瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型抑制剂HC067047对脂多糖诱导的小鼠焦虑样行为的影响

目的探讨瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)抑制剂HC067047对脂多糖(LPS)模型小鼠焦虑样行为的影响。方法48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(NS)、模型组(LPS)和药物干预组(HC+LPS)。腹腔注射0.83 mg/kg LPS建立焦虑样小鼠模型,HC+LPS组于LPS注射前30 min腹腔注射HC067047(10 mg/kg),NS组及LPS组注射等体积溶媒;旷场实验以及社会交往实验观察小鼠焦虑样行为;免疫组织化学及Western blotting检测海马TRPV4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。结果免疫组织化学和Western blotting实验发现,与NS组相比,LPS组小鼠海马中TRPV4表达显著上调(P<0.0001);旷场实验中,与NS组比较,发现LPS组小鼠活动的总距离(P<0.0001)、在中央区域活动的距离(P<0.01)以及在中央区域活动的时间均明显减少(P<0.01),HC067047干预可增加LPS模型小鼠的活动总距离(P<0.05)、在中央区域活动的距离(P<0.001)以及在中央区域的活动时间(P<0.01);社会交往实验中,与NS组相比,LPS组小鼠与陌生小鼠的交往时间显著降低(P<0.01),HC067047干预后能显著增加LPS模型小鼠与陌生小鼠的交往时间(P<0.01);Western blotting检测发现,LPS组小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.001)和eNOS(P<0.001)的表达显著高于NS组,但HC067047干预后可使LPS模型小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.01)、eNOS(P<0.01)的表达明显降低。结论抑制TRPV4的表达能够改善LPS所致小鼠焦虑样行为,该过程可能与抗氧化应激有关。

瞬时感受器电位离子通道香草素受体4下游信号分子的确定及其对大鼠背根神经节慢性压迫后痛觉过敏的作用

目的:探讨大鼠背根神经节慢性压迫CCD后瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)下游信号分子及其在痛觉过敏中的机制。方法:鞘内分别注射TRPV4拮抗剂钌红(RR)、TRPV4反义寡脱氧核苷酸(ASODN)和一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAME,检测CCD大鼠背根神经节DRG内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(nitrite)含量变化,并观测热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)的变化。结果:鞘内分别注射RR、TRPV4 AS ODN和L-NAME后,均能够显著降低CCD大鼠DRG内亚硝酸盐含量(P<0.05),CCD大鼠的热痛敏行为也能够显著改善(P<0.05)。结论:TRPV4及其下游信号分子NO参与介导CCD大鼠的热痛觉过敏。

基于瞬时受体电位香草素亚家族4信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响

目的:基于瞬时受体电位香草素亚家族4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响。方法:自新生SD大鼠膝关节软骨组织提取软骨细胞,进行体外培养,取第1代软骨细胞分别加入不同培养液进行干预。空白组仅加入常规培养液,牛蒡子苷元组加入含10μmol牛蒡子苷元的培养液,牛蒡子苷元联合阻断剂组加入含10μmol牛蒡子苷元和10μmol GSK205的培养液,激动剂组加入含1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂联合激动剂组加入含10μmol GSK205和1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂组加入含10μmol GSK205的培养液。分别于干预24 h和72 h后以CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,48 h后以Western blot法检测软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平。结果:(1)软骨细胞增殖测定结果。干预24 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.03±0.72,1.32±0.11,1.01±0.05,1.33±0.34,1.04±0.50,1.10±0.06;F=18.309,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组、阻断剂组的吸光度与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.632,P=0.840,P=0.164);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.834);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.498);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。干预72 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.66±0.02,2.21±0.05,1.84±0.04,1.92±0.07,1.71±0.10,1.74±0.08;F=37.629,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.001,P=0.000);阻断剂联合激动剂组、阻断剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.326,P=0.104);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组及阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.010),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.098);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。(2)软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平测定结果。5组软骨细胞中软骨蛋白聚糖水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,20.74±5.01,4.20±0.66,22.87±1.82,2.09±0.63;F=194.544,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的软骨蛋白聚糖水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.136,P=0.593);牛蒡子苷元组的软骨蛋白聚糖水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.305);牛蒡子苷元联合阻断剂组的软骨蛋白聚糖水平低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.310);激动剂组的软骨蛋白聚糖水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。5组软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,2.94±0.11,1.92±0.17,2.04±0.12,0.78±0.09;F=58.701,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);阻断剂联合激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平低于空白组(P=0.032);牛蒡子苷元组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000),与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.193);激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。结论:牛蒡子苷元可通过TRPV4信号通路促进体外培养软骨细胞的增殖及软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖的表达。

抑制瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型通道对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后细胞凋亡与新生血管生成的作用

目的探讨抑制瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)通道对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)细胞凋亡和血管形成的影响。方法将30只SD大鼠分为对照组、RIRI组和RIRI+HC-067047组,每组10只。采用高眼压法建立大鼠RIRI模型,RIRI+HC-067047组在造模后5、10 h通过侧脑室注射HC-067047(5μmol/μL),对照组和RIRI组给予同等剂量的生理盐水。测量各组大鼠治疗后第7天、第14天与第21天的体质量,于治疗第21天观察大鼠视网膜组织形态变化和视网膜组织神经细胞凋亡情况,检测各组大鼠视网膜组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白阳性表达情况,VEGF、核因子E2相关因子2(Nrf2)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的相对表达水平,以及色素上皮衍生因子(PEDF)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、Caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的相对表达水平。结果与对照组比较,治疗后第21天RIRI组大鼠体质量下降,RIRI组和RIRI+HC-067047组视网膜组织神经细胞凋亡增加,Caspase-3、VEGF蛋白阳性表达率增加,Nrf2、VEGF、HIF-1αmRNA相对表达水平升高,PEDF、Bcl-2蛋白表达水平下降而GFAP、Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与RIRI组比较,治疗后第21天,RIRI+HC-067047组视网膜神经细胞凋亡数目减少,Caspase-3、VEGF蛋白阳性表达率下降,Nrf2、VEGF、HIF-1αmRNA相对表达水平下降,PEDF、Bcl-2蛋白表达水平升高而GFAP、Caspase-3、Bax蛋白表达水平下降(均P<0.05)。结论抑制TRPV4通道可改善大鼠RIRI,其机制可能与抑制视网膜细胞凋亡与减少血管新生有关。

温敏离子通道蛋白TRPV4受热激活参与相关疾病发生的机制研究进展

发热是机体应对感染和损伤的一种病理性防御反应。瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族的成员,在机体中广泛表达,对体温具有负调节作用。当机体温度升高激活TRPV4或使其表达增多时,可引起脑水肿和癫痫发作的加剧;TRPV4的活性及正常表达影响新生儿面部与心脏缺陷和精子活动趋热性。通过对TRPV4的多方面研究,有望揭示TRPV4受热激活下与疾病的具体机制,探索新的药物作用靶点和开发新的药物等。

瞬时受体电位香草醛亚家族1对高脂处理肝细胞凋亡的保护作用

目的研究瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)在高脂处理肝细胞中的变化及其作用。方法将肝细胞(BRL-3A)分为对照组和250、500μmol·L^(-1)软脂酸钠组,加入辣椒素和辣椒卓平对肝细胞进行干预,通过Q-PCR法测量肝细胞中TRPV1的表达水平,并采用流式细胞仪检测肝细胞的凋亡水平。结果肝细胞的凋亡比例随软脂酸钠浓度的增加而增加,其浓度为500μmol·L^(-1)时,TRPV1的表达水平明显增加;辣椒素能够上调TRPV1的表达水平并减轻高脂所诱导的肝细胞凋亡;而辣椒卓平能够逆转辣椒素对肝细胞的保护作用。结论高脂能够激活肝细胞中的TRPV1通道,同时,上调TRPV1,减少高脂诱导的肝细胞凋亡。

肠胶质细胞系TRPV4依赖性Ca^(2+)内流、ATP释放与炎症因子表达

目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在调节肠胶质细胞外Ca^(2+)内流中的作用及其意义。方法收集大鼠肠胶质细胞系CRL-2690、大鼠肠上皮细胞系IEC6和人胚肾细胞系HEK293T样本,采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法检测TRPV4的mRNA、蛋白表达与定位;将CRL-2690细胞依次分为GSK组与GSK+HC组,低渗组与低渗+HC组,GdCl_(3)组与GdCl_(3)+HC组以及CaCl_(2)组与CaCl^(2+)HC组,采用Fura-2荧光探针和单细胞荧光Ca^(2+)检测仪评估CRL-2690细胞中TRPV4通道活性。将CRL-2690细胞分为对照组、GSK组与GSK+HC组,通过荧光素-荧光素酶实验测量细胞ATP的释放水平;采用RT-qPCR检测炎症相关基因GFAP、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA表达。结果在大鼠肠胶质细胞系CRL-2690中检测到TRPV4 mRNA和蛋白表达;TRPV4特异性激动剂GSK1016790A和低渗透压刺激明显增强了CRL-2690细胞内钙荧光强度,而TRPV4特异性抑制剂HC067047可抑制此作用(0.43038±0.06365 vs 0.00423±0.00578,P<0.0001);钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)激活诱导的外Ca^(2+)内流也可被HC067047所抑制(P<0.05);功能上,激活TRPV4可促ATP释放、EGC反应性增生标志物GFAP和炎症因子IL-1β、IL-6的表达,并抑制抗炎因子IL-10的表达,该作用可被HC067047所抑制(P<0.05)。结论激活TRPV4可引起肠胶质细胞外Ca^(2+)内流,并促进ATP释放与炎症因子表达,可能参与肠道炎症的发生。

TRPV4在青光眼性视神经病变中的研究进展

青光眼性视神经病变(GON)是青光眼治疗难点所在。近年来,关于GON的发病机制提出了多种学说,但其中任何一种均无法解释所有类型青光眼造成的视神经病变原理,使得该病在临床治疗中顾此失彼,且不利于早期干预。最新研究发现,存在于视网膜中的瞬时受体电位通道香草酸亚家族4(TRPV4)在GON多种发病机制中均占有重要地位。本文将对TRPV4及其在GON发生发展过程中所发挥的作用作一综述,以期为GON的多种机制学说寻找一共同“连接点”,这将有助于对该病的进一步认识和临床治疗。

TRPV4活化调控炎性小体Nod样受体家族3在小鼠膀胱上皮细胞损伤中作用和机制研究

目的探讨瞬时受体电位离子通道香草素受体亚家族4(transient receptor potential vanilloid receptor 4, TRPV4)通道活化在小鼠原代培养的膀胱上皮细胞损伤中的作用及其分子机制。方法小鼠1只,原代培养膀胱上皮细胞,并分为对照组、刺激组、β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate, BHB)预处理组和细胞因子释放抑制药物3(cytokine release inhibitory drug 3, MCC950)预处理组,刺激组采用TRPV4激动剂GSK1016790A 100μmol/L进行刺激;BHB预处理组和MCC950预处理组分别给予10 mmol/L BHB和50μmol/L MCC950后采用TRPV4激动剂GSK1016790A进行刺激;对照组正常培养。4组细胞采用Calcein-AM/PI双染色法观察活细胞数和死细胞数;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)细胞毒实验检测细胞LDH水平;采用Western blot法检测刺激组GSK1016790A刺激前及刺激3、6、9 h时细胞Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(Nod-like receptor family pyrin domain-containing protein 3, NLRP3)及其下游活化产物胱冬肽酶-1(caspase-1 p10)相对表达量。结果刺激组Calcein-AM染色的活细胞数[(46.80±15.51)个]较对照组[(1 242.20±143.79)个]、BHB预处理组[(1 001.20±115.41)个]和MCC950预处理组[(1 144.00±138.62)个]减少(P<0.05),BHB预处理组、MCC950预处理组少于对照组(P<0.05),BHB预处理组与MCC950预处理组比较差异无统计学意义(P>0.05);刺激组PI染色的死细胞数[(1 111.60±127.49)个]较对照组[(33.80±8.41)个]、BHB预处理组[(251.80±48.67)个]和MCC950预处理组[(265.20±31.57)个]增多(P<0.05),BHB预处理组、MCC950预处理组多于对照组(P<0.05),BHB预处理组与MCC950预处理组比较差异无统计学意义(P>0.05);刺激组LDH水平[(85.27±7.18)u/L]高于对照组[(22.47±2.94)u/L]、BHB预处理组[(35.74±4.32)u/L]和MCC950预处理组[(37.09±4.09)u/L](P<0.05),BHB预处理组、MCC950预处理组高于对照组(P<0.05),BHB预处理组与MCC950预处理组比较差异无统计学意义(P>0.05);刺激组GSK1016790A刺激3、6、9 h时细胞中NLRP3(0.68±0.07、0.86±0.08、0.79±0.09)、caspase-1 p10表达量(0.68±0.06、0.51±0.07、0.47±0.05)均高于刺激前(0.36±0.05、0.24±0.06)(P<0.05)。结论 TRPV4可通过活化炎性小体NLRP3导致小鼠膀胱上皮细胞损伤,调控TRPV4-NLRP3可能为膀胱过度活动症治疗提供新靶点。

高糖环境下大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4 mRNA的表达

目的观察高糖环境对大鼠背根神经节(DRG)细胞瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)﹑蛋白激酶Cε(PKCε)mRNA表达的影响,明确高糖环境对以上2种受体的调控作用。方法急性分离新生大鼠DRG细胞,培养48 h后更换培养液并分组。按照培养基含糖量不同分为:对照组(5.5 mmol/L,C组)、高糖1组(17.5 mmol/L,H1组)、高糖2组(35.0 mmol/L,H2组)。换液后48 h提取细胞总RNA并进行逆转录。用RT-PCR及实时定量PCR检测TRPV4和PKCεmRNA表达的变化。结果与对照组比较,PKCεmRNA在H1组表达没有明显变化(P>0.05),而在H2组表达显著上调(P<0.05)。与对照组比较,TRPV4 mRNA在H1组表达显著上调(P<0.05),而在H2组表达没有明显变化(P>0.05)。结论高糖环境可以上调TRPV4/PKCε基因的表达,但是2种基因明显上调时糖浓度不一致,说明TRPV4的激活除了PKCε的调控外还受其它因素调节。

TRPV4在皮肤免疫性大疱病中的表达及意义

目的探讨TRPV4蛋白在寻常型天疱疮(PV)、大疱性类天疱疮(BP)、疱疹样皮炎(DH)、获得性大疱性表皮松解症(EBA)中的作用机制。方法用免疫组化方法检测正常皮肤组织、PV、BP、DH及EBA皮损组织中TRPV4蛋白的表达量。结果 TRPV4在PV(61.90%)、BP(81.81%)、DH(72.22%)、EBA(68.42%)的阳性率均低于正常皮肤组织(93.33%),且各类疾病间亦存在表达差异(PV<EBA<DH<BP)。结论 TRPV4蛋白的低表达可能影响着皮肤连接的形成或修复,参与皮肤免疫性大疱病的发生、发展。

TRPV4-SK_(Ca)在老年大鼠气管平滑肌中改变及对其收缩的影响

目的阐明瞬时受体电位离子通道家族(TRP)中香草素受体亚家族(TRPV)成员TRPV4和小电导钙激活钾通道3(SK3)复合物对老年大鼠气管平滑肌收缩的影响。方法运用离体气管张力实验,观察高钾、卡巴胆碱对年轻、老年大鼠气管收缩的影响,以及瞬时受体电位离子通道TRPV4特异性激动剂和抑制剂对卡巴胆碱引起的气管收缩的影响;运用Western blot法检测TRPV4和SK3在年轻、老年大鼠气管平滑肌上表达量的变化。结果与年轻大鼠比较,老年大鼠高钾引起的气管收缩没有显著改变,但卡巴胆碱引起的收缩显著增强,且TRPV4激动剂GSK引起的舒张反应显著降低;两组大鼠用TRPV4阻断剂HC或RN1734预处理后,GSK引起的舒张反应均被显著阻断;Western blot结果显示,与年轻大鼠比较,老年大鼠气管平滑肌组织TRPV4表达显著升高,SK3表达却显著降低。结论 TRPV4-SK3信号复合物在老年大鼠气管平滑肌表达改变可能与老年大鼠气管舒张效应减弱有密切关系。

牛蒡子苷元基于机械敏感离子通道对软骨细胞转录因子和胶原蛋白表达的影响

目的:基于机械敏感离子通道探讨牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和胶原蛋白表达的影响。方法:分离并培养原代小鼠软骨细胞。将细胞分为空白组(常规培养基)、ARG组(10μmol/L)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)抑制剂组(GSK2193874,10 nmol/L)、ARG+抑制剂组(10μmol/L ARG+10 nmol/L GSK2193874)和TRPV4激动剂组(GSK1016790A,10 nmol/L),各组给予相应干预。细胞培养24 h后,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)表达,PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和ColⅡ的mRNA表达水平,Western blot检测转录因子SOX9、RUNX2及ColⅠ、ColⅡ的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著,而激动剂组较弱。与ARG组或抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著。②与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡmRNA表达量显著增高(P<0.05,P<0.01),ColⅠmRNA表达量明显降低(P<0.01),而激动剂组ColⅡmRNA表达量显著降低(P<0.01)。与ARG组相比,抑制剂组和ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01),而激动剂组ColⅠmRNA表达量增高(P<0.01),ColⅡmRNA表达量降低(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05)。③与空白组相比,ARG组ColⅡ蛋白表达量显著上调(P<0.01),ColⅠ、SOX9和RUNX2蛋白表达量降低(P<0.05,P<0.01);抑制剂组ColⅡ蛋白表达量亦明显增多(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量明显降低(P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ蛋白表达量显著升高(P<0.01),SOX9蛋白表达量显著降低(P<0.05),ColⅠ和RUNX2蛋白表达无明显变化(P>0.05);激动剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.01),RUNX2蛋白表达量明显增高(P<0.01),ColⅠ蛋白表达量无明显变化(P>0.05)。④与ARG组相比,抑制剂组ColⅡ和ColⅠ蛋白表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均明显增高(P<0.01);激动剂组ColⅡ蛋白表达量降低(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量升高(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均显著增多(P<0.05),SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:ARG可上调软骨细胞ColⅡ表达,抑制ColⅠ表达,调节转录因子SOX9和RUNX2,促进软骨细胞分化成熟。其作用与TRPV4抑制剂相似,两者合用对ColⅡ的调控作用更显著。

小檗碱对高糖培养的背根神经节中疼痛相关因子的影响

目的探讨小檗碱对痛性糖尿病神经病变疼痛相关蛋白P2X3、TRPV4、神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响及意义。方法新生大鼠离体培养背根神经节神经元,免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测细胞表达阳性率及蛋白表达。结果 P2X3、TRPV4、nNOS正常条件下在背根神经节中均有表达。免疫组织化学法检测高糖培养条件下P2X3、TRPV4、nNOS可看到阳性表达神经元增多,受体表达升高。小檗碱处理后,P2X3、TRPV4、nNOS表达均下降。蛋白质印迹法检测结果显示高糖条件下P2X3、nNOS表达高于对照组(P<0.01),小檗碱处理后,P2X3、TRPV4、nNOS均较高糖组降低(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论小檗碱可降低背根神经节神经元高糖环境下P2X3、TRPV4、nNOS的高表达,对糖尿病受损神经元有保护作用,可能为改善痛性糖尿病神经病变提供新途径。

TRPV4活化调控TXNIP表达在急性大鼠肾损伤中的作用及分子机制

目的观察TRPV4通道活化是否诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)损伤,并探讨可能的分子机制。方法利用不同浓度的TRPV4激动剂4α-PDD刺激NRK-52E细胞,应用Calcein-AM/PI双染色和LDH释放实验检测NRK-52E细胞损伤情况。Western blot检测TXNIP的表达,siRNA沉默TXNIP表达对4α-PDD诱导的NRK细胞损伤的影响。结果 4α-PDD诱导NRK-52E细胞损伤,表现为Calcein-AM染色的活细胞数下降,PI染色的死细胞增加,同时LDH释放增加,且这种损伤作用呈时间和剂量依赖。4α-PDD诱导TXNIP表达,且表达呈时间和剂量依赖。利用siRNA沉默表达TXNIP可明显降低TRPV4活化导致的NRK-52E损伤。结论 TRPV4活化通过上调TXNIP的表达导致NRK细胞的损伤,通过调控TRPV4/TXNIP很可能为保护肾损伤提供新的理论依据。

miR-3605-5p通过调控TRPV4表达对肾细胞癌A498细胞侵袭和增殖的影响

目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-3605-5p通过调控瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)基因表达对肾细胞癌A498细胞侵袭和增殖的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾细胞癌细胞系(A498、CaKi-1、786-O、ACHN)和永生化近端肾小管上皮细胞(HK-2)中miR-3605-5p的表达。将miR-3605-5p表达最少的肾细胞癌细胞系随机分为2组:miR-NC组(转染miR-NC)和miR-3605-5p组(转染miR-3605-5p)。qRT-PCR检测转染效果。Transwell实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组肾细胞癌A498细胞侵袭和增殖水平。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告实验验证miR-3605-5p的靶基因。qRT-PCR和Western Blot检测2组肾细胞癌A498细胞中靶基因的表达。结果:miR-3605-5p在肾细胞癌细胞系的表达水平明显低于永生化近端肾小管上皮细胞(P<0.05),在A498细胞中表达最少(P<0.01)。miR-3605-5p组A498细胞中miR-3605-5p的表达(9.49±1.09)高于miR-NC组(1.06±0.18),差异有统计学意义(P<0.01)。miR-NC组和miR-3605-5p组侵袭细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-3605-5p组A498细胞侵袭能力下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-3605-5p组A498细胞增殖能力降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-3605-5p的靶基因是TRPV4。双荧光素酶报告实验证明miR-3605-5p可靶向结合TRPV4基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-3605-5p组A498细胞中TRPV4的表达降低(P<0.05)。结论:miR-3605-5p通过下调TRPV4基因表达抑制肾细胞癌细胞A498的侵袭和增殖能力,miR-3605-5p可能成为肾细胞癌的潜在治疗靶点。

臭氧在大鼠神经病理性疼痛治疗中对TRPV4的影响

目的通过观察大鼠瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4(TRPV4)的变化,进一步探讨臭氧治疗神经病理性疼痛的作用机制。方法健康雌性SD大鼠72只,体重150~180 g,3~4月龄,采用随机数字表法将其随机分为3组(n=24):对照组(C组),仅暴露坐骨神经;神经病理性疼痛组(NP组),结扎右侧坐骨神经;臭氧注射组(CY组),结扎右侧坐骨神经,大鼠右后肢出现跛行、缩足等症状后局部注射35μg/ml臭氧0.5 ml,连续注射7 d。于制模前,制模后1、3、5、7 d及注射臭氧后3、5、7 d测定大鼠术侧足底机械缩足反应阈值(MWT)。分别于注射臭氧后3、5、7 d处死8只大鼠,采用免疫组织化学和RT-PCR方法测定背根神经节TRPV4的阳性细胞数与mRNA表达水平。结果与C组比较,NP组和CY组制模后各时点MWT较低,TRPV4阳性细胞计数较高,TRPV4的mRNA均上调(P均<0.05);与NP组比较,CY组制模后各时点MWT较高,TRPV4阳性细胞计数较低,TRPV4的mRNA均上调(P均<0.05)。结论臭氧可能通过介导TRPV4的表达,对神经病理性疼痛发挥镇痛作用。

TRPV3通道研究进展

瞬时受体电位离子通道香草素亚家族3(transient receptor potential vanilloid 3,TRPV3)是位于细胞膜上的一种非选择性阳离子通道蛋白,广泛表达于皮肤、大脑、背根神经节、心脏和结肠等器官。TRPV3参与感觉传导、皮肤屏障形成、毛发生长及血管舒张等生理过程,并被证明与瘙痒、皮肤炎症性疾病及癌症等病理进程密切相关。TRPV3能应答非伤害性热刺激(≥33℃)、内源性物质(如焦磷酸法尼酯)及外源性小分子化合物(如香芹酚、樟脑和2-APB等)。近年来,多种天然和合成的TRPV3抑制剂(如蛇床子素、74a和达克罗宁等)陆续被发现,并且在多种疾病动物模型中表现出一定疗效,说明TRPV3是具有潜力的药物开发靶点。本文综述了TRPV3通道蛋白结构、生理功能、相关疾病及调节剂的研究进展,为TRPV3的后续研究提供理论参考。

模拟步行压力下牛蒡子苷元对软骨细胞的保护机制研究

目的:探讨模拟步行压力对软骨细胞的作用及压力负荷下牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)、基质金属蛋白酶(MMPs)的影响。方法:分离并培养小鼠原代软骨细胞,制备3D培养软骨细胞水凝胶。将制备的水凝胶分为空白组、模型组、ARG组和抑制剂组。空白组不进行压力干预,使用常规培养基换液。其他3组均给予模拟步行压力(正弦波,1 Hz,20 kPa)干预2 h。压力干预同时,ARG组和抑制剂组分别给予10μmol/L ARG和10 nmol/L TRPV4抑制剂GSK2193874。收集干预后各组水凝胶提取的软骨细胞,免疫荧光染色检测ColⅡ蛋白表达,PCR检测ColⅡ、SOX9、TRPV4、MMP9、MMP13的mRNA表达水平,Western blot检测ColⅡ、SOX9、TRPV4的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,模型组ColⅡ蛋白表达较少;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ蛋白表达明显增多。②与空白组相比,模型组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著降低(P<0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著增高(P<0.01);与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著增高(P<0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著降低(P<0.01)。③与空白组相比,模型组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),TRPV4蛋白表达无明显变化;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著增高(P<0.01),TRPV4蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:模拟步行压力可导致软骨细胞发生趋向于软骨退化的代谢反应。模拟步行压力下,ARG和TRPV4抑制剂对软骨细胞具有保护作用,其机制可能与上调ColⅡ、SOX9表达,抑制TRPV4、MMP9和MMP13的表达有关。