高脂饮食诱导肥胖大鼠生精障碍及睾丸支持细胞线粒体和内质网结构功能的改变

目的观察高脂饮食诱导肥胖对大鼠生精功能的影响及睾丸支持细胞线粒体和内质网结构功能改变,探讨肥胖致生精障碍的可能机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,对照组给予普通饮食,模型组给予高脂饲料喂养。20周模型复制成功后解剖,取附睾进行精子功能分析;血清酶联免疫吸附试验分析性激素水平变化;苏木精-伊红染色观察肝脏和睾丸组织病理改变;油红O染色观察肝脏和睾丸组织脂质沉积情况;免疫荧光染色法检测睾丸闭锁小带蛋白1(ZO-1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及线粒体融合蛋白2(Mfn2)的定位及表达;Western blotting检测睾丸组织GRP78、Mfn2蛋白相对表达量;透射电镜观察睾丸支持细胞紧密连接及线粒体和内质网结构改变。结果模型组体重较对照组重(P<0.05),雌二醇较对照组高(P<0.05),睾酮较对照组低(P<0.05)。两组孕酮、泌乳素、促黄体生成素、卵泡刺激素比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组肝细胞脂肪变性明显,睾丸生精细胞排列稀疏,细胞变性,油红O染色均可见脂质沉积。对照组精子活力率高于模型组(P<0.05),畸形率低于模型组(P<0.05)。两组精子密度,直线速率和曲线速率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组GRP78蛋白相对表达量较对照组高(P<0.05),Mfn2蛋白相对表达量较对照组低(P<0.05)。模型组睾丸支持细胞间紧密连接分离,紧密连接蛋白ZO-1表达较对照组减少;内质网和线粒体肿胀,呈空泡状,部分网膜断裂。结论高脂饮食诱导肥胖可引起大鼠生精障碍,其机制可能与睾丸支持细胞线粒体和内质网结构功能改变导致紧密连接损伤有关。

奶山羊睾丸支持细胞分离培养与鉴定

本研究以2月龄莎能奶山羊为实验动物分离睾丸支持细胞(SCs),比较三种酶消化法(胰酶消化法、两步酶消化法和两步混合酶消化法)的分离效率,并采用形态学及分子生物学技术评估培养效果。结果显示,两步酶消化法和两步混合酶消化法获得的细胞数量以及细胞活率和增殖力均显著高于胰酶消化法。形态学观察两步酶消化法分离的细胞符合典型SCs形态,并能稳定传代至第5代。HE染色可观察到细胞核中的双极小体,油红O染色可见细胞核周围大小不一的脂滴。免疫荧光染色显示SCs特异蛋白WT1和Vimen-tin抗体免疫阳性率大于96%。超微结构观察发现细胞结构完整,细胞器丰富,细胞核呈不规则形状,符合SCs超微结构特征。综上,两步酶消化法操作简单、成本低,且分离的SCs数量多、活力好、纯度高,能在体外稳定培养,为最佳的奶山羊SCs分离方法,可为深入开展奶山羊雄性生殖机能研究提供良好的细胞学模型。

基于多组学解析布鲁氏菌BvfA对睾丸支持细胞线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体的影响

【目的】明确布鲁氏菌BvfA对宿主睾丸支持细胞(TM4细胞)的损伤作用,以揭示布鲁氏菌对宿主的致病机制。【方法】利用RNA-Seq双端测序、Label-free蛋白组学技术和LC-MS非靶代谢组学技术分析感染布鲁氏菌S19△bvfA与S19菌株的TM4细胞的组学差异,采用KEGG数据库对差异表达蛋白及差异代谢物通路进行分析,并利用平行反应监测(PRM)对蛋白表达量进行验证。【结果】感染S19△bvfA和S19菌株的TM4细胞差异表达基因共400个,差异表达蛋白共422个,差异代谢产物共271种。多组学联合分析发现,S19△bvfA和S19菌株感染TM4细胞差异表达基因、差异表达蛋白和差异代谢产物共同富集的KEGG通路为内源性大麻素信号通路,在该通路中发现S19△bvfA菌株感染TM4细胞的线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体(ComplexⅠ)中有20个蛋白表达量下调。PRM验证结果显示,ComplexⅠ中Ndufb11、Ndufa9、Ndufv1、Ndufv2、Ndufs8和Ndufs2蛋白的表达趋势与Label-free蛋白组学技术测定结果一致。【结论】BvfA在布鲁氏菌感染TM4细胞时能引起转录、蛋白质和代谢水平的变化,布鲁氏菌BvfA使睾丸支持细胞线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体蛋白表达下调。

Bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响

旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄(n=3)与13月龄(n=3)健康公牛的睾丸组织,构建安格斯牛组织表达谱,验证bta-miR-101在两个时期的差异表达。利用在线工具(TargetScan、miRTarBase、miRDB及miRWalk)预测miR-101的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将miR-101的模拟物与抑制物分别转染至牛睾丸支持细胞中,利用RT-qPCR、Western Blotting以及CCK-8等技术检测细胞增殖、凋亡及分泌相关基因表达量以及细胞增殖系数。通过4种在线软件预测到26个bta-miR-101的共同靶基因,GO和KEGG富集分析发现这些基因主要富集在核质、蛋白质结合、JAK-STAT的受体信号通路上,这些信号通路与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡等生物过程有着不同程度的关联。RT-qPCR结果显示,bta-miR-101在牛初生期睾丸组织中的表达量显著高于性成熟时期(P<0.05),与实验室前期测序结果一致。转染miR-101的模拟物与抑制物后,发现相较于对照组,miR-101 mimics可以促进增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,并显著升高支持细胞的增殖系数,同时抑制凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05);miR-101 inhibitor可以抑制增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,同时促进凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05)。在细胞分泌方面,miR-101对分泌标志基因GDNF、BMP4的转录有影响,但对雄激素结合蛋白的分泌影响不显著。综上所述,miR-101促进牛睾丸未成熟支持细胞的增殖并抑制其凋亡,对雄激素结合蛋白的分泌无显著影响。

敲低锌转运蛋白ZIP7抑制小鼠睾丸支持细胞增殖的研究

目的探讨敲低锌转运蛋白ZIP7对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4细胞)进行实验,TM4细胞培养后采用细胞免疫荧光染色法观察ZIP7在TM4细胞中的亚细胞定位;将TM4细胞分为对照组和ZIP7 siRNA组(采用siRNA转染敲低TM4细胞中ZIP7表达),采用CCK8法检测两组细胞的增殖能力,使用DHE荧光探针检测两组细胞内活性氧(ROS)的水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组细胞内ZIP7 mRNA的相对表达量,Western blot法检测两组细胞内ZIP7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光染色法结果显示ZIP7定位于TM4细胞的内质网上。siRNA干扰使得ZIP7 siRNA组细胞中ZIP7的mRNA和蛋白表达显著低于对照组(P<0.05);siRNA转染敲低TM4细胞内ZIP7的表达后,ZIP7 siRNA组细胞增殖能力显著低于对照组(P<0.001),细胞内ROS水平显著高于对照组(P<0.001)。与对照组比较,ZIP7 siRNA组细胞的p-ERK/ERK蛋白表达无显著差异(P>0.05),而p-JNK/JNK蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论敲低ZIP7可以明显抑制TM4细胞增殖,该过程可能通过细胞内ROS水平的升高及JNK磷酸化的激活介导。

miR-542-3p生物信息学分析及对未成熟猪睾丸支持细胞的影响

为了探讨miR-542-3p的生物信息学信息及其对未成熟猪睾丸支持细胞的影响,试验通过AliBaba 2.1和AnimalTFDB 3.0软件预测miR-542-3p转录因子结合位点(TFBS);并分析miR-542-3p在不同物种间的保守性;采用CCK-8试剂、ATP试剂盒、流式周期检测试剂盒和实时荧光定量PCR方法探究过表达miR-542-3p对未成熟猪睾丸支持细胞的影响;利用TargetScan、miRDB和miWalk 3种在线软件预测miR-542-3p靶基因后取交集,并对猪源靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析;最后利用Cytoscape 3.2.0软件构建TF-miR-542-3p-靶基因相互作用网络。结果表明:经预测miR-542-3p受GATA1、TBP、Sp1、Ap1、SRF等多个转录因子调控,且在多物种间具有高度的保守性;miR-542-3p可显著或极显著抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖活性(P<0.05或P<0.01),极显著降低细胞内ATP含量(P<0.01),显著或极显著抑制细胞增殖基因和周期基因的相对表达量(P<0.05或P<0.01),进而抑制细胞周期和细胞增殖;转染miR-542-3p mimic后G1期猪睾丸支持细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例极显著降低(P<0.01);共发现7个猪源miR-542-3p潜在靶基因,miR-542-3p调控的UBE2E1基因相对表达量极显著下降(P<0.01),KCMF1、ILK基因相对表达量显著下降(P<0.05),HIPK3基因相对表达量极显著升高(P<0.01),AP3D1、PLEKHM3基因相对表达量显著升高(P<0.05),各靶基因主要在激酶活性和结合上发挥作用;miR-542-3p靶基因主要参与MAPK、cAMP、TGF-β和cGMP-PKG等信号通路;构建的TF-miR-542-3p-靶基因相互作用网络包含5个转录因子和50个mRNA。说明miR-542-3p受多种转录因子调控,在多物种间高度保守,能够抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖,并通过调控下游靶基因的表达参与MAPK、cAMP和TGF-β等信号通路,从而调控未成熟猪睾丸支持细胞生长。

ssc-miR-152生物信息学及对未成熟猪睾丸支持细胞功能的分析

为研究ssc-miR-152生物信息学特征及对未成熟猪睾丸支持细胞功能的影响,本研究通过NCBI数据库确定ssc-miR-152在猪基因组中的位置,通过MethPrimer和EMBOSS在线软件分析ssc-miR-152上游序列CpG岛,使用Netural Network Promoter Predictio和Promoter-2.0预测其启动子区域,结合AliBaba 2.1和AnimalTFDB3.0软件预测其转录因子结合位点;Clustal W软件分析ssc-miR-152在物种间的保守性,采用CCK-8、流式细胞术和实时荧光定量PCR技术检测细胞增殖、周期及凋亡情况,运用miRanda、EIMMO、TargetScan和PITA在线软件预测ssc-miR-152的靶基因并取交集,并对预测的靶基因进行GO功能及KEGG通路分析,最后利用Cytoscape构建TF-miRNA-mRNA互作网络。结果表明:ssc-miR-152位于猪12号染色体反义链的24 292 249~24 292 328位置,其转录起始位点在上游序列200 bp处,启动子范围为393~4 619,并在该范围内存在1个CpG岛,且有RELA、SP1、SRF、IRF1和EGR1等多个转录因子调控ssc-miR-152的表达。同时发现ssc-miR-152具有高度保守性,在未成熟猪睾丸支持细胞中过表达ssc-miR-152后增强细胞增殖活性、加快细胞的周期进程、抑制细胞凋亡率。互作网络显示ssc-miR-152可调控下游NOG、S1PR1和FBN1等多个基因,参与TGF-β、PI3K/AKT和FoxO等信号通路。本研究说明,ssc-miR-152对未成熟猪睾丸支持细胞生长发育有重要作用,本研究为后续进一步探索未成熟猪睾丸支持细胞机理并对雄性精子发生机理提供理论科学依据。

镉暴露大鼠睾丸支持细胞金属硫蛋白表达的时相研究

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸支持细胞和肝脏组织的分离 .采用RT PCR技术分析mRNA ,并用光密度扫描作半定量分析 ,蛋白质定量用ELISA方法 ,原子分光光度吸收法测定镉浓度 .结果显示 :镉暴露 1h后肝脏MTmRNA即有明显的诱导表达 ,3h达高峰 ;支持细胞也有明显的诱导表达 ,6h达高峰 .镉暴露后肝脏MT有明显的诱导表达 ,但睾丸支持细胞不但未见MT增加而且还稍有下降 .提示 :a 镉对MTmRNA的诱导表达具有时间依赖性和组织特异性 .b 镉虽然能诱导睾丸MT的转录 ,但没有促进其MT的合成 。

新生牛睾丸支持细胞的体外培养及鉴定分析

为探究支持细胞的体外培养特性,以新生牛睾丸组织为试验材料,利用组合酶消化法将其解离成单细胞悬液,并采用差速贴壁法纯化支持细胞后进行体外培养与鉴定。结果表明:支持细胞体外培养能够传至第20代,并且随着传代次数的增加,支持细胞的增殖速度越来越慢;添加2%血清浓度的DMEM/F-12的培养基即可用于支持细胞的体外培养;免疫组化染色显示,所培养的细胞内波形蛋白呈阳性;RT-PCR检测结果可见支持细胞标志基因SCF和GDNF的表达;第15代的支持细胞内含有正常的二倍体核型。

大鼠睾丸支持细胞的原代培养与鉴定

目的采用改良方法对大鼠睾丸支持细胞进行分离、纯化和原代培养,为得到更高纯度和稳定的支持细胞原代培养体系,并建立一种简单、易行的支持细胞鉴定方法。方法采用酶消化法分离大鼠睾丸支持细胞,用Tris-HCl处理后除去生精细胞,实现进一步纯化。并用Feulgen染色法鉴定支持细胞,对支持细胞进行形态学观察。结果培养的支持细胞纯度达到95%,每个睾丸可获取支持细胞约107个,Feulgen染色后明显可见支持细胞核内的双极小体。结论酶消化法分离和Feulgen染色法鉴定大鼠支持细胞简单易行,且细胞纯度较高。

和田羊睾丸支持细胞的体外培养与分离鉴定

【目的】研究和田羊睾丸支持细胞的体外培养特性。【方法】取新生和田羊睾丸组织,利用两步酶消化后,采用差速贴壁法纯化细胞进行体外培养,并通过形态学观察、HE染色、AKP染色、油红O染色、吖啶橙染色、罗丹明123染色、免疫组化染色、RTPCR和MTT法检测细胞活性及纯度。【结果】培养基中加入2.00%血清浓度的DMEM/F-12可提高支持细胞纯度,在体外培养传至20代的和田羊睾丸支持细胞形态和核型均为正常;所培养的细胞内波形蛋白表达及标志基因SCF和GDNF的表达均为阳性。【结论】本试验成功建立了和田羊睾丸支持细胞体外培养模型。

改良的大鼠睾丸支持细胞分离培养方法

目的 简化睾丸支持细胞的分离方法 ,提高细胞产量。方法 采用 0 .2 5 %胰酶、0 .0 5 %胶原酶序贯两步消化法消化 ,细胞悬液在 37°C、5 % CO2 培养箱内孵育培养 4 8h,观察产量和细胞功能。结果 改良的分离方法所获得的睾丸支持细胞占细胞总数的 90 %以上 ,大大提高了支持细胞的获取量 ,细胞 Fas配体 (Fas- L )表达功能正常。结论 改良的分离培养方法简化了传统的分离培养方法 。

原代睾丸支持细胞分离纯化及双室培养模型的建立

[目的]通过建立双室培养模型,为探讨毒物或药物对睾丸支持细胞作用机制提供一个合适的体外研究方法。[方法]18d龄雄性SD大鼠,脱颈椎处死后,无菌条件下取睾丸组织,经胰蛋白酶和胶原酶二步消化后获得支持细胞,经接种、纯化和鉴定,获得纯度>95%支持细胞。培养液A为DMEM培养基和F12培养基按照1:1比例用去离水配制,每升培养基中含有20万单位青霉素和0.2g链霉素,用2%的碳酸氢钠调整pH值为7.2左右。培养液B为培养液A中加入维生素A、E(200ng/ml)和胰岛素(2μg/ml)。培养液C为B培养液中再加入卵泡刺激素(100ng/ml)和睾丸酮(10-8mol/L)。将制备好的支持(Sertoli)细胞混悬液按2.5×106个/ml浓度接种于24孔培养板内,培养条件为35℃(睾丸细胞的适宜温度),2%CO2恒温静止培养。测定3种不同培养液中培养的支持细胞形成的跨细胞上皮电阻值(transep-ithelialelectricalresistance,TER)。[结果]培养液加入维生素A、E和胰岛素后,支持细胞形成的TER有所升高,而培养液在加入睾丸酮和卵泡刺激素后,Sertoli细胞形成的TER则显著升高。培养第1天3种培养液中培养的Sertoli细胞形成的TER分别为33.85、31.38和34.26Ω/cm2,培养第13天分别为198.53、289.91和707.50Ω/cm2。[结论]Sertoli细胞双室培养模型可模拟体内状态的“血睾屏障”,为体外研究雄性生殖毒性机制提供一个合适模型。

成人睾丸支持细胞的分离培养及其免疫豁免机制

目的:建立成人睾丸支持细胞的体外培养方法并探讨其免疫豁免机制。方法:依次用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶及脱氧核糖核酸酶消化制备成人睾丸支持细胞,以SABC染色法检测支持细胞上Fas-L和TGF-β1的表达。将其与成人脾细胞共同培养,用MTT比色法检测其对脾细胞增殖的抑制作用。结果:成人睾丸支持细胞占培养细胞总数的80%以上,活性可达90%。睾丸支持细胞上可表达Fas-L和TGF-β1,体外可抑制共培养的脾细胞增殖。结论:建立了培养成人睾丸支持细胞的方法,其免疫豁免机制可能与Fas-L和TGF-β1的表达有关。

FSH通过cAMP、Ca^(2+)调节仔猪睾丸支持细胞的增殖

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞增殖的机制。试验以2～3周龄的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,采用体外培养模型,通过细胞数量检测、ELISA和Western blot等方法研究FSH对睾丸支持细胞的调节作用。试验结果如下:(1)在0～50ng·mL-1内,随着FSH浓度的增加,睾丸支持细胞数量呈增加的趋势(P<0.05);当浓度为50ng·mL-1时,FSH促增殖作用最明显;细胞内cAMP的浓度也随着FSH的浓度而增加(P<0.05);(2)FSH作用后5min内就激活了ERK1/2级联反应,在48h内,ERK1/2的激活有一定的周期性;加入ERK1/2的抑制剂PD98059和U0126明显的降低了FSH诱导的睾丸支持细胞的增殖和PCNA的表达(P<0.05);(3)加入FSH和Forskolin增强了细胞的增殖和ERK1/2的激活(P<0.05);而加入Rp-cAMP则明显降低了FSH诱导的细胞增殖和ERK1/2的激活(P<0.05);L-Ca2+通道抑制剂Verapamil抑制了细胞的增殖和ERK1/2的激活;Rp-cAMP与Verapamil共同作用强于单独作用,表现出一定的协同效应(P<0.05)。结果表明,FSH通过cAMP、Ca2+激活ERK1/2,并通过ERK1/2调节PCNA的表达进而调节支持细胞的增殖。

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。

一种获得高纯度睾丸支持细胞的分离方法

背景:研究证实睾丸支持细胞具有免疫抑制功能,可以被用于在睾丸以外的部位为移植细胞提供免疫豁免环境。最近的研究还表明支持细胞分泌的多种活性物质对其他细胞有促进作用。但至今其分离纯化方法还不完整,且细胞纯度不太理想。目的:探讨一种获取高纯度睾丸支持细胞的方法。方法:迅速分离出生后20d雄性SD大鼠睾丸生精小管,采用酶消化法将细胞悬液接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养7d后,采用Tris-HCL低渗缓冲液处理生精细胞和成纤维细胞,采用FasL免疫组织化学、Hoechst33342复染鉴定睾丸支持细胞的纯度。结果与结论:支持细胞贴壁性比较强,培养24h后,大多数细胞开始贴壁,细胞形状呈圆形或椭圆形,培养液中漂浮着较多生精细胞。培养48h后,胞质逐渐增多,折光性减弱。三四天后支持细胞胞质铺展,细胞间隙变小。4～6d后胞质完全铺开,细胞相互连接,铺展成膜状单层。此时,质核比为(7～9)∶1,细胞为多边形,其形态和胞质面积不再改变;睾丸支持细胞的纯度为(95.64±2.76)%。结果证明该方法是一种相对简便易行且经济﹑稳定﹑有效的睾丸支持细胞分离方法。

葛根素对钴60-γ射线致小鼠睾丸支持细胞急性损伤的保护作用

目的探讨中药单体葛根素对钴60(60Co)-γ射线致小鼠睾丸支持细胞急性损伤的保护作用及机制。方法 40只健康雄性Wistar小鼠随机分为正常组,模型组及低、高剂量组,每组10只。模型组及低、高剂量组给予60Co-γ8.0Gy下腹部均匀照射517s。造模24h后,低、高剂量组分别给予葛根素230、450mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均每天1次,连续2周。观察小鼠睾丸组织形态学变化;采用酶联免疫吸附法测量血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及抑制素β(Inhibinβ)水平;应用实时定量PCR法测定睾丸组织中Inhibinβ mRNA相对表达量。结果模型组小鼠睾丸支持细胞和生精细胞发生不同程度的损伤,低、高剂量组小鼠有不同程度的改善,以高剂量组改善最为明显。与正常组比较,模型组血清FSH水平显著提高,血清Inhibinβ水平及睾丸组织Inhibinβ mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,低、高剂量组小鼠血清FSH、Inhibinβ水平及睾丸组织Inhibinβ mRNA表达显著改善(P<0.05),以高剂量组改善最明显(P<0.01,P<0.05)。结论中药单体葛根素对60Co-γ射线致小鼠睾丸支持细胞急性损伤有一定的保护作用。

五子衍宗复方对睾丸支持细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响

目的:探讨五子衍宗复方对睾丸支持细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响。方法:在人睾丸支持细胞系TM4细胞培养液内分别加入H2O2(100 mmol/L)和五子衍宗复方提取液,分为空白组、模型组、低(0.2 mg/ml)、中(1 mg/ml)、高(5 mg/ml)剂量五子衍宗复方加药组。在作用24 h后,用MTT法检测各组的吸光度值,用硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化酶法分别测定各组MDA含量及SOD活性,用流式细胞仪测定各组的细胞凋亡率和存活率,用实时PCR检测caspase-3 mRNA的表达。结果:五子衍宗复方低、中、高剂量组的吸光度值由模型组的0.23±0.01分别增加至0.27±0.02、0.30±0.01和0.35±0.01;SOD活性由(8.32±0.62)U/ml分别增加至(9.69±0.59)U/ml、(10.47±0.74)U/ml和(12.28±0.38)U/ml;MDA含量由(6.99±0.74)mol/L分别降低至(5.78±0.28)mol/L、(4.19±0.43)mol/L和(3.42±0.51)mol/L;细胞凋亡率由(21.63±1.38)%分别降低至(17.87±0.75)%、(14.10±0.50)%和(9.53±1.34)%;存活率由(65.67±7.48)%分别增加至(70.37±1.12)%、(72.57±1.95)%和(81.60±2.46)%;caspase-3 mRNA的相对表达量由2.69±0.16分别降低为2.47±0.12、2.38±0.16和1.96±0.11。结论:五子衍宗复方能改善睾丸支持细胞的氧化应激损伤,抑制细胞凋亡。

棉酚对睾丸支持细胞间隙连接蛋白表达的影响

目的:探讨药物棉酚对睾丸Sertoli细胞间隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法:培养TM4睾丸Sertoli细胞,用1.25、2.5、5、10μmol/L的棉酚分别染毒细胞6、12、24、48 h。CCk-8试剂盒检测细胞毒性,应用细胞免疫荧光化学、RT-PCR检测Cx43在正常TM4细胞和在不同浓度及不同染毒时间的TM4细胞中的表达情况。结果:半定量RT-PCR及免疫荧光结果显示,正常TM4细胞中有较多的Cx43表达;棉酚染毒24 h后,Cx43 mRNA水平开始随时间增加而逐渐下降(P<0.05),且随剂量增加Cx43蛋白表达强度逐渐减弱(P<0.05)。结论:棉酚可抑制TM4细胞表达Cx43,可能是其抗生育的机制之一。