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低温β-1,4-内切葡聚糖酶的基因挖掘、异源表达及其酶学性质表征
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作者 圣弟青 钮成拓 +4 位作者 闫亚楠 郑飞云 刘春凤 王金晶 李崎 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期17-24,共8页
β-1,4-内切葡聚糖酶在洗涤行业有着广泛的应用价值,其中具有较好的低温和碱性耐受能力是其实现工业应用的重要前提。该论文通过基因挖掘获得一株具有低温耐受能力的Deinococcus cellulosilyticus来源新型β-1,4-内切葡聚糖酶基因EgDC,... β-1,4-内切葡聚糖酶在洗涤行业有着广泛的应用价值,其中具有较好的低温和碱性耐受能力是其实现工业应用的重要前提。该论文通过基因挖掘获得一株具有低温耐受能力的Deinococcus cellulosilyticus来源新型β-1,4-内切葡聚糖酶基因EgDC,并将其在大肠杆菌中实现了可溶性表达,其中大部分存在于周质空间,少部分分泌至胞外。对EgDC酶的酶学性质进行了表征,发现该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和pH 6.5,其在20℃能保持70%以上活力,且在pH 8.0和pH 9.0的半衰期分别达到83.43 min和53.79 min。EgDC酶具有较好的催化性质,其比酶活力k_(cat)/K_(m)值分别为(26.38±1.43)U/mg和(520.03±17.07)s^(-1)/mg,且对于金属离子以及表面活性剂均具有较强耐受能力。由此可见,新型β-1,4-内切葡聚糖酶EgDC具有较好的催化能力,且在低温、碱性以及存在表面活性剂环境下较为稳定,因此具有潜在的工业应用价值。 展开更多
关键词 基因挖掘 β-1 4-内切葡聚糖酶 异源表达 酶学性质 低温 耐碱性
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睾丸特异表达基因-1在小鼠隐睾模型中的表达及其意义 被引量:3
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作者 顾朝辉 曾甫清 童强松 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期239-241,共3页
目的 探讨睾丸特异表达基因-1(TSEG-1)在小鼠隐睾模型中的定位、定量表达变化及其意义.方法 将46只雄性昆明新生小鼠随机分为对照组(n=10)、丙二醇(溶剂)注射组(n=15)、17β-雌二醇注射组(n=21),应用苏术素-伊红(HE)染色观... 目的 探讨睾丸特异表达基因-1(TSEG-1)在小鼠隐睾模型中的定位、定量表达变化及其意义.方法 将46只雄性昆明新生小鼠随机分为对照组(n=10)、丙二醇(溶剂)注射组(n=15)、17β-雌二醇注射组(n=21),应用苏术素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学改变,原位杂交、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR检测TSEG-1 mRNA的定位和定量变化.结果 17β-雌二醇注射组发生隐睾,而对照组和丙二醇注射组睾丸位置正常.与对照组比较,17β-雌二醇组睾丸组织80%曲精小管管腔消失,Ⅰ~Ⅳ级生精细胞数目减少,60%精母细胞或精子细胞核皱缩,90%精子发生障碍.在对照组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平是模型组25倍,主要定位于精母细胞和早期精子细胞,而隐睾组TSEG-1 mRNA表达水平显著下调.结论 17β-雌二醇诱导小鼠隐睾模型是制作隐睾模型的有效方法 ,新基因TSEG-1可能参与雌激素诱导隐睾模型的发生过程. 展开更多
关键词 1-雌二醇 隐睾 睾丸特异表达基因-1
原文传递
睾丸特异表达基因-1在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达及意义 被引量:1
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作者 顾朝辉 田凤艳 +6 位作者 李冠儒 贾占奎 孟政雷 孙科 魏金星 杨锦建 阚全程 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1530-1532,F0004,共4页
目的 探讨睾丸特异表达基因-1(TSEG-1)在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达变化及意义。方法 首先建立乙醇致睾丸损伤模型,将12只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,用生理盐水稀释无水乙醇为15%浓度。实验组小鼠每天按3 g乙... 目的 探讨睾丸特异表达基因-1(TSEG-1)在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达变化及意义。方法 首先建立乙醇致睾丸损伤模型,将12只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,用生理盐水稀释无水乙醇为15%浓度。实验组小鼠每天按3 g乙醇(15%,V/V)/kg体质量,腹腔内注射14 d,对照组为等体积生理盐水。应用苏木素-伊红(HE)染色鉴定睾丸组织形态学变化,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TSEG-1 mRNA变化,采用免疫组织化学和Western blot检测其蛋白变化。结果 乙醇组睾丸HE染色结果提示,与对照组比较,乙醇组睾丸组织85.6%曲精小管管腔消失,I-Ⅳ级生精细胞数目减少,78.2%精母细胞或精子细胞核皱缩。在乙醇组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平(7.500±0.657,n=6)较对照组(0.985±0.231,n=6)显著增加,差异有统计学意义(t=22.915,P〈0.01)。同时,乙醇组TSEG-1蛋白质较生理盐水组显著增加,经Quantity One软件分析灰度值后,与管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)比较,乙醇组TSEG-1蛋白(1.360±0.202,n=6)较生理盐水组(0.330±0.112,n=6)表达增加达4倍,差异有统计学意义(t=10.69,P〈0.01)。结论 乙醇致小鼠睾丸损伤模型是研究睾丸损伤的可靠模型,TSEG-1可能参与乙醇致睾丸损伤模型的分子发生过程。 展开更多
关键词 乙醇 睾丸损伤 睾丸特异表达基因-1
原文传递
长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究
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作者 张璐 郭含梦 王庆义 《陕西医学杂志》 CAS 2024年第7期895-899,共5页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 母系表达基因8 微小RNA-495-3p 急性髓性白血病细胞 高迁移率族蛋白1
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草鱼TAB2与TAK1蛋白互作鉴定及其对两种抗菌肽基因表达的影响
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作者 杨文飞 郭佳静 +1 位作者 赵文平 李槿年 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期131-140,共10页
为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利... 为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利用荧光共定位、免疫共沉淀及Western blot技术鉴定Ci TAB2与Ci TAK1在细胞内共定位及相互作用情况。最后将过表达质粒pEGFP-N1-Citak1与pEGFP-N1-Citab2共同转染草鱼肾细胞(CIK细胞),检测Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平。结果显示,拟态弧菌感染能够显著改变Citab2和Citak1的相对表达水平,前者于感染后不同时间在各检测组织中表现出不同的时空表达模式,而后者均呈现先上调后下调的表达模式;荧光显微镜下观察到Ci TAB2与Ci TAK1共定位于转染后的HEK293T和CIK细胞的胞质中,且在HEK293T细胞内能够形成Ci TAB2-Ci TAK1蛋白复合物;共同过表达Ci TAB2与Ci TAK1后,CIK细胞内Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平在各检测时间点均显著上调。结果表明,Ci TAB2与Ci TAK1存在互作关系且二者互作能够促进上述两种抗菌肽的转录表达。本研究从蛋白互作调控抗菌肽表达的角度为防治鱼类弧菌病提供了新策略。 展开更多
关键词 草鱼 转化生长因子-β激活激酶1(TAK1) TAK1结合蛋白2(TAB2) 蛋白互作 抗菌肽基因表达
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中华绒螯蟹内源性纤维素酶EsGH9-1基因的克隆、表达及其对不同饵料的响应
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作者 刁澎云 储俊东 +6 位作者 李旭光 陈建华 周军 邓燕飞 许郑超 刘洪岩 曾庆飞 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第1期147-155,共9页
本研究从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)转录组数据库中比对筛选到内源性纤维素酶(β-1,4-内切葡聚糖酶)基因序列信息,通过克隆获得该纤维素酶(EsGH9-1)基因组DNA和c DNA序列。EsGH9-1基因组DNA序列长度为11 679 bp,包含15个外显子和1... 本研究从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)转录组数据库中比对筛选到内源性纤维素酶(β-1,4-内切葡聚糖酶)基因序列信息,通过克隆获得该纤维素酶(EsGH9-1)基因组DNA和c DNA序列。EsGH9-1基因组DNA序列长度为11 679 bp,包含15个外显子和14个内含子;c DNA序列全长为2044 bp,编码580个氨基酸,具有糖基水解酶第9家族的典型催化功能域。RT-PCR结果显示,EsGH9-1主要分布在肝胰腺组织,在大眼幼体期和仔蟹早期高表达。不同饵料条件下,EsGH9-1相对表达量在植物性饵料组显著上调,与β-1,4内切葡聚糖酶活性趋势相一致,推测EsGH9-1参与纤维素的消化与分解。本研究证明中华绒螯蟹自身具有纤维素酶基因,为今后深入研究内源性纤维素酶在水生甲壳类的摄食与消化机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 纤维素酶 β-1 4内切葡聚糖酶 基因克隆 表达分析 不同饵料
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睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因片段的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 王莉 李青 +3 位作者 郭爱林 张丰 郭斌 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期148-149,155,共3页
目的 :克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE E1基因片段。方法 :从人胶质瘤细胞系BT 32 5提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体 pGEX ... 目的 :克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE E1基因片段。方法 :从人胶质瘤细胞系BT 32 5提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。结果 :用 1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白的表达即达高峰。SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr 约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论 :该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体 ,以及制备肿瘤疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 睾丸肿瘤 抗原 MAGE-E1基因 基因克隆 大肠杆菌 基因表达
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玉米生物钟基因ZmPRR 1-2的克隆及表达分析
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作者 董柯清 王雷立 +2 位作者 刘青青 张严玲 王翠玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期21-28,共8页
为探究玉米生物钟基因ZmPRR 1-2的功能及表达特性,解析玉米光周期途径调控开花的机理,该研究以玉米骨干自交系‘黄早4’为材料,克隆ZmPRR 1-2基因的cDNA序列并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析和48 h... 为探究玉米生物钟基因ZmPRR 1-2的功能及表达特性,解析玉米光周期途径调控开花的机理,该研究以玉米骨干自交系‘黄早4’为材料,克隆ZmPRR 1-2基因的cDNA序列并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析和48 h的昼夜节律表达分析。结果表明:(1)成功克隆获得ZmPRR 1-2基因的编码区全长1554 bp,编码517个氨基酸,编码的蛋白属于PRR基因家族,含有1个REC结构域和1个CCT结构域,多序列比对和系统进化分析显示ZmPRR 1-2基因在禾本科植物中高度保守;ZmPRR1-2蛋白属亲水性蛋白,不包含跨膜结构域和信号肽。(2)ZmPRR 1-2基因在玉米叶片中的表达量最高,显著高于其他7个组织,表明该基因主要在叶片中发挥功能,而在果穗和花丝中表达量相对较低,且显著低于雄穗中的表达量。(3)昼夜节律表达分析显示,在短日照条件下,ZmPRR 1-2基因的表达量于光照3 h后开始逐渐上升,在光照结束后3 h时达到表达高峰;在长日照条件下,于光照6 h后ZmPRR 1-2基因的表达量才开始逐渐上升,且在光照结束时达到表达高峰。研究认为,ZmPRR 1-2基因在玉米开花转化过程中对雄穗发育和雌穗发育的调控功能存在差异,推测ZmPRR 1-2基因可能在玉米生物钟调控中发挥重要作用。 展开更多
关键词 玉米 生物钟 ZmPRR 1-2 基因克隆 表达分析
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人睾丸组织特异表达新基因HSD-9的克隆及其编码蛋白质功能
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作者 王勇 陈轶男 +2 位作者 乔原 缪时英 王琳芳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期318-323,I0004,共7页
目的利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,... 目的利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,原核表达方法得到HSD-9蛋白并制备特异性多克隆抗体,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术研究HSD-9蛋白在生精细胞中的定位及在哺乳动物细胞中的表达特点。结果HSD-9基因在人睾丸组织特异表达,其大鼠同源物可在大鼠各级生精细胞中表达;HSD-9-EGFP在CHO细胞和S4细胞中表达呈现沿细胞膜分布的小颗粒和偏心分布于胞内一侧的粗大颗粒;HSD-9-EGFP和网格蛋白clathrin可以部分共定位。结论HSD-9是人睾丸组织特异表达新基因,其编码蛋白质在CHO细胞和S4细胞中表达特点非常类似于内吞小体蛋白的表达特点,推测其可能参与了细胞中内吞过程的调节。 展开更多
关键词 HSD-9 睾丸组织特异表达基因 CLATHRIN 内吞
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人睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因的克隆测序及在原核系统中的表达
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作者 王莉 李青 +3 位作者 郭爱林 郭斌 张丰 樊代明 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期380-382,共3页
目的 扩增及克隆人的MAGE E1基因并利用大肠杆菌进行表达。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体... 目的 扩增及克隆人的MAGE E1基因并利用大肠杆菌进行表达。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体 pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。 结果  1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白表达即达高峰 ,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论 成功扩增、克隆MAGE E1基因 ,并在大肠杆菌中得到稳定高效表达。 展开更多
关键词 睾丸肿瘤抗原 MAGE-E1基因 克隆 测序 原核系统 表达
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金线莲甘露糖-1-磷酸尿苷转移酶基因的克隆与表达分析
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作者 李和平 林江波 +2 位作者 黄惠明 邹晖 戴艺民 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期537-544,共8页
【目的】甘露糖是金线莲多糖重要组成成分,对甘露糖-1-磷酸尿苷转移酶(GMP)基因进行克隆和基因表达调控分析,为进一步研究金线莲多糖的生物合成奠定基础。【方法】以梅花山金线莲植株为材料,克隆ArGMP基因的cDNA序列和基因组序列,利用... 【目的】甘露糖是金线莲多糖重要组成成分,对甘露糖-1-磷酸尿苷转移酶(GMP)基因进行克隆和基因表达调控分析,为进一步研究金线莲多糖的生物合成奠定基础。【方法】以梅花山金线莲植株为材料,克隆ArGMP基因的cDNA序列和基因组序列,利用在线软件进行生物信息学分析,并对其基因表达调控模式进行qRTPCR分析。【结果】金线莲ArGMP基因ORF区序列长1086 bp,共编码361个氨基酸;基因组序列长度为1760 bp,含有3个内含子,GenBank登录号OQ030271。生物信息学分析表明:ArGMP蛋白是一种较稳定的、无跨膜结构的亲水蛋白,该蛋白与铁皮石斛、深圳拟兰、蝴蝶兰等兰科植物的亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示:ArGMP基因在金线莲不同组织中的表达量差异显著,在花中的表达量最高;在不同种植温度处理条件下,25℃时表达量最高,高温严重抑制其表达;35℃高温处理不同时间显示,处理3 h后ArGMP基因表达量显著下降;而不同浓度NaCl胁迫处理对ArGMP基因表达基本无影响。【结论】克隆了甘露糖-1-磷酸尿苷转移酶基因的cDNA序列和基因组序列,发现该基因具有组织特异性表达的特点,且该基因受温度调控,而不受盐胁迫调控,这为进一步研究金线莲多糖生物合成调控机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 金线莲 甘露糖-1-磷酸尿苷转移酶 多糖 基因表达
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QGY-7701肝癌细胞株中癌-睾丸抗原GAGE-1基因的表达 被引量:2
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作者 农彩莲 李立志 +6 位作者 范蓉 何国珍 李中华 岑妍慧 黄荣师 陈青 赵飞兰 《广西医学》 CAS 2013年第5期521-523,共3页
目的研究癌-睾丸抗原GAGE-1基因mRNA在QGY-7701肝癌细胞株中的表达情况。方法运用反转录聚合酶链反应技术检测肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因呈阳性表达,正常肝组织... 目的研究癌-睾丸抗原GAGE-1基因mRNA在QGY-7701肝癌细胞株中的表达情况。方法运用反转录聚合酶链反应技术检测肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因呈阳性表达,正常肝组织中GAGE-1基因呈阴性表达。结论 GAGE-1基因具有作为诊断肝癌的分子标记和免疫治疗肝癌的特异性靶位的潜在价值。 展开更多
关键词 肝癌 -睾丸抗原 QGY-7701肝癌细胞株 GAGE-1基因 反转录聚合酶链反应
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基于HIF-1信号通路基因变化探讨COPD肺血管病变的发生机制
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作者 李小娟 郭思佳 +4 位作者 孙增涛 王坤 李晓丹 岳宝柱 栾哲宇 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第14期3431-3436,共6页
目的以慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型为基础,探索COPD肺血管病变发生发展与低氧诱导因子(HIF)-1复合信号通路的关系。方法将30只SD雄性大鼠随机分为正常组10只,模型组20只,模型组后续分为造模6 w组与造模12 w组。以香烟烟雾暴露结合... 目的以慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型为基础,探索COPD肺血管病变发生发展与低氧诱导因子(HIF)-1复合信号通路的关系。方法将30只SD雄性大鼠随机分为正常组10只,模型组20只,模型组后续分为造模6 w组与造模12 w组。以香烟烟雾暴露结合鼻腔滴入内毒素法建立COPD模型,收集正常组、造模6、12 w组肺组织,q-聚合酶链反应(PCR)法检测COPD模型造模后不同时间点HIF-1复合通路关键基因HIF-1α、热休克蛋白(HSP)90、血管内皮生长因子(VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮素(ET)-1 mRNA表达。结果与正常组相比,COPD模型组黏膜下存在明显的炎细胞浸润,肺泡壁变薄或断裂引起部分肺泡扩大融合形成肺大泡,肺血管也显示出不同程度增生,管壁增厚或管腔变形,微血管数量明显增多。与正常组相比,造模6、12 w后肺组织中HIF-1α、HSP90、VEGF、ET-1 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),且造模12 w后肺组织中HIF-1α、VEGF、iNOS mRNA表达与造模6 w时相比显著上调(P<0.05)。与造模6 w时相比,造模12 w后肺组织中HSP90、ET-1 mRNA表达无显著差异(P>0.05)。与正常组相比,肺组织中iNOS mRNA表达在造模6 w时无显著差异(P>0.05),造模12 w后肺组织中iNOS mRNA表达显著上调(P>0.05)。结论COPD肺血管病变的发生发展与HIF-1复合信号通路的表达相关,且严重程度与造模时长呈正相关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 肺血管病变 低氧诱导因子(HIF)-1信号通路 基因表达
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乳腺癌特异基因1在乳腺癌表达的意义 被引量:18
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作者 吴克瑾 翁子毅 +4 位作者 林古法 殷敏智 钱惠琴 张一楚 丁小燕 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期193-195,共3页
目的 检测乳腺癌特异基因 1(BCSG1)在乳腺癌中的表达 ,评价其表达与乳腺癌临床病理因素的相关性。方法 利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR法 )检测 2 8例乳腺癌、7例乳腺增生症及 5例乳腺纤维瘤中BCSG1的表达。结果  2 8例乳腺癌中有... 目的 检测乳腺癌特异基因 1(BCSG1)在乳腺癌中的表达 ,评价其表达与乳腺癌临床病理因素的相关性。方法 利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR法 )检测 2 8例乳腺癌、7例乳腺增生症及 5例乳腺纤维瘤中BCSG1的表达。结果  2 8例乳腺癌中有BCSG1表达 12例 (4 2 .9% ) ,其中Ⅲ /Ⅳ期乳腺癌的表达率为 6 9.2 %(9/ 13例 ) ,乳腺良性病变中BCSG1无一例表达。BCSG1的表达与乳腺癌分期密切相关 (P =0 .0 2 ) ,与患者年龄、月经、肿瘤部位以及雌激素受体、孕激素受体、核增殖抗原、C erbB2 的表达等无相关性。结论 BCSG1可能是与肿瘤恶性进展有关的肿瘤标记物 ,是乳腺癌发生过程中的中晚期事件 ,为判定乳腺癌预后的新指标。 展开更多
关键词 乳腺癌 特异基因1 表达 逆转录-聚合酶链反应
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睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1与Mtsarg1的分子克隆及Mtsarg1基因的表达谱分析 被引量:9
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作者 傅俊江 卢光琇 +3 位作者 李麓芸 刘刚 邢晓为 刘上峰 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期25-29,共5页
从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (GenBank登录号 :BE64 45 3 8)出发 ,利用生物信息学和实验技术 ,克隆了小鼠睾丸生精细胞凋亡相关新基因Mtsarg1及相应的人类新基因TSARG1,Gen Bank登录号分别为AF3 99971和... 从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (GenBank登录号 :BE64 45 3 8)出发 ,利用生物信息学和实验技术 ,克隆了小鼠睾丸生精细胞凋亡相关新基因Mtsarg1及相应的人类新基因TSARG1,Gen Bank登录号分别为AF3 99971和AY0 3 2 92 5。小鼠Mtsarg1与人类TSARG1基因在氨基酸水平有 5 5 %的一致性和 61%相似性 ,与其他已知蛋白质无明显同源性。小鼠 10种组织的RT -PCR分析结果表明 ,Mtsarg1基因在睾丸中高表达 ,在附睾中呈微弱表达 ,在其他组织不表达 。 展开更多
关键词 睾丸生精细胞 凋亡相关基因 TSARG1 Mtsarg1 Mtsarg1基因 分子克隆 表达谱分析
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猪α1-干扰素的基因改造与高效原核表达 被引量:27
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作者 曹瑞兵 徐学清 +2 位作者 周斌 陈德胜 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期291-294,共4页
poIFN α1基因中含有大量的大肠杆菌稀有密码子 ,为了获得高表达 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工合成了poIFN α1成熟蛋白编码基因。在保留编码蛋白序列的同时 ,使其 5′端A +T的含量增加到最大限度 ,并将其终止密码子改为TAA。将... poIFN α1基因中含有大量的大肠杆菌稀有密码子 ,为了获得高表达 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工合成了poIFN α1成熟蛋白编码基因。在保留编码蛋白序列的同时 ,使其 5′端A +T的含量增加到最大限度 ,并将其终止密码子改为TAA。将合成的poIFN α1成熟蛋白编码基因插入原核单纯表达载体pRLC中 ,转化大肠杆菌DH5α。实现了poIFN α1在大肠杆菌中的高效表达 ,表达产物以包涵体形式存在。纯化的包涵体经含DTT的 6mol L盐酸胍的变性液溶解及含GSH GSSG的复性液复性处理 ,复性后的表达产物浓缩后经凝胶层析纯化 ,细胞病变抑制法测定表明 ,重组poIFN α1具有较高的抗病毒活性 ,约为 6 4x10 6 u mg。 展开更多
关键词 α1-干扰素 基因 原核表达 poIFN-α1 大肠杆菌 包涵体 抗病毒活性
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小鼠睾丸组织Bmi1基因的克隆及原核表达 被引量:5
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作者 张世庆 李德雪 +3 位作者 李恩中 王常勇 张学明 鲁景艳 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期308-310,314,共4页
目的:克隆小鼠Bm i1 cDNA并进行原核表达,为下一步制备BM I1多克隆抗体奠定基础。方法:从小鼠睾丸组织中克隆Bm i1 cDNA,测序并利用BLAST程序比对证明该基因序列正确后,构建原核表达载体pET-28 c-Bm i1,将其转入大肠埃希菌BL21中,异丙基... 目的:克隆小鼠Bm i1 cDNA并进行原核表达,为下一步制备BM I1多克隆抗体奠定基础。方法:从小鼠睾丸组织中克隆Bm i1 cDNA,测序并利用BLAST程序比对证明该基因序列正确后,构建原核表达载体pET-28 c-Bm i1,将其转入大肠埃希菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过免疫印迹检测重组目的蛋白。结果:成功克隆了小鼠Bm i1 cDNA,原核表达的融合蛋白可与H is标签抗体和BM I1单克隆抗体特异性结合。结论:小鼠睾丸组织中Bm i1基因有表达;成功克隆了小鼠Bm i1 cDNA并在大肠埃希菌BL21中正确表达了重组蛋白rBM I1。 展开更多
关键词 Bmi1基因 睾丸 克隆 表达 小鼠
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精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA表达的探讨 被引量:8
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作者 范蓉 肖绍文 +4 位作者 何少健 张小静 罗昱 罗国容 谢小薰 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期102-105,共4页
目的了解精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA的表达特点,研制癌-睾丸抗原(CTA)的肿瘤疫苗。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测95例正常人组织及125例人肿瘤组织中Sp32/OY-TES-1mRNA的表达,随机选取RT-PCR阳性产物12份进行DNA测... 目的了解精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA的表达特点,研制癌-睾丸抗原(CTA)的肿瘤疫苗。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测95例正常人组织及125例人肿瘤组织中Sp32/OY-TES-1mRNA的表达,随机选取RT-PCR阳性产物12份进行DNA测序;对所得数据进行统计学分析。结果Sp32/OY-TES-1在正常和肿瘤组织中的表达频率分别为68.4%(65/95)和44.00%(55/125),两者比较有统计学意义(P<0.05)。在24种不同器官的正常组织中,21种表达Sp32/OY-TES-1基因mRNA(87.50%)。DNA测序结果证实,RT-PCR产物为Sp32/OY-TES-1基因。结论Sp32/OY-TES-1基因的mRNA在正常组织中广泛表达,它是否可归为睾丸和肿瘤限制性表达的基因尚需进一步研究。 展开更多
关键词 -睾丸抗原 基因表达 精子蛋白 逆转录聚合酶链反应
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大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎症蛋白-2α基因表达的变化 被引量:14
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作者 陈宣维 贾连顺 +2 位作者 孙海燕 桂斌捷 陈长青 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2004年第1期77-79,共3页
目的 :探讨大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)、巨噬细胞炎症蛋白 1α (MIP 1α)mRNA表达的变化规律。方法 :SD大鼠 42只 ,随机分为 7组 ,采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓MC... 目的 :探讨大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)、巨噬细胞炎症蛋白 1α (MIP 1α)mRNA表达的变化规律。方法 :SD大鼠 42只 ,随机分为 7组 ,采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓MCP 1、MIP 1αmRNA表达情况。结果 :正常脊髓组织内存在MCP 1、MIP 1αmR NA的表达 ,脊髓损伤后MCP 1、MIP 1αmRNA表达逐渐增强 ,MCP 1在伤后 2 4h达到高峰 ,MIP 1α伤后 6h达到高峰。结论 :MCP 1、MIP 1α存在于正常的脊髓组织内 ,脊髓损伤后MCP 1、MIP 1α表达迅速增强 ,提示参与了继发性脊髓损伤过程 ,并可能是损伤因素。 展开更多
关键词 脊髓损伤 单核细胞趋化蛋白-1 巨噬细胞炎症蛋白-1Α 基因表达 聚合酶链式反应 大鼠
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大豆谷氨酰胺合成酶基因的分类及根瘤特异表达GmGS1β2基因功能的初步分析 被引量:5
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作者 王晓波 滕婉 +1 位作者 何雪 童依平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2145-2153,共9页
从Phytozome数据库中获得包括大豆在内的12种植物的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)氨基酸序列,利用MEGA5.10软件进行多序列比对、构建进化树。进化分析表明,植物GS可以分成胞质型(GS1)和质体型(GS2)两大类,GS1可进一步分成分... 从Phytozome数据库中获得包括大豆在内的12种植物的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)氨基酸序列,利用MEGA5.10软件进行多序列比对、构建进化树。进化分析表明,植物GS可以分成胞质型(GS1)和质体型(GS2)两大类,GS1可进一步分成分5个亚类,包括双子叶植物为主的I、II和III亚类、低等植物类(IV)和单子叶植物类(V)。这5亚类中,第II类是豆科植物特有的一类,大豆的4个GS1(GmGS1β1/2和GmGS1γ1/2)属于该亚类;利用qPCR在大豆盛花期分析GS1基因的组织表达特异性,结果表明不同类型GmGS1基因在表达部位和表达丰度上存在较大差异,而同一类基因之间具有相似的表达规律;4个豆科植物特有的GS1基因在大豆根瘤中都有较高的表达量,其中位于大豆第18染色体上的GmGS1β2基因表达丰度最高;利用原核表达系统体外表达GmGS1β2蛋白,诱导出分子量大小与理论预测值一致的目标蛋白,酶活性分析表明GmGS1β2可以与底物发生催化反应,具有谷氨酰胺合成酶活性,推测该基因在大豆根瘤氮素同化代谢中具有重要作用。 展开更多
关键词 大豆 GmGS1基因 组织特异表达 GS酶活性
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