足细胞损伤的诱导途径:血管紧张素Ⅱ-足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6信号通路

背景:瞬时受体电位阳离子通道蛋白6是足细胞上一种新发现的阳离子通道蛋白,是组成裂隙隔膜重要蛋白之一,其表达变化与糖尿病肾病蛋白尿密切相关。目的:观察高糖刺激对足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达的影响,探讨糖尿病肾病发生发展的可能机制。方法:以永生化小鼠足细胞(MPC5)作为实验对象,将其设为:正常糖组(D-葡萄糖5.6 mmol/L);渗透压对照组(D-葡萄糖5.6 mmol/L+甘露醇25 mmol/L);高糖组(D-葡萄糖30 mmol/L);缬沙坦组(D-葡萄糖30 mmol/L+10-5mol/L缬沙坦);高糖+U73122组(D-葡萄糖30 mmol/L+10μmol/L磷脂酶抑制剂U73122)。各组细胞干预时间为48 h。采用荧光定量PCR和western-blot方法检测各组足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、nephrin、血管紧张素ⅡmR NA和蛋白的表达。结果与结论:与正常糖组相比,高糖组足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ蛋白及mR NA水平明显升高(P<0.01),nephrin m RNA及蛋白水平明显降低(P<0.01);与高糖组相比,缬沙坦组瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ的表达显著降低(P<0.05,P<0.01);高糖+U73122组瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ表达较高糖组明显下降(P<0.05,P<0.01);渗透压对照组与正常糖组之间各因子差异无显著性意义(P>0.05)。结果说明高糖可能通过血管紧张素Ⅱ-瞬时受体电位阳离子通道蛋白6反馈信号通路损伤足细胞,同时也为血管紧张素受体拮抗剂通过此通路保护足细胞而治疗糖尿病肾病的提供了一新的理论基础。

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在缺血-再灌注损伤中的作用研究进展

缺血-再灌注损伤(IRI)是指缺血组织或器官血液供应恢复导致的再灌注损伤,在器官移植等外科手术过程中较为常见,可引起一系列严重的临床问题,如移植物功能延迟恢复、急性肾损伤、心肌梗死、缺血性脑卒中、循环骤停等,发生率和病死率较高,目前尚无有效的解决办法。瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)是Ca^(2+)通道家族中的一员,在多种细胞中高表达,可通过调节细胞内Ca浓度参与多项生理功能的调控,已成为研发治疗多种疾病药物的重要靶点。本文就TRPC6的概述及功能、TRPC6与IRI及TRPC6靶向药物在IRI中治疗前景的研究进展作一综述,以期为器官移植过程中IRI的防治提供新的思路。

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在肾脏的表达

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在正常人、小鼠和大鼠肾组织及小鼠足细胞系(MPC5)的表达和分布,为研究TRPC6在肾脏的功能及其与足细胞分子间的关系奠定基础。方法1.应用免疫组织化学方法观察TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾组织及MPC5分布。2.通过反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRPC6在小鼠肾组织和MPC5表达。3.应用免疫蛋白印迹检测TRPC6在正常人、小鼠和MPC5表达。结果1.TRPC6在正常人肾小球呈弱表达,在肾小管和肾血管表达较强,在小鼠和大鼠主要沿肾小球毛细血管袢和系膜区分布,肾间质也有少许表达。TRPC6在MPC5的荧光染色为阳性,在分化态细胞主要分布于胞膜表面。2.在小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性TRPC6的PCR产物条带。3.在正常人、小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性的相对分子质量为106的TRPC6蛋白条带。结论TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾小球均有表达,在mRNA及蛋白水平均证实MPC5能表达TRPC6,为从离子通道的角度利用MPC5探讨蛋白尿发生的分子机制奠定基础。

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6过表达致足细胞足突形态改变的形态计量学分析

目的:定量研究足细胞过表达瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)引起足细胞足突形态变化的特征。方法:建立足细胞过表达TRPC6的细胞模型,设立正常对照组(Con)、转染空载体组(GFP)和过表达TRPC6组(OverTRP),并分别给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG和阻断剂U73122处理足细胞;免疫荧光染色后采用激光扫描共聚焦显微镜摄片,图像分析仪进行分析,并应用形态计量学的方法,分别检测足细胞足突的表面积密度、突触长径和足突平均宽度,以研究TRPC6通道蛋白高表达所引起的小鼠足细胞足突的形态变化。结果:共聚焦成像分析结果可见,足细胞过表达TRPC6后,足突表现出回缩的形态特点。形态计量学的结果进一步表明,过表达TRPC6的足细胞足突表面积密度减小(OverTRP:500.97±98.25vsCon:915.5±130.83,P<0.05)、突触长径缩短(OverTRP:58.32±5.41vsCon:91.41±9.13,P<0.05)、平均宽度缩短(OverTRP:7.97±2.64vsCon:12.43±1.47,P<0.05),与对照组比较统计学差异均有显著性(P<0.05);其中过表达组突触长径与对照组比较差异最为显著(P<0.05)。结论:足细胞离子通道蛋白TRPC6的过表达,可诱导足细胞足突形态发生改变,表现为足突回缩,可能是参与蛋白尿发生的形态学基础,为今后对该通道蛋白功能与相关分子间作用的研究提供了实验形态依据。

瞬时受体电位阳离子通道6作为疾病治疗靶点研究进展

瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)在肾、心脏和肺等多个器官均有表达,是构成细胞膜钙库操纵性通道的分子基础,在细胞信号转导中起着重要作用。其基因突变或过量表达可引起细胞内钙离子信号通路异常,使得大量钙离子内流,导致机体各种病理生理过程的变化。通过特异性TRPC6通道抑制剂和RNA干扰技术干预其在相关疾病中的过量表达,可以改善或缓解病情,提示TRPC6可能作为疾病治疗的新靶点。本文就近年来关于TRPC6作为疾病治疗靶点的研究进展进行综述。

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6与肾脏疾病

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)是一个非选择性阳离子通道,定位于足细胞膜,为6次跨膜蛋白。TRPC6与裂孔隔膜分子nephrin以及podocin间存在相互作用,其共同组成裂孔隔膜复合体,突变TRPC6干扰了该复合体的功能,导致足细胞不能维持正常的生物学功能。研究发现TRPC6基因突变与遗传性和非遗传性肾脏疾病发病密切相关,突变的TRPC6可能通过使足细胞动力学发生改变以及足细胞数量减少而引起肾脏疾病。阻断TRPC6通道可能是一种治疗蛋白尿性肾脏疾病的有效方法 ,将给肾病患者带来长期的临床效应。

线粒体氧化应激及m6A表观遗传调控TRPC6钙通道在肾病综合征发病中的作用研究

目的 初步探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)表观遗传修饰瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)通道失调在肾病综合征发病中的作用及潜在机理。方法 按照随机数字表法将小鼠足细胞分为4组:对照组、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组、嘌呤霉素氨基核苷(PAN)处理组、TBHQ+PAN处理组。对照组为正常完全培养液,TBHQ组培养液中加入10 nmol/L TBHQ,PAN处理组培养液中加入PAN 50μg/mL,TBHQ+PAN处理组培养液中加入10 nmol/L TBHQ以及PAN 50μg/mL,刺激24 h收集细胞。应用膜片钳证实PAN损伤诱导TRPC6通道激活机理及1,4,5-肌醇三磷酸(IP3)受体拮抗剂TBHQ对电流的影响,检测对照组、PAN处理组、TBHQ组和TBHQ+PAN处理组细胞TRPC6通道电流变化。通过葡萄糖氧化酶(GO)建立足细胞氧化应激模型。另外按照随机数字表法将足细胞分为4组:空白对照组、GO组、姜黄素组、姜黄素+GO组。GO组给予GO 3.5 kU/L,姜黄素组给予Nrf2激动剂(姜黄素)40μmol/L,姜黄素+GO组给予姜黄素40μmol/L和GO 3.5 kU/L处理,给药处理8~12 h后收集细胞。检测各组Nrf2和特异性调控蛋白NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)、TRPC6及Transgelin蛋白和线粒体调控蛋白表达变化。通过SRAMP对TRPC6通道m6A位点进行精准预测,对PAN诱导足细胞损伤模型公共数据库GSE124622进行2次生物信息学分析。结果 对照组与TBHQ组电流比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PAN处理组电流升高,而TBHQ+PAN组电流减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与GO组比较,姜黄素+GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组线粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达均降低,Drp1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与GO组比较,姜黄素+GO组粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达升高,Drp1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);空白对照组与姜黄素组TRPC6/Transgelin及线粒体调控蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TRPC6通道序列存在多个m6A修饰位点,均具有被甲基转移酶(METTL)3、METTL14、肾母细胞肿瘤1相关蛋白(WTAP)和去甲基化酶ALKB同源蛋白(ALKBH)、m6A去甲基化酶(FTO)调控的潜在可能。对12个m6A调节基因进行表达分析,发现m6A调节基因的表达在PAN诱导足细胞损伤中发生显著差异。结论 TRPC6介导钙离子内流可被氧化应激激活参与足细胞损伤,激活Nrf2可以减少钙过负荷所致线粒体损伤而保护足细胞。TRPC6序列中存在多个高m6A修饰靶点,肾病综合征发病机理可能通过m6A修饰足细胞TRPC6离子通道,m6A相关调控基因在肾病足细胞损伤中发生明显变化。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6对子宫内膜癌细胞周期的调控作用

目的探讨子宫内膜癌组织中瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6(TRPC6)的表达变化及其对子宫内膜癌细胞周期的调控作用。方法应用qRT-PCR技术和蛋白质印迹法检测30例正常子宫内膜、30例不典型增生和32例子宫内膜癌组织中TRPC6的表达。分别用SKF59636(TRPC6阻断剂)和小干扰RNA(siRNA)干扰两种方法阻断TRPC6的作用,观察子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞周期的变化。结果子宫内膜癌组织中的TRPC6 mRNA和蛋白表达量均高于不典型增生组织和正常子宫内膜组织(P<0.01)。SKF96365呈剂量依赖性方式将细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少;转染siRNA可将子宫内膜癌细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少,同时上调磷酸化细胞分裂周期蛋白2(pCDC2)的表达。结论子宫内膜癌组织中TRPC6表达增高,TRPC6可能通过影响pCDC2蛋白表达参与子宫内膜癌细胞周期调控。

瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)在SGC-7901细胞增殖中的作用

目的探讨瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)与SGC-7901细胞增殖的关系。方法体外培养SGC-7901细胞,以是否加入TGF-β_1分为对照组和实验组。根据实验组是否加入SKF96365抑制剂分为TGF-β_1和TGF-β_1+SKF96365组。免疫荧光染色观察TRPC6在对照和TGF-β_1组的表达。Western blot方法检测TRPC6和增殖指标在对照组、TGF-β_1组和TGF-β_1+SKF96365组中的变化。结果与对照组相比,TRPC6蛋白在TGF-β_1组中表达升高(P<0.05)。抑制TRPC6蛋白表达,增殖指标在TGF-β_1+SKF96365组表达明显降低(P<0.01)。结论抑制TRPC6蛋白表达可降低SGC-7901细胞增殖能力。

厄贝沙坦对高糖诱导的小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(angiotensinⅡreceptor blockers,ARB)厄贝沙坦对高糖诱导的条件永生化小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel,TRPC6)表达的影响。方法首先体外培养条件永生化小鼠足细胞,分为高渗对照组(甘露醇30 mmol/L+葡萄糖5 mmol/L),正常对照组(葡萄糖5 mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15 mmol/L、25 mmol/L和35 mmol/L),免疫细胞化学检测小鼠足细胞TRPC6分布,Western Blot和RT-PCR分别检测小鼠足细胞TRPC6蛋白和mRNA的表达;其次使用高糖(25 mmol/L)在不同时间点(0 h,12 h,24 h,48 h)作用于足细胞,Western Blot和RT-PCR分别检测小鼠足细胞TRPC6蛋白和mRNA的表达;最后将细胞分为5组:正常对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦组(10^(-7)mol/L)、高糖+厄贝沙坦组(10^(-6)mol/L)、高糖+厄贝沙坦组(10^(-5)mol/L),倒置显微镜下观察不同浓度厄贝沙坦对高糖诱导的足细胞形态学变化,Western Blot和RT-PCR分别检测小鼠足细胞TRPC6蛋白和mRNA的表达。结果①免疫细胞化学检测可见,随着葡萄糖浓度的增加,TRPC6主要集中表达于足细胞胞膜,沿足突分布更加明显;Western Blot和RT-PCR检测到TRPC6蛋白和mRNA表达量逐渐增加,以25 mmol/L变化最明显。②高糖刺激足细胞后,与0h比较,随着刺激时间的延长,足细胞TRPC6蛋白和mRNA表达量明显增加(P<0.05),在48 h达到高峰,呈一定的时间依赖性。③与正常对照组比较,高糖诱导的TRPC6表达明显增高(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+厄贝沙坦组随厄贝沙坦浓度的增加,TRPC6蛋白和mRNA表达量明显下调(P<0.05),呈浓度依赖性。结论高糖可诱导足细胞TRPC6表达增加,厄贝沙坦对高糖诱导的足细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过下调足细胞TRPC6的表达来实现的。

基于CiteSpace的TRPC6的研究现状及热点分析

目的分析国内关于瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)的中文研究现状及热点。方法应用CiteSpace软件对中国学术期刊网络出版总库(CNKI)中以“TRPC6”为主题的中文文献进行可视化分析,分析内容包括发文量、高频关键词、期刊、发文作者、研究热点及发展趋势等。检索日期截止于2022年4月27日。结果共纳入556篇中文文献,发文量总体呈上升趋势;关键词共现、聚类分析显示,“足细胞”、“基因”、“凋亡”、“增殖”、“钙离子”、“慢性低氧”是主要研究领域;国内中文文献中对于TRPC6今后的研究趋势可能是“基因突变”、“儿童”和“机制”。国内有3个主要团队进行TRPC6的相关研究,团队内部合作紧密,但团队间缺少合作;在266个发文机构中,吉林农业大学中药材学院发文最多。结论“基因突变”、“儿童”、“机制”是近年来TRPC6研究的主要趋势和热点。目前,该领域的重点是研究TRPC6相关的基因突变引起的疾病和致病机制,特别是肾病综合征、恶性肿瘤及儿童疾病。笔者分析发现,各个研究团队之间合作较少,期望未来各大团队能够紧密合作,加速TRPC6研究的进展。

新型钙离子通道蛋白TRPV6在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究新型钙离子通道蛋白TRPV6在胃癌中的表达及其临床意义。方法:收集2010年5月至2013年3月在我院行手术切除并经病理证实的胃癌组织和相应的癌旁组织标本各65份,采用免疫组化SP法检测胃癌及癌旁组织中TRPV6蛋白的表达;以不同浓度的TRPV6拮抗剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-amino ethyl two phenyl boronic acid,2-APB)处理胃癌MGC-803细胞,分别采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell法检测胃癌MGC-803细胞的增殖、细胞凋亡和迁移能力,采用Western blotting检测细胞中TRPV6、AKT/p-AKT和p-GSK3β蛋白的表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中TRPV6蛋白的阳性表达率明显增高[95.4%(62/65)vs 36.9%(24/65),P<0.01],且其表达水平与瘤块大小、淋巴结及远处转移和DUKES分期有关(P<0.05)。2-APB以剂量和时间依赖方式显著抑制胃癌细胞MGC-803的增殖,诱导其凋亡,并使胃癌细胞迁移力减弱(P<0.05)。2-APB明显下调胃癌细胞MGC-803中TRPV6、p-AKT和p-GSK3β蛋白的表达(P<0.05)。结论:TRPV6在胃癌组织中高表达,以2-APB拮抗TRPV6蛋白则显著抑制MGC-803细胞的增殖和迁移能力并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调p-AKT/GSK3β信号通路有关。

舒肝解郁胶囊对CUMS小鼠TRPC6、p-CREB和BDNF表达的影响

目的探讨舒肝解郁胶囊对抑郁症小鼠抑郁状态及相关脑区瞬时受体电位阳离子通道6蛋白(TRPC6)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)和脑源性神经营养因子蛋白(BDNF)表达的影响。方法采用慢性轻度不可预见性应激抑郁(CUMS)模型,将小鼠随机分为正常组、模型组和舒肝解郁胶囊组,各组连续灌胃3周。实验始末,称定小鼠体质量;采用悬尾实验、强迫游泳实验及血清皮质酮水平、脑组织5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)的含量检测来评价小鼠的抑郁状态,采用免疫组化(Elisa)法测定海马区域及眶额区域TRPC6、p-CREB和BDNF的表达研究作用机制。结果与正常组相比,模型组小鼠体质量降低(P<0.05);悬尾不动时间及强迫游泳不动时间延长(P<0.05);血清皮质酮水平升高(P<0.05);5-羟色胺和多巴胺含量降低(P<0.05);海马及眶额区域TRPC6、p-CREB和BDNF表达均降低,仅p-CREB表达组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,舒肝解郁胶囊组小鼠体质量升高(P<0.05);悬尾不动时间及强迫游泳不动时间缩短(P<0.05);血清皮质酮水平降低(P<0.05);5-羟色胺和多巴胺含量升高(P<0.05);海马及眶额区域TRPC6、p-CREB和BDNF均升高,除海马区域TRPC6外其余组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论舒肝解郁胶囊能够改善CUMS小鼠的抑郁状态,可能与其调节小鼠海马区域及眶额区域的TRPC6、p-CREB和BDNF表达密切相关。

HIF1α调控TRPC6通道在肾小球系膜细胞缺氧损伤中的分子机制

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1α)和瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)在人肾小球系膜细胞(mesangial cells,MC)缺氧损伤中的作用及机制。方法:用不同缺氧时间处理系膜细胞诱导细胞损伤,采用MTT还原法测定细胞存活率,Tunel法观察细胞凋亡情况,采用real-time PCR,Western-blot分析检测HIF1α及TRPC6的mRNA及蛋白含量变化。结果:缺氧可以诱导系膜细胞损伤,使系膜细胞HIF1α表达上调,TRPC6表达增加,导致细胞凋亡,应用HIF1α的抑制剂可以使TRPC6含量下调,细胞凋亡减轻。结论:HIF1α和TRPC6介导了缺氧诱导的系膜细胞凋亡。

儿童原发性肾病综合征血清PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4检测的意义

目的探讨检测外周血磷脂酶CE1(PLCE1)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、CD2相关蛋白(CD2AP)、α-辅肌动蛋白4(ACTN4)在儿童原发性肾病综合征(PNS)、激素敏感型肾病综合征(SSNS)、激素耐药型肾病综合征(SRNS)、激素依耐型肾病综合(SDNS)及不同病理类型表达的临床意义。方法采集原发性肾病综合征外周血清标本,采用双抗体夹心ELISA法检测样本中目PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达浓度。结果PNS组、SSNS组、SRNS组、SDNS组PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与健康组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),SRNS组、SDNS组表达与SSNS组比较降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),SRNS组与SDNS组比较差异均无统计学意义(P>0.05);FSGS组、IgAN组血清PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与MCD组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),FSGS组、IgAN组分别与MsPGN组、MPGN组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),MsPGN组与MPGN组比较差异无统计学意义(P>0.05),FSGS组与IgAN组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论①血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4作为足细胞裂孔隔膜分子、足细胞信号分子、骨架分子等正常表达,对维系肾小球滤过膜的功能完整性起关键作用,一旦表达异常降低,可能导致肾病综合征发生、对激素治疗耐药或依耐;②血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与肾病综合征病理类型有关;③临床上检测血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达水平对判断是否为难治性肾病、病理类型、指导用药及预测预后具有重大意义。

甲基-β-环糊精抑制AngⅡ诱导肾小球系膜细胞增殖及TRPC6表达

目的:探讨MβCD(甲基-β-环糊精)对AngⅡ诱导肾小球系膜细胞(GMC)TRPC6的表达及小窝(caveolae)在GMC增殖中的作用。方法:实验分为:空白对照组(Con组)、AngⅡ组、MβCD预处理组(MβCD组)。根据预实验选定AngⅡ10-7mol/L作用GMC24h作为AngⅡ组。MβCD组用10-2mol/LMβCD预处理GMC1h后,用10-7mol/LAngⅡ刺激24h。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测GMC增殖,WesternBlot检测TRPC6蛋白,实时荧光定量PCR检测TRPC6mRNA表达,免疫荧光检测TRPC6的分布。结果:AngⅡ组较Con组明显促进GMC增殖(P<0.05),MβCD组明显抑制AngⅡ对GMC的增殖作用,抑制率为48.96%(P<0.01)。AngⅡ组TRPC6mRNA及蛋白水平均较Con组升高(P<0.01,P<0.05),而MβCD组TRPC6mRNA及蛋白水平均较AngⅡ组降低(P<0.01)。GMCOD值与TRPC6蛋白表达水平呈正相关(R=0.907,P<0.01)。结论:AngⅡ诱导GMC增殖需要完整的小窝结构,TRPC6与GMC增殖密切相关。

TRPC6突变致足细胞病变机制的研究进展

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient channel receptor potential cation6,TRPC6)是肾脏足细胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)的重要组成蛋白之一,与肌动蛋白、足细胞表面蛋白以及其他裂孔隔膜蛋白分子相互作用,共同维持足细胞的正常功能.TRPC6过表达或过度活动导致细胞内钙超载而损伤足细胞.目前报道TRPC6基因致病突变可导致局灶节段性肾小球硬化症.近来研究发现,TRPC6与以蛋白尿为主要表现的肾小球疾病的发生发展密切相关,但尚无特效靶向药物应用于临床.文章主要对TRPC6基因突变致足细胞病变的分子机制以及TRPC6基因型与临床表型之间的关系进行了综述.

TRPC6在高糖所致足细胞骨架F-actin损伤中的作用

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道6(Transient receptor potential canonical channel 6,TRPC6)在高糖诱导的肾小球足细胞骨架纤维状肌动蛋白(F-actin)损伤中的作用。方法以条件永生性人类肾小球足细胞为研究对象,分别采用Real-time PCR,Western blot技术观察高糖条件下足细胞TRPC6mRNA和蛋白表达的变化,通过激光共聚焦法观察高糖作用下足细胞内钙的变化,以及利用激光共聚焦检测技术观察高糖条件下足细胞F-actin变化。结果 Real-time PCR和Western blot实验显示高糖作用下足细胞TRPC6通道蛋白mRNA和蛋白表达明显上调;共聚焦数据显示,高糖作用下足细胞内钙明显增多,高糖条件下足细胞F-actin出现重构,使用TRPC6抑制剂后有所恢复。结论高糖诱导足细胞骨架F-actin发生损伤,且TRPC6参与高糖所致的足细胞骨架F-actin损伤。

PI3K/AKT通路与TRPC6通道在AngⅡ诱导足细胞损伤中的相互作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路与瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球足细胞损伤过程中的作用及其可能机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分别利用AngⅡ、氯沙坦、PI3K/AKT通路抑制剂(LY294002)、TRPC6通道阻滞剂(SKF96365)进行处理,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+氯沙坦组、氯沙坦组、AngⅡ+LY294002组、LY294002组、AngⅡ+SKF96365组、SKF96365组,采用qRT-PCR检测各分组细胞TRPC6 mRNA的变化。采用Western blot检测各分组细胞AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、TRPC6蛋白质表达的变化。采用Hoechst 33258染色法检测各组足细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,AngⅡ组AKT磷酸化水平降低,TRPC6的表达升高,足细胞凋亡增加(P<0.05)。与AngⅡ组相比:AngⅡ+SKF96365组AKT磷酸化水平升高,TRPC6的表达下降,足细胞凋亡减少(P<0.05);AngⅡ+LY294002组AKT磷酸化水平减少,足细胞凋亡增加(P<0.05);AngⅡ+氯沙坦组AKT磷酸化水平升高,TRPC6的表达下降,足细胞凋亡减少(P<0.05)。结论AngⅡ可能通过激活TRPC6通道进而抑制PI3K/AKT通路的激活而导致足细胞损伤。

巨噬细胞钙敏感受体通过TRPC6/Ca^(2+)信号促进炎症反应

目的观察钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)对RAW264.7细胞炎症反应的影响,并探讨其分子机制。方法采用Fura-2荧光探针对RAW264.7细胞质中Ca^(2+)进行荧光染色,使用单细胞荧光钙离子检测仪检测CaSR对巨噬细胞内Ca^(2+)信号的影响;采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞炎症模型;采用q-PCR检测IL-1β和IL-18 mRNA表达;ELISA检测IL-1β蛋白含量。结果CaSR激动剂CaCl_(2)显著增加RAW264.7胞内钙荧光强度,而CaSR拮抗剂Calhex231可抑制此作用。CaCl_(2)及cinacalcet(CaSR特异性激动剂)都能引起胞内Ca^(2+)信号增加,此作用可被Calhex231及瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)抑制剂SAR7334所抑制(P<0.05)。q-PCR检测结果显示:LPS组IL-1β和IL-18 mRNA表达显著高于对照组,cinacalcet进一步增加其表达,而Calhex231及SAR7334可显著抑制此作用(P<0.05)。ELISA结果显示:与LPS比较,cinacalcet增加IL-1β蛋白分泌(P<0.05),而此作用可被Calhex231及SAR7334抑制(P<0.05)。结论在巨噬细胞中,激活CaSR通过TRPC6引起胞内Ca^(2+)浓度增加,进而促进IL-1β及IL-18的分泌,最终促进了可能的炎症反应。