去盆腔神经支配对大鼠远端结肠黏膜瞬时受体电位通道V1表达的影响

目的：探讨去盆腔神经支配（PND）对大鼠远端结肠黏膜瞬时受体电位通道V1（TRPV1）的影响。 方法：采用实验研究方法。将108只成年雄性大鼠按数字表法随机分成对照组、假手术组及PND组3组：（1）对照组36只，大鼠不做特殊处理，常规饲养；（2）假手术组36只，大鼠开腹后旷置15 min，不施行手术，关闭腹腔；（3）PND组36只，大鼠开腹后剥离出盆腔神经，显微剪剪断，缝合切口，关闭腹腔。采用免疫组织化学染色、Western blot检测各组大鼠术后第1、3、7天远端结肠黏膜中TRPV1蛋白表达，反转录实时定量PCR（RTqPCR）检测各组大鼠术后第1、3、7天远端结肠黏膜中TRPV1 mRNA水平。正态分布的计量资料以±s表示。重复测量数据采用重复测量方差分析。同时相点组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用独立样本t检验。 结果：（1）免疫组织化学染色检测TRPV1表达情况：对照组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3、7天分别为0.180±0.016、0.179±0.015、0.183±0.026，3者比较，差异无统计学意义（F=0.088，P〉0.05）。假手术组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3、 7天分别为0.132±0.017、0.160±0.023、0.173±0.020，3者比较，差异有统计学意义（F=8.699，P〈0.05）。PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3、7天分别为0.057±0.009、0.122±0.016、0.180±0.016，3者比较，差异有统计学意义（F=113.315，P〈0.05）。对照组、假手术组及PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第1、3天比较，差异均有统计学意义（F=108.960，15.218，P〈0.05）。术后第 1天对照组分别与假手术组、PND组比较，差异均有统计学意义（t=5.025，15.979，P〈0.05）；假手术组与PND组比较，差异有统计学意义（t=9.590，P〈0.05）。术后第3天对照组与假手术组比较，差异无统计学意义（t=1.670，P〉0.05）；对照组与PND组比较，差异有统计学意义（t=6.543，P〈0.05）；假手术组与PND组比较，差异有统计学意义（t=3.361，P〈0.05）。3组大鼠远端结肠黏膜TRPV1平均光密度值术后第7天比较，差异无统计学意义（F=0.518，P〉0.05）。（2）Western blot检测TRPV1表达情况：对照组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3、7天分别为1.02±0.13、1.00±0.15、1.00±0.10，3者比较，差异无统计学意义（F=0.084，P〉0.05）。假手术组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3、7天分别为0.51±0.13、0.93±0.14、1.01±0.16，3者比较，差异有统计学意义（F=20.930，P〈0.05）。PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3、7天分别为0.30±0.10、0.70±0.10、1.07±0.16，3者比较，差异有统计学意义（F=61.441，P〈0.05）。对照组、假手术组及PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第1、3天比较，差异均有统计学意义（F=58.014，8.841，P〈0.05）。术后第1天对照组分别与假手术组、PND组比较，差异均有统计学意义（t=6.677，11.145，P〈0.05）；假手术组与PND组比较，差异有统计学意义（t=3.287，P〈0.05）。术后第3天对照组与假手术组比较，差异无统计学意义（t=0.798， P〉0.05）；对照组与PND组比较，差异有统计学意义（t=4.127，P〈0.05）；假手术组与PND组比较，差异有统计学意义（t=3.398，P〈0.05）。3组大鼠远端结肠黏膜TRPV1蛋白相对表达量术后第7天比较，差异无统计学意义（F=0.428，P〉0.05）。（3）RTqPCR检测TRPV1表达情况：对照组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3、7天分别为1.00±0.15、1.10±0.21、1.09±0.18，3者比较，差异无统计学意义（F=0.489，P〉0.05）。假手术组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3、7天分别为0.58 ±0.12、0.99±0.19、1.13±0.23，3者比较，差异有统计学意义（F=13.964，P〈0.05）。PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3、7天分别为0.31±0.10、0.67±0.12、1.09±0.19，3者比较，差异有统计学意义（F=44.642，P〈0.05）。对照组、假手术组及PND组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第1、3天比较，差异均有统计学意义（F=44.653，9.700，P〈0.05）。术后第1天对照组分别与假手术组、PND组比较，差异 均有统计学意义（t=5.233，9.264，P〈0.05）；假手术组与PND组比较，差异有统计学意义（t=4.127，P〈0.05）。术后第3天对照组与假手术组比较，差异无统计学意义（t=0.995，P〉0.05）；对照组与PND组比较，差异有统计学意义（t=4.411，P〈0.05）；假手术组与PND组比较，差异有统计学意义（t=3.505，P〈0.05）。3组大鼠远端结肠黏膜TRPV1 mRNA水平术后第7天比较，差异无统计学意义（F=0.099，P〉0.05）。 结论：PND后，大鼠远端结肠黏膜TRPV1表达显著下调，但随时间推移逐步回升，这与盆腔神经损伤后结肠传输功能先减慢后逐步恢复的趋势一致。

瞬时受体电位通道蛋白A1和V1在正常小鼠耳蜗中的定位表达

目的研究瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和V1(TRPV1)在正常小鼠耳蜗中的定位与表达。方法选择12只健康成年BALB/c小鼠,应用免疫荧光染色方法和蛋白质印迹技术检测TRPA1和TRPV1在耳蜗中的定位与表达,同时结合电生理指标听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试小鼠的听力。结果 TRPA1和TRPV1在小鼠耳蜗螺旋器的内、外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞等都有表达,且主要定位于细胞膜;蛋白质印迹检测结果亦显示小鼠耳蜗中有TRPA1和TRPV1的表达。结论 TRPA1和TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗的多种细胞中均有表达,这为深入研究二者在内耳听觉生理和病理生理中的作用奠定基础。

瞬时受体电位A1/V1通道联动在慢性咳嗽中的作用机制探讨

咳嗽临床常见,特别是胸部影像检查无明显异常的慢性咳嗽,在我国专科门诊中,慢性咳嗽患者约占三分之一以上^([1]),全球患病率约为9.6%^([2])。其病因繁多,诊疗程序较复杂,临床疗效欠佳,反复发作的咳嗽给患者的工作、生活甚至心理上带来严重困扰,引起了国内外的广泛关注。

TRPV4在心血管疾病中作用的研究进展

瞬时受体电位阳离子通道V亚家族成员4(transient receptor potential cation channel subfamily V member4,TRPV4)是瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential cation channel, TRP)家族成员,是一种非选择性阳离子通道,对Ca^(2+)离子具有适中通透性,对Na^(+)和Mg^(2+)少量通透(PCa/PNa约为6~10,PCa/PMg约为2~3)。TRPV4在心血管系统表达广泛,主要表达于血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞和成纤维细胞等,可调节血管张力和血管通透性,参与机械信号传导等。

N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性的影响

目的探究N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXC趋化因子配体(CXCL)8-CXC趋化因子受体(CXCR)1/2及瞬时受体电位通道蛋白(TRP)V1神经元敏感性的影响。方法选取80只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组、模型(MO)组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、急支糖浆(ES)组,每组20只,对MO组、NAC组、ES组进行支气管哮喘建模,建模成功后,NAC组、ES组每天分别于腹腔内注射2 ml N-乙酰半胱氨酸注射液、急支糖浆灌胃10 g/kg剂量,NO组、MO组同期灌胃同体积生理盐水,通过苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹检测血清及肺组织中CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达,并分析N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性。结果与NO组相比,MO组咳嗽次数明显增加(P<0.05),而NAC组、ES组与MO组相比,其咳嗽次数明显降低(P<0.05),且NAC组比ES组降低明显(P<0.05);与NO组相比,MO组细支气管管腔、肺泡腔内可见渗出液、脱落的上皮细胞等,远端肺泡可见局部肺不张及周围肺大泡,且肺间质明显增厚,炎性细胞浸润明显,而与MO组比较,ES组、NAC组症状明显减少,部分肺间质的组织结构趋向正常,部分肺泡轻度扩张,且NAC组比ES组明显降低(P<0.05);与NO组对比,MO组CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.05),NAC组、ES组与MO组相比均显著降低(P<0.05),且NAC组比ES组明显降低(P<0.05)。结论N-乙酰半胱氨酸可以显著降低咳嗽次数,减少支气管哮喘症状,可使CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性显著降低。

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

目的:探讨用辣椒素(CAP)激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法:SPF级ICR小鼠108只随机分为6组:正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱(CAPZ)对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖(LPS)经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30 min经皮下注射。分别在LPS注射后3 h、8 h和16 h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质(SP)和降血钙素基因相关肽(CGRP),Western blotting法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果:内毒素血症组小鼠3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高(P<0.05);CAP干预组各时点肺组织TNF-α和IL-6水平较内毒素血症组显著降低(P<0.05),而IL-10均明显升高(P<0.05);CAPZ干预组3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α和IL-6较内毒素血症组显著升高(P<0.05),而IL-10水平均显著降低(P<0.05)。内毒素血症组和CAP对照组各时间点SP和CGRP较正常对照组均显著升高(P<0.05),CAP对照组SP和CGRP水平明显低于内毒素血症组(P<0.05);与同时点内毒素血症组相比,CAP干预组SP和CGRP显著升高(P<0.05),而CAPZ干预组显著降低(P<0.05)。内毒素血症组小鼠肺组织TLR4和核内NF-κB表达较正常对照组显著升高(P<0.05);与内毒素血症组相比,CAP干预组和CAPZ干预组小鼠肺组织TLR4表达均无显著差异(P>0.05),而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低(P<0.05),CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高(P<0.05)。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8 h和16 h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论:TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。

自动痔疮套扎术对直肠内脱垂合并便秘患者肠黏膜屏障功能及黏膜TRPV1、5-HT表达的影响

目的研究自动痔疮套扎术(RPH)对直肠内脱垂(IRP)合并便秘患者肠黏膜屏障功能及黏膜瞬时受体电位通道V1(TRPV1)、5-羟色胺(5-HT)表达的影响。方法前瞻性选取2018年2月至2020年3月西南大学附属医院收治的IRP合并便秘患者98例为病例组,均接受RPH治疗。分析临床疗效、并发症发生率及半年复发情况;比较术前和术后外周血中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸及细菌内毒素水平,胃肠道生活质量评分(GIQLI)及Wexner便秘评分(WC)评分,以及直肠黏膜TRPV1、5-HT阳性表达水平。结果临床治疗总有效率为80.61%(79/98);术前及术后血清DAO、D-乳酸及细菌内毒素水平比较无显著差异(P>0.05);与术前比较,术后肠黏膜TRPV1、5-HT阳性表达水平显著下降(P<0.05);与术前比较,术后GIQLI评分、WC评分显著上升(P<0.05);总并发症发生率为5.10%(5/98),随访半年,无复发病例。结论RPH治疗IRP合并便秘疗效确切,对肠黏膜屏障功能损伤较小,能促进黏膜TRPV1、5-HT正常表达,改善患者胃肠道生质量和便秘情况,且术后并发症少,病情不易复发。

急性髓系白血病中Aurora家族及TRPV家族基因表达量与病情进展的相关性

目的:研究急性髓系白血病中Aurora家族及TRPV家族基因表达量与病情进展的相关性。方法:选择2014年1月~2017年9月期间在喀什地区第一人民医院诊断为急性髓系白血病的患者作为研究的白血病组,同期在喀什地区第一人民医院接受骨髓穿刺术且骨髓象无异常的患者作为对照组。取骨髓组织并测定Aurora家族及TRPV家族基因、凋亡基因、转移基因的mRNA表达量。结果:白血病组骨髓组织中Aurora-A、Aurora-B、Aurora-C、TRPV-5、TRPV-6、GFI-1、Bcl-2、CXCR3、C3AR1、β-arrestin1、MMP2、MMP9的mRNA表达量显著高于对照组,CD40L、Bax、Caspase-9、Caspase-3的mRNA表达量显著低于对照组。白血病组骨髓组织中Aurora-A、Aurora-B、Aurora-C、TRPV-5、TRPV-6的mRNA表达量与GFI-1、Bcl-2、CXCR3、C3AR1、β-arrestin1、MMP2、MMP9的mRNA表达量呈正相关,与CD40L、Bax、Caspase-9、Caspase-3的mRNA表达量呈负相关。结论:急性髓系白血病中Aurora家族及TRPV家族基因的高表达能够促进病程进展过程中肿瘤细胞的增殖和转移。

TRPV1和TRPA1在大鼠睾丸痛模型背根神经节中的表达

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)和瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)在睾丸痛大鼠模型的表达及作用机制。方法:通过睾丸内注射2%醋酸的方法建立睾丸痛大鼠模型;造模后通过行为学实验检测大鼠自发痛计数与阴囊部热痛阈;RT-q PCR、Western印迹、免疫荧光检测T_(13)~L_1节段背根神经节(DRG)TRPV1和TRPA1的表达。结果:建模后大鼠自发痛计数较对照组明显增多[(22.63±3.42)次vs(0.13±0.35)次,P<0.01],热痛阈值下降,其下降峰值在注射后第4小时(4.85±1.00 s),与对照组(12.75±1.50 s)相比差异有统计学意义(P<0.01)。TRPV1和TRPA1均表达在DRG内神经元的胞膜上,与对照组相比,模型组大鼠DRG内TRPV1的mRNA水平上升至对照组的(1.77±0.34)倍,TRPA1的mRNA水平上升至对照组的(1.75±0.30)倍,且两种蛋白均表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TRPV1和TRPA1可能通过在DRG内表达上调,参与了睾丸痛大鼠模型的痛觉产生与外周痛敏的形成。

子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节神经元中TRPV1、TRPA1表达及其意义

目的:探讨子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节(DRG)神经元中瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)、瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)表达及其意义。方法:选取雌性、成熟未交配Sprague-Dawley健康大鼠40只,分为模型组和假手术组,模型组采用自体移植方法建立子宫内膜异位症大鼠模型,假手术组仅做开腹手术。分别检测DRG中TRPV1、TRPA1表达情况,并使用TRPV1、TRPA1拮抗剂处理两组大鼠,观察其热板法痛阈、甩尾潜伏期变化。结果:模型组大鼠TRPV1、TRPA1表达阳性率明显高于假手术组(P<0.05)。术前,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P﹥0.05)。术后,模型组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期较术前明显减小(P<0.05),模型组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期明显小于假手术组(P<0.05)。使用TRPV1、TRPA1拮抗剂前,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P>0.05)。使用TRPV1、TRPA1拮抗剂后,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P>0.05),模型组大鼠使用TRPV1、TRPA1拮抗剂前后,热板法痛阈、甩尾潜伏期无明显变化(P>0.05)。结论:TRPV1、TRPA1在子宫内膜异位症模型大鼠中高表达,使用TRPV1、TRPA1拮抗剂降低子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1、TRPA1表达,降低大鼠对痛觉的敏感性。

TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗中的定位表达

目的研究瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)在正常小鼠耳蜗中的定位观察。方法选择10只健康成年BALB/c小鼠,应用免疫荧光染色方法观察TRPV1在耳蜗中的定位与表达,同时结合电生理指标听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试小鼠的听力。结果 TRPV1在小鼠耳蜗螺旋器的内、外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞等都有表达,且主要定位于细胞膜;蛋白质印迹检测结果亦显示小鼠耳蜗中有TRPV1的表达。结论 TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗的多种细胞中均有表达,这为深入TRPV1在内耳听觉生理和病理生理中的作用奠定基础。

TRPV1在哮喘发病机制中作用的研究进展

哮喘(asthma)是临床常见的呼吸系统疾病之一。目前全世界约有3亿哮喘患者[1],且有证据表明,该病在世界范围内的患病率和死亡率均在逐年上升,预计到2025年,哮喘患者会增加到4亿,同时每年会有约25万人死于哮喘[2]。我国哮喘的患病率约为4.2%,目前全国有超过4570万的哮喘患者,这表明哮喘已成为严重威胁公众健康的疾患[3]。

TRPV4在心肌细胞缺氧损伤中的作用及机制研究

目的:探究瞬时受体电位阳离子通道V亚家族成员4(transient receptor potential cation channel subfamily V member 4,TRPV4)在H9C2细胞中缺氧环境下的作用机制。方法:采用H9C2细胞建立缺氧损伤模型,检测缺氧不同时间细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。将细胞分为常氧组(0 h)、HC-067047(TRPV4抑制剂)预处理+常氧(0 h)组、缺氧(24 h)组和HC-067047预处理+缺氧(24 h)组,使用Fluo-4 AM检测细胞内Ca^(2+)含量,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测TRPV4蛋白水平,RT-qPCR检测TRPV4的mRNA水平,DCFH-DA检测ROS含量,酶标仪检测CAT和SOD活性,CCK-8法检测细胞活力。结果:与0 h组相比,随着缺氧时间的延长,LDH释放率提高(P<0.05),细胞内ROS和MDA含量上升(P<0.05),CAT和SOD活性增强(P<0.05),氧化损伤逐渐加重并在24 h达到顶峰。此外,缺氧后细胞出现钙超载现象,线粒体膜电位下降,TRPV4被激活。使用TRPV4抑制剂HC-067047预处理后,H9C2的氧化损伤明显被抑制,细胞活力上升(P<0.05),并且钙超载现象和线粒体膜电位下降均有所逆转。结论:在心肌细胞缺氧后,TRPV4被激活,Ca^(2+)内流,线粒体膜电位受损,ROS增多,氧化损伤加重,抗氧化系统被激活,CAT和SOD活性上升,进而调控氧化与抗氧化平衡。

金刚丸对骨质疏松大鼠骨代谢和血清骨钙素的影响

目的探讨金刚丸对骨质疏松大鼠骨代谢和血清骨钙素的影响。方法将60只SPF级大鼠随机分为正常对照组、模型组及高、中、低剂量组和己烯雌酚组,每组10只。高、中、低剂量金刚丸组每天分别以3.24、1.62、0.81 g/kg的剂量灌胃1次;己烯雌酚组大鼠每天给予1.0 mg/kg灌胃1次;正常对照组及模型组给予等体积的生理盐水。给药6周后取股骨,测量股骨最大载荷和断裂载荷;HE染色法观察骨小梁结构;ELISA法测定股骨组织中血清骨源性碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、雌二醇(estradiol E2)和血清骨钙素(bone gla-containing protein, BGP)、骨保护蛋白(osteoprotegerin, OPG)、核因子-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB, RANK)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)的水平;采用光子骨密度(bone mineral density, BMD)测试仪测定BMD;采用Western blot法检测瞬时受体电位阳离子通道亚族V成员6 (transient receptor potential cation channel subfamily V member 6, TRPV6)蛋白相对表达量。结果模型组骨小梁形态模糊、广泛断裂,骨髓腔增宽,骨细胞排列散乱;高、中、低剂量组可见骨小梁形态较模型组改善、结构较为紧密,骨髓腔减小,骨外膜排列改善。与正常对照组相比,模型组体质量、BALP、BGP、RANK、RANKL水平明显升高,E2、BMD、最大负荷、断裂负荷、TRPV6、OPG水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,高、中、低剂量组体质量、BALP、BGP、RANK、RANKL水平降低,E2、BMD、最大负荷、断裂负荷、OPG、TRPV6水平显著升高(P<0.05)。结论金刚丸通过提高绝经后骨质疏松大鼠雌激素水平,调节骨代谢,提高生物力学性能和BMD,起到抗骨质疏松的疗效和骨保护作用,其机制可能是通过影响TRPV6表达上调OPG表达,下调RANKL表达。

大麻二酚对载脂蛋白E基因敲除小鼠空间记忆障碍的调节及作用机制研究

目的研究大麻二酚(CBD)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠空间记忆障碍的调节作用及其作用机制。方法将18只ApoE^(-/-)小鼠采用随机数字表法分为ApoE^(-/-)组和ApoE^(-/-)+CBD组,每组9只。ApoE^(-/-)+CBD组小鼠每天予CBD 10 mg/kg腹腔注射,ApoE^(-/-)组小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续注射21 d。最后一次注射后,通过旷场实验和新物体识别实验研究CBD对ApoE^(-/-)小鼠学习记忆能力和焦虑情绪的影响;采用免疫印迹法检测小鼠大脑皮层和海马组织中相关蛋白的表达;培养原代神经元,分为野生型(WT)组、WT+CBD组、ApoE^(-/-)组、ApoE^(-/-)+CBD组4组,观察各组神经元的分化情况。结果ApoE^(-/-)+CBD组小鼠的新物体识别指数明显高于ApoE^(-/-)组,差异有统计学意义(P<0.05)。与WT组比较,ApoE^(-/-)组神经元轴突长度和胞体大小明显缩小,差异均有统计学意义(P<0.01);与ApoE^(-/-)组比较,ApoE^(-/-)+CBD组神经元轴突长度和胞体大小均明显增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。与ApoE^(-/-)组比较,ApoE^(-/-)+CBD组小鼠大脑皮层中瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员2(TRPV2)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(AKT)及磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ型亚基α和δ(CaMKIIα/δ)表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CBD可抑制ApoE基因敲除小鼠的空间记忆障碍,减弱ApoE基因敲除小鼠大脑神经元分化障碍,这些作用主要是通过TRPV2/AKT/CaMKIIα/δ通路实现的。

厚朴麻黄汤对哮喘小鼠气道炎症及TRPA1,TRPV1 mRNA与蛋白表达的影响

目的:探讨厚朴麻黄汤对哮喘小鼠气道炎症的效应及对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1),TRPV1 mRNA与蛋白表达的影响。方法:将60只雌性Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、厚朴麻黄汤低、中、高(7,14,28 g·kg^-1)剂量组和地塞米松组(0.0024 g·kg^-1),每组10只。复制卵蛋白(OVA)致敏及激发小鼠哮喘模型。检测各组小鼠气道反应性,以不同浓度氯化乙酰胆碱(ACh)雾化吸入激发后增强呼气间歇(Penh)值表示,观察各组小鼠肺组织病理学改变,外周血嗜酸性粒细胞数(EOS),支气管肺泡灌洗液(BALF)中EOS百分比的变化。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素(IL)-4,IL-13,前列腺素D2(PGD2),P物质(SP),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织TRPA1,TRPV1 mRNA与蛋白表达。结果:与正常组比较,给予质量浓度为12.5,25,50 g·L-1ACh雾化吸入后,模型组小鼠Penh明显上升(P<0.05,P<0.01);肺病理显示支气管及管壁周围有大量炎症细胞浸润,支气管黏膜水肿、增厚,黏液分泌增多;外周血中EOS数量及BALF中EOS百分比明显升高(P<0.01)。BALF中IL-4,IL-13,PGD2和SP水平以及肺组织中TRPA1,TRPV1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组Penh明显降低(P<0.05,P<0.01),肺组织病理损伤改善,外周血中EOS数量及BALF中EOS百分比显著降低(P<0.01);BALF中IL-4,IL-13,PGD2和SP水平以及肺组织中TRPA1,TRPV1 mRNA与蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:厚朴麻黄汤可以改善哮喘小鼠气道炎症、降低气道反应性,其机制除降低Th2相关的细胞因子水平外,可能也与调控TRPA1,TRPV1mRNA与蛋白表达及降低相关神经因子水平有关。

TRPV1对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的影响及机制

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的保护作用及可能机制。方法将H9c2心肌细胞随机分为对照组、模型组(缺氧/复氧组)、辣椒素(TRPV1激活剂)组(缺氧/复氧+辣椒素组)、辣椒素+LY组[缺氧/复氧+辣椒素+LY294002(PI3k抑制剂)组]。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率,采用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率,采用Western blot法和逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)法测定各组细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化-蛋白激酶B(pAkt)、蛋白激酶B(Akt)水平。结果与对照组比较,模型组、辣椒素组、辣椒素+LY组心肌细胞存活率和Bcl-2水平降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3、Bax、p-Akt水平升高(均P<0.05);与模型组比较,辣椒素组心肌细胞存活率和Bcl-2、p-Akt水平升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3、Bax水平降低(均P<0.05);模型组与辣椒素+LY组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 TRPV1可抑制缺氧复氧后H9c2心肌细胞凋亡,其机制可能与TRPV1激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)/Akt信号通路有关。

祛风宣肺方对模型豚鼠肺组织病理及PLC-β/PKC与TRPA1/V1蛋白表达的影响

目的:观察祛风宣肺方对模型豚鼠肺组织病理及PLC-β/PKC、TRPA1/V1蛋白表达的影响。方法:将48只SPF级雄性健康Hartley豚鼠随机分为正常组、模型组、TRPV1抑制剂组、TRPA1抑制剂组、PLC抑制剂组、祛风宣肺方组,每组8只,应用经典咳嗽高敏感豚鼠模型,相应药物干预7d后,肺功能仪检测麻醉后豚鼠气道阻力,HE染色法观察肺组织病理变化,ELISA法检测BALF中SP水平,免疫组化法测定肺组织中PLC-β、PKC、TRPA1、TRPV1、NK-1R蛋白表达水平。结果:与模型组比较,各组气道阻力均显著降低(P<0.01,P<0.05),肺组织TRPA1、TRPV1、NK-1R蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),其中PLC抑制剂组与祛风宣肺方组肺组织PLC-β蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05);模型组肺组织病理及BALF炎症反应明显,TRPV1抑制剂组、TRPA1抑制剂组、PLC抑制剂组及祛风宣肺方组炎症水平降低(P<0.01)。结论:祛风宣肺方可降低咳嗽敏感性增高模型豚鼠的气道反应性,减轻肺组织炎症,可能通过下调肺组织中PLC-β、TRPV1、TRPA1、NK-1R的蛋白表达水平发挥作用。

左归丸对去势大鼠钙转运通路相关蛋白的影响

目的:探讨左归丸对去势大鼠骨密度和骨组织中钙转运通路相关蛋白的影响。方法:选取48只雌性SD大鼠,随机分为正常组,假手术组,模型组,尼尔雌醇组(0.167 mg·kg^-1),左归丸低、高剂量组(9.6,38.4 g·kg^-1)。除假手术组和正常组,其余组切除大鼠卵巢,造模成功后3个月进行各组干预。3个月后处死大鼠,检测大鼠骨密度(BMD)和骨代谢标志物;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测钙转运通路(骨组织)瞬时受体电位通道V5(TRPV5),钙结合蛋白-D28K(CaBP-D28K),钠钙交换器1(NCX1)和细胞膜钙汞(PMCA1b)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血钙降低(P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组和尼尔雌醇组大鼠血钙显著升高(P<0.01);与正常组比较,模型组BMD显著降低(P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组与尼尔雌醇组大鼠BMD均有改善(P<0.05);与假手术组和正常组比较,模型组各蛋白表达均有不同程度上调(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组中TRPV5蛋白表达有显著下调(P<0.01),各干预组中的CaBP-D28K与NCX1蛋白表达均有不同程度的下调(P<0.05,P<0.01),PMCA1b蛋白表达在左归丸低剂量组和尼尔雌醇组内表达均有不同程度下调(P<0.05,P<0.01)。结论:左归丸可不同程度的降低大鼠破骨细胞中TRPV5,CAPB-D28K,PMCA1b,NCX1等介导破骨细胞吸收钙离子的重要通道蛋白的表达,左归丸的抗骨质疏松机理有可能是通过抑制TRPV5介导的破骨细胞的骨吸收而起作用。

祛风宣肺方对咳嗽高敏感性豚鼠神经源性炎症的作用及机制研究

目的探讨祛风宣肺方对咳嗽高敏感性豚鼠神经源性炎症的作用及机制。方法 48只豚鼠随机分为正常组、模型组、辣椒平组及祛风宣肺方组,每组12只。采用环磷酰胺、卵蛋白和氢氧化铝制备咳嗽高敏感豚鼠模型。造模成功后正常组及模型组予生理盐水灌胃;辣椒平组予瞬时受体电位阳离子通道V1(TRPV1)抑制剂辣椒平腹腔注射(1μmol/kg),每日1次;祛风宣肺方组予祛风宣肺方灌胃(5 g/kg),每日1次。给药7 d后辣椒素雾化测定各组豚鼠的咳嗽次数,肺功能仪检测不同浓度氯化乙酰胆碱激发下豚鼠的气道阻力,HE染色法观察各组豚鼠肺组织的病理变化,RT-PCR法测定各组豚鼠肺组织中TRPV1、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的基因表达。结果与正常组比较,模型组咳嗽次数,气道阻力,肺组织TRPV1、SP、CGRP基因表达增加(P<0.05);与模型组比较,祛风宣肺方组、辣椒平组豚鼠咳嗽次数,气道阻力,肺组织TRPV1、SP、CGRP基因表达降低(P<0.05);祛风宣肺方组肺组织TRPV1、SP、CGRP基因表达低于辣椒平组,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组肺组织结构破坏及炎症反应明显,辣椒平组及祛风宣肺方组肺组织结构较模型组改善,炎症水平降低。结论祛风宣肺方可降低咳嗽高敏感豚鼠的气道敏感性,其作用机制可能与抑制TRPV1进而减轻气道神经源性炎症有关。