鞘内注射SAHA对M型瞬时受体电位通道2介导小鼠慢性炎性痛的影响

目的探讨鞘内注射辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对M型瞬时受体电位通道2(TRPM2)介导小鼠慢性炎性痛的影响。方法将雄性野生型(WT)小鼠和TRPM2^(-/-)小鼠各32只,按随机对照原则分为8组:WT对照组(WT CON组)、WT溶媒组(WT DMSO组)、WT炎性痛组(WT CFA组)、WT炎性痛+SAHA组(WT SAHA组)、TRPM2^(-/-)对照组(TRPM2^(-/-)CON组)、TRPM2^(-/-)溶媒组(TRPM2^(-/-)DMSO组)、TRPM2^(-/-)炎性痛组(TRPM2^(-/-)CFA组)、TRPM2^(-/-)炎性痛+SAHA组(TRPM2^(-/-)SAHA组),每组8只。采用完全弗氏佐剂(CFA)40μl于小鼠左后肢足底皮下注射建立慢性炎性痛模型,WT和TRPM2^(-/-)的SAHA组于造模后3~9 d行为学测试后鞘内注射50 mg/kg的SAHA,WT CON组、WT CFA组、TRPM2^(-/-)CON组、TRPM2^(-/-)CFA组4组注射等量生理盐水。WT和TRPM2^(-/-)的DMSO组鞘内注射与SAHA等体积的DMSO。分别测定小鼠的机械刺激伤害感受阈、辐射热刺激伤害感受阈及足爪的肿胀度。结果TRPM2^(-/-)小鼠在未造模前表现出正常的疼痛行为学反应,与WT小鼠差异无统计学意义。WT和TRPM2^(-/-)小鼠鞘内注射DMSO,其疼痛行为学指标与未注射前差异无统计学意义。WT CFA组的机械刺激伤害感受阈值和热刺激伤害感受阈值均明显低于WT CON组(P<0.001),WT SAHA组在给予SAHA干预后,各种疼痛阈值显著升高,与WT CFA组比较差异有统计学意义(P<0.001);TRPM2^(-/-)CFA组机械刺激伤害感受阈值和辐射热刺激伤害感受阈值均明显高于WT CFA组,与TRPM2^(-/-)SAHA组比较差异无统计学意义。WT CFA组足爪肿胀度造模后明显升高,与WT CON组、WT SAHA组比较均差异有统计学意义(P<0.001);TRPM2^(-/-)CFA组足爪肿胀度明显低于WT CFA组(P<0.001),与TRPM2^(-/-)SAHA比较差异无统计学意义。结论 TRPM2参与小鼠慢性炎性痛的发生发展,鞘内注射SAHA可能改善TRPM2介导的慢性炎性痛。

动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者外周血单个核细胞中瞬时受体电位通道M2水平与介入治疗预后的关系

目的 分析动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)患者外周血单个核细胞中瞬时受体电位通道M2(TRPM2)水平与介入治疗预后的关系。方法 选取2019年8月至2021年5月在三亚市中医院接受介入治疗的148例aSAH患者作为研究对象。用Ficoll密度梯度离心法和蛋白质免疫印迹法检测外周血单个核细胞中TRPM2水平。用改良Rankin量表(mRS)评分评价介入治疗90 d后预后。用logistic回归分析TRPM2与aSAH患者介入治疗预后的关系。结果 根据随访后m RS评分将患者分为预后良好组(n=107)和预后不良组(n=41)。预后良好组年龄、Hunt-Hess分级Ⅲ级占比、脑血管痉挛占比和Glasgow昏迷量表(GCS)评分低于预后不良组(均P<0.05)。预后良好组治疗前后TRPM2水平低于预后不良组(均P<0.05)。治疗后TRPM2>0.28和Hunt-Hess分级Ⅲ级是a SAH患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 aSAH患者介入治疗后TRPM2水平高与预后不良有关。

瞬时受体电位M2通道:氧化应激敏感的离子通道

瞬时受体电位(TRP)通道是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道超家族,根据氨基酸序列的同源性,可将已发现的TRP通道分为7个不同的亚家族,瞬时受体电位M2(TRPM2)通道隶属于TRPM家族。越来越多证据表明,TRPM2通道参与如胰岛素分泌和释放、炎性细胞因子分泌、氧化应激介导的细胞死亡等多种病理生理过程。TRPM2离子通道作为氧化应激反应感受器,可被多种因子激活和影响,有望成为氧化应激相关疾病的一个潜在治疗靶点。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2在小鼠肝缺血再灌注损伤模型中的作用及机制

目的:观察瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2(transient receptor potential cation channel subfamily M member 2,TRPM2)在小鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型中的作用及可能的机制。方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、TRPM2腺病毒干扰载体预处理组(T组)和TRPM2腺病毒对照载体预处理组(C组)(均n=15)。取各组小鼠灌注前肝组织,采用荧光显微镜观察腺病毒感染效率,利用real-time PCR检测腺病毒对TRPM2的沉默效率。各组小鼠分别于再灌注2,4和8 h抽取腹主动脉血并获取肝组织,分别检测血清中谷丙转氨酶(alanine amino-transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate amino-transferase,AST)活性。采用HE染色观察肝组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肝中TRPM2和Rac家族小GTP酶1(Rac family small GTPase 1,RAC1)蛋白质的表达量变化;并通过酶联免疫吸附试验检测肝中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性的变化。结果:与S组和M组相比,T组和C组小鼠肝组织可见大量绿色荧光。与S组、M组及C组相比,T组小鼠肝组织中TRPM2 mRNA的表达量显著降低(均P<0.05)。光镜下S组小鼠肝细胞形态正常;M组和C组小鼠肝窦扩张和淤血、肝细胞变性、小叶中央坏死及大量炎症细胞浸润;与M组和C组相比较,T组小鼠肝细胞受损程度明显减轻。与S组相比较,M组、T组及C组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05);与M组和C组相比较,T组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著降低(均P<0.05)。与M组和C组相比较,T组小鼠中SOD活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05),而MDA和MPO活性均显著降低(均P<0.05)。T组小鼠肝组织中TRPM2和RAC1蛋白质表达量在再灌注2,4和8 h较M组和C组均显著降低(均P<0.05)。结论:TRPM2腺病毒干扰载体预处理能有效沉默小鼠肝组织中TRPM2基因表达,并能减轻HIRI,该机制可能与抑制氧化应激和降低RAC1蛋白质表达水平有关。

瞬时受体电位通道M2在恶性肿瘤中的作用

瞬时受体电位通道M2(transient receptor potential channel melastatin 2,TRPM2)是人体中一个重要的Ca^(2+)通透性非选择性阳离子通道,通常表达于正常细胞胞膜和溶酶体膜上,并在氧化应激中发挥重要的离子调节作用。但近年发现,TRPM2也在多种恶性肿瘤(神经母细胞瘤,舌/喉鳞状细胞癌,肺癌,乳腺癌,胃癌,胰腺癌,膀胱癌,前列腺癌和T细胞白血病)中高表达,能通过调节细胞线粒体功能和自噬促进肿瘤细胞的生物学能量而促进其生存能力,通过调节抗氧化物水平增强细胞对氧化刺激的耐受力而表现出化疗抵抗作用。同时,在肿瘤细胞膜上该通道大量激活又对化疗药物联合使用发挥协同作用。此外,TRPM2能通过激活多种不同的分子的信号通路,促进细胞增殖、侵袭和转移能力。总之,根据肿瘤的不同,TRPM2对肿瘤细胞生物学行为的调控机制也不同,甚至具有复杂的双重作用。所以,对TRPM2的生化及分子机制的研究必将使我们对肿瘤的发生发展的认识更加全面。本文将从TRPM2蛋白质的结构,生理功能及肿瘤机制等不同角度系统阐述TRPM2的研究现状和进展。

瞬时受体电位M2抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧细胞的保护作用

目的:探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)抑制剂A10对缺糖缺氧后复糖复氧(OGD/R)细胞模型的保护作用。方法:采用SH-SY5Y细胞系制备OGD/R损伤模型。将细胞随机分为空白对照组、模型对照组和A10组。细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧水平;四甲基罗丹明甲酯法检测线粒体膜电位;一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡细胞数量;蛋白质印迹法测定cleaved caspase 3蛋白表达。结果:相对于3、20、30、50和100μmol/L,10μmol/L浓度的A10具有较低的细胞毒性及较好的通道活性抑制作用。与模型对照组比较,A10组活性氧水平降低(P<0.05),线粒体膜电位降低程度改善(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase 3表达减少(P<0.05)。结论:A10可以通过抑制TRPM2通道功能、减少细胞外钙离子内流、降低细胞活性氧水平、稳定线粒体膜电位水平和减少细胞凋亡缓解OGD/R后细胞的损伤。

TRPM2通道在星形胶质细胞氨中毒中的作用

目的:通过建立星形胶质细胞氨中毒的模型,探讨瞬时受体电位M2(TRPM2)阳离子通道在其中发挥的作用。方法:分离并培养小鼠原代星形胶质细胞。实验分为5组:对照组、氯化铵处理组、氯化铵+3-氨基苯甲酰胺(3-AB)处理组、氯化铵+PJ-34处理组和TRPM2基因敲除小鼠+氧化铵处理组。测定细胞的活性、caspase-3活性、细胞坏死和体积大小,以此来衡量氨中毒的程度。用全细胞膜片钳记录TRPM2通道电流变化。结果:氯化铵引起细胞肿胀伴随着细胞坏死。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-AB和PJ-34抑制了氯化铵引起的阳离子电流,并减轻了氯化铵引起的相应细胞伤害。TRPM2基因敲除小鼠组细胞的伤害明显减轻(P<0.01)。结论:TRMP2通道的激活是细胞暴露于氯化铵后发生肿胀、坏死的必要步骤;氯化铵诱导的星形胶质细胞肿胀与坏死密切相关。

黄芪提取物调节TRPM2表达的抗急性药物性肝损伤作用研究

目的 探讨黄芪提取物(AR)调节TRPM2表达的抗急性DILI作用机制。方法 雄性小鼠39只,随机分为对照组(n=7),对乙酰氨基酚(APAP)模型组,AR低、高剂量组及N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗组,每组各8只。其中AR低、高剂量组分别以50、75 mg/kg的AR灌胃,NAC组以100 mg/kg灌胃,每日1次,共3 d。第4天,除对照组外,其余各组以350 mg/kg剂量APAP灌胃,12 h后处死全部小鼠,收集血清及肝组织。检测血清ALT、AST活性;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化染色观察肝组织髓过氧化物酶(MPO)、瞬时受体电位M2型离子通道(TRPM2)表达。体外实验以不同剂量APAP(0、5、10、20 mM)孵育AML12细胞12、24 h,筛选出APAP肝细胞损伤最佳浓度和作用时间,并动态检测肝细胞TRPM2基因及蛋白表达。肝细胞分为对照组,模型组,AR低、高剂量组及NAC对照组,除对照组外,其余各组以20 mM APAP诱导损伤,并分别以125、250μg/mL的AR、50 mM NAC孵育24 h。采用CCK8检测细胞活力,qRT-PCR检测肝细胞TRPM2基因表达、Western Blot检测蛋白表达。结果 与对照组比较,APAP可诱导急性DILI,血清ALT、AST活性明显升高(F=35.717、F=18.997,P值均<0.01),肝组织结构破坏严重、肝细胞大块/亚大块坏死、中央静脉淤血;与模型组相比,AR能显著降低模型小鼠血清ALT、AST活性,减轻肝细胞坏死、肝组织MPO及TRPM2表达,具有明显的保肝作用,且AR高剂量组与NAC疗效相当。5 mM APAP孵育AML12细胞24 h明显诱导肝细胞损伤,且肝细胞TRPM2表达随着时间的延长而增加(F=25.408,P<0.01);与模型组相比,AR可提高肝细胞活力、降低肝细胞TRPM2表达。结论 黄芪提取物具有良好的保护APAP诱导急性DILI作用,其机制与抑制TRPM2表达相关。

瞬时受体电位通道M2在动脉粥样硬化小鼠血管高反应性中的作用

目的探究瞬时受体电位通道M2(TRPM2)在动脉粥样硬化(AS)小鼠主动脉5-羟色胺高反应性中的作用。方法将40只小鼠随机分为C57BL/6J普通饲料组(C57+nd)、C57BL/6J高脂饲料组(C57+hfd)、载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)普通饲料组(APOE-/-+nd)和APOE-/-高脂饲料组(APOE-/-+hfd),喂养16周。比较4组小鼠主动脉TRPM2基因表达变化,运用血管环张力检测技术测定小鼠主动脉对5-羟色胺的反应性变化,观察TRPM2抑制剂处理对5-羟色胺反应性的作用。结果APOE-/-+hfd组小鼠体质量、血糖和血脂显著增高,主动脉斑块形成明显,模型制备成功。APOE-/-+hfd组小鼠主动脉TRPM2 mRNA(3.20±0.97)与蛋白(2.82±0.35)相对表达水平高于其他3组(mRNA:C57+nd组0.92±0.42、C57+hfd组0.74±0.37、APOE-/-+nd组0.87±0.42;蛋白:C57+nd组1.39±0.23、C57+hfd组1.35±0.34、APOE-/-+nd组1.22±0.23);APOE-/-+hfd组主动脉对5-羟色胺反应性增强,半最大效应浓度(EC50)减小,且可被TRPM2抑制剂N-苯基邻氨基苯甲酸(ACA,1μmol/L)和2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB,10μmol/L)显著抑制[ACA抑制率:C57+nd组(16.62±1.28)%、C57+hfd组(19.20±5.55)%、APOE-/-+nd组(14.72±2.30)%、APOE-/-+hfd组(38.15±1.13)%,F=12.58,P<0.01;2-APB抑制率:C57+nd组(27.68±5.24)%、C57+hfd组(28.75±3.67)%、APOE-/-+nd组(50.40±7.74)%、APOE-/-+hfd组(62.81±5.99)%,F=98.83,P<0.01]。结论APOE基因敲除和高脂喂食处理可能通过上调TRPM2基因表达,增强TRPM2在5-羟色胺高反应性中的作用,促进小鼠AS的产生。

TRPV2在术后化疗结肠癌患者癌组织中的表达及临床意义

目的分析TRPV2在术后化疗结肠癌患者癌组织中的表达及临床意义方法选择2010年10月—2011年8月唐山市人民医院普外科住院的90例结肠癌患者作为研究对象,患者均接受手术治疗及术后辅助化疗。根据随访结果将其分为未复发组(51例)和复发组(39例)。分别采用免疫组织化学方法及RT-PCR方法检测结肠癌组织中TRPV2蛋白及TRPV2 mRNA的表达,并结合临床及随访资料分析结肠癌组织TRPV2表达与患者预后之间的关系。结果复发组患者肿瘤组织中TRPV2蛋白及TRPV2 mRNA表达高于未复发组(t=12. 701,P <0. 001,t=11. 069,P <0. 001); TRPV2表达与术后化疗结肠癌患者的肿瘤分化程度、血管淋巴管浸润及淋巴结转移存在相关性(χ~2=9. 847,P=0. 001,χ~2=3. 879,P=0. 027,χ~2=6. 513,P=0. 006); TRPV2高表达患者的5年无复发生存率低于TRPV2低表达患者(P <0. 05); Cox生存分析显示TRPV2表达(HR=2. 253,95%CI 1. 427～3. 629)、肿瘤分化程度(HR=2. 526,95%CI 1. 423～5. 396)、血管淋巴管浸润(HR=3. 688,95%CI 2. 259～6. 139)及淋巴结转移(HR=3. 139,95%CI 1. 578～7. 351)均是术后化疗结肠癌患者预后的独立影响因子(P <0. 05)。结论 TRPV2在结肠癌组织中表达增加发生在转录水平,为一个潜在的基因治疗靶点;结肠癌组织TRPV2高表达与结肠癌患者不良预后有密切关系,可作为判断结肠癌患者预后的指标。

TRPM2在H9N2猪流感病毒感染小鼠PMVEC损伤中的表达与作用

目的:探讨瞬时受体电位阳离子通道M2(TRPM2)在H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的表达与作用。方法:采用H9N2-SIV感染小鼠PMVEC (每组设立3个重复),在病毒感染后24 h和48 h进行采样,根据试剂盒方法测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧簇(ROS)和一氧化氮合成酶(NOS)的变化;电镜观察PMVEC超微结构变化;利用Transwell培养PMVEC单层细胞,测定跨膜电阻及辣根过氧化物酶渗出率;real-time PCR和Western blot方法检测TRPM2 mRNA与蛋白的表达;采用Annexin V/PI双染法观察病毒感染细胞的凋亡情况。结果:H9N2-SIV感染后小鼠PMVEC中GSH-Px和SOD活性显著下降,而ROS水平和NOS活性显著高于未感染对照组(P<0.01);病毒感染细胞细胞器明显减少,出现空泡化结构,线粒体基质减少,细胞发生凋亡;病毒感染后跨膜电阻值明显降低,辣根过氧化物酶渗出率则显著增加;TRPM2 mRNA和蛋白表达随病毒感染时间增加显著升高(P<0.01);Annexin V/PI双染法显示病毒感染细胞的胞膜荧光显著增强,同时大量细胞的胞核显现红色,表明大量细胞发生凋亡现象。结论:TRPM2在H9N2-SIV感染PMEVC过程中表达明显增强,提示其参与了H9N2-SIV感染导致的PMVEC损伤和凋亡过程。

下调TRPM2表达抑制NLRP3炎症小体激活减轻氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞损伤

目的探讨下调瞬时受体电位通道M2(TRPM2)表达对氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞损伤的影响。方法将TRPM2小干扰RNA(siRNA-TRPM2)及其阴性对照(siRNA-NC)转染至体外培养的人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)中,并用氯胺酮处理,记为si-TRPM2+氯胺酮组(si-TRPM2+Ketamine组)和si-NC+氯胺酮组(si-NC+Ketamine组),另设氯胺酮组和对照组。采用qRT-PCR法检测SV-HUC-1细胞中的TRPM2表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞中的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等炎症因子水平,Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果与对照组比较,氯胺酮组的SV-HUC-1细胞增殖活性、SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达均显著降低(均P<0.05),TRPM2的mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、MDA含量和细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达均显著升高(均P<0.05);si-NC+Ketamine组的上述指标与氯胺酮组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);与si-NC+Ketamine组比较,si-TRPM2+Ketamine组的SV-HUC-1细胞增殖活性、SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达均显著升高(均P<0.05),TRPM2的mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、MDA含量和细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论下调TRPM2表达可抑制氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激,进而减轻膀胱上皮细胞损伤,其可能是通过抑制NLRP3炎症小体激活发挥作用。

大麻二酚对载脂蛋白E基因敲除小鼠空间记忆障碍的调节及作用机制研究

目的研究大麻二酚(CBD)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠空间记忆障碍的调节作用及其作用机制。方法将18只ApoE^(-/-)小鼠采用随机数字表法分为ApoE^(-/-)组和ApoE^(-/-)+CBD组,每组9只。ApoE^(-/-)+CBD组小鼠每天予CBD 10 mg/kg腹腔注射,ApoE^(-/-)组小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续注射21 d。最后一次注射后,通过旷场实验和新物体识别实验研究CBD对ApoE^(-/-)小鼠学习记忆能力和焦虑情绪的影响;采用免疫印迹法检测小鼠大脑皮层和海马组织中相关蛋白的表达;培养原代神经元,分为野生型(WT)组、WT+CBD组、ApoE^(-/-)组、ApoE^(-/-)+CBD组4组,观察各组神经元的分化情况。结果ApoE^(-/-)+CBD组小鼠的新物体识别指数明显高于ApoE^(-/-)组,差异有统计学意义(P<0.05)。与WT组比较,ApoE^(-/-)组神经元轴突长度和胞体大小明显缩小,差异均有统计学意义(P<0.01);与ApoE^(-/-)组比较,ApoE^(-/-)+CBD组神经元轴突长度和胞体大小均明显增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。与ApoE^(-/-)组比较,ApoE^(-/-)+CBD组小鼠大脑皮层中瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员2(TRPV2)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(AKT)及磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ型亚基α和δ(CaMKIIα/δ)表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CBD可抑制ApoE基因敲除小鼠的空间记忆障碍,减弱ApoE基因敲除小鼠大脑神经元分化障碍,这些作用主要是通过TRPV2/AKT/CaMKIIα/δ通路实现的。

沉默TRPM2-AS对耐奥沙利铂的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)瞬时受体电位通道M2反义RNA(TRPM2-AS)对耐奥沙利铂(L-OHP)的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法采用L-OHP浓度递增处理结直肠癌细胞HCT-8,获得L-OHP耐药细胞HCT-8/L-OHP,RT-qPCR法分别检测HCT-8和HCT-8/L-OHP细胞中TRPM2-AS与miR-22-3p表达。分别转染TRPM2-AS小干扰RNA、miR-22-3p模拟物,或共转染TRPM2-AS小干扰RNA与miR-22-3p抑制剂至HCT-8/L-OHP细胞,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证TRPM2-AS和miR-22-3p调控关系。结果HCT-8/L-OHP细胞中TRPM2-AS表达明显高于HCT-8细胞(P<0.05),而miR-22-3p表达明显低于HCT-8细胞(P<0.05)。沉默TRPM2-AS或过表达miR-22-3p后,HCT-8/L-OHP细胞OD_(48 h/72 h)值和克隆形成数降低(P<0.05),而细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达升高(P<0.05)。TRPM2-AS可靶向结合miR-22-3p,且沉默TRPM2-AS促进HCT-8/L-OHP细胞中miR-22-3p表达。抑制miR-22-3p逆转了沉默TRPM2-AS对HCT-8/L-OHP细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默TRPM2-AS可能通过靶向上调miR-22-3p阻碍耐L-OHP的结直肠癌细胞增殖,并促进其凋亡,TRPM2-AS可能是逆转结直肠癌细胞耐L-OHP的分子靶点。

稳定抑制TRPM2基因表达肺微血管内皮细胞系的构建与鉴定

应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰,以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株。结果表明,正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4μg/mL和0.6μg/mL;然后加入0.6、2.0、4.0、8.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定抑制TRPM2表达的shRNA TRPM2 PMVEC株,结果在嘌呤霉素达到8μg/mL时该细胞株仍细胞生长良好; Semi-quantitative PCR和Western blot对获得阳性细胞株进行TRPM2基因和蛋白表达的检测显示, shRNA TRPM2阳性PMVEC的TRPM2基因和蛋白表达相对量显著低于阴性对照和正常对照组(P<0.01)。该研究通过shRNA慢病毒载体成功建立了稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株,为进一步开展TRPM2在流感病毒诱导肺微血管内皮细胞损伤的作用机制奠定了基础。

火针对化疗所致神经病理性疼痛大鼠外周敏化的镇痛作用机制

目的:从外周敏化角度探讨火针治疗奥沙利铂诱导的神经病理性疼痛(NP)大鼠外周敏化的镇痛机制。方法:SD大鼠随机分为正常组(n=6)、模型组(n=6)、火针组(n=6)和药物组(n=6)。采用腹腔注射奥沙利铂(4 mg/kg)建立NP大鼠模型。造模后的第1、3、5天(即实验的第24、26、28天),火针组行火针L4—L6“夹脊”治疗,药物组行普瑞巴林(100 mg/kg)腹腔注射治疗。Von Frey丝检测大鼠缩足阈值(PWT)代表机械痛阈值,ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、趋化因子12(CXCL12)含量,HE染色法观察大鼠穴区皮肤病理形态,甲苯胺蓝染色法观察各组大鼠穴区皮肤肥大细胞数量,免疫组织化学法检测大鼠穴区皮肤类胰蛋白酶(TPS)、瞬时受体电位香草酸通道1(TRPV1)、蛋白酶活化受体2(PAR2)阳性表达,Western blot法检测大鼠背根神经节(DRG)中TRPV1和PAR2蛋白的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠造模后的PWT降低(P<0.05),血清IL-6、TNF-α、CXCL12含量升高(P<0.05),穴区皮肤肥大细胞数量增加(P<0.05),穴区皮肤TPS、TRPV1和PAR2蛋白阳性表达升高(P<0.05)。与模型组相比,火针组和药物组大鼠干预后的PWT升高(P<0.05),血清IL-6、TNF-α、CXCL12含量,穴区皮肤TPS、TRPV1、PAR2蛋白阳性表达降低(P<0.05);药物组DRG中TRPV1和PAR2蛋白表达量降低(P<0.05)。HE染色结果显示,模型组大鼠穴区表皮层增厚,细胞排列层次紊乱,细胞间水肿明显,真皮层内可见大量炎性细胞浸润;药物组、火针组穴区表皮层较薄,细胞排列层次较清晰,组织水肿和炎性细胞浸润情况均较模型组减轻。结论:火针可以改善奥沙利铂诱导的NP大鼠的机械痛阈、降低外周炎性因子的水平,该作用可能与抑制肥大细胞活化,抑制穴区局部TPS、TRPV1和PAR2蛋白的表达有关。