宫颈癌患者血清WNT1诱导信号通路蛋白1、瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员7水平及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)、瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员7(TRPM7)水平及临床意义。方法选取150例宫颈癌患者和164例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者。采用酶联免疫吸附法检测两组患者血清WISP1水平,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组患者血清TRPM7 mRNA水平。宫颈癌发生的影响因素采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估血清TRPM7 mRNA、WISP1单独及联合检测对宫颈癌的诊断价值。结果宫颈癌患者血清TRPM7 mRNA、WISP1水平均明显高于CIN患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。宫颈癌患者中文化程度为初中及以下、孕次≥3次、产次≥2次、合并高危人乳头瘤病毒(HPV)感染的比例均明显高于CIN患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,TRPM7 mRNA水平升高、WISP1水平升高、合并高危HPV感染均是宫颈癌发生的独立危险因素(P﹤0.01)。ROC曲线显示,TRPM7 mRNA、WISP1联合检测诊断宫颈癌的AUC为0.944(95%CI:0.921~0.966),高于二者单独检测(P﹤0.05)。结论宫颈癌患者血清TRPM7 mRNA、WISP1水平较高,二者联合检测可提高对宫颈癌的诊断价值。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2在小鼠肝缺血再灌注损伤模型中的作用及机制

目的:观察瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2(transient receptor potential cation channel subfamily M member 2,TRPM2)在小鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型中的作用及可能的机制。方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、TRPM2腺病毒干扰载体预处理组(T组)和TRPM2腺病毒对照载体预处理组(C组)(均n=15)。取各组小鼠灌注前肝组织,采用荧光显微镜观察腺病毒感染效率,利用real-time PCR检测腺病毒对TRPM2的沉默效率。各组小鼠分别于再灌注2,4和8 h抽取腹主动脉血并获取肝组织,分别检测血清中谷丙转氨酶(alanine amino-transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate amino-transferase,AST)活性。采用HE染色观察肝组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肝中TRPM2和Rac家族小GTP酶1(Rac family small GTPase 1,RAC1)蛋白质的表达量变化;并通过酶联免疫吸附试验检测肝中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性的变化。结果:与S组和M组相比,T组和C组小鼠肝组织可见大量绿色荧光。与S组、M组及C组相比,T组小鼠肝组织中TRPM2 mRNA的表达量显著降低(均P<0.05)。光镜下S组小鼠肝细胞形态正常;M组和C组小鼠肝窦扩张和淤血、肝细胞变性、小叶中央坏死及大量炎症细胞浸润;与M组和C组相比较,T组小鼠肝细胞受损程度明显减轻。与S组相比较,M组、T组及C组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05);与M组和C组相比较,T组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著降低(均P<0.05)。与M组和C组相比较,T组小鼠中SOD活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05),而MDA和MPO活性均显著降低(均P<0.05)。T组小鼠肝组织中TRPM2和RAC1蛋白质表达量在再灌注2,4和8 h较M组和C组均显著降低(均P<0.05)。结论:TRPM2腺病毒干扰载体预处理能有效沉默小鼠肝组织中TRPM2基因表达,并能减轻HIRI,该机制可能与抑制氧化应激和降低RAC1蛋白质表达水平有关。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6对子宫内膜癌细胞周期的调控作用

目的探讨子宫内膜癌组织中瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6(TRPC6)的表达变化及其对子宫内膜癌细胞周期的调控作用。方法应用qRT-PCR技术和蛋白质印迹法检测30例正常子宫内膜、30例不典型增生和32例子宫内膜癌组织中TRPC6的表达。分别用SKF59636(TRPC6阻断剂)和小干扰RNA(siRNA)干扰两种方法阻断TRPC6的作用,观察子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞周期的变化。结果子宫内膜癌组织中的TRPC6 mRNA和蛋白表达量均高于不典型增生组织和正常子宫内膜组织(P<0.01)。SKF96365呈剂量依赖性方式将细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少;转染siRNA可将子宫内膜癌细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少,同时上调磷酸化细胞分裂周期蛋白2(pCDC2)的表达。结论子宫内膜癌组织中TRPC6表达增高,TRPC6可能通过影响pCDC2蛋白表达参与子宫内膜癌细胞周期调控。

壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗带状疱疹后神经痛的临床效果及其对TRPV1的影响

目的观察壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗带状疱疹后神经痛(PHN)的临床效果,以及对瞬时受体电位阳离子通道亚家族Ⅴ成员1(TRPV1)的影响。方法将96例PHN患者随机分为观察组(n=32)、对照1组(n=32)、对照2组(n=32),分别给予壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗、中医针灸围刺治疗、加巴喷丁胶囊口服治疗。治疗后第42天评价3组的临床疗效。在治疗前、治疗后第21天、治疗后第42天,评估3组患者的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分,检测其静脉血和穴位血的TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平。结果治疗后,观察组、对照1组、对照2组总有效率分别为93.75%(30/32)、81.25%(26/32)和68.75%(22/32),观察组的总有效率高于对照2组(P<0.05)。3组患者的疼痛VAS评分随治疗时间的延长而降低(P<0.05),其中,治疗后第42天,对照2组、对照1组、观察组患者的疼痛VAS评分依次降低(P<0.05)。观察组和对照1组的静脉血和穴位血TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平随着治疗时间延长而降低(P<0.05),其中,治疗后第21天、第42天,对照2组、对照1组、观察组静脉血和穴位血TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平依次降低(P<0.05)。结论壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗PHN疗效显著,镇痛效果优于中医针灸围刺及加巴喷丁胶囊口服治疗,其作用机制可能是通过下调TRPV1的表达来抑制炎症介质进一步释放,从而降低痛觉过敏,缓解疼痛。

异丙酚通过TRPV1离子通道抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的:探讨异丙酚(propofol,P)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应的影响及其机制。方法:LPS(100μg/L)处理建立小鼠小胶质细胞BV2神经炎症损伤模型,将细胞分为对照(C)组、模型(L)组、L+P组和LPS+AMG517(L+A)组。ELISA法检测各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;real-timePCR法检测各组细胞瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1) mRNA的表达;Western blot法检测各组细胞TRPV1、TNF-α、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)的蛋白表达;荧光探针Fluo-3 AM标记法检测细胞内游离的Ca2+含量。结果:与C组相比,L组细胞培养液中TNF-α水平显著升高(P<0.01);单独propofol处理TNF-α水平无显著差异;与L组相比,L+P组细胞培养液中在4 h内TNF-α水平显著降低(P<0.01)。与C组相比,L组TRPV1 mRNA表达显著上调(P<0.01);与L组相比,L+P组TRPV1 mRNA表达显著下调(P<0.01)。相比L组,L+P和L+A组TNF-α、IL-1β、IL-6和p-CaMKⅡ蛋白表达显著下调(P<0.01)。相比L组,L+P和L+A组细胞内Ca2+浓度显著降低(P<0.01)。结论:Propofol通过下调TRPV1的表达,下调p-CaMKⅡ的表达,降低细胞内Ca2+浓度,从而下调TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,抑制小胶质细胞的炎症反应。

新型钙离子通道蛋白TRPV6在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究新型钙离子通道蛋白TRPV6在胃癌中的表达及其临床意义。方法:收集2010年5月至2013年3月在我院行手术切除并经病理证实的胃癌组织和相应的癌旁组织标本各65份,采用免疫组化SP法检测胃癌及癌旁组织中TRPV6蛋白的表达;以不同浓度的TRPV6拮抗剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-amino ethyl two phenyl boronic acid,2-APB)处理胃癌MGC-803细胞,分别采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell法检测胃癌MGC-803细胞的增殖、细胞凋亡和迁移能力,采用Western blotting检测细胞中TRPV6、AKT/p-AKT和p-GSK3β蛋白的表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中TRPV6蛋白的阳性表达率明显增高[95.4%(62/65)vs 36.9%(24/65),P<0.01],且其表达水平与瘤块大小、淋巴结及远处转移和DUKES分期有关(P<0.05)。2-APB以剂量和时间依赖方式显著抑制胃癌细胞MGC-803的增殖,诱导其凋亡,并使胃癌细胞迁移力减弱(P<0.05)。2-APB明显下调胃癌细胞MGC-803中TRPV6、p-AKT和p-GSK3β蛋白的表达(P<0.05)。结论:TRPV6在胃癌组织中高表达,以2-APB拮抗TRPV6蛋白则显著抑制MGC-803细胞的增殖和迁移能力并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调p-AKT/GSK3β信号通路有关。

胎盘组织瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6表达与新生儿骨骼发育不良的相关性分析

目的检测胎盘组织瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(TRPV6)mRNA表达水平,并探讨其与新生儿骨骼发育不良的关系。方法选取2018年7月—2019年12月于台州市立医院妇产科分娩的74例骨骼发育不良新生儿作为骨骼发育不良组,同期选取86例骨骼正常新生儿作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR法检测胎盘组织中TRPV6 mRNA表达水平;受试者工作特征曲线(ROC)分析胎盘组织TRPV6 mRNA水平对新生儿骨骼发育不良的评估价值;多因素Logistic回归分析影响新生儿骨骼发育不良的因素。结果两组孕妇分娩孕周、分娩史、新生儿性别比较差异均无统计学意义(P>0.05);骨骼发育不良组孕妇孕龄、孕前BMI、孕中期BMI增加及孕期羊水量异常比例均高于健康对照组,胎盘组织TRPV6 mRNA表达水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。胎盘组织TRPV6 mRNA表达水平评估新生儿骨骼发育不良的曲线下面积(AUC)为0.856(95%CI:0.794~0.918),截断值为0.895,特异度为68.6%,灵敏度为95.9%。TRPV6 mRNA表达水平高、孕期羊水量异常是影响新生儿骨骼发育不良的独立危险因素(P<0.05)。结论胎盘组织TRPV6 mRNA表达水平可能与新生儿骨骼发育不良有密切联系,对其评估有一定的潜在应用价值。

钙离子通道蛋白TRPV6及其相关疾病的研究进展

瞬时受体电位亚家族V成员 6 (Transient Receptor Potential Channel Subfamily V Member 6, TRPV6) 是一种钙离 子高度选择性离子通道,在多种组织中均有表达,控制细胞顶端钙离子的进入,在维持钙稳态中发挥重要作用。TRPV6 功 能异常会影响体内钙稳态,进而引发新生儿骨骼发育异常、甲状旁腺功能亢进、骨与软骨代谢异常、肾结石和高尿钙症、 以及炎症性肠病和慢性胰腺炎等多种疾病。近年来研究也表明,TRPV6 的上调与多种肿瘤的侵袭性增加有关,具有作为肿 瘤检测的标志物以及治疗靶点的潜力。本综述将聚焦于 TRPV6 与其在相关疾病中发挥的作用,旨在为 TRPV6 作为药物靶点 实现临床转化提供理论依据。

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

目的:探讨用辣椒素(CAP)激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法:SPF级ICR小鼠108只随机分为6组:正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱(CAPZ)对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖(LPS)经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30 min经皮下注射。分别在LPS注射后3 h、8 h和16 h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质(SP)和降血钙素基因相关肽(CGRP),Western blotting法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果:内毒素血症组小鼠3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高(P<0.05);CAP干预组各时点肺组织TNF-α和IL-6水平较内毒素血症组显著降低(P<0.05),而IL-10均明显升高(P<0.05);CAPZ干预组3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α和IL-6较内毒素血症组显著升高(P<0.05),而IL-10水平均显著降低(P<0.05)。内毒素血症组和CAP对照组各时间点SP和CGRP较正常对照组均显著升高(P<0.05),CAP对照组SP和CGRP水平明显低于内毒素血症组(P<0.05);与同时点内毒素血症组相比,CAP干预组SP和CGRP显著升高(P<0.05),而CAPZ干预组显著降低(P<0.05)。内毒素血症组小鼠肺组织TLR4和核内NF-κB表达较正常对照组显著升高(P<0.05);与内毒素血症组相比,CAP干预组和CAPZ干预组小鼠肺组织TLR4表达均无显著差异(P>0.05),而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低(P<0.05),CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高(P<0.05)。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8 h和16 h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论:TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。

TRPV1在哮喘发病机制中作用的研究进展

哮喘(asthma)是临床常见的呼吸系统疾病之一。目前全世界约有3亿哮喘患者[1],且有证据表明,该病在世界范围内的患病率和死亡率均在逐年上升,预计到2025年,哮喘患者会增加到4亿,同时每年会有约25万人死于哮喘[2]。我国哮喘的患病率约为4.2%,目前全国有超过4570万的哮喘患者,这表明哮喘已成为严重威胁公众健康的疾患[3]。

普瑞巴林可通过抑制TRPV1以缓解神经病理性疼痛

目的探讨普瑞巴林(pregabalin,PGB)缓解神经病理性疼痛的潜在机制。方法构建常用的神经病理性疼痛模型——大鼠慢性坐骨神经缩窄损伤模型(chronic constriction injury,CCI),给予PGB或瞬时阳离子通道亚家族V成员1蛋白受体(the transient receptor potential cation channel subfamily V member 1,TRPV1)的抑制剂辣椒平(capsazepine,CPZ)或TRPV1的激动剂辣椒素(capsaicine,CP)以观察PGB的镇痛效果。运用免疫组化和免疫印迹法检测与疼痛正相关的TRPV1蛋白在CCI大鼠脊髓中的表达。结果PGB和TRPV1的抑制剂CPZ都能有效地提高CCI大鼠模型的痛阈(P<0.05),CPZ+PGB和CPZ的镇痛作用差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和免疫印迹结果均显示PGB可减低CCI模型大鼠脊髓中TRPV1蛋白的表达。同时给予PGB和TRPV1激动剂CP干预CCI大鼠后,CCI+PGB+CP组痛阈低于CCI+PGB组(P<0.05),且与CCI组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PGB可通过抑制TRPV1蛋白的表达而缓解神经病理性疼痛。

TRPV4在心血管疾病中作用的研究进展

瞬时受体电位阳离子通道V亚家族成员4(transient receptor potential cation channel subfamily V member4,TRPV4)是瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential cation channel, TRP)家族成员,是一种非选择性阳离子通道,对Ca^(2+)离子具有适中通透性,对Na^(+)和Mg^(2+)少量通透(PCa/PNa约为6~10,PCa/PMg约为2~3)。TRPV4在心血管系统表达广泛,主要表达于血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞和成纤维细胞等,可调节血管张力和血管通透性,参与机械信号传导等。

TRPC3对OIR小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞生物学行为的调控作用

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3(TRPC3)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞(HREC)生物学行为的调控作用。方法选取健康SPF级7日龄C57BL/6小鼠32只,采用随机数字表法分为对照组和OIR组,每组16只,其中对照组不做特殊处理,OIR组小鼠诱导OIR模型。出生后第17天(PN17)采用视网膜铺片免疫荧光染色验证模型构建是否成功。将体外培养HREC分为正常对照组、转染试剂组和si-TRPC3组,其中正常对照组不做特殊处理,转染试剂组和si-TRPC3组分别采用转染试剂和转染试剂+si-TRPC3转染。采用实时荧光定量PCR法检测TRPC3 mRNA相对表达量;采用Western blot法检测TRPC3、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)和超氧化物歧化酶(SOD)蛋白相对表达量。另将HREC分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)组、si-TRPC3组和Pyr3(TRPC3通道抑制剂)组,分别用完全培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基(si-TRPC3转染72 h)和含有20 ng/ml VEGF重组蛋白+1μmol/L Pyr3的培养基培养48 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HREC增生能力;分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞横向和纵向迁移能力。结果PN17时OIR组小鼠视网膜出现病理性新生血管团簇强荧光染色。OIR组小鼠视网膜TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量分别为2.057±0.244和1.517±0.290,明显高于对照组的0.983±0.033和0.874±0.052,差异均有统计学意义(t=6.165、3.094,均P<0.05)。si-TRPC3组TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和转染试剂组,Nrf2和SOD蛋白相对表达量明显高于正常对照组和转染试剂组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示,VEGF组细胞吸光度(A)值明显高于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组细胞A值明显低于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,VEGF组细胞横向迁移率高于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组细胞横向迁移率低于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Transwell实验结果显示,VEGF组染色细胞数明显多于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组染色细胞数明显少于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论OIR模型小鼠视网膜中TRPC3表达水平升高,下调TRPC3可抑制HREC增生和迁移能力,其机制与Nrf2氧化应激通路激活有关。

冰片通过TRPM8减轻小鼠心肌梗死后炎症反应并抑制心脏重构

目的:研究冰片(borneol)对小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)后炎症反应和心脏重构的作用及可能机制。方法:8周龄野生型(wild-type,WT)C57BL/6小鼠和瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(transient receptor potential cation channel subfamily M member 8,TRPM8)基因敲除(TRPM8 gene knockout,TRPM8−/−)小鼠随机分为假手术组和MI组,再分别用生理盐水(对照组)或冰片(冰片组)灌胃。绘制小鼠MI后生存曲线,28 d后超声心动图检测心脏功能,多导生理记录仪测量血流动力学参数,病理染色观察MI面积、心肌肥大和间质纤维化,并检测梗死交界区心肌中炎症反应情况。结果:在WT小鼠中,梗死交界区心肌组织中TRPM8表达显著增加(P<0.05),冰片对心脏中TRPM8表达无影响(P>0.05),但可提高小鼠生存率,缩小MI面积,抑制MI后心脏重构,改善心脏功能(P<0.05或P<0.01);在TRPM8−/−小鼠中,冰片对小鼠生存率、MI面积、心肌肥大、心肌纤维化和心脏功能未见明显影响(P>0.05)。在WT小鼠中,冰片可减少中性粒细胞和巨噬细胞的浸润(P<0.01),抑制炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)过度表达(P<0.05或P<0.01);而在TRPM8−/−小鼠中,冰片对炎症细胞数量和炎症因子表达未见明显影响(P>0.05)。结论:TRPM8可能是冰片在心脏的作用靶点;冰片可能通过TRPM8减轻MI后炎症反应和抑制心脏重构,改善小鼠MI后的心脏功能。

TRPV4在心肌细胞缺氧损伤中的作用及机制研究

目的:探究瞬时受体电位阳离子通道V亚家族成员4(transient receptor potential cation channel subfamily V member 4,TRPV4)在H9C2细胞中缺氧环境下的作用机制。方法:采用H9C2细胞建立缺氧损伤模型,检测缺氧不同时间细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。将细胞分为常氧组(0 h)、HC-067047(TRPV4抑制剂)预处理+常氧(0 h)组、缺氧(24 h)组和HC-067047预处理+缺氧(24 h)组,使用Fluo-4 AM检测细胞内Ca^(2+)含量,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测TRPV4蛋白水平,RT-qPCR检测TRPV4的mRNA水平,DCFH-DA检测ROS含量,酶标仪检测CAT和SOD活性,CCK-8法检测细胞活力。结果:与0 h组相比,随着缺氧时间的延长,LDH释放率提高(P<0.05),细胞内ROS和MDA含量上升(P<0.05),CAT和SOD活性增强(P<0.05),氧化损伤逐渐加重并在24 h达到顶峰。此外,缺氧后细胞出现钙超载现象,线粒体膜电位下降,TRPV4被激活。使用TRPV4抑制剂HC-067047预处理后,H9C2的氧化损伤明显被抑制,细胞活力上升(P<0.05),并且钙超载现象和线粒体膜电位下降均有所逆转。结论:在心肌细胞缺氧后,TRPV4被激活,Ca^(2+)内流,线粒体膜电位受损,ROS增多,氧化损伤加重,抗氧化系统被激活,CAT和SOD活性上升,进而调控氧化与抗氧化平衡。

胰腺癌组织中TRPC6、B7-H1蛋白表达与肿瘤发生发展的关系

目的探讨胰腺癌组织中瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)、B7免疫球蛋白超家族成员-1(B7-H1)蛋白表达与胰腺癌发生发展的关系。方法收集手术后胰腺癌病理标本112例及其对应的癌旁组织标本,采用Western-blot技术检测2组标本中的TRPC6、B7-H1蛋白表达强度,比较不同年龄、性别、病灶大小、肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移的胰腺癌病理标本中TRPC6、B7-H1蛋白表达强度差异。结果胰腺癌癌组织中的TRPC6蛋白、B7-H1蛋白表达强度均高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。在淋巴结阳性转移的胰腺癌组织中的TRPC6蛋白、B7-H1蛋白表达强度均高于淋巴结阴性胰腺癌患者(P<0.05);在不同TNM分期的胰腺癌组织中,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期胰腺癌组织中的TRPC6、B7-H1蛋白表达强度呈逐渐增强的趋势,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论胰腺癌组织中TRPC6蛋白、B7-H1蛋白表达强度均显著高于癌旁组织,并且与胰腺癌的发生及发展有一定的关系。

肺腺癌表达TRPM8蛋白的意义

目的:探讨肺腺癌表达瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(TRPM8)蛋白的意义。方法:收集112例肺腺癌患者的肿瘤组织标本,对其进行4~5年临床随访。免疫组织化学染色检测肿瘤组织中TRPM8蛋白的表达,分析TRPM8蛋白表达与肺腺癌患者临床特征及预后的关系。培养A549肺腺癌细胞,通过感染慢病毒上调细胞中TRPM8蛋白的表达,CCK-8法及集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,划痕实验及Transwell实验观察细胞迁移和侵袭。培养H1299肺腺癌细胞,通过感染慢病毒上调细胞中TRPM8表达后,分别在免疫缺陷小鼠左右臀部皮下注射对应空载体细胞及上调TRPM8的细胞,分析TRPM8对移植瘤生长的影响。结果:肺腺癌组织存在TRPM8表达。TRPM8蛋白高表达的肺腺癌患者,其4~5年累积生存率高于TRPM8蛋白低表达的患者(P=0.017),且其肿瘤最大径小于低表达的患者(P=0.028)。上调A549细胞中TRPM8的表达后,细胞活力较空载体组和亲本细胞组显著减弱,形成的集落数显著减少,处于S期的细胞比例显著升高,迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01)。与空载体对照细胞株比较,上调H1299细胞中TRPM8的表达后,其在免疫缺陷小鼠皮下的移植瘤生长速率显著下降,肿瘤重量显著降低(P<0.01)。结论:TPRM8在肺腺癌中具有抑癌作用,低表达TRPM8蛋白的肺腺癌患者预后不良。

金刚丸对骨质疏松大鼠骨代谢和血清骨钙素的影响

目的探讨金刚丸对骨质疏松大鼠骨代谢和血清骨钙素的影响。方法将60只SPF级大鼠随机分为正常对照组、模型组及高、中、低剂量组和己烯雌酚组,每组10只。高、中、低剂量金刚丸组每天分别以3.24、1.62、0.81 g/kg的剂量灌胃1次;己烯雌酚组大鼠每天给予1.0 mg/kg灌胃1次;正常对照组及模型组给予等体积的生理盐水。给药6周后取股骨,测量股骨最大载荷和断裂载荷;HE染色法观察骨小梁结构;ELISA法测定股骨组织中血清骨源性碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、雌二醇(estradiol E2)和血清骨钙素(bone gla-containing protein, BGP)、骨保护蛋白(osteoprotegerin, OPG)、核因子-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB, RANK)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)的水平;采用光子骨密度(bone mineral density, BMD)测试仪测定BMD;采用Western blot法检测瞬时受体电位阳离子通道亚族V成员6 (transient receptor potential cation channel subfamily V member 6, TRPV6)蛋白相对表达量。结果模型组骨小梁形态模糊、广泛断裂,骨髓腔增宽,骨细胞排列散乱;高、中、低剂量组可见骨小梁形态较模型组改善、结构较为紧密,骨髓腔减小,骨外膜排列改善。与正常对照组相比,模型组体质量、BALP、BGP、RANK、RANKL水平明显升高,E2、BMD、最大负荷、断裂负荷、TRPV6、OPG水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,高、中、低剂量组体质量、BALP、BGP、RANK、RANKL水平降低,E2、BMD、最大负荷、断裂负荷、OPG、TRPV6水平显著升高(P<0.05)。结论金刚丸通过提高绝经后骨质疏松大鼠雌激素水平,调节骨代谢,提高生物力学性能和BMD,起到抗骨质疏松的疗效和骨保护作用,其机制可能是通过影响TRPV6表达上调OPG表达,下调RANKL表达。

TRPV1对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的影响及机制

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的保护作用及可能机制。方法将H9c2心肌细胞随机分为对照组、模型组(缺氧/复氧组)、辣椒素(TRPV1激活剂)组(缺氧/复氧+辣椒素组)、辣椒素+LY组[缺氧/复氧+辣椒素+LY294002(PI3k抑制剂)组]。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率,采用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率,采用Western blot法和逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)法测定各组细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化-蛋白激酶B(pAkt)、蛋白激酶B(Akt)水平。结果与对照组比较,模型组、辣椒素组、辣椒素+LY组心肌细胞存活率和Bcl-2水平降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3、Bax、p-Akt水平升高(均P<0.05);与模型组比较,辣椒素组心肌细胞存活率和Bcl-2、p-Akt水平升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3、Bax水平降低(均P<0.05);模型组与辣椒素+LY组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 TRPV1可抑制缺氧复氧后H9c2心肌细胞凋亡,其机制可能与TRPV1激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)/Akt信号通路有关。

TRPV6蛋白在胃腺癌中的表达及其临床意义

目的:通过检测瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(TRPV6)和Ki-67在胃腺癌、胃腺瘤和正常胃组织中的表达,了解TRPV6的表达与胃腺癌临床病理特征的关系,探讨其在胃腺癌发生发展中的作用。方法:收集手术切除的胃腺癌组织标本68例、胃腺瘤组织标本30例、正常胃组织标本20例,应用免疫组化Eli VisionTMplus法检测TRPV6和Ki-67在不同组织中的表达。结果:TRPV6在正常胃组织、胃腺瘤和胃腺癌中阳性表达率逐渐升高,在胃腺癌与正常胃组织、胃腺瘤与正常胃组织中表达差异均有统计学意义(P<0.05),在胃腺癌与胃腺瘤组织中表达差异无统计学意义(P>0.05);Ki-67抗原在正常胃组织、胃腺瘤和胃腺癌中阳性表达逐渐升高(P<0.05);TRPV6在胃腺癌中的表达与肿瘤分期、有无淋巴结转移及Ki-67的阳性指数相关(P<0.05)。结论:TRPV6在胃腺癌和胃腺瘤中的表达升高,提示其在胃腺癌的发生发展中发挥作用,可作为胃癌重要的生物学标志,联合Ki-67抗原检测对胃癌的诊断、预后评估具有重要意义。