人睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因的克隆测序及在原核系统中的表达

目的 扩增及克隆人的MAGE E1基因并利用大肠杆菌进行表达。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体 pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。 结果 1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白表达即达高峰 ,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论 成功扩增、克隆MAGE E1基因 ,并在大肠杆菌中得到稳定高效表达。

肿瘤睾丸抗原45在卵巢癌组织中的表达水平和血清免疫原性与预后的关系

目的评估肿瘤睾丸抗原45(CT45)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达水平和血清免疫原性与预后的关系。方法选取2018年11月至2020年1月在该院妇产科接受手术治疗的121例EOC患者(EOC组)和60例良性卵巢病变患者(对照组)作为研究对象,采集其组织和血清标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学法检测CT45在EOC组织、正常卵巢组织中的表达水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本中抗CT45自身抗体水平,采用Western blot试验进一步证实ELISA的检测结果。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清抗CT45自身抗体对EOC的诊断价值。结果EOC组CT45A1 mRNA表达水平[1.80(1.10,3.65)]明显高于对照组[0.99(0.68,1.32)],差异有统计学意义(Z=11.883,P<0.001)。46.28%(56/121)的EOC组织均表现出CT45蛋白高表达(++/+++)。CT45蛋白高表达水平与高国际妇产科联盟分期和化疗反应均有关(P<0.05)。EOC组血清抗CT45自身抗体水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,当抗CT45自身抗体最佳截断值设置为中位数(0.37)时,39.67%(48/121)的EOC患者血清标本中可检测到抗CT45自身抗体,其鉴别EOC组和对照组的曲线下面积为0.705,灵敏度和特异度分别为72.51%和68.95%。在48份ELISA检测阳性血清样本中,有81.25%(39/48)的EOC组织CT45蛋白呈高表达。Western blot试验证实了ELISA的检测结果与EOC血清中CT45的免疫原性。组织CT45蛋白高表达(P=0.006)或血清抗CT45自身抗体阳性(P=0.029)患者3年累计总生存率明显更低。结论CT45在EOC组织中表达水平上调,并且在EOC患者中诱导体液免疫反应,表明CT45是EOC的潜在预后生物标志物和肿瘤免疫治疗的靶点。

肿瘤睾丸抗原(CTA)在肺癌中的表达

目的 检测多种肿瘤睾丸抗原 (CTA )基因在肺癌中的表达。方法 用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)法对 35例肺癌患者癌组织和癌旁正常肺组织进行MAGE 1、 3,SSX 1、 2、 4、 5和NY ESO 1mR NA表达检测。随机抽取每种CTA基因的 3例RT PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。结果 35例肺癌标本中MAGE 1、 3,SSX 1、 2、 4、 5和NY ESO 1的表达率分别为 34.3% ( 12 / 35 )、5 7.1% ( 2 0 / 35 )、17.1% ( 6 / 35 )、17.1% ( 6 / 35 )、2 0 .0 % ( 7/ 35 )、2 5 .7% ( 9/ 35 )和 37.1% ( 13/ 35 )。正常肺组织中 7种CTA基因均无表达。肿瘤组织中 7种基因至少有 1种表达的几率是 2 6 / 35 ( 74.3% ) ,两种或两种以上同时表达几率是2 3/ 35 ( 6 5 .7% )。测序结果表明RT PCR产物确为CTA基因。结论 CTA在肺癌主动免疫治疗中是一种合适的、有前景的攻击靶点。同时 。

直肠癌中肿瘤/睾丸抗原相关基因的表达

目的检测MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1基因在直肠癌中的表达情况,探索其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法应用MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1单克隆抗体,对68例直肠癌组织进行免疫组织化学法(SP法)检测,SPSS统计软件分析所得数据。结果在检测的68例直肠癌标本中,MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1的阳性表达率分别为30.9%(21/68)、23.5%(16/68)、17.6%(12/68)。多个CTA基因可在直肠癌中同时表达,至少表达一种CTA的频率为67.7%(46/68),同时表达两种或两种以上CTA的频率是20.6%(14/68),同时表达三种CTA的频率为5.9%(4/68)。阳性颗粒均位于细胞质。MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1基因的表达主要集中在肿瘤细胞分化较好Ⅰ级直肠腺癌,阳性率有显著性差异(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小、Dukes分期和淋巴结转移无显著相关性(P>0.05)。结论 CT抗原(MAGE-1、NY-ESO-1、SCP-1)在直肠癌组织中有高特异的表达,这使得用这些CTA编码的蛋白作为疫苗用于直肠癌的免疫治疗成为可能。

膀胱移行细胞癌中肿瘤-睾丸抗原基因的表达情况

目的:研究4种肿瘤-睾丸抗原(CT)基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测49例膀胱移行细胞癌患者癌组织(新鲜标本,Ta-T1期28例,T2-T4期21例;G120例,G216例,G313例)及其中15例患者癌旁组织的cTAGE-1、cTAGE-2、MAGE-A1及NY-ESO-1等4种CT基因mRNA的表达。结果:49例膀胱移行细胞癌组织中MAGE-A1表达最高,其次为cTAGE-1,cTAGE-2及NY-ESO-1,分别为59%(29/49),55%(27/49),51%(25/49)及47%(23/49)。15例癌旁组织表达均阴性。膀胱移行细胞癌组织中肿瘤不同分期、不同分级之间4种CT基因表达的差异均无统计学意义(Pearsonχ2检验法,P>0.05)。结论:CT基因在膀胱移行细胞癌组织中有较高表达,而在癌旁组织无表达,可以进一步研究作为膀胱移行细胞癌特异性免疫治疗靶基因的可行性。

卵巢癌相关肿瘤睾丸抗原的研究进展

卵巢癌从本质上来说是一种免疫原性肿瘤,以免疫治疗为主的生物治疗已成为备受人们关注的一种新的辅助治疗卵巢癌的方法。肿瘤睾丸抗原参与肿瘤的发生、发展,可以作为肿瘤标志物或治疗靶标,是当前肿瘤免疫诊断和免疫治疗的研究热点。多项研究表明,肿瘤睾丸抗原对卵巢癌的早期诊断和治疗具有较好的前景。本文综述目前在卵巢癌中研究较为广泛的3种肿瘤睾丸抗原(cancer testis antigen,CTA)NY-ESO-1、精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)和精子相关抗原9(sperm associated antigen 9,SPAG9)的研究进展。

肿瘤/睾丸抗原的研究进展

现今已经确认的肿瘤/睾丸(CT)抗原有40余种,通常仅在人类生殖系统中表达,也可在多种肿瘤如黑色素瘤、膀胱癌、肺癌和肝癌中表达。这些具有免疫原性的蛋白被认为是肿瘤疫苗的治疗靶标。作者对CT抗原的分类、表达和功能进行综述。

肿瘤-睾丸抗原SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在胰腺癌中的表达及其生物学意义

目的检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在正常胰腺组织、慢性胰腺炎以及胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺肿瘤中高表达的CTA。方法应用免疫组织化学SP法检测8例正常胰腺组织、15例慢性胰腺炎组织、52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达。Western blotting检测52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达。结果正常胰腺组织、慢性胰腺炎中SSX、MAGE-A1和NY-ESO-1均不表达,SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在52例胰腺癌的阳性表达率分别为48.08%(25/52)、7.69%(4/52)、5.77%(3/52);经相关分析,SSX、NY-ESO-1和MAGE-1的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度均未见明显相关关系(P>0.05);SSX的表达与肿瘤的浸润转移呈负相关(r=-0.306,P=0.028);52例胰腺癌病例中55.77%(29/52)有1种以上的CTA表达。结论不同种类的CTA在胰腺癌中的表达存在显著差异,SSX的阳性表达率最高;胰腺癌中SSX的高表达与肿瘤的转移呈明显的负相关关系;CTA在胰腺癌中的表达呈现簇生现象。

肿瘤-睾丸抗原在乳腺癌中的研究现状

肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原,是包含MAGE、NY-ESO-1等抗原肽的一个基因大家族。基于CTA在肿瘤患者体内可诱发肿瘤特异性免疫应答,CTA已成为肿瘤免疫治疗的重要候选分子。本文就CTA在乳腺癌中的表达情况,尤其在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达及临床意义作一综述,为制订乳腺癌免疫治疗策略提供新的概念和思考,CTA有望成为TNBC特异性免疫治疗的理想靶点。

肿瘤睾丸抗原基因研究进展

当前，导致人类死亡的主要原因之一为恶性肿瘤。WHO统计结果显示，每年约有700万人因肿瘤而死亡[1]，而且这一数字呈逐年递增趋势。肿瘤发生是一个长期累积的过程，受多基因控制和多因素调节。

肿瘤睾丸抗原CTA的研究进展——基因表达的活化与精子发生

就目前关于CTA基因的表达、功能、调节、CT抗原的免疫原性做一综述,分析了最新的关于CTA基因活化的假说．该假说从进化论的思想角度着手,认为CTA基因的活化与早期生命系统发育中的染色体倍数性循环有关,所以与精子发生相联系．该假说的提出可以拓宽目前抗肿瘤研究的思路．

肿瘤-睾丸抗原MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4在胰腺癌中的表达及意义

目的:检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)黑色素抗原A(Melanoma Antigen-A,MAGE-A)在胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺癌中高表达MAGE亚型。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对52例胰腺癌组织及癌旁正常组织中MAGE亚型MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4的表达情况进行检测。结果:癌旁正常组织中无MAGE亚型的表达,MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4在52例胰腺癌的阳性表达率分别为5.77%(3/52)、44.23%(23/52)、23.08%(12/52);经相关分析,MAGE-A1、MAGE-A4的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度无明显相关关系(P>0.05);MAGE-A3的阳性表达与肿瘤的分化程度呈负相关(r=-0.294,P=0.034),而与患者的年龄、性别、病变部位无明显相关关系(P>0.05)。结论:胰腺癌中MAGE亚型中MAGE-A3表达率最高,其阳性表达与肿瘤的分级呈负相关关系;MAGE-A3有望成为胰腺癌免疫治疗特异性的靶点。

肿瘤-睾丸抗原MAGE-1和NY-ESO-1 mRNA在胃肠间质瘤中的表达

目的:探讨肿瘤-睾丸抗原(CTA)MAGE-1和NY-ESO-1作为胃肠间质瘤(GISTs)免疫治疗特异性靶点及MAGE-1和NY-ESO-1mRNA作为辅助GISTs危险度分级指标的可能性,及其与GISTs生物学行为的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测30例GISTs中MAGE-1和NY-ESO-1m R NA的表达,并取正常胃肠道组织作为阴性对照组,同时分析MAGE-1和NY-ESO-1mRNA表达与病理特征的关系.结果:正常对照组中无阳性表达,30例GISTs中,18例至少表达一种CTA,MAGE-1和NY-E S O-1m R NA在G I S T s中的表达率分别为30%和47%.MAGE-1和NY-ESO-1mRNA表达与患者年龄、性别和病理类型无关,而与肿瘤生长部位、肿瘤大小及危险度分级有关(P<0.05).MAGE-1和NY-ESO-1mRNA在低危、中危、高危三个组中表达量随着危险度分级的升高而增高,三组间差异有统计学意义(P<0.05).MAGE-1和NY-ESO-1mRNA在GISTs中的表达不存在相关性(r=0.018,P>0.05).结论:MAGE-1和NY-ESO-1mRNA在GISTs中的高特异性表达,其抗原有望成为GISTs免疫治疗特异性的靶点;MAGE-1和NY-ESO-1mRNA表达与GISTs危险度分级有关,MAGE-1和NY-ESO-1mRNA有望成为辅助GISTs危险度分级的诊断指标.

肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因mRNA在肝细胞癌中的表达及HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的:检测肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因在肝细胞癌(HCC)中的表达,预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.为HCC的免疫治疗寻找新的靶位.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCC患者癌组织、相应癌旁组织和对照组织(肝硬化和正常肝组织)中的SPANX-C基因mRNA进行检测,随机选取RT-PCR阳性扩增产物进行序列测定;用超基序法和量化基序法联合预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.结果:在所检测的115例HCC组织中有70例(60.9%)表达SPANX-C基因mRNA,癌旁组织和20例对照肝组织均不表达.SPANX-C基因的表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平等临床指标无相关性(P>0.05).用基序预测法筛选出5个HLA-A2限制性CTL表位(9肽),其中SPANX-C51-59(LVVRYRRNV)与HLA-A2分子具有较高结合力.结论:SPANX-C基因mRNA在HCC组织中呈高频率特异性表达,并存在HLA-A2限制性CTL表位,有望用于HCC的免疫治疗.

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达。ELISA方法检测抗NY ESO 1抗体。利用NY ESO 1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY ESO 1抗原物质。结果: 101例胃癌患者中, 74. 3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因。12例患者表达NY ESO 1mRNA, 5例可以检测到NY ESO 1抗原蛋白以及针对NY ESO 1抗原的体液免疫反应。结论: 胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE 3,SSX 4和NY ESO 1 /LAGE 1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY ESO 1蛋白的免疫原性得到验证。CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性。

新肿瘤睾丸抗原Ropporin重组蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的:构建新肿瘤睾丸抗原Ropporin原核表达载体,表达和纯化人Ropporin重组蛋白,并制备其兔抗血清.方法:人Ropporin全长cDNA克隆入pQE30载体,在大肠杆菌中利用IPTG诱导表达并纯化人Ropporin重组蛋白.利用人Ropporin重组蛋白免疫兔,制备人Ropporin多克隆抗体.结果:以构建的pQE30-Ropporin质粒转化大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达和纯化得到相对分子质量与鼠Ropporin蛋白一致的蛋白质,利用其免疫动物后,Western blot检测显示该蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔抗血清效价>1∶512000,对该蛋白具有高度特异性.结论:利用大肠杆菌原核表达系统表达和纯化了人Ropporin重组蛋白,并成功制备了人Ropporin多克隆抗体.

肿瘤-睾丸抗原SSX_1和SSX_4 mRNA在肝细胞癌中的表达

目的检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)SSX1和SSX4mRNA在肝细胞癌(HCC)及外周血中的表达,探讨CTA抗原SSX1和SSX4在HCC中表达有无特异性。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对35例HCC患者癌组织和相应的癌旁组织SSX1和SSX4基因表达进行检测,对其中6例RT-PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定;HCC确诊后第2周对30例患者外周血中SSX1基因进行检测。结果35例HCC患者中,SSX1和SSX4的表达率分别为77.1%(27/35)和65.7%(23/35);癌旁组织、12例肝硬化和15例正常肝组织未检测到SSX1和SSX4的表达。6例DNA序列测定结果显示RT-PCR产物为SSX1和SSX4的cDNA。SSX1和SSX4的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、血清甲胎蛋白(AFP)水平、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染无相关关系(均P>0.05)。外周血中未检测到SSX1表达。结论SSX1和SSX4在HCC中呈高度特异性表达,是制备HCC疫苗理想的靶向分子,多种CTA联合表达为多效价疫苗治疗HCC提供了理论基础。

肿瘤-睾丸-脑抗原家族新成员PNMA5的克隆和表达谱分析

综合运用几种生物信息学数据库 ,分析了人类X染色体上可能的未知基因 ,筛选获得一个新的肿瘤抗原基因并克隆鉴定了它的全长cDNA .该基因全长为 3194bp ,编码一个 4 48个氨基酸残基的蛋白质 ,它与肿瘤 睾丸 脑抗原家族成员PNMA1、PNMA2及PNMA3有很高的同源性 ,命名为PNMA5 .在 16种人正常组织中 ,PNMA5仅在睾丸与脑中表达 ;而在所检测的肝癌、胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌与头颈部肿瘤 ,PNMA5在肠癌中表达 .PNMA5是肿瘤 睾丸 脑抗原家族的一个新成员 .认识这些肿瘤 睾丸 脑抗原的意义在于它们在肿瘤组织的表达可能是肿瘤破坏机体免疫耐受的一种机制 ,其相关神经副肿瘤综合症可能是一些隐匿肿瘤的早期表现 .

Cultured ELISPOT试验在检测肿瘤-睾丸抗原特异性CTL反应中的初步应用

目的探讨Cultured ELISPOT试验检测肿瘤-睾丸抗原特异性CTL反应的能力。方法选择2016年1月-6月新疆医科大学附属肿瘤医院头颈放疗科确诊头颈部鳞癌肿瘤住院患者26例,采用ELISPOT试验(ELISPOT组),选择2016年10月-2017年2月新疆医科大学附属肿瘤医院头颈放疗科确诊头颈部鳞癌肿瘤住院患者17例,采用Cultured ELISPOT试验(Cultured ELISPOT组)。用合成的肿瘤-睾丸抗原(CTAs)NYESO1、SSX2、SALL4、MAGEA1、MAGEA3特异性CTL抗原表位肽刺激患者外周血单个核细胞(PBMC),分别检测两组患者分泌IFN-γ的CTL细胞的频率及强度,并比较两组差异。结果 (1)Cultured ELISPOT组患者特异性CTL平均反应频率高于ELISPOT组患者,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Cultured ELISPOT组患者平均反应强度明显高于ELISPOT组患者,差异均有统计学意义(P<0.05),且Cultured ELISPOT组患者平均反应强度至少高于ELISPOT组患者25倍以上。结论 Cultured ELISPOT试验可以部分提高特异性T细胞免疫反应的平均反应频率及强度,有助于T细胞免疫在肿瘤中的研究。