儿童嵌顿性腹股沟斜疝致睾丸缺血损伤的影响因素

目的本研究旨在总结儿童嵌顿性腹股沟斜疝对睾丸缺血损伤的影响因素,以便术前更准确地评估睾丸缺血损伤,从而及时进行睾丸探查或防止不必要的探查。方法回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院2013年7月到2019年6月行疝囊及同侧睾丸探查术的单侧嵌顿性腹股沟斜疝患儿临床资料,收集数据包括年龄、嵌顿时间、肠管损伤程度(术中发现)、睾丸损伤程度(探查发现)、既往手法复位次数和术前超声检查等。通过SAS 9.4(Copyright © 2016 SAS Institute Inc.Cary,NC,USA)进行单因素分析和逐步倒退多因素Logistics回归分析。结果 460例接受了术前超声检查,其中57例(12.39%)(中位年龄:1.4个月,四分位区间:0.8~10.7个月)有严重的睾丸缺血损伤,平均嵌顿时间为(23.9±9.3)h,术前超声检查预测严重睾丸缺血损伤的敏感度为68.42%,特异度为95.30%。单因素Logistic回归分析显示:年龄(OR=0.257,95%CI=0.146~0.451)、手法复位次数增多(OR=4.543,95%CI=3.285~6.283)与睾丸损伤程度呈负相关,术前超声评分(OR=3.994,95%CI=2.845~5.609)、嵌顿时间(OR=0.457,95%CI=0.224~0.934)、肠管损伤程度(OR=2.317,95%CI=1.633~3.287)与睾丸损伤严重程度呈正相关(P<0.05)。通过多元分析与后向逐步逻辑回归分析建立了一个严重的睾丸局部缺血损伤可能性计算模型:,当P<0.15时,则认为该患者患有严重的睾丸局部缺血损伤。通过十字交叉试验初步验证了模型的预测准确性。结论本研究提供了一个相对可靠的预测模型,可使用易获得的临床数据来预测因嵌顿性腹股沟斜疝导致的严重睾丸缺血损伤的风险,与单独的术前超声相比,该模型可提高严重睾丸损伤的预测准确性。

lncRNA MALAT1靶向调控miR-214在睾丸缺血再灌注损伤中的作用及其机制

目的:观察长链非编码RNA肺癌转移相关转录本1(IncRNA MALAT1)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型,qRT-PCR法检测不同复氧损伤时间点IncRNA MALAT1和微小RNA-214(miR-214)的表达变化;分别采用MTT实验、流式细胞术测定转染IncRNA MALAT1对GC-1细胞增殖和凋亡的影响;采用Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase-3和cytc蛋白表达;荧光素酶实验验证IncRNA MALAT1和miR-214的靶向关系,并采用qRT-PCR法检测转染IncRNA MALAT1后细胞中miR-214的表达变化。结果:IncRNA MALAT1随着复氧损伤时间的增加,其表达增高,在缺氧3 h/复氧24 h细胞上调最为明显,而miR-214的表达降低;过表达IncRNA MALAT1能显著抑制GC-1细胞增殖能力,促进细胞凋亡。沉默IncRNA MALAT1可使GC-1细胞的增殖能力增强,凋亡水平减弱;荧光素酶报告实验表明IncRNA MALAT1序列上有miR-214的结合位点。过表达IncRNA MALAT1抑制GC-1细胞miR-214表达,而沉默IncRNA MALAT1能促进miR-214表达。结论:IncRNA MALAT1可以通过靶向miR-214改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展。

缺血后处理对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的影响

目的观察缺血后处理对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的影响。方法 60只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组20只。对照组行左侧睾丸假手术。缺血再灌注组予左侧睾丸扭转720度,2h后复位。缺血后处理组予左侧睾丸扭转720度,2h后行缺血后处理,即先将睾丸复位,血流再灌注10s,然后将睾丸再次扭转720度,使睾丸缺血10s,反复6个循环,最后睾丸复位,血流持续灌注。复位后4h,每组处死大鼠10只,行左侧睾丸切除术,测定睾丸组织丙二醛水平。复位后3个月,各组处死剩余的大鼠,行左侧睾丸切除术,分析睾丸生精功能。结果睾丸组织丙二醛含量缺血后灌注组>缺血后处理组>处理组[(2.73±0.34)、(1.86±0.29)、(1.45±0.20)mmol/mg](P<0.05),睾丸生精功能对照组>缺血后处理组>缺血后灌注组[(22.03±1.97)、(15.13±1.81)、(2.14±0.42)×106](P<0.05)。结论缺血后处理对睾丸缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与降低活性氧水平有关。

牛磺酸对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的影响

目的：睾丸扭转复位后的损伤是一种缺血再灌注损伤。本研究旨在探讨牛磺酸对睾丸缺血再灌注损伤的影响。方法60只成年雄性SD大鼠随机分为三组，对照组作左侧睾丸假手术；缺血再灌注组作左侧睾丸扭转，2h后复位；治疗组与缺血再灌注组用一样的外科手术，治疗组术后给予牛磺酸静脉注射，复位后4h或3个月行睾丸切除术，分析睾丸髓过氧化物酶活性（反映中性粒细胞数目的指标）、丙二醛水平（活性氧标志）和睾丸生精功能。结果单侧睾丸扭转复位引起该侧睾丸髓过氧化物酶活性、丙二醛水平明显升高，睾丸生精功能显著降低，牛磺酸治疗后睾丸髓过氧化物酶活性和丙二醛水平得到降低，睾丸生精功能得到显著提高。结论牛磺酸对睾丸缺血再灌注损伤具有明显的保护效应，该效应可能与减少睾丸内中性粒细胞数目和活性氧产生有关。

黄芩素减轻大鼠睾丸缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究

研究PI3K蛋白在黄芩素减轻大鼠睾丸扭转缺血后再灌注损伤中的作用。方法:采用Turner法建立SD大鼠睾丸I/R损伤模型。36只健康且年龄7-8周的雄性SD品系大鼠(180-220g)不按照任何顺序分成3组,每组12只:虚拟手术组(对照组):无菌手术将左侧阴囊做手术切口,分离筋膜至附睾,沿精索游离至将左侧睾丸露出,不予扭转,固定于阴囊2小时返还阴囊,缝合手术切口;缺血再灌注组(模型组);缺血再灌注+黄芩素(黄芩素治疗组)。模型组和黄素治疗组麻醉后在左侧阴囊做无菌手术切口,游离精索至左侧睾丸并将睾丸露于阴囊外,沿睾丸纵轴方向顺向扭转720°,固定扭转状态2小时,恢复位置后闭合切口。复位前30min黄芩素治疗组腹腔注射17ml/kg的黄芩素生理盐水溶液,再于手术总时长4h后,所有试验动物颈椎离断处死,取睾丸组织精密称重后沿中轴切开,其中一半用于组织匀浆,检测各组睾丸组织中各项氧化应激标志物的水平,另一半用于制备石蜡切片。结果:与对照组相比,模型组和黄芩素治疗组睾丸组织均存在病理损伤,生精细胞减少,活性氧含量上升,超氧化物歧化酶活性降低,经免疫组织化学法测定PI3K蛋白表达水平较高。与扭转复位组相比,扭转复位+黄芩素组睾丸组织病理损伤较不明显,生精细胞减少较少,活性氧(ROS)含量上升幅度较小,超氧化物歧化酶(SOD)活性较高,PI3K蛋白表达水平更高。

LncRNA H19/miR-203a/PTEN轴在小鼠GC-1细胞缺血再灌注损伤中的作用及影响机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19在小鼠体外GC-1细胞的表达,以及其通过调控微小RNA(miRNA)-203a/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)轴对GC-1细胞凋亡和增殖的影响。方法:建立GC-1细胞体外缺氧复氧模型,qRT-PCR检测GC-1细胞不同复氧损伤时间点lncRNA H19的表达变化;MTT法、流式细胞术测定沉默lncRNA H19对GC-1细胞增殖和凋亡的影响;Western印迹检测沉默lncRNA H19对GC-1细胞凋亡相关蛋白Bax和caspase-3表达的影响;qRT-PCR和Western印迹分别测定沉默lncRNA H19后GC-1细胞miR-203a和PTEN的表达变化。结果:随着复氧损伤时间的增加,GC-1细胞lncRNA H19表达明显增加,在缺氧3 h/复氧12 h达到峰值,与此同时miR-203a表达明显降低。此外,沉默lncRNA H19增强了GC-1细胞的增殖能力并降低了其凋亡水平,增加了miR-203a表达水平并降低了PTEN表达水平,结果显著。结论:LncRNA H19在体外GC-1细胞中高表达,其可能通过调控miR-203a/PTEN信号途径改变GC-1细胞增殖及凋亡的能力。

胡黄连苷Ⅱ对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨胡黄连苷Ⅱ在大鼠睾丸缺血再灌注损伤过程中的保护作用。方法选取成年雄性SD大鼠45只随机分为3组,每组15只:睾丸缺血再灌注+胡黄连苷Ⅱ组(睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组);睾丸缺血再灌注组(睾丸IRI组);对照组。睾丸IRI组和睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组大鼠分别建立睾丸扭转复位模型,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组在再灌注同时腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(10 mg/kg)。HE染色观察睾丸组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;采用原位缺口末端标记检测细胞凋亡指数;免疫组化检测睾丸组织中的Bax和Caspase-3的表达情况;RT-PCR检测TNF-α和IL-1βmRNA表达水平。结果睾丸IRI组可见生精上皮排列紊乱,生精细胞广泛脱落等表现;3组的凋亡指数分别为(4.28±0.36)%、(18.93±1.27)%、(9.53±1.02)%,SOD活性分别为(0.83±0.05)、(0.28±0.03)、(0.54±0.03)U/mg蛋白,MDA含量分别为(1.92±0.26)、(5.23±0.78)、(2.97±0.35)nmol/g蛋白,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P<0.05);睾丸IRI组中Bax及Caspase-3表达明显高于对照组,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组明显改善IRI引起的表达变化;与对照组相比,睾丸IRI组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显增高。和睾丸IRI组比较,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显减低,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P<0.05)。结论胡黄连苷Ⅱ可减轻氧化应激水平,发挥抗炎及抗凋亡作用,从而在睾丸组织在缺血再灌注损伤过程中发挥保护作用。

磷酸酶和张力蛋白同源物在睾丸缺血再灌注损伤中对GC-1细胞焦亡的影响及作用机制

目的探讨磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞焦亡的作用及其机制。方法建立睾丸GC-1细胞(美国ATCC细胞库)缺氧复氧模型,采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同复氧损伤时间点PTEN的表达变化;分别采用免疫荧光实验、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染PTEN后对GC-1细胞焦亡相关蛋白NLRP3和Caspase-1表达水平的影响。组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果对照组及缺氧复氧组(0、6、12、24 h)PTEN的mRNA表达水平分别为(1.00±0.21、3.48±0.35、3.75±0.38、4.25±0.40、4.06±0.37)。与未缺氧GC-1细胞的对照组比较,随着复氧损伤时间的增加,PTEN表达明显增高,并在复氧12 h达到峰值(F=43.21,P<0.05)。Western blot结果显示,缺氧复氧组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.52±0.04、0.41±0.04)高于对照组(0.24±0.03、0.20±0.03,t=9.700,P<0.05;t=7.275,P<0.05)。过表达PTEN组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.75±0.06、0.62±0.05)高于其对照组(0.53±0.04、0.42±0.03)明显(t=5.284,P<0.05;t=5.941,P<0.05)。沉默PTEN组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.36±0.03、0.32±0.03)低于对照组(0.52±0.04、0.41±0.03)明显(t=-5.543,P<0.05;t=-3.674,P<0.05)。结论PTEN在GC-1细胞中呈高表达,其可能通过改变GC-1细胞焦亡水平,从而影响睾丸IRI的发生发展。