TSEG-2基因在小鼠睾丸扭转复位模型中的表达特征

目的 探讨睾丸特异表达基因2（testis specific expressed gene 2,TSEG-2）在小鼠睾丸扭转复位模型中的表达特征.方法 昆明小鼠36只,随机分组为对照组（6只）、假手术组（6只）、单侧睾丸扭转复位实验组（24只）.实验组分为2组,每组12只,左侧睾丸扭转720°维持2 h,分别于复位后1、7 d取扭转侧睾丸.采用HE染色、原位末端标记技术（TUNEL）观察睾丸组织形态改变;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）活性;原位杂交法观测TSEG-2在睾丸生精细胞内的表达定位;实时定量PCR法检测TSEG-2基因在睾丸组织中的表达水平.结果 对照组和假手术组生精上皮排列规则,扭转复位后1、7 d的睾丸组织内生精上皮结构松散,出现生精细胞凋亡,Johnsen＇s评分分别降低23.4%、64.1%（P〈0.01）,SOD活性降低11.6%、22.2%（P〈0.05）,MDA活性升高69.6%、93.2%（P〈0.01）.TSEG-2基因表达定位于小鼠睾丸生精小管的精原细胞和精母细胞.与对照组比较,扭转复位1、7 d后睾丸组织内TSEG-2表达水平分别上调2.2倍、6.6倍（P〈0.01）.结论 成功建立小鼠睾丸扭转复位模型,TSEG-2表达上调可能与抗氧化酶活性下降、生精细胞凋亡有关.

TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达

目的构建睾丸特异表达基因2（TSEG-2）的真核表达载体，探讨TSEG-2存细胞中的表达及其生物学功能。方法以小鼠睾丸组织cDNA为模版，设计携带HindⅢ和BamHI酶切位点的引物序列，聚合酶链反应（PCR）扩增基因片段，克隆至携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的真核表达载体pEGFP—N1；在阳离子聚合物聚乙烯亚胺（PEI）的介导下，重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd48h后，荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位，噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞生长活性，AO／EB荧光染色法、Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，实时定量PCR测定Fas、bcl-2、bax表达水平。结果成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP—TSEG2，转染GC-2spd细胞后可见胞质内绿色荧光蛋白表达。转染pEGFP—TSEG248h后，GC-2spd细胞生长抑制39．2％（P〈0．05），出现细胞凋亡形态学改变，凋亡率为28．3％（P〈0．05）；GC-2spd细胞中Fas和bcl-2的表达分别下调17．9％、64．8％（P〈0．05），而bax的表达上调25．1％（P〈0．05）。结论成功构建TSEG-2基因的真核表达载体，能在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡。