不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义

为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一.

脑脊液中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、神经元特异性烯醇化酶水平在化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎中鉴别价值

目的观察化脓性脑膜炎(PM)、结核性脑膜炎(TBM)患者脑脊液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的差异,并分析三项指标在PM、TBM鉴别中的价值。方法将2019年12月至2021年12月就诊于衡水市人民医院神经内科的35例PM患者纳入PM组,45例TBM患者作为TBM组。采集患者治疗前的脑脊液样本,测定并对比两组脑脊液中LDH、CK、NSE水平及糖、蛋白、氯化物含量,经Pearson分析脑脊液中指标间相关性。线性回归分析影响TBM发生的因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估脑脊液中LDH、CK、NSE及联合对PM与TBM的鉴别价值。结果年龄、性别、临床特征(发热、病理征、呕吐、肢体抽搐等)发生率、脑脊液中糖与蛋白含量两组差异无统计学意义(P>0.05);TBM组脑脊液中LDH、NSE水平高于PM组,CK水平、氯化物含量低于PM组(P<0.05);Pearson相关性显示,脑脊液中LDH与CK、氯化物呈负相关(r<0,P<0.05),与NSE呈正相关(r>0,P<0.05);CK与NSE呈负相关(r<0,P<0.05),与氯化物呈正相关(r>0,P<0.05);NSE与氯化物呈负相关(r<0,P<0.05);线性回归分析显示,脑脊液中LDH、CK、NSE、氯化物均与TBM的发生相关(P<0.05);ROC曲线结果发现,脑脊液中LDH、CK、NSE及三者联合鉴别PM、TBM的AUC为0.849(95%CI:0.768~0.930)、0.858(95%CI:0.779~0.937)、0.851(95%CI:0.771~0.931)、0.954(95%CI:0.911~0.996)。结论PM、TBM患者临床特征相似,但脑脊液中LDH、CK、NSE水平存在差异,三项指标联合检测可提高PM与TBM的鉴别诊断。

RNA-DNA杂交法研究乳酸脱氢酶-C基因在睾丸中特异性表达

用同位32~P标记乳酸脱氢酶-C(LDH-C)cDNA作为探针,与小鼠胸腺、脑、胰、心肌、骨骼肌、睾丸、肾、肺、肝的RNA以及人胰、皋丸、肝、骨骼肌、心肌及脑的RNA分别作点溃杂交(dot blot hybridization)及Northern印迹杂交,证实LDH-C基因只在睾丸中特异性表达。

乳酸脱氢酶和神经元特异性烯醇化酶水平与广泛期小细胞肺癌预后的关系

目的通过分析广泛期小细胞肺癌(SCLC)患者治疗前乳酸脱氢酶(LDH)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)与无进展生存(PFS)和总生存(OS)的关系,探讨其是否为影响广泛期SCLC患者的疗效预测和预后的因素。方法本研究回顾性地分析了2008年3月至2014年9月于中国医科大学附属第一医院肿瘤内科住院治疗的广泛期SCLC患者83例。用Kaplan-Meier方法和Cox比例风险模型分析患者治疗前LDH和NSE与PFS和OS的关系,P<0.05为差异有统计学意义。结果治疗前LDH水平与患者PFS(P=0.001)及OS(P=0.036)均显著相关,治疗前NSE水平与患者PFS(P=0.007)及OS(P=0.013)也显著相关。结论LDH和NSE是影响广泛期SCLC患者疗效的预测因素和影响生存的预后因素。

双须叶须鱼5种组织乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的组织特异性分析

为了解双须叶须鱼的生化遗传特性,采用聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对双须叶须鱼5种组织(心脏、眼睛、肌肉、肝脏和肾脏)的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行了分析。结果表明,双须叶须鱼LDH同工酶和MDH同工酶具有组织特异性和个体差异性,双须叶须鱼的MDH分为上清液型(s-MDH)和线粒体型(m-MDH)。

口虾蛄乳酸脱氢酶同工酶组织特异性的研究

以口虾结为材料进行研究,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对其肌肉、心脏、腹鳃、肝胰腺及眼球5种组织器官进行乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的研究分析。结果表明:不同组织中乳酸脱氢酶(LDH)的同工酶谱带存在差异,具有明显的组织特异性。肌肉、腹鳃、肝胰腺和心脏中有2条酶带,眼球中只有1条酶带,心脏中的谱带表达最浓,而腹鳃中的酶带表达最弱。

睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接的研究

采用RT-PCR方法从牦牛、狗和大鼠睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因的cDNA序列,结果在3种动物中均发现了4或5种Ldhc剪接体,包括外显子缺失或内含子增加两种类型,其中外显子缺失数量为1或2个的比例高.3种动物中外显子缺失的比例由高到低依次为外显子5,4,7,6;狗和大鼠剪接体中额外增加的内含子部分序列均导致在内含子中提前形成终止密码子;对牦牛和狗睾丸组织LDH同工酶的电泳分析未检测到潜在的多种Ldhc剪接体的表达,推测睾丸组织Ldhc选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一;用RT-PCR方法克隆牦牛肌肉和心脏组织Ldhc基因,意外检测到Ldhc的两种剪接体,提示Ldhc基因的选择性剪接可能参与睾丸以外的其他组织沉寂Ldhc基因的表达.

神经元特异性烯醇化酶、癌胚抗原、乳酸脱氢酶在小细胞肺癌中的预后价值比较

目的 评价神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、乳酸脱氢酶(LDH)在小细胞肺癌(SCLC)患者中的预后价值。方法 收集苏州大学附属第二医院1997年12月至2 0 0 3年11月确诊的4 6例非手术治疗的SCLC患者,在治疗前检测NSE、CEA、LDH及其它实验室指标,进行预后单因素和多因素分析。结果 NSE、CEA、LDH的升高率分别为4 8.3%、4 2 .9%、30 .4 % ,三者水平在广泛期均高于局限期,其中LDH、CEA有显著统计学意义(P <0 .0 5 )。单因素分析NSE >12ng/ml,、LDH >1(与上限比值)均是提示预后较差的指标。多因素分析时,NSE是独立的预后因子,LDH、CEA的影响不明显。结论 NSE、CEA、LDH中,NSE与预后的相关性最强,是提示预后的独立指标。

血清神经元特异性烯醇化酶、乳酸脱氢酶在小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的探讨小细胞肺癌(SCLC)血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和乳酸脱氢酶(LDH)的表达及临床意义。方法检测SCLC组、肺部疾病组和正常对照组血清中NSE和LDH表达水平,分析其高表达与SCLC患者预后之间的关系。结果 SCLC组患者血清中NSE和LDH含量水平显著高于肺部疾病组和正常对照组(P<0.05);NSE和LDH高表达是影响SCLC患者预后的独立风险因素(P<0.05)。结论 NSE和LDH表达水平与SCLC发生发展及预后有关,NSE和LDH高表达可作为SCLC患者不良预后的重要指标。

人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫效果的初步研究

目的:构建人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗,并免疫雌雄两性BALB/c小鼠,以观察特异性抗体的产生。方法:采用分子克隆的方法构建pVAX1-hLDHC DNA疫苗。双酶切及正反向测序对该DNA疫苗进行鉴定。肌肉注射方法免疫雌雄两性BALB/c小鼠,ELISA和Western blot方法检测小鼠血清中的特异性抗体,常规病理学方法检测雄性实验小鼠的睾丸组织。结果:双酶切及正反向测序结果表明:插入片段的序列以及插入的位置和方向均正确。肌肉注射免疫BALB/c小鼠后可诱导明显的体液免疫反应,且在雄性实验小鼠中未观察到睾丸炎的发生。结论:成功构建了具有一定免疫效果的hLDHC DNA疫苗,为今后进行更深入的研究奠定了基础。

截短的人精子特异性乳酸脱氢酶L178X突变体丧失催化活性

精子特异性乳酸脱氢酶(乳酸脱氢酶C4,LDH-C4)是精子能量代谢的关键酶类之一.为了研究前期发现的1个LDH-C4基因突变(L178X)对LDH-C4功能的影响,在已构建的LDH-C4原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC的基础上,利用PCR定点诱变技术,制备了L178X突变体的原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC/L178X,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,诱导其表达.对该载体进行限制性酶切表明,插入的LDHC基因cDNA约1000bp;序列分析表明,该插入片段读框正确,带L178X突变.SDS-PAGE及免疫印迹显示,携带该载体的菌体可表达分子量约25kD的蛋白质,后者可被兔抗LDH-C4血清特异识别.乳酸脱氢酶(LDH)活性测定及活性染色表明,所表达的产物没有LDH活性.本研究成功进行了LDH-C4的1个突变体的原核表达,为研究LDHC基因突变对LDH-C4功能以及男性生育的影响奠定了基础.

黄牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接体的克隆与序列分析

采用RT-PCR方法从黄牛睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因的cDNA序列,结果发现2种Ldhc剪接体,根据Ldhc基因在进化上的保守性,参照普通牛Ldhc基因结构分析了黄牛Ldhc基因的选择性剪接体的结构,结果显示,剪接体存在外显子缺失:其中剪接体1缺失第7个外显子,剪接体2缺失第4和第7两个外显子。因为LDH-C4酶的NAD+结合结构域由Ldhc的外显子2-4编码,酶的活性中心由外显子4编码。所以剪接体1包含完整酶的NAD+结合结构域和酶的活性中心,剪接体2失去了大部分NAD+结合结构域和酶的活性中心。对黄牛睾丸组织和精子LDH同工酶的电泳分析未检测到潜在的Ldhc剪接体的表达,推测睾丸组织Ldhc选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一。

醒脑静对化脓性脑膜炎患者肿瘤坏死因子-α、神经元特异性烯醇化酶、C反应蛋白及乳酸脱氢酶的影响

目的探讨醒脑静注射液对成人化脓性脑膜炎炎症细胞介质的影响。方法将80例化脓性脑膜炎患者随机分为对照组和治疗组。对照组给予西医疗法,治疗组在对照组基础上加用醒脑静注射液。治疗2周后,比较2组脑脊液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、C反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)等指标的变化。结果治疗后,治疗组TNF-α、NSE、CRP、LDH水平均显著低于对照组,格拉斯哥昏迷评分(GCS)低于对照组,临床总有效率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论醒脑静注射液能有效抑制成人化脓性脑膜炎患者炎症细胞介质的分泌,促进患者意识障碍的恢复,疗效确切。

秀丽白虾乳酸脱氢酶组织的特异性

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳法对秀丽白虾的眼睛、腹肌和心脏3种新鲜组织中的乳酸脱氢酶(LDH)进行比较研究.研究结果表明,LDH同工酶在秀丽白虾的这3种组织内存在不同程度的组织特异性,其位点表达与否和酶活性的强弱方面都表现出明显的组织差异性.LDH同工酶在腹肌、心脏组织中的活性较高,而在眼组织中的活性较低.同时,腹肌组织的LDH同工酶在繁殖期与非繁殖期表现出明显的差异性.

人精子特异性乳酸脱氢酶结构和功能的计算生物学分析

精子特异性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),又称乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系.根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列(P07864),利用PROSITE数据库预测人LDH-C4的功能基序;利用Clustalw2、TreeView1.6.6进行LDH-C4进化树的构建;利用I-TASSER软件预测人LDH-C4的二、三、四级结构以及功能位点.结果表明:在190!196位有1个LDH活性位点,该位点为脊椎动物各亚型乳酸脱氢酶共有的催化位点,为进化中的1个保守序列;从进化树来看,LDHC和LDHB的亲缘关系比较近;人LDH-C4与小鼠LDH-C4的二级、三级结构具有很高的相似性;LDH-C4属乳酸脱氢酶-苹果酸脱氢酶(LDH-MDH)超家族中的LDH-1(cd05293)家族的成员,属于NAD依赖性酶,拥有LDH-1家族具备的基本结构特点.以上结果为研究LDH-C4基因突变对其功能的影响打下基础.

水牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接体的克隆与序列分析

为了克隆水牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因选择性剪接体,试验采用RT-PCR方法从水牛睾丸组织中克隆睾丸特异LDH-C基因的cDNA序列,发现1种LDH-C剪接体。根据LDH-C基因在进化上的保守性,参照普通牛LDH-C基因结构分析了水牛LDH-C基因的选择性剪接体的结构。结果表明:该剪接体缺失第7个外显子,因为LDH-C4酶的NAD+结合结构域由LDH-C的外显子2～4编码,酶的活性中心由外显子4编码,所以剪接体包含完整酶的NAD+结合结构域和酶的活性中心。对水牛睾丸组织LDH同工酶的电泳分析,未检测到潜在的LDH-C剪接体的表达,推测睾丸组织LDH-C选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一。

睾丸特异乳酸脱氢酶-C的研究和应用进展

睾丸特异乳酸脱氢酶-C在酶学性质、免疫特性等方面不同于其他类型的LDH同工酶(LDH1～LDH5),并且在动物生殖中可能发挥重要作用,因此有关其研究在生物化学、基因进化、免疫节育、突变监测等领域长期以来一直引起研究人员的广泛关注,并且近年来不断有新的发现和进展。

精子特异性乳酸脱氢酶研究进展

精子特异性乳酸脱氢酶（sperm-specific lactate dehydrogenase，LDH-C4）特异地存在于鸟类和哺乳类动物的睾丸和精子中，与体细胞乳酸脱氢酶A4（LDH-A4）和B4（LDH-B4）同属于乳酸脱氢酶家族，它们都以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）为辅酶催化丙酮酸和乳酸的转化，在能量代谢中发挥重要作用，但LDH—C4与体细胞LDH相比又具有一些独特性质。

精子特异性乳酸脱氢酶的免疫学特性及其应用

精子特异性乳酸脱氢酶特异地存在于鸟类和哺乳类动物的成熟睾丸和精子中 ,为精子的运动和存活提供能量。它是一种自身抗原 ,其天然抗体不与体细胞LDH同工酶发生交叉反应。用LDH C4免疫小鼠或兔等能够诱导免疫应答 ,导致生育率的降低 ,因此在人类避孕和鼠害控制方面将有较好的应用前景。

锥颅置管血肿清除术对高血压脑出血患者血清神经元特异性烯醇化酶、乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶水平的影响

目的探讨锥颅置管血肿清除术对高血压脑出血(hypertens ivecerebral hemorrhage,HIH)患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)水平的影响。方法将HIH患者100例根据手术方法不同分为锥颅置管引流组和开颅组各50例。锥颅置管引流组患者行锥颅置管血肿清除术,开颅组患者行传统开颅血肿清除术;比较两组手术情况、临床疗效;观察两组手术前后血肿体积、神经功能缺损情况以及血清NSE、LDH及CK水平变化。结果锥颅置管引流组患者术中出血量、手术时间以及住院时间均显著小于开颅组(P<0.05)。锥颅置管引流组死亡率显著低于开颅组,总有效率则显著高于开颅组(P<0.05)。术后2周,两组患者神经功能缺损评分以及血清NSE、LDH、CK水平均明显降低,且锥颅置管引流组显著低于开颅组(P<0.05);而两组术后血肿量比较,差异无显著性(P>0.05)。结论锥颅置管血肿清除术治疗HIH疗效显著,具有创伤小、恢复快等优点;且能够降低患者血清NSE、LDH、CK水平,改善患者预后。