睾丸酮丛毛单胞菌激素降解关键酶3,17β-HSD蛋白质相互作用研究

为研究睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas Testosteroni,C.T.)ATCC11996降解甾体类激素过程中关键蛋白质的相互作用关系,本文利用基因同源重组及移码突变原理构建睾丸酮降解关键酶3,17β-HSD基因敲除突变株,在回收率95%条件下高效液相检测野生株与突变株睾丸酮降解率,突变株对睾丸酮降解能力明显低于野生株;原核表达3,17β-HSD获得浓度2.4 mg/mL纯化蛋白,制备特异性鼠源多克隆抗体,ELISA检测抗体效价1∶320000;将多克隆抗体与经睾丸酮诱导的野生型C.T.细胞裂解液蛋白质复合物进行免疫共沉淀,质谱测定蛋白质相互作用组,结果表明短链脱氢酶SDRy(WP_003078287.1)为睾丸酮降解过程中关键酶3,17β-HSD的主要相互作用蛋白。

睾丸酮丛毛单胞菌对喹啉的微生物降解途径的研究

从油制气废水的活性污泥中分离得到一株可以在好氧条件下利用喹啉作为唯一碳源和能源的睾丸酮丛毛单胞菌 (Co mamonastestosteroni,编号为Q10 ) .浓度为 2 5 0mg L的喹啉可被该菌完全降解 ,TOC去除率为 70 % .实验结果表明喹啉首先降解为 1H— 2 氧喹啉 ,然后继续转化为 6 羟基— 1H— 2 氧喹啉、5 ,6 二羟基— 1H— 2 氧喹啉和 5 羟基— 6 (2 羧基乙烯基 )—1H— 2 吡啶酮 ,由此提出该菌降解喹啉的一种可能途径 .样品中还发现少量的 8 羟基— 1H— 2 氧喹啉 ,表明菌Q10 对喹啉的降解可能是通过以一种途径为主的多种途径进行的 .

睾丸酮丛毛单胞菌对喹啉类化合物的降解

对喹啉、异喹啉、 2 甲基喹啉、 3 甲基喹啉、4 甲基喹啉和 6 甲基喹啉在睾丸酮丝毛单胞菌 (ComamonastestosteroniQ1 0 )作用下的降解及底物之间的相互作用进行研究 .结果表明 ,喹啉和 3 甲基喹啉不仅能有效地被降解 ,而且细菌也有明显的生长 ,而其它化合物虽有部分降解但没有观察到细胞生长 .底物初始浓度的增加对菌Q1 0 有一定抑制作用 .喹啉的存在对其它化合物的降解具有不同的促进效应 ,其中尤以 6 甲基喹啉和 4 甲基喹啉最为明显 ,能在较短时间内得到完全去除 。

睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因插入失活突变体构建及降解特性分析

睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是革兰氏阴性菌,能够以各种类固醇化合物作为唯一碳源和能源,生物信息学分析发现睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因编码蛋白属于LuxR-type转录调控蛋白.利用同源重组原理构建teiR基因插入失活突变体C.mut,初步研究了teiR基因在类固醇代谢途径中的作用,以及对睾丸酮丛毛单胞菌关键降解酶3a-HSD/CR的表达影响.结果发现,teiR基因插入失活突变体C.mut在LB培养基中的生长速率不受影响,突变体C.mut抑制了teiR基因和关键降解酶3a-HSD/CR的表达,同时突变体C.mut丧失了以睾丸酮作为碳源进行生长的能力.结果表明teiR基因调节睾丸酮丛毛单胞菌类固醇代谢,同时teiR基因表达对3a-HSD/CR基因的表达是必需的.

睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因的克隆及对3α-HSD/CR表达的调节

采用分子克隆技术构建睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因表达载体,并通过与PAX1共转化来分析LysR基因对3α-HSD/CR在E.coliHB101的表达调节。结果表明:酶切和DNA测序显示,所构建的表达质粒pKtac1-LysR含有编码LysR的基因序列且稳定性较好;共转化结果显示,加入重组质粒pKtac1-LysR的3α-HSD/CR的表达量显著高于加入pKtac1的3α-HSD/CR的表达量(P<0.01)。

改良睾丸酮丛毛单胞菌降解鸡粪甾体化合物的研究

微生物对有机污染物的降解速率受到环境因素的影响。利用经改良的睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosterone C.t)的3种菌株降解鸡粪中的甾类物质污染,探讨建立改良菌降解鸡粪中甾类物质污染的最佳条件。试验结果表明,经过基因改造的3种菌株Pktac-A8、C.test+Pa、C.test+Pb中,以C.test+Pa菌株对胆固醇降解率最大,且与其他菌株之间差异达到极显著水平。各菌株降解胆固醇的最适温度为30℃;最佳降解时间为15天;鸡粪含水量为66.7%时是降解胆固醇的最适宜湿度。

急性阑尾炎腹腔渗出物检出睾丸酮丛毛单胞菌

1病例患者男,30岁,因右下腹痛10 h,加重3 h,伴恶心、呕吐,2008年7月31日上午10点急诊入我院;PE：神清,痛苦状,心肺（-）,腹软,中下腹压痛,无反跳痛,未及包块,肠鸣音不亢,腹水征（-）,腹透、

睾丸酮丛毛单胞菌生物催化合成对苯二甲酸(英文)

以对甲基苯甲酸为唯一碳源筛选能够生物催化合成对苯二甲酸的菌株,发现只有睾丸酮丛毛单胞菌DSM6577可以氧化对甲基苯甲酸生成对苯二甲酸. 对该菌株的细胞生长及其催化对甲基苯甲酸转化为对苯二甲酸的过程进行了研究. 结果表明,底物在8 h内即可完全转化,产物的生成时间为14～31 h, 其中在21 h时产量最大,为34 mg/L.

睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。

睾丸酮丛毛单胞菌降解喹啉的影响因素分析

喹啉是环境中一种重要的含氮杂环类污染化合物,对人体和动物有毒性.研究了不同的环境因素如pH值、温度、振荡速度、无机氮源、细菌量和初始浓度等对睾丸酮丛毛单胞菌降解喹啉的影响.实验结果表明,菌种Q10对喹啉具有较强的降解能力,在pH 4～10可完全降解喹啉,偏碱性效果更佳;最适降解温度为30℃;60r·min-1的振荡速度能够满足该菌降解喹啉的氧气需求;无机氮源对降解没有明显影响;加菌量和初始浓度对降解影响明显;底物初始浓度增加对菌Q10有一定的抑制作用.

睾丸酮丛毛单胞菌降解胆固醇的培养条件研究

利用睾丸酮丛毛单胞菌(菌株c.test+act5、菌株c.test+tac、菌株c.test)具有消化甾醇这一特性,以胆固醇为底物筛选其降解甾醇的培养条件,使胆固醇降解酶的活力相对提高,从而为高效降解甾醇类物质的工程菌的筛选奠定基础.研究结果:最佳诱导时间14 h,培养基最佳pH7.0、最佳诱导温度30℃、及最佳装液量50 ml(250 ml摇瓶).在此条件下胆固醇降解酶活力:菌株c.test+act5为3.82×10-3U.ml-1、菌株c.test+tac为3.51×10-3U.ml-1、菌株c.test为2.68×10-3U.ml-1.

1例睾丸酮丛毛单胞菌足部感染病例报道

目的探讨1例足部组织伤口感染睾丸酮丛毛单胞菌的用药有效性。方法回顾性分析临床资料,并结合文献,临床药师协助医师选择安全、有效、经济的药物。结果临床药师根据病菌、药物特点及患者情况,实施用药指导,提高了患者用药的疗效。结论临床药师应善于总结和积累用药经验,为患者提供优质的药学服务。

睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD的研究进展

3α-HSD(3α-hydroxysteroid dehydrogenase)是睾丸酮丛毛单胞菌在以类固醇为唯一碳源时,产生的一种类固醇脱氢酶,也是降解类固醇的关键酶。本文对睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因的调控、酶蛋白结构与功能等生物学特点进行阐述,总结了3α-HSD蛋白的两种获得途径:天然提取和人工诱导表达途径。从技术可行性、实用性和成本控制等几个方面,分析比对二者的优势和不足。介绍和展望了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD在血清总胆汁酸测定、转基因生物工程、环境或食品中类固醇类激素检测及环境修复等领域的研究现状和应用前景。

Kirby-Bauer法检测睾丸酮丛毛单胞菌的药物敏感性

目的:用无临床实验室标准化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)解释标准的KirbyBauer(K-B)法和有CLSI解释标准的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)法分别测定睾丸酮丛毛单胞菌的耐药性情况,评价K-B法用于睾丸酮丛毛单胞菌敏感性检测的临床应用价值。方法:用K-B法、MIC法测定睾丸酮丛毛单胞菌对哌拉西林、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、头孢他啶、环丙沙星的敏感性,K-B法暂借铜绿假单胞菌的解释标准,并对两种方法相互间的符合情况进行比较。结果:K-B法、MIC法检测哌拉西林、头孢吡肟比较,完全符合率97.4%,部分符合率2.6%;检测哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美洛培南比较,完全符合率100%;检测阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素比较,完全符合率94.7%,部分符合率5.3%;检测头孢他啶比较,完全符合率97.4%,部分符合率2.6%;检测环丙沙星比较,完全符合率86.8%,部分符合率10.6%,完全不符合率2.6%。结论:两种药敏试验方法得出的结果具有高度的一致性。微生物实验室用K-B法对睾丸酮丛毛单胞菌的药敏检测可仅报告实验检测结果,而不报药敏检测解释结果。

睾丸酮丛毛单胞菌JL40中甲酸脱氢酶-O的锑抗性及锑氧化作用

利用转座子插入突变技术从睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)JL40中筛选出编码具有锑抗性及锑氧化作用的甲酸脱氢酶-O的fdhO基因。为了进一步验证fdhO基因的功能,在JL40中构建了fdhO基因突变株JL40-fdhO和互补株JL40-fdhO-C,并进行了锑抗性、生长及锑氧化实验。结果表明,fdhO基因突变株的锑抗性及锑氧化速率有所下降,互补株的锑抗性及锑氧化能力得到了一定的恢复。在大肠杆菌中异源表达fdhO基因时发现,与空载对照菌相比,表达fdhO基因的大肠杆菌提高了锑氧化速率。报告基因融合实验表明,fdhO基因的启动子受锑(Ⅲ)的诱导。综上表明,fdhO基因在睾丸酮丛毛单胞菌JL40中具有明显的锑氧化作用,但可能不是唯一的氧化酶;fdhO基因在细菌中的锑氧化功能将会为细菌锑抗性机制的进一步探究提供参考。

睾丸酮丛毛单胞菌临床分布及耐药性分析

目的了解睾丸酮丛毛单胞菌在临床标本中的分布及耐药性，为临床治疗提供依据。方法对本院2013年7月～2014年12月临床分离的睾丸酮丛毛单胞菌引起的感染分布及药敏结果进行回顾性分析。结果2年各种标本中共分离培养出睾丸酮丛毛单胞菌23株，标本全部来源于阑尾脓液和腹腔分泌物，分别占91．3％和8．7％；感染发生在普外科病区和ICU病区，分别占95．7％和4．3％；睾丸酮丛毛单胞菌对环丙沙星耐药率最高，为21．7％，对替卡西林、替卡西林／克拉维酸、哌拉西林／他唑巴坦、头孢吡肟、亚胺培南、美洛培南、头孢他啶、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、哌拉西林、复方新诺明的敏感率高达100．0％。结论本院检出的睾丸酮丛毛单胞菌对各种抗菌药物均比较敏感，应规范抗菌药物的临床应用，减少耐药性菌株产生及扩散。

环丙沙星对睾丸酮丛毛单胞菌CT1降解4-氯硝基苯作用的影响

为了研究环境中抗生素对4-氯硝基苯(4-chloro-1-nitrobenzene,4-CNB)生物降解的影响,本文选用9种高效降解4-CNB的菌株开展试验,并通过药敏试验研究了18种常用抗生素对菌株CT1的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。采用4-CNB-环丙沙星联合培养,研究了不同浓度环丙沙星作用下菌体浓度、细胞活性、总超氧化物歧化酶(SOD)及降解性能的变化。结果表明:睾丸酮丛毛单胞菌CT1降解4-CNB效率最高,27℃9 h降解效率为98.4%±0.2%。仅6种抗生素存在MIC值,其中环丙沙星的MIC值最低,为4μg·mL^(-1);链霉素MIC最高,为64μg·mL^(-1)。加入低浓度环丙沙星(1/4 MIC),菌体浓度和细胞活性显著降低,4-CNB降解率下降至87.0%±3.3%,环丙沙星浓度高于最小抑菌浓度(4 MIC)时,菌株生长受到极大抑制,4-CNB降解率仅为35.7%±3.9%。SOD酶活结果显示,加入环丙沙星能显著降低菌体细胞的SOD酶活力,引起活性氧对菌体的损伤,因此环丙沙星导致的菌体细胞内SOD酶活力降低可能是4-CNB生物降解受到抑制的主要原因之一。