红景天多糖对低氧环境下猪睾丸间质细胞增殖及凋亡的影响

本研究探讨了红景天多糖(rhodiola sachalinensis polysaccaride, RSP)对缺氧条件下猪睾丸间质细胞增殖和凋亡的影响及其机制。通过CCK-8法测定细胞活力,筛选出RSP的最适宜浓度和预处理时间;设正常组、低氧组、低氧+RSP组,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,RT-qPCR检测细胞增殖和凋亡相关基因(CCND1、CDK4、IL-6、TNF-a、Bcl-2、Bax、Caspase-3) mRNA表达水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、p21、JNK、p-JNK、p53表达水平。低氧条件下,猪睾丸间质细胞活力下降,经0.012 5mg·mL^(-1) RSP预处理18 h后,细胞活力有所提高。流式细胞术结果显示,RSP能缓解猪睾丸间质细胞低氧引起的细胞周期阻滞。RSP显著上调Bcl-2、CCND1、CDK4的表达(P<0.05),下调TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3、p21、p53、pJNK/JNK的表达(P<0.05)。RSP能保证低氧环境下猪睾丸间质细胞由S期进入G2期,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,推测RSP通过p53/p21和JNK通路调控细胞增殖和凋亡。

何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

邻苯二甲酸单丁酯通过Caspase-3/GSDME通路诱导睾丸间质细胞焦亡

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)诱导睾丸间质细胞(TM-3细胞)焦亡及其可能的发生机制。方法用浓度为0、2.5、5、10 mmol·L^(-1) MBP(对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组)染毒对数生长期细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态学变化;微量酶标法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的释放率;荧光显微镜检测PI阳性细胞比例;Western blot检测焦亡相关蛋白Caspase-3、GSDME的相对表达水平。将对数生长期的TM-3细胞暴露于浓度梯度(0、2.5、5、10、20μmol·L^(-1))的Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO中24 h,CCK-8法检测细胞活力,确定Ac-DEVD-CHO染毒剂量。Ac-DEVD-CHO作用于细胞验证MBP诱导TM-3细胞焦亡的机制。结果与对照组相比,各染毒组细胞LDH的释放率、PI阳性细胞比例以及Caspase-3和GSDME蛋白的相对表达水平均升高(P均<0.05)。当Ac-DEVD-CHO浓度为5.0μmol·L^(-1)时,细胞存活率为99.17%(P>0.05),并且中剂量+抑制剂组的细胞存活率较中剂量组升高(P<0.01)。确定抑制剂的干预浓度为5.0μmol·L^(-1)。并且中剂量+抑制剂组的LDH的释放率、PI阳性细胞比例以及Caspase-3和GSDME蛋白的相对表达水平较中剂量组下降(P均<0.05)。结论MBP可以通过Caspase-3/GSDME通路诱导睾丸间质细胞焦亡。

睾丸间质细胞瘤伴乳腺增生1例并文献复习

目的睾丸间质细胞瘤(Leydig cell tumor,LCT)是一种罕见的睾丸肿瘤,临床表现各异,尤其在以乳腺增生为首诊的患者中容易误诊或漏诊。本文通过回顾1例LCT伴乳腺增生患者的临床资料并复习相关文献,探讨LCT伴乳腺增生症的诊断和治疗经验。

苦参总黄酮对醋酸铅诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激的改善作用及对Keap1/Nrf2信号通路的影响

目的:观察苦参总黄酮(SF)对醋酸铅(LA)诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激的改善作用及其对KELCH状ECH相关蛋白1(Keap1)/细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响,探讨SF改善由LA诱导的TM3细胞氧化应激的相关作用机制。方法:利用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、50和80µmol·L^(-1))LA和不同浓度(0、12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^(-1))SF分别干预24 h后的TM3细胞存活率;将TM3细胞随机分为空白对照组、LA组、LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组。除空白对照组外,其他各组均采用50µmol·L^(-1)LA诱导TM3细胞24 h建立TM3细胞氧化应激模型,其中LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞再分别给予12.5、25.0和50.0 mg·L^(-1)SF。利用MTT法检测TM3细胞存活率;WST-1法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测TM3细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;Western blotting法检测Nrf2、Keap1和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)蛋白表达水平。结果:MTT法检测,与0µmol·L^(-1)LA组比较,10、20、50和80µmol·L^(-1)LA组TM3细胞存活率明显降低(P<0.01);与0 mg·L^(-1)SF组比较,12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^(-1)SF组TM3细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01);与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞存活率明显升高(P<0.01);WST-1法和TBA法检测,与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01);Western blotting法检测,与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞中Nrf2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Keap1和Caspase-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:SF对LA诱导TM3细胞氧化应激具有一定改善作用,并可降低TM3细胞中Keap1蛋白表达水平,升高TM3细胞中Nrf2蛋白表达水平。

淫羊藿苷对锰暴露SD大鼠血清睾酮含量及睾丸间质细胞损伤修复的作用

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对锰(Mn)暴露睾丸间质细胞损伤的修复作用及其对SD大鼠血清睾酮含量的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组(30 mg/kg MnCl_(2)·4H_(2)O)、ICA干预组(30 mg/kg MnCl_(2)·4H_(2)O加100 mg/kg ICA);连续4周(每周5 d)腹腔注射MnCl_(2)·4H_(2)O,随后ICA干预组连续2周灌胃ICA;采用HE染色法观察睾丸结构变化;Elisa法检测大鼠血清睾酮含量(TSTO),qPCR法检测大鼠睾丸3β-HSD、StAR和P450scc的表达。小鼠间质细胞系TM3随机分为对照组、模型组(1 mmol/L Mn^(2+))、ICA干预组Ⅰ(1 mmol/L Mn^(2+)+0.08μmol/L ICA)、ICA干预组Ⅱ(1 mmol/L Mn^(2+)+0.4μmol/L ICA)、ICA干预组Ⅲ(1 mmol/L Mn^(2+)+2μmol/L ICA)、ICA干预组Ⅳ(1 mmol/L Mn^(2+)+10μmol/L ICA)、ICA干预组Ⅴ(1 mmol/L Mn^(2+)+50μmol/L ICA);采用MTT法检测不同浓度ICA对锰暴露TM3细胞体外增殖的影响。结果 ICA可修复锰对生精小管结构的破坏;锰可降低大鼠血清睾酮浓度,ICA可提高锰暴露大鼠血清睾酮浓度;锰可抑制睾丸中睾酮生成相关基因3β-HSD、StAR和P450scc的表达,ICA可促进3β-HSD、StAR和P450scc的表达;锰可抑制TM3体外增殖,ICA可促进锰暴露TM3体外增殖。结论 锰可抑制StAR、P450scc和3β-HSD表达,抑制睾丸间质细胞合成睾酮;ICA可促进StAR、P450scc和3β-HSD表达,促进锰暴露睾丸间质细胞合成睾酮;ICA可修复锰对睾丸间质细胞的损伤。

黔北麻羊SIRT1基因睾丸组织表达及其过表达对间质细胞发育和抗氧化能力的影响

【目的】分析沉默信息调节因子1(SIRT1)在黔北麻羊不同月龄睾丸组织与12月龄性腺轴组织中的表达水平,以及对睾丸间质细胞发育及抗氧化能力的影响,为探明SIRT1基因调控睾丸间质细胞生长发育机制提供理论基础。【方法】以1、3、6、9和12月龄健康的黔北麻羊公羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测不同月龄睾丸组织及12月龄性腺轴组织(下丘脑、垂体、睾丸和附睾)中SIRT1的表达量;将过表达载体pEGFP-N3-SIRT1和空载体pEGFP-N3转染至山羊睾丸间质细胞,运用CCK-8法检测细胞的增殖情况,划痕试验检测细胞迁移效率,利用实时荧光定量PCR检测细胞增殖、发育及抗氧化相关基因的表达量。【结果】SIRT1基因在3、6、9和12月龄睾丸组织中的表达水平均显著高于1月龄(P<0.05,下同),以12月龄的相对表达量最高;在性腺轴上,睾丸组织中SIRT1基因相对表达量显著高于下丘脑、垂体和附睾。CCK-8法结果显示,过表达SIRT1基因在12 h后极显著促进睾丸间质细胞的增殖(P<0.01);划痕试验发现,过表达SIRT1基因组在9和18 h的细胞迁移率均显著高于空载体组;实时荧光定量PCR结果显示,过表达SIRT1基因可显著促进睾丸发育相关基因[胰岛素样生长因子2基因(IGF2)],细胞增殖相关基因[增殖细胞核抗原基因(PCNA)]和抗氧化相关基因[超氧化物歧化酶基因(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶1基因(GPx1)和血红素加氧酶1基因(HO-1)]的表达,对抗氧化相关基因[核因子E2相关因子2基因(Nrf2)]的表达无显著影响(P>0.05)。【结论】SIRT1基因在黔北麻羊不同月龄的睾丸组织中均有表达。成功将过表达SIRT1基因表达在睾丸间质细胞,且可能通过提高黔北麻羊睾丸间质细胞中相关基因的表达,促进细胞增殖和发育,并提高其抗氧化能力,进而直接或间接影响睾丸间质细胞的生理功能。

参杞强精颗粒对H_(2)O_(2)诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨参杞强精颗粒对过氧化氢H_(2)O_(2)诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激损伤的作用。方法以小鼠睾丸间质细胞为细胞模型,用MTT法检测参杞强精颗粒对正常TM3的细胞毒性作用;以500µmol/L H_(2)O_(2)诱导损伤TM3细胞4 h后复制氧化应激损伤模型,采用CCK-8法检测不同浓度参杞强精颗粒对H_(2)O_(2)损伤TM3细胞增殖活力的影响;分别给予参杞强精颗粒(0.4、0.8和1.6mg/mL)干预处理24h后,用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中睾酮分泌水平、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量及谷胱甘肽-S转移酶(GST)的活性;同时检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及总抗氧化能力(TAOC)的含量;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测睾酮合成酶类固醇合成快速调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17β-羟基固醇脱氢酶(17β-HSD)mRNA表达。结果参杞强精颗粒在浓度为0.05~2.50 mg/mL时对正常TM3细胞无毒性作用。与H_(2)O_(2)损伤模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组能提高TM3细胞增殖活率(P<0.05)。与H_(2)O_(2)模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组提高细胞上清液中睾酮水平和NO含量,增加GST活性,降低LDH和8-OHdG含量(P<0.05)。与H_(2)O_(2)损伤模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组降低细胞内ROS、MDA含量,同时增强CAT、SOD和TAOC的活性(P<0.05)。与H_(2)O_(2)模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组能提高睾酮合成酶StAR、P450scc、17β-HSD mRNA相对表达量(P<0.05)。结论参杞强精颗粒对H_(2)O_(2)诱导睾丸间质细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能通过清除氧自由基、抗氧化应激损伤及促进睾酮合成有关。

成人双侧睾丸间质细胞瘤1例报道

双侧睾丸间质细胞瘤(leydig cell tumor,LCT)十分罕见,且术前诊断较为困难。我院收治成人双侧LCT患者1例,现报告其诊疗过程,并复习相关文献,为后续临床睾丸间质细胞瘤的诊断提供参考。1病例报告,患者男性,45岁,以“阴囊肿大半年”入院。患者在家务农,中等身材。

Wnt5a基因沉默对骨髓间充质干细胞向睾丸间质细胞分化的影响

目的 通过siRNA干扰技术研究Wnt5a基因沉默对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向睾丸间质细胞(LC)分化的初步机制。方法 采用流式细胞仪检测由中国科学院干细胞库提供的Sprague Dawley(SD)大鼠骨髓间充质干细胞株表面蛋白(CD29、CD44、CD45、CD90)的表达。BMSCs分为NC组、siRNA1组和siRNA2组,分别转染空载siRNA,Wnt5a-siRNA-1,Wnt5a-siRNA-2;采用RT-qPCR法检测Wnt5a-siRNA转染后Wnt5a及Wnt/β-catenin信号轴中LRP-5、β-catenin、TCF mRNA的表达;采用ELISA法检测Wnt5a-siRNA转染后Wnt5a及Wnt/β-catenin信号轴中LRP-5、β-catenin、TCF的蛋白表达;免疫荧光实验通过检测转染3 d的细胞表面标志物3β-羟化类固醇脱氢酶(3β-HSD),分析BMSCs向LC分化水平;倒置显微镜观察转染5 d细胞的形态学变化。ELISA法检测转染后LC的睾酮生成水平。结果 购买的大鼠BMSCs细胞株表面抗体CD29、CD44及CD90阳性表达及CD45阴性表达符合大鼠BMSCs的特异性抗体特征。与NC组比较,siRNA1组和siRNA2组Wnt/β-catenin信号轴中LRP-5、β-catenin、TCF的mRNA及蛋白表达量下降(P<0.05),睾酮分泌量均显著升高(P<0.05)。siRNA1组和siRNA2组LC特异性标记物3β-HSD染色阳性面积百分比明显高于NC组(P<0.01);细胞转染后形态学变化符合LC的形态特点。结论 Wnt5a-siRNA转染BMSCs细胞可显著抑制Wnt5a的mRNA和蛋白表达;Wnt5a基因沉默通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥促进BMSCs向LC分化的作用。

长链非编码RNA H 19调控小鼠睾丸间质细胞功能的机制

目的探讨长链非编码RNA H 19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制。方法采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象,细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control组、si H19组、si Creb1组、Mimic control组、miR-181c-5p mimic组、Inhibitor control组、miR-181c-5p inhibitor组、si H19+Inhibitor control组和si H19+miR-181c-5p inhibitor组共11组。干扰H 19表达后,ELISA法检测其睾酮分泌水平的变化,CCK8法检测LCs增殖变化;生物信息学分析预测各基因的结合位点。RT-qPCR法和Western-blot检测各组小鼠LCs转染后各相关基因及蛋白表达的变化。结果(1)与si control组比较,si H19组LCs培养液睾酮水平及细胞增殖水平均显著下降(72 h后,P<0.01)。(2)各相关基因之间存在结合位点。(3)与DMSO组比较,2-NP组LCs的p-STAT1表达增加、H 19表达明显升高,而miR-181c-5p表达明显降低(P<0.01)。(4)与si control组比较,si H19处理可显著下调LCs的H 19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 RNA表达水平并显著上调miR-181c-5p表达水平(P<0.01),si Creb1处理可显著下调Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达水平(P<0.01);si H19组和si Creb1组Creb1、3β-HSD蛋白表达均明显降低(P<0.01);与Mimic control组比较,miR-181c-5p mimic组H 19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达明显降低,miR-181c-5p表达水平明显升高且Creb1、3β-HSD蛋白表达显著降低(P<0.01);与Inhibitor control组比较,miR-181c-5p inhibitor组的各相关基因及蛋白表达呈现与miR-181c-5p mimic组作用相反的效应;与si H19+Inhibitor control组比较,si H19+miR-181c-5p inhibitor组H 19表达显著升高,miR-181c-5p表达水平明显降低,Creb1、HSD的mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论H 19低表达可通过抑制细胞增殖、miR-181c-5p表达升高、Creb1蛋白表达降低和3β-HSD蛋白表达降低导致LCs合成分泌睾酮能力降低。STAT1/H 19/miR-181c-5p/Creb1/3β-HSD通路可能在LCs功能调控中发挥重要作用。

亚硒酸钠对绵羊睾丸间质细胞氧化应激及Keap1-Nrf2信号通路的影响

本试验旨在研究硒对绵羊睾丸间质细胞抗氧化能力及Keap1-Nrf2信号通路的影响。使用不同浓度亚硒酸钠(0、2、4、8μmol/L)处理绵羊睾丸间质细胞,采用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和活性氧(ROS)含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分析抗氧化相关基因及蛋白表达。结果表明:2μmol/L硒组ROS和MDA含量显著低于其他各组,SOD和GSH-Px活性显著高于其他各组,8μmol/L硒组呈相反变化趋势;且随着硒浓度升高,Keap1表达量显著降低;NQO1表达量显著升高;Nrf2和HO-1的mRNA表达量显著升高,蛋白丰度呈上升趋势。综上,硒能通过调控抗氧化酶活性,激活Keap1-Nrf2抗氧化信号通路,调节细胞内的氧化应激反应。

不同氧浓度下猪睾丸间质细胞转录组分析

【目的】研究不同氧浓度下猪睾丸间质细胞表达谱差异,筛选缺氧导致猪睾丸间质细胞损伤的关键基因。【方法】将猪睾丸间质细胞分为缺氧组(1%氧气,H24组)、正常组(15.75%氧气,N24组),每组3个重复,在相应条件下分别处理24 h,用CCK8法检测细胞存活率;利用转录组测序技术筛选出缺氧组和正常组睾丸间质细胞中的差异表达基因,利用DESeq 2.0软件进行差异表达基因分析,并对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,进一步筛选与氧含量相关的调控基因。【结果】缺氧刺激24 h后,与正常组相比,缺氧组猪睾丸间质细胞存活率极显著降低(P<0.01);转录组测序共获得1654个差异表达基因,其中1242个基因上调,412个基因下调。GO功能富集分析发现,共获得富集条目8条,其中生物过程1条,分子功能7条;KEGG通路富集分析发现,共获得10个显著富集的信号通路,包括HIF-1信号通路、JAK-STAT信号通路和糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路等。通过GO功能和KEGG通路富集分析共获得6个与缺氧应激相关的基因,分别为信号传导及转录激活蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、CC基元趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)、Ⅰ型干扰素受体1(interferon alpha and beta receptor subunit 1,IFNAR1)、细胞因子信号传导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)和红细胞生成素(erythropoietin,EPO)。【结论】本研究通过对不同氧浓度下猪睾丸间质细胞进行转录组分析,获得了SOCS 1、IFNAR 1、EPO、STAT 5、IL-8和CCL 26个与猪睾丸间质细胞缺氧损伤和应激修复相关的基因,为解决高原地区公猪生殖能力低下的研究提供参考。

香猪睾丸间质细胞 TAS 1R3基因干扰后对自噬相关因子的影响

旨在探究 TAS1 R3基因通过mTOR对从江香猪自噬相关基因表达的影响。本试验选择30日龄健康雄性从江香猪3头,采集睾丸组织并培养出睾丸间质细胞。将构建成功的干扰载体和空载体转染至细胞中,利用qRT-PCR检测其对 TAS 1R3基因表达影响,运用qRT-PCR和Western blot检测 TAS1 R3基因干扰后对味觉受体第一家族一号受体(TAS1R1)、细胞外信号调节激酶1(ERK1 ) 、细胞外信号调节激酶2(ERK2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、 BECN1 和微管相关蛋白1轻链3β(MAP1LC3B)表达的影响。结果表明,当 TAS 1R3基因被干扰后,相较于shRNA-NC对照组, TAS 1R1、 ERK 1、 ERK 2、 mTOR 基因mRNA表达量均极显著降低( P <0.01),自噬因子 BECN1 和 MAP 1LC3B表达量极显著升高( P <0.01)。Western blot结果表明当 TAS 1R3基因被干扰后,与 shRNA-NC 对照组相比,蛋白T1R3、T1R1、p-mTOR、p-S6K1、p-ERK12均极显著降低( P <0.01),而自噬蛋白 Beclin 1 表达量极显著升高( P <0.01)。本试验通过将 TAS 1R3基因干扰载体转染至睾丸间质细胞,发现当 TAS 1R3基因被干扰后可通过影响 mTOR 基因的表达,调控其下游自噬因子的表达,提示 TAS 1R3基因与睾丸间质细胞的自噬密切相关,这为进一步研究 TAS 1R3基因通过调节自噬影响香猪生殖活动提供了借鉴。

m6A甲基化对邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导小鼠睾丸间质细胞自噬的作用

目的 探讨邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]致小鼠睾丸间质(TM-3)细胞自噬中m6A甲基化的作用。方法 将对数生长期的TM-3细胞暴露于浓度梯度(0、5、10、20、40、80μmol·L^(-1))的m6A甲基化抑制剂3-脱氮腺苷(3-Deazaadenosine,DAA)24 h,CCK-8法检测细胞活力,确定3-脱氮腺苷的染毒剂量后,梯度稀释为对照组(0μmol·L^(-1))、MEHP低剂量组(200μmol·L^(-1))、MEHP中剂量组(400μmol·L^(-1))、MEHP高剂量组(800μmol·L^(-1)),将TM-3细胞分别暴露于0、200、400、800μmol·L^(-1)MEHP,40μmol·L^(-1)DAA+400μmol·L^(-1)MEHP和40μmol·L^(-1)DAA染毒组24 h,光镜下观察TM-3细胞形态。CCK-8法检测细胞存活率;m6A RNA甲基化定量检测试剂盒检测m6A修饰水平;丹酰尸胺(MDC)荧光染色检测自噬形成情况;Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达水平。结果 与对照组相比,DAA浓度为5、10、20、40μmol·L^(-1)时,细胞活力均无明显变化(P均>0.05);DAA浓度为80μmol·L^(-1)时,细胞活力下降(P<0.01);各MEHP染毒组TM-3细胞活力和m6A甲基化水平均降低(P均<0.01),细胞空隙变大,圆形细胞增多,贴壁细胞的数量明显减少;DAA组m6A甲基化水平较对照组降低(P<0.01);与MEHP中剂量组相比,DAA+MEHP组细胞活力和m6A甲基化水平均下降(P均<0.01),细胞发生皱缩,细胞间隔稍有增大。与对照组相比,各MEHP染毒组、DAA+MEHP组和DAA处理组LC3-Ⅱ的蛋白表达水平均升高(P均<0.05),MEHP低剂量组MDC荧光信号强度、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达量均无明显变化(P均>0.05);MEHP中、高剂量组和DAA+MEHP组荧光强度、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的表达量均升高(P均<0.01);DAA组荧光强度和Beclin-1的表达水平均升高(P均<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ无明显变化(P均>0.05)。DAA+MEHP组荧光强度和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ较MEHP中剂量组呈上升趋势(P<0.05)。结论 MEHP可能通过降低RNA甲基化m6A修饰的水平来诱导TM-3细胞发生自噬。

大鼠睾丸间质细胞发育的形态学研究及立体学定量分析

对６３例胚胎期至生后不同发育时期Ｗｉｓｔａｒ大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞进行光镜、电镜观察及立体学分析。结果表明：１．大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞从胚胎１５ｄ出现，１７ｄ初具分泌类固醇激素的结构特点。２．Ｌｅｙｄｉｇ细胞存在两个细胞增殖峰，一个在胚胎１７～１９ｄ，另一个在生后４周。两峰之间有一个低谷（约在生后第２周）。从胚胎至生后，细胞核的体密度逐渐减小，细胞质、线粒体及滑面内质网的体密度逐渐增大，脂滴的体密度呈现较大波动，在一定程度上反映了间质细胞的功能状态。３．生后第２周后，睾丸间质内明确见到明、暗两种细胞。

不同发育阶段牦牛睾丸生精小管和间质细胞的形态学变化

利用常规石蜡切片、HE染色进行显微结构观察并结合形态剂量学分析，研究不同年龄（3月、1岁、3岁、9岁）牦牛睾丸的显微结构，探讨不同发育阶段牦牛睾丸生精小管和间质细胞的发育及其变化规律.结果表明：3月龄牦牛睾丸生精小管细而稀疏，偶见完整的内腔，小管中仅仅是精原细胞和支持细胞，可以看见单个或者成群分布的间质细胞；1岁牦牛生精小管排列略紧密，上皮中有不同发育阶段的生精细胞，间质可见3～4群的间质细胞；3岁牦牛生精小管密集、生精小管外直径增加明显（P〈0.05），上皮细胞层数较其它年龄达到最大值，大量间质细胞出现；9岁牦牛生精小管稀疏，上皮生精细胞和间质细胞均明显减少（P〈0.05）.3月牦牛龄生精小管内无精子生成；1岁牦牛时有精子的出现，间质细胞数量逐渐增加；3岁牦牛生精小管及间质细胞发育充分，处于生殖旺盛的性成熟阶段；9岁牦牛睾丸生精小管内生精能力明显降低.

胎儿睾丸组织发育过程中精原细胞和间质细胞c-fos的表达

原癌基因c-fos是一类即刻早期基因（immediate-earlygene，IEG），是细胞基因组的正常成分，作为细胞内信号传递的“第三信使”，参与转录机制和核基因的表达，编码核内蛋白质，可对生殖细胞的增殖、分化、凋亡及信息传递起到调节作用。睾丸间质细胞的睾酮分泌过程也伴有某些原癌基因的表达变化。c-fos在胎儿睾丸组织发育过程中的分布和表达规律，国内未见报道。本实验旨在研究c-dos在不同阶段胎儿睾丸中定位和表达规律，为男性生殖生理学研究提供理论依据。

硒对铅致小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响

【目的】探究硒对铅致小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响。【方法】以小鼠睾丸间质细胞为研究对象,分为对照组、硒组、铅组和硒+铅组:硒组在细胞培养液中添加2μmol/L亚硒酸钠;铅组在细胞培养液中添加40μmol/L醋酸铅;硒+铅组在细胞培养液中联合添加2μmol/L亚硒酸钠+40μmol/L醋酸铅,体外培养24 h。采用MTT法检测细胞增殖情况;检测细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;使用化学荧光法测定活性氧(ROS)水平;运用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测凋亡相关基因天冬氨酸半胱氨酸酶-3(Caspase3)、Caspase8、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白表达水平。【结果】与对照组相比,铅组细胞增殖显著受到抑制(P<0.05),MDA含量和ROS水平显著上升(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著下降(P<0.05),同时,铅显著上调了Caspase3、Caspase8、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调了Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);硒组小鼠睾丸间质细胞增殖活性显著提高(P<0.05)。与铅组相比,硒+铅组细胞中MDA含量和ROS水平显著下降(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05),且介于对照组和铅组之间;Caspase3、Caspase8、Bax的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平则显著上升(P<0.05),均介于铅组和对照组之间。【结论】铅能抑制小鼠睾丸间质细胞增殖活力,诱导细胞氧化应激和凋亡;补充适量硒可以促进细胞增殖,且通过提高抗氧化酶活性缓解铅造成的细胞氧化应激和凋亡。

玉米赤霉烯酮对山羊睾丸间质细胞的毒性机制研究

【目的】探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对山羊睾丸间质细胞活力、形态及细胞凋亡相关基因表达的影响,明确其对山羊睾丸间质细胞的毒性作用,为后续揭示ZEA对雄性山羊生殖系统的毒性机制提供理论依据。【方法】以山羊睾丸间质细胞为试验材料,采用不同浓度ZEA处理细胞24 h,以CCK-8法检测细胞增殖情况并筛选出最适浓度;然后通过光学显微镜、透射电子显微镜、细胞划痕试验、实时荧光定量PCR、JC-1试剂盒及ROS试剂盒分别检测ZEA处理山羊睾丸间质细胞的形态特征、超微结构变化、损伤愈合能力、细胞凋亡及氧化应激相关基因表达、线粒体膜电位及胞内活性氧(ROS)水平的变化。【结果】随着ZEA浓度的升高,山羊睾丸间质细胞活力呈剂量依赖效应极显著下降(P<0.01,下同),ZEA的半数抑制浓度(IC_(50))在20μmol/L附近,故选取20μmol/L作为后续试验的处理浓度。经20μmol/L ZEA处理后,山羊睾丸间质细胞大量死亡,细胞皱缩呈圆珠状,细胞间连接松散;核膜出现破损,内质网断裂、结构模糊,线粒体破裂,形成自噬囊泡,细胞核皱缩、深染;细胞愈合能力降低,划痕培养18 h后的细胞迁移率约80%;细胞中的Bcl-2、caspase-3和SOD2基因相对表达量显著上升(P<0.05),Bax、HO-1、Nrf2、GPX1和CAT基因相对表达量极显著上升;JC-1检测发现细胞中的红色荧光数量减少,荧光强度较弱,而绿色荧光数量明显增多且荧光强度较强;ROS检测显示细胞ROS水平极显著升高,即细胞氧化应激程度加剧。【结论】ZEA通过诱导山羊睾丸间质细胞形变及线粒体、内质网等细胞超微结构损伤,降低其损伤修复能力,促使线粒体膜电位水平降低和加剧氧化应激程度,而发挥其毒性作用。