TRPP2通过UPR/AFT6/EpCAM信号通路调节口腔鳞状细胞癌的迁移和侵袭

目的研究瞬时受体多囊蛋白2(TRPP2)在口腔鳞状上皮细胞的表达及其对口腔鳞状细胞癌(OSCC)侵袭和迁移的影响,初步探讨TRPP2影响OSCC转移的潜在信号通路。方法利用规律性成簇间隔短回文重复序列核酸酶9(CRISPR-Cas9)慢病毒质粒转染技术,构建TRPP2敲低的OSCC模型。免疫蛋白印迹技术(Western blot)验证TRPP2蛋白敲低效果。CCK-8实验和克隆形成实验检测TRPP2对OSCC增殖的影响。RT-qPCR法检测TRPP2对OSCC转移相关的靶基因。Western blot和qRT-PCR检测与靶基因EpCAM及其与未折叠蛋白反应(UPR)相关转录因子表达。利用侵袭实验和划痕实验检测TRPP2对OSCC侵袭和迁移能力的影响。结果与口腔上皮细胞HOK相比,OSCC中TRPP2显著高表达。敲低TRPP2,OSCC增殖和克隆形成能力显著增强。与对照组相比,TRPP2敲低转录谱中共494个差异基因显著表达,其中234个基因表达上调,260个基因下调。其中与细胞黏附相关的上皮细胞黏附分子(EpCAM)基因上调表达。此外,与UPR相关基因PERK、ATF6、GRP78表达上调,而与HOK细胞相比,OSCC中ATF6与EpCAM表达下调。敲低TRPP2,OSCC中ATF6与EpCAM表达上调,并降低细胞迁移和侵袭能力。ATF6抑制剂ceapin-A7(5.0μmol/L)可恢复TRPP2敲低的OSCC迁移和侵袭能力。结论TRPP2在OSCC中显著高表达。敲低TRPP2,OSCC增殖能力增强,迁移和侵袭能力受抑制。TRPP2通过激活UPR介导EpCAM的表达,进而影响OSCC的侵袭和迁移能力。

TRPP2在哮喘大鼠气管平滑肌细胞中的变化及对气管收缩的影响

目的 探讨哮喘大鼠的气管平滑肌细胞中瞬时受体电位多囊蛋白2(TRPP2)的改变及其在气管收缩中的病理作用。方法 随机将大鼠分为对照组和哮喘模型组。将新配制的致敏液腹腔注射制备哮喘动物模型,于第1天和第8天进行腹腔注射,在第15~20天时采用1%OVA雾化吸入进行致敏;对照组中,致敏液替换为磷酸盐缓冲溶液。采用气管张力实验观察钙库操纵的钙内流(SOCE)引起的气管平滑肌收缩中的改变;采用TRPP2siRNA转染敲低TRPP2;TRPP2蛋白表达采用Western Blot和免疫组化进行观察。结果 成功复刻哮喘模型后,哮喘组SOCE引起的气管收缩在高钾引起的收缩中占比明显高于对照组(P <0.05);TRPP2蛋白在哮喘组大鼠气管平滑肌细胞中表达水平升高(P<0.05)。使用TRPP2siRNA敲低TRPP2含量,与对照大鼠气管相比,SOCE引起的TRPP2敲低后的大鼠气管收缩在高钾引起收缩百分比中显著减小(P <0.05)。结论 哮喘大鼠气管平滑肌中表达上调的TRPP2可能是导致SOCE引起的收缩增强的主要原因。