瞬时受体电位通道C3/6与大电导钙激活钾通道在肾小球足细胞表面转运中的作用

由Slo1基因编码的大电导钙激活钾通道（BKca）与各种瞬时受体电位通道C（TRPCs）在许多细胞系上共表达，其中包括肾小球的足细胞（脏层上皮细胞）。在本实验中，通过免疫共沉淀和谷胱甘肽S-转移酶（GST）pull—down方法证实在分化的足细胞系上的BKCa通道与内源性的TRPC3／6通道相联系。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6对子宫内膜癌细胞周期的调控作用

目的探讨子宫内膜癌组织中瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6(TRPC6)的表达变化及其对子宫内膜癌细胞周期的调控作用。方法应用qRT-PCR技术和蛋白质印迹法检测30例正常子宫内膜、30例不典型增生和32例子宫内膜癌组织中TRPC6的表达。分别用SKF59636(TRPC6阻断剂)和小干扰RNA(siRNA)干扰两种方法阻断TRPC6的作用,观察子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞周期的变化。结果子宫内膜癌组织中的TRPC6 mRNA和蛋白表达量均高于不典型增生组织和正常子宫内膜组织(P<0.01)。SKF96365呈剂量依赖性方式将细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少;转染siRNA可将子宫内膜癌细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少,同时上调磷酸化细胞分裂周期蛋白2(pCDC2)的表达。结论子宫内膜癌组织中TRPC6表达增高,TRPC6可能通过影响pCDC2蛋白表达参与子宫内膜癌细胞周期调控。

瞬时受体电位通道C1在豚鼠哮喘气道重塑中的作用机制及布地奈德的干预作用

目的通过干预瞬时受体电位通道C1(TRPC1)的表达,探讨TRPC1离子通道在气道重塑演变过程中的作用机制及布地奈德的干预作用。方法雄性普通级豚鼠50只,随机均分为5组:A组为空白对照组、B组为卵蛋白刺激组、C组为卵蛋白刺激+TRPC1 siRNA干扰组、D组为卵蛋白刺激+荧光素酶siRNA干预组、E组为卵蛋白刺激+布地奈德干扰组。取肺泡灌洗液(BALF),比较嗜酸性粒细胞(Eos)占总细胞数的百分比;酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中IL-5,IL-13表达水平。取支气管肺组织行苏木精-伊红染色(HE)、马松三色染色(Maason),Image-Pro图像处理软件定量分析支气管壁厚度、平滑肌增殖及胶原沉积情况。免疫组化法观察TRPC1蛋白在肺内相对表达水平。实时荧光定量PCR法测定TRPC1 m RNA的相对表达。结果Image-Pro图像软件分析结果示,B组显著表现出支气管壁增厚、平滑肌增殖、基底膜胶原沉积、气道周围炎症细胞浸润、炎症因子增加等病理变化,C组、E组的上述病理变化则不明显(P<0.05)。进一步行免疫组化法显示,TRPC1蛋白位于支气管上皮粘膜层,主要分布于支气管粘膜基底细胞、柱状上皮细胞的胞膜及胞核内。结论 TRPC1通道在哮喘个体的高水平表达与气道重塑、慢性气道炎症的发生、发展密切关联;而布地奈德可在一定程度上通过调节TRPC1的表达参与气道重塑的演变。

不同降压药物干预对自发性高血压大鼠主动脉瞬时受体电位通道C亚族表达的影响

目的:研究雷米普利、缬沙坦和氨氯地平对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉(内膜及平滑肌)的瞬时受体电位通道C亚族3亚型及6亚型(TRPC3、TRPC6)表达的影响。方法:24只SHR随机分成4个组(n=6),1个SHR对照组,雷米普利组、缬沙坦组和氨氯地平组,采用灌胃法给药4周,另用6只Wistar鼠(WKY)作正常WKY组,观察给药治疗4周前后血压变化,实验结束时取主动脉组织进行TRPC3和TRPC6的检测,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测信使核糖核酸(mRNA)的表达,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测蛋白的表达。结果:SHR对照组与正常WKY组治疗前比较,血压明显增高(P<0.05),SHR对照组与正常WKY组治疗后比TR-PC3、TRPC6的mRNA和蛋白表达显著增加(P均<0.05),差异均有统计学意义。药物治疗4周后,雷米普利组、缬沙坦组、氨氯地平组与治疗前比血压均有效地降低(P均<0.05),TRPC3的mRNA和蛋白表达均减少(P均<0.05),差异均有统计学意义。TRPC6的mRNA和蛋白表达改变不明显,雷米普利组、缬沙坦组、氨氯地平组间TRPC3、TRPC6的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义。结论:SHR大鼠主动脉TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达明显增高,给予雷米普利、缬沙坦和氨氯地平4周后血压下降,同时TRPC3mRNA和蛋白表达降低,提示TRPC3可能参与了SHR大鼠血压调控。

瞬时受体电位C通道研究进展

钙离子（Ca^2＋）是细胞信号传导过程中重要的第二信使，在细胞内传递信息并调控一系列生命过程。当细胞受到相应刺激时，细胞会通过各种途径升高细胞内Ca^2＋浓度，胞浆内Ca^2＋浓度的升高主要来源于2个方面：外钙内流和细胞内钙库释放。外钙内流的途径主要分成3大类：电压门控的钙通道（voltage depentent calcium chnnel，VOC）、受体门控的钙通道（receptor operatedc alcium chnnel，ROC）和库操纵性钙通道（store-operated calcium channels，SOC）。VOC和ROC的特性是在短时间内产生大量的钙内流，SOC则产生较小的、持续的钙内流。细胞膜上持续的钙内流保证了信号的正常传播。目前认为，瞬时受体电位C（TRPC）通道家族成员是构成细胞膜上SOC和ROC的分子基础。

缬沙坦干预瞬时受体电位通道C亚族3亚型的表达对小鼠心肌纤维化的影响

目的探讨瞬时受体电位通道C亚族3亚型(TRPC3)在心肌纤维化中所起作用,以及缬沙坦干预TRPC3的表达对心肌纤维化的影响。方法取50只昆明种小鼠,随机分为五组,分别为空白组,对照组,低、中、高剂量给药组,每组各10只。其中对照组,各给药组小鼠皮下注射异丙肾上腺素制造心肌纤维化模型,空白组小鼠皮下注射相同体积的0.9%氯化钠注射液。从造模第5天开始,低剂量给药组予以缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃,中剂量给药组予以缬沙坦20 mg/(kg·d),高剂量给药组予以缬沙坦30 mg/(kg·d),均连续灌胃20 d;空白组、对照组每天给予相同体积的0.9%氯化钠注射液灌胃,连续灌胃20 d。灌胃处理结束后,记录小鼠心电图,计算心脏质量指数(HWI),RT-PCR测定心肌组织TRPC3mRNA表达,免疫印迹法测心肌组织TRPC3蛋白、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量。结果五组间的HWI、心率(HR)、T波峰点到末端的间期(Tp-e)、Tp-e/校正Q波起点到T波终点间期(Q-Tc),Ⅰ与Ⅲ型胶原纤维相对表达量、TRPC3mRNA与TRPC3蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(F=5.416、5.780、33.752、38.011、189.692、94.940、6.501、80.009,P <0.05)。与空白组比较,对照组HWI增大(P <0.05),对照组与低剂量给药组HR、Tp-e、Tp-e/Q-Tc升高(P <0.05),对照组、低剂量与中剂量给药组Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维相对表达量、Ⅰ型胶原纤维表达量/Ⅲ型胶原纤维表达量比值升高(P <0.05),对照组、低剂量与中剂量给药组TRPC3蛋白表达升高(P <0.05),对照组、低、中、高剂量给药组TRPC3mRNA表达升高(P <0.05)。与对照组比较,低、中、高剂量给药组HWI减小(P <0.05),中、高剂量给药组HR下降(P <0.05),低、中、高剂量给药组Tp-e、Tp-e/Q-Tc缩短(P <0.05),高剂量给药组Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维相对表达量、Ⅰ型胶原纤维表达量/Ⅲ型胶原纤维表达量比值、TRPC3蛋白与TRPC3mRNA表达水平下降(P <0.05)。与低剂量组比较,高剂量给药组HR下降(P <0.05),中剂量与高剂给药量组Tp-e、Tp-e/Q-Tc缩短(P <0.05),高剂量给药组Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维相对表达量、TRPC3蛋白表达水平下降(P <0.05)。与中剂量给药组比较,高剂量给药组Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维相对表达量、Ⅰ型胶原纤维表达量/Ⅲ型胶原纤维表达量比值、TRPC3蛋白表达水平下降(P <0.05)。结论缬沙坦可抑制TRPC3表达,改善心肌纤维化。

糖尿病冠状动脉平滑肌细胞瞬时受体电位C1通道表达及对冠状动脉功能的影响

目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中瞬时受体电位C1通道(TRPC1通道)表达变化及对冠状动脉功能的影响。方法采用腹腔链脲霉素注射建立1型糖尿病大鼠动物模型;采用酶消化法急性分离正常组(40只)和糖尿病组(40只)大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用Western Blot和q RT-PCR分别测定冠状动脉TRPC1通道蛋白和基因的表达;采用细胞内钙离子荧光成像技术测定加入TRPC1通道阻滞剂SKF96365前后细胞内钙离子浓度;采用血管张力测定技术测定SKF96365对冠状动脉功能的影响。结果造模前后糖尿病组大鼠血糖水平和体重水平分别为(7.38±0.21)和(29.58±0.62)mmol/L(P<0.05),(205.8±4.65)和(328.3±19.57)g(P<0.05)。两组冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道蛋白表达量分别为0.9802±0.0589和1.2204±0.0636(P<0.05);基因表达量分别为0.9641±0.0293和2.1484±0.3061(P<0.05);两组钙离子浓度测定ΔRatio分别为0.8692±0.0290和1.2166±0.0435(P<0.05),正常组加入SKF96365前后的ΔRatio分别为0.8439±0.0202和0.0666±0.0393(P<0.05),糖尿病组加入SKF96365前后的ΔRatio分别为1.2166±0.0435和0.1951±0.0277(P<0.05);两组冠状动脉在ET-1收缩血管后,加入10μmol/L TRPC1通道抑制剂SKF96365,冠状动脉舒张的百分比分别为(73.02±5.26)%和(92.23±2.09)%(P<0.05)。结论糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道表达增加,细胞内钙离子浓度增加,冠状动脉功能紊乱。

线粒体氧化应激及m6A表观遗传调控TRPC6钙通道在肾病综合征发病中的作用研究

目的 初步探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)表观遗传修饰瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)通道失调在肾病综合征发病中的作用及潜在机理。方法 按照随机数字表法将小鼠足细胞分为4组:对照组、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组、嘌呤霉素氨基核苷(PAN)处理组、TBHQ+PAN处理组。对照组为正常完全培养液,TBHQ组培养液中加入10 nmol/L TBHQ,PAN处理组培养液中加入PAN 50μg/mL,TBHQ+PAN处理组培养液中加入10 nmol/L TBHQ以及PAN 50μg/mL,刺激24 h收集细胞。应用膜片钳证实PAN损伤诱导TRPC6通道激活机理及1,4,5-肌醇三磷酸(IP3)受体拮抗剂TBHQ对电流的影响,检测对照组、PAN处理组、TBHQ组和TBHQ+PAN处理组细胞TRPC6通道电流变化。通过葡萄糖氧化酶(GO)建立足细胞氧化应激模型。另外按照随机数字表法将足细胞分为4组:空白对照组、GO组、姜黄素组、姜黄素+GO组。GO组给予GO 3.5 kU/L,姜黄素组给予Nrf2激动剂(姜黄素)40μmol/L,姜黄素+GO组给予姜黄素40μmol/L和GO 3.5 kU/L处理,给药处理8~12 h后收集细胞。检测各组Nrf2和特异性调控蛋白NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)、TRPC6及Transgelin蛋白和线粒体调控蛋白表达变化。通过SRAMP对TRPC6通道m6A位点进行精准预测,对PAN诱导足细胞损伤模型公共数据库GSE124622进行2次生物信息学分析。结果 对照组与TBHQ组电流比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PAN处理组电流升高,而TBHQ+PAN组电流减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与GO组比较,姜黄素+GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组线粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达均降低,Drp1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与GO组比较,姜黄素+GO组粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达升高,Drp1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);空白对照组与姜黄素组TRPC6/Transgelin及线粒体调控蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TRPC6通道序列存在多个m6A修饰位点,均具有被甲基转移酶(METTL)3、METTL14、肾母细胞肿瘤1相关蛋白(WTAP)和去甲基化酶ALKB同源蛋白(ALKBH)、m6A去甲基化酶(FTO)调控的潜在可能。对12个m6A调节基因进行表达分析,发现m6A调节基因的表达在PAN诱导足细胞损伤中发生显著差异。结论 TRPC6介导钙离子内流可被氧化应激激活参与足细胞损伤,激活Nrf2可以减少钙过负荷所致线粒体损伤而保护足细胞。TRPC6序列中存在多个高m6A修饰靶点,肾病综合征发病机理可能通过m6A修饰足细胞TRPC6离子通道,m6A相关调控基因在肾病足细胞损伤中发生明显变化。

经典瞬时受体电位C亚族通道在心血管疾病中的作用

经典瞬时受体电位通道C亚族(canonical transient receptor potential,TRPC)通道是细胞膜上的一种非电压门控性阳离子通道,广泛表达于心血管系统。胞质内Ca^(2+)参与许多生命活动过程,其稳态对维持机体正常生理功能具有重大意义。几乎所有TRPC通道都能非选择性地渗透Ca^(2+)。当TRPC基因突变或过度表达引起Ca^(2+)内流变化,常造成一些心血管系统细胞基本功能的紊乱,参与相关疾病的病理生理过程。本文着重对TRPC通道在高血压、肺动脉高压、心肌肥厚、动脉粥样硬化和心律失常等心血管疾病中的作用新进展及可能的疾病治疗靶点进行综述。

瞬时受体电位C通道与心肌肥厚的研究进展

瞬时受体电位C(transient receptor potential canonical,TRPC)通道作为一类重要的非选择性阳离子通道,在心脏具有广泛的分布和表达。TRPC通道通过改变细胞膜电位和介导钙离子(Ca2+)内流对心脏的生理和病理反应产生重要影响。细胞内Ca2+不仅在心肌细胞的兴奋-收缩偶联中发挥重要作用,而且与各类心脏疾病发生密切相关。最近研究发现,TRPC通道可以通过调节细胞内Ca2+变化,与钙调磷酸酶(calcineurin,Ca N)和活化的T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)等效应因子参与心肌肥厚的发生发展过程,同时可诱导其他心脏疾病(如心肌纤维化、心率失常、心力衰竭)的发生。本文根据相关研究,围绕TRPC通道在心肌肥厚及相关心脏疾病的发生发展中的作用进行总结回顾。

经典瞬时受体电位通道C亚族4在心血管系统疾病中的研究进展

经典瞬时受体电位通道C亚族4(TRPC4)是TRPC家族的一个亚型,包含6个跨膜结构域,11种剪接变体,是起源于细胞膜的一种非选择性阳离子通道蛋白,可在多个器官和细胞中表达,包括神经元的胞体和突触,心血管系统的内皮平滑肌细胞和心脏细胞,子宫肌瘤和骨骼肌细胞,肾和免疫细胞等。TRPC4通道的激活与心血管疾病的发生密切相关。本文主要对TRPC4的结构以及作用机制做简单阐述,总结TRPC4与高血压、扩张性心肌病、心肌梗死、血管新生、动脉粥样硬化等心血管系统疾病的相关性,以及其在心血管疾病中的作用的研究进展。

瞬时受体电位C亚族通道与心肌纤维化的研究进展

心肌纤维化过程作为心脏病变的终末阶段,可导致心脏结构重构和电重构。瞬时受体电位通道是位于细胞膜上的一类非特异性阳离子通道家族,近年来研究发现其与心肌纤维化有着密切关系。本文详细介绍了瞬时受体电位C亚族通道(TRPC)的分布、特点、激活方式、致心肌纤维化机制等内容,为TRPC通道可能成为抗纤维化治疗的新靶点提供依据。

子宫内膜息肉患者TRPC3和TRPC6蛋白表达的临床意义及与孕酮抵抗的相关性研究

目的探究子宫内膜息肉中瞬时受体电位通道C亚族3(TRPC3)、瞬时受体电位通道C亚族6(TRPC6)蛋白表达与孕酮抵抗的相关性。方法选取石家庄市第六医院2021年2月至2023年2月期间收治的65例子宫内膜息肉患者作为子宫内膜息肉组,于同期同一医院选取65例因不孕症进行宫腔镜检查的患者作为正常子宫内膜对照组。采用免疫组化法检测正常子宫内膜组织和子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6、孕酮受体(PR)蛋白表达情况;采用Spearman等级相关分析探究子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6与PR的相关性;采用Logistic回归分析子宫内膜息肉发生的影响因素。结果子宫内膜息肉组和正常子宫内膜对照组慢性子宫内膜炎、肥胖所占比例比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与正常子宫内膜组织相比,子宫内膜息肉组织中TRPC3蛋白(56.92%vs.84.46%,χ^(2)=12.048,P=0.001)、TRPC6蛋白(53.85%vs.83.08%,χ^(2)=12.861,P<0.001)阳性表达率升高,PR蛋白(86.15%vs.46.15%,χ^(2)=23.224,P<0.001)阳性表达率降低。Spearman等级相关性分析显示,子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6与PR表达呈负相关(r=-0.289、-0.323,P<0.05);TRPC3、TRPC6、慢性子宫内膜炎、肥胖是影响子宫内膜息肉发生的相关因素(P<0.05)。结论子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6与PR表达呈负相关,且是发生子宫内膜息肉的影响因素。

去窦弓神经对自发性高血压大鼠主动脉TRPC3及TRPC6表达的影响

目的:研究去窦弓神经(Sinoaortic denervated,SAD)对自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rat,SHR)主动脉瞬时受体电位通道C3(Transient receptor potential canonical 3,TRPC3)及TRPC6亚型表达的影响,探讨TRPC3及TRPC6与血压变异(Blood pressure variability,BPV)的关系。方法:14只10周龄雄性SHR随机分为SAD组和假手术组,各7只。术后8周在清醒、自由活动状态下测定两组大鼠24 h动脉血压及BPV,采用逆转录多聚酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测主动脉组织TRPC3及TRPC6信使核糖核苷酸(Messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)与免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测其蛋白的表达。结果:术后8周,两组大鼠24 h平均收缩压(Systolic blood pressure,SBP)和舒张压(Diastolic blood pressure,DBP)比较无显著性差异;SAD组24 h收缩压变异(Systolic blood pressure variability,SBPV)显著高于假手术组大鼠(P<0.05),SAD组24 h舒张压变异(Diastolic blood pressure variability,DBPV)亦显著高于假手术组大鼠(P<0.01),主动脉组织TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达均显著高于假手术组大鼠(P<0.01),差异均有统计学意义。结论:SAD组大鼠SBPV和DBPV升高,同时TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达升高,提示TRPC3及TRPC6的升高与其BPV升高密切相关,TRPC3及TRPC6可能参与BPV的调控。

PI3K/AKT通路与TRPC6通道在AngⅡ诱导足细胞损伤中的相互作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路与瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球足细胞损伤过程中的作用及其可能机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分别利用AngⅡ、氯沙坦、PI3K/AKT通路抑制剂(LY294002)、TRPC6通道阻滞剂(SKF96365)进行处理,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+氯沙坦组、氯沙坦组、AngⅡ+LY294002组、LY294002组、AngⅡ+SKF96365组、SKF96365组,采用qRT-PCR检测各分组细胞TRPC6 mRNA的变化。采用Western blot检测各分组细胞AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、TRPC6蛋白质表达的变化。采用Hoechst 33258染色法检测各组足细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,AngⅡ组AKT磷酸化水平降低,TRPC6的表达升高,足细胞凋亡增加(P<0.05)。与AngⅡ组相比:AngⅡ+SKF96365组AKT磷酸化水平升高,TRPC6的表达下降,足细胞凋亡减少(P<0.05);AngⅡ+LY294002组AKT磷酸化水平减少,足细胞凋亡增加(P<0.05);AngⅡ+氯沙坦组AKT磷酸化水平升高,TRPC6的表达下降,足细胞凋亡减少(P<0.05)。结论AngⅡ可能通过激活TRPC6通道进而抑制PI3K/AKT通路的激活而导致足细胞损伤。

桔梗素D通过下调成纤维细胞TRPC6表达改善小鼠肺纤维化

目的探究桔梗素D(PD)对肺纤维化的影响及其机制。方法博来霉素(BLM)气道内滴入构建C57BL/6J小鼠肺纤维化模型,再予PD(10 mg/kg)灌胃,28 d后处死小鼠。分组如下:对照组(control)、BLM(10 mg/kg)模型组、BLM(10 mg/kg)+PD(10 mg/kg)组。肺组织石蜡切片HE染色、免疫组化和天狼星红染色评估小鼠肺组织纤维化程度和瞬时受体电位离子通道亚族C成员6(TRPC6)的表达与分布。Westernblot检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。小鼠原代肺成纤维细胞体外培养,分别用PD、TRPC6抑制剂醋酸落叶松酯(LA)预处理后加入转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞,根据加入的TGF-β1和PD浓度不同分组如下:control组、TGF-β1(10 ng/mL)组、PD(2.5μmol/L)+TGF-β1组、PD(5μmol/L)+TGF-β1组和PD(10μmol/L)+TGF-β1组,LA处理分组如下:control组、TGF-β1(10 ng/mL)组和LA(10μmol/L)+TGF-β1组,测定细胞存活率、collagenⅠ、α-SMA和TRPC6的表达水平、活性氧(ROS)生成水平、线粒体膜电位、细胞增殖能力等指标。利用网络药理学方法结合文献分析PD作用于肺纤维化可能通过的机制。结果PD可明显减轻BLM诱导小鼠模型的肺部纤维化程度、减少α-SMA表达(P<0.05)。CCK-8结果显示PD、TGF-β1和LA的最适宜刺激浓度分别是10μmol/L、10 ng/mL和10μmol/L;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色结果显示PD能够有效抑制肺成纤维细胞增殖;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色显示PD能有效减少TGF-β1诱导的细胞ROS生成(P<0.0001);线粒体膜电位检测(Jc-1染色)结果显示PD能有效缓解TGF-β1诱导的细胞线粒体膜电位下降(P<0.001);蛋白电泳结果显示PD能显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA和collagenⅠ的表达(P<0.05)。网络药理学结合文献分析发现PD可能通过TRPC6作用于肺纤维化。免疫组织化学结果显示PD明显减轻了BLM诱导的肺组织TRPC6表达。蛋白电泳结果显示PD可明显抑制TGF-β1诱导的TRPC6表达(P<0.05);使用LA可明显抑制细胞TRPC6、α-SMA、collagenⅠ的表达(P<0.05)。结论PD可降低小鼠肺纤维化,其机制可能与下调TRPC6并减少ROS产生有关。

活性维生素D_3通过抑制TRPC6表达发挥糖尿病肾病的保护作用

目的:探讨活性维生素D3对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)大鼠的肾保护作用是否与抑制瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)有关。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组及DN加活性维生素D3干预组(DN+VD组)3组各10只。造模成功后6、12、18周检测大鼠体重、24 h尿蛋白量;造模成功后18周末处死大鼠,检测血样及肾组织指标变化。结果:DN+VD组与DN组相比蛋白尿显著减少,肾脏病理损伤改善。DN组与NC组比较,Podocin、Nephrin蛋白表达量均明显降低(均P<0.05),Desmin和TRPC6蛋白表达量均显著升高(均P<0.05),活性维生素D3干预后上述改变明显改善,差异有统计学意义。相关性分析显示:TRPC6与Podocin(r=-0.808,P<0.05)、Nephrin(r=-0.791,P<0.05)呈负相关,而与24 h尿蛋白(r=0.886,P<0.05)、Desmin(r=0.929,P<0.05)呈正相关。结论:活性维生素D3显著抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤,其作用机制与调节足细胞TRPC6的表达有关。

鞘内注射瞬时受体电位通道A1 shRNA对部分坐骨神经结扎小鼠神经病理性疼痛的作用及其机制

目的:探讨瞬时受体电位通道A1(TRPA1)在部分坐骨神经结扎(pSNL)小鼠神经病理性疼痛模型中的作用,阐明其作用机制。方法:30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6)、假手术组(n=6)和pSNL组(n=18)。pSNL组小鼠鞘内置管成功后随机分为pSNL组、pSNL+NC shRNA组(于术后第7天鞘内注射NC shRNA)和pSNL+TRPA1 shRNA组(于术后第7天鞘内注射TRPA1 shRNA)。检测注射前和注射后l、7、12和24 h各组小鼠后肢机械缩足反射阈值(MWT)和热阈值(TWL)。最后一次检测后2 h处死小鼠,采用Western blotting法检测各组小鼠术侧背根神经节(DRG)中TRPA1蛋白激酶Cε型(Prkce)和星形胶质细胞激活标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,ELISA法检测各组小鼠细胞上清和血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平。分离培养pSNL模型小鼠的原代星形胶质细胞,过表达或敲低TRPA1,检测星形胶质细胞中TRPA1、Prkce和GFAP蛋白表达水平以及细胞上清中TNF-α和MCP-1水平。采用STRING数据库和免疫共沉淀(Co-IP)法预测并验证TRPA1和Prkce相互作用。检测过表达或敲低TRPA1后空质粒组、Ad-TRPA1、sh-NC组和sh-TRPA1组星形胶质细胞中Prkce和GFAP蛋白表达水平以及细胞上清中TNF-α和MCP-1水平。将TRPA1 shRNA单独转染或与AdPrkce共转染星形胶质细胞,分为sh-TRPA1+empty vector组(转染空载体)、sh-TRPA1+Ad-Prkce组(转染TRPA1过表达载体)和sh-TRPA1+Ad-Prkce组(转染Prkce过表达载体)。采用Western blotting法检测各组细胞中TRPA1、Prkce和GFAP蛋白表达水平,ELISA法检测细胞上清中TNF-α和MCP-1水平。结果:与对照组比较,pSNL组小鼠MWT和TWL降低(P<0.01);与pSNL+NC中shRNA组比较,pSNL+TRPA1 shRNA组小鼠MWT和TWL升高(P<0.01)。与假手术组比较,术后第7天pSNL组小鼠DRG中TRPA1和GFAP蛋白表达水平升高(P<0.05),血清中TNF-α和MCP-1水平升高(P<0.05)。与pSNL+NC shRNA组比较,pSNL+TRPA1 shRNA组小鼠DRG中TRPA1和GFAP蛋白表达水平及血清中TNF-α和MCP-1水平降低(P<0.05)。与空质粒组比较,Ad-TRPA1组细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞上清中TNF-α和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-TRPA1组细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞上清中TNF-α和MCP-1水平明显降低(P<0.05)。与sh-TRPA1+empty vector组比较,sh-TRPA1+Ad-Prkce组细胞中TRPA1、Prkce和GFAP蛋白表达水平升高(P<0.01),细胞上清中TNF-α和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。结论:TRPA1通过与Prkce相互作用参与pSNL模型小鼠星形胶质细胞的激活以及神经病理性疼痛发生发展过程。

TRPC3对OIR小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞生物学行为的调控作用

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3(TRPC3)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞(HREC)生物学行为的调控作用。方法选取健康SPF级7日龄C57BL/6小鼠32只,采用随机数字表法分为对照组和OIR组,每组16只,其中对照组不做特殊处理,OIR组小鼠诱导OIR模型。出生后第17天(PN17)采用视网膜铺片免疫荧光染色验证模型构建是否成功。将体外培养HREC分为正常对照组、转染试剂组和si-TRPC3组,其中正常对照组不做特殊处理,转染试剂组和si-TRPC3组分别采用转染试剂和转染试剂+si-TRPC3转染。采用实时荧光定量PCR法检测TRPC3 mRNA相对表达量;采用Western blot法检测TRPC3、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)和超氧化物歧化酶(SOD)蛋白相对表达量。另将HREC分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)组、si-TRPC3组和Pyr3(TRPC3通道抑制剂)组,分别用完全培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基(si-TRPC3转染72 h)和含有20 ng/ml VEGF重组蛋白+1μmol/L Pyr3的培养基培养48 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HREC增生能力;分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞横向和纵向迁移能力。结果PN17时OIR组小鼠视网膜出现病理性新生血管团簇强荧光染色。OIR组小鼠视网膜TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量分别为2.057±0.244和1.517±0.290,明显高于对照组的0.983±0.033和0.874±0.052,差异均有统计学意义(t=6.165、3.094,均P<0.05)。si-TRPC3组TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和转染试剂组,Nrf2和SOD蛋白相对表达量明显高于正常对照组和转染试剂组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示,VEGF组细胞吸光度(A)值明显高于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组细胞A值明显低于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,VEGF组细胞横向迁移率高于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组细胞横向迁移率低于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Transwell实验结果显示,VEGF组染色细胞数明显多于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组染色细胞数明显少于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论OIR模型小鼠视网膜中TRPC3表达水平升高,下调TRPC3可抑制HREC增生和迁移能力,其机制与Nrf2氧化应激通路激活有关。