靶向瞬时受体电位香草酸亚型1离子通道的Nplus-RhTx多肽抑制剂理性设计及功能验证

目的:获得靶向瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道的多肽抑制剂。方法:基于已有的靶向TRPV1通道的多肽激动剂红头蜈蚣毒素(RhTx)进行理性设计,在其氨基末端增加带正电荷的氨基酸,并在细胞上使用膜片钳电生理验证设计的多肽对TRPV1通道的抑制作用。结果:理性设计了8条Nplus-RhTx多肽,在膜片钳电生理记录中发现其中4条可以抑制TRPV1的辣椒素激活,4条Nplus-RhTx多肽的半数有效抑制浓度分别为(188.3±4.7)、(193.6±18.0)、(282.8±11.9)和(299.5±6.4)µmol/L。结论:通过对RhTx多肽的氨基端进行理性设计改变其性质,可获得靶向TRPV1的多肽抑制剂。

瞬时受体电位香草酸亚型1在急性呼吸窘迫综合征中的作用及研究进展

急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由肺内和肺外病因引发的一种严重的、以顽固性低氧血症为显著特征的呼吸系统危重症,起病较急,发病率和死亡率较高。随着全球范围内的呼吸道病毒的流行和变异,ARDS的诊疗也变得更加复杂,因此临床上亟待探索有关ARDS发生发展的分子机制和有效的治疗方法。研究发现,ARDS的发病机制涉及炎症反应及氧化还原反应失衡、内皮细胞功能失调、肺泡毛细血管屏障的破坏、凝血功能异常等多个因素的相互作用。虽然基因组学、蛋白质组学等分子生物学技术的发展已为ARDS的发病机制提供了全新视角,但仍缺乏早期诊断ARDS的生物标志物和针对性治疗ARDS的有效药物。目前,越来越多的研究表明,瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1;即辣椒素受体)广泛分布于上呼吸道、气道平滑肌、肺泡和肺血管等部位,参与调解气道舒张和收缩、咳嗽反射、炎症和疼痛相关的炎症介质释放,以及呼吸系统对温度、化学物质和机械牵拉等刺激的感知并传递各种生物信号,在呼吸系统疾病中扮演着重要角色,且已成为肺炎、肺水肿、咳嗽、哮喘、急性肺损伤等呼吸系统疾病的研究热点。基于此,该文以脓毒症、创伤性脑损伤和呼吸道病毒引发的ARDS与TRPV1的相关性和分子机制为切入点进行综述,总结了调控TRPV1的表达对ARDS发病进程所发挥的积极作用,旨在为加强ARDS的早期诊断和有效干预措施提供参考。

ST段抬高型心肌梗死病人瞬时受体电位通道1、肌肉生长抑制素表达与心功能、预后的关系

目的:探讨ST段抬高型心肌梗死(STEMI)病人血清中瞬时受体电位通道1(TRPC1)、肌肉生长抑制素(MSTN)表达与心功能、预后的关系。方法:选取2019年3月—2021年3月安阳市人民医院收治的急性STEMI病人110例作为研究组,另选取同期体检健康者90名为对照组。收集研究对象临床资料,检测研究对象血清TRPC1、MSTN水平;采用Killip分级方法评估病人的心功能;采用Spearman相关性分析法分析TRPC1、MSTN与STEMI病人Killip分级的相关性。根据预后是否发生主要不良心脏事件(MACE)将STEMI病人分为预后良好组(83例)和预后不良组(27例);受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TRPC1、MSTN水平对STEMI病人预后的预测价值。结果:STEMI病人总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)及血清TRPC1、MSTN水平高于对照组(P<0.001),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.001)。不同Killip分级的STEMI病人血清TRPC1、MSTN水平比较差异有统计学意义(P<0.001),Killip分级越高,血清TRPC1、MSTN水平越高。STEMI病人血清TRPC1、MSTN水平与Killip分级呈正相关(P<0.05);预后不良组血清TRPC1、MSTN水平明显高于预后良好组(P<0.001);血清TRPC1、MSTN单独及联合预测STEMI病人预后的曲线下面积(AUC)分别为0.763,0.891,0.942,敏感度分别为77.27%、86.36%和95.45%,特异度分别为74.36%、75.64%和88.46%;二者联合预测优于TRPC1、MSTN各自单独预测(P<0.05)。结论:STEMI病人血清TRPC1、MSTN水平明显升高,与病人心功能密切相关,且二者联合检测有利于早期评估病人MACE发生情况。

基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

柴胡疏肝散对糖尿病周围神经病变大鼠瞬时受体电位香草酸亚型1/降钙素基因相关肽通路及坐骨神经电生理变化的影响

目的探究柴胡疏肝散对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)/降钙素基因相关肽(CGRP)通路及坐骨神经电生理变化的影响。方法2019年12月至2020年9月,从北京生命科学研究所动物实验中心购入SD大鼠,采用高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立DPN大鼠模型,分为对照组、模型组、弥可保组(175μg/kg)、低中高剂量柴胡疏肝散(3.15、6.30、12.60 g/kg),每组5只,造模成功后,连续给药8周。8周末检测各组大鼠摆尾温度阈值,肌电图仪检测大鼠运动神经传导速度(MNCV)及其支配肌复合运动动作电位的波幅(AMP)、潜伏期(LAT)的变化。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清TRPV1、CGRP、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的水平;苏木精-伊红(HE)染色观察坐骨神经组织病理变化;蛋白质印迹法检测坐骨神经组织中TRPV1、CGRP、TNF-α、IL-1β蛋白水平。结果与对照组[(33.15±1.28)s、(1.37±0.06)ms、(41.48±5.36)m/s、(12.32±1.55)mV]相比,模型组大鼠坐骨神经周围观察到大量浸润性巨噬细胞和单核细胞,并伴有广泛的轴突脱髓鞘,摆尾温度阈值(48.67±2.65)s、LAT(3.68±0.18)ms升高,MNCV(30.26±3.65)m/s、AMP(4.58±0.26)mV降低,血清及坐骨神经中TRPV1、CGRP、TNF-α、IL-1βmRNA或蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,弥可保组、低中高剂量柴胡疏肝散组单核细胞浸润减少,脱髓鞘程度减轻,摆尾温度阈值[(37.75±1.45)s、(45.61±2.38)s、(41.74±1.68)s、(38.21±1.36)s]、LAT[(1.62±0.08)ms、(2.92±0.12)ms、(2.03±0.09)ms、(1.69±0.08)ms]降低,MNCV[(38.56±4.85)m/s、(33.63±3.21)m/s、(35.42±3.35)m/s、(38.57±4.14)m/s]、AMP[(11.95±1.02)mV、(7.61±0.75)mV、(9.35±0.92)mV、(11.89±1.03)mV]升高,血清及坐骨神经中TRPV1、CGRP、TNF-α、IL-1βmRNA或蛋白水平降低(P<0.05)。结论柴胡疏肝散可能通过抑制TRPV1/CGRP通路表达,减轻大鼠坐骨神经损伤,达到保护周围神经的作用,可能作为DPN潜在的治疗药物。

皮肤瞬时受体电位香草素-1和白细胞介素-31受体A在大疱性类天疱疮皮损组织中表达及意义

目的观察大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid,BP)患者皮损组织瞬时受体电位香草素-1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、白细胞介素-31受体A(interleukin-31 receptor A,IL-31RA)表达情况,探讨其在BP患者瘙痒发生中的作用。方法BP患者23例为BP组,整形外科手术患者12例为对照组,采用免疫组织化学法检测BP组皮损和对照组手术切除的正常皮肤表皮和真皮组织TRPV1、IL-3IRA表达的累积光密度(integrated optical density,IOD)值。采用瘙痒视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)评估BP患者瘙痒程度,比较不同瘙痒程度的BP患者瘙痒VAS评分及皮损表皮和真皮组织TRPV1、IL-3IRA表达的IOD值,采用Spearman相关分析BP患者瘙痒VAS评分与皮损表皮和真皮组织TRPV1、IL-3IRA表达的相关性。结果BP患者TRPV1、IL-31RA主要在表皮组织表达,其中轻度瘙痒7例,中度瘙痒9例,重度瘙痒7例。BP组患者皮损表皮和真皮组织TRPV1[1284.92(601.43,1788.39)、225.84(62.46,258.58)]、IL-31RA[1049.43(903.86,1235.15)、290.74(256.21,480.84)]表达的IOD值均高于对照组[TRPV1250.03(210.75,294.53)、39.89(37.29,47.21),IL-31RA 281.67(248.85,310.64)、71.89(65.30,88.96)](P<0.05);轻、中、重度瘙痒的BP患者瘙痒VAS评分依次增高[4.00(4.00,4.00)、5.00(5.00,5.50)、7.00(7.00,7.00)](P<0.05),皮损表皮组织TRPV1表达的IOD值[1885.62(1788.39,1973.68)、1284.92(1186.16,1558.39)、568.39(550.53,601.43)]依次降低(P<0.05),IL-31RA表达的IOD值[856.87(779.32,903.86)、1099.74(980.90,1190.52)、1374.18(1153.95,1507.45)]依次增高(P<0.05);轻、中、重度瘙痒的BP患者皮损真皮组织TRPV1、IL-31RA表达的IOD值[258.58(225.84,264.72)、256.04(217.74,268.15)、40.76(35.29,62.46),490.74(480.84,521.68)、290.46(248.53,331.69)、256.91(247.03,278.02)]均依次降低(P<0.05)。BP患者瘙痒VAS评分与皮损表皮组织TRPV1表达呈负相关(r=—0.910,P=0.023),与皮损表皮组织IL-31RA表达呈正相关(r=0.770,P=0.014);与皮损真皮组织TRPV1、IL-31RA表达均呈负相关(r=—0.790,P=0.018;r=—0.720,P=0.026)。结论BP患者皮损表皮和真皮组织TRPV1和IL-31RA表达均明显升高,参与瘙痒的发生;表皮和真皮组织TRPV1、真皮组织IL-31RA负反馈参与瘙痒的维持。

瞬时受体电位香草素1型对高脂饮食诱导的小胶质细胞代谢的调控

目的·利用转录组以及脂质组分析技术研究瞬时受体电位香草素1型(transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1)通道的激活对高脂饮食诱导的小胶质细胞代谢的调控作用。方法·以8周龄C57BL/6J小鼠(WT)和Trpv1−/−(KO)小鼠为实验动物,高脂饲料(high-fat diet,HFD)分别喂养3d、7d、8周诱导造模(WT和KO组,n=3;WT-HFD和KO-HFD组,n=4)。通过免疫荧光试验测量WT-HFD和KO-HFD组小鼠大脑中TRPV1通道的表达以及细胞定位。通过RNA测序和液相色谱-质谱法确定WT-HFD和KO-HFD组小鼠的大脑表型。结果·与WT组小鼠相比,WT-HFD组小鼠体内小胶质细胞Trpv1 mRNA的表达水平显著增加。与WT-HFD组小鼠相比,KO-HFD组小鼠的脑脂质代谢、线粒体功能、葡萄糖转移以及糖酵解相关基因的表达水平下调。脂质组分析显示,虽然KO-HFD组小鼠的脑组织中脂质积累,但是Trpv1基因敲除减弱了HFD诱导的小胶质细胞活化,此外,TRPV1激动剂辣椒素在体外减弱棕榈酸诱导的线粒体膜电位去极化。结论·TRPV1通过线粒体驱动的燃料可用性机制调节小胶质细胞的脂质和葡萄糖代谢。

基于药效团和分子对接探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1介导的减毒机制

目的:本研究利用药效团、分子对接及实时反转录PCR(RT-PCR)方法探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1(TRPV1)介导的减毒机制。方法:采用Discovery Studio 4.0软件构建基于TRPV1激动剂分子共同特征的TRPV1激活药效团,虚拟筛选出草乌中的潜在活性成分;对草乌成分及诃子制草乌中引入的诃子成分进行Autodock vina分子对接研究;根据结果选出代表性成分,采用实时反转录PCR验证是否可促进心肌细胞中TRPV1 mRNA表达。结果:药效团共筛选出草乌中包括毒性较大的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱及次乌头碱在内的13个成分,分子对接结果表明这13个成分及诃子制草乌引入的诃子成分均有潜力与TRPV1结合。RT-PCR实验中没食子酸和新乌头碱在浓度≥25μmol/L时,均可明显促进大鼠H9c2心肌细胞中TRPV1 mRNA表达的增加,随着给药浓度的增大表达量增加,新乌头碱促进TRPV1 mRNA表达的作用更强。药效团、分子对接结果表明诃子和草乌中均含有多种具备TRPV1激活潜力的成分。结论:实验证明新乌头碱、没食子酸均可在一定程度上激活TRPV1通道,可作为TRPV1的激动剂。根据结果推测,诃子可能会通过拮抗草乌中的活性成分与TRPV1的结合,从而降低草乌通过TRPV1介导的毒性;也可能是诃子制草乌在引入没食子酸等诃子成分后,可在安全剂量范围内使TRPV1通道快速脱敏从而实现减毒。

瞬时受体电位香草酸亚型1在缺血性中风机制及相关中药的研究进展

中风是严重危害人民健康的重大疾病,居我国致死疾病之首,缺血性中风(IS)占70%以上。因时间窗窄、适应证严格等原因,静脉溶栓、血管内治疗临床实际受益人群极为有限,寻求特异性有效药物仍是临床迫切需求,深入探索相关机制、发掘治疗新靶点是创新药物研发的关键。近年来,瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通过非谷氨酸机制调控中风后钙离子稳态,并参与中风后多种复杂机制,有望成为中风后神经保护作用的新兴靶点。中药具有多成分、多靶点的特点,已有临床研究证实在中风不同阶段应用中药治疗均有良好疗效,目前已在许多中药如吴茱萸、生姜、天然冰片中发现TRPV1激动剂/抑制剂。现从TRPV1参与调控钙超载、兴奋性毒性、神经炎症等病理机制出发,厘清其具体作用,并归纳可能作用于TRPV1治疗中风的中药成分,以期为中风研究及治疗提供新思路。

瞬时受体电位香草酸亚型1受体及C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的观察瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)受体基因缺陷和C-C趋化因子受体2(CCR2)阻断剂对盐敏感性高血压所致肾脏损害的影响。方法野生型和TRPV1基因缺陷(TRPV1-/-)小鼠通过切除左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水建立DOCA-盐高血压模型。DOCA-盐高血压组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)和DOCA-盐高血压-RS504393组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2阻断剂RS504393,假手术组野生型和TRPV1-/-小鼠(n均=7)仅左肾切除和给予正常饮用水。实验共4周,实验期间和结束时分别检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、尿8-异构前列腺素排泄量和肌酐清除率。取右肾进行病理组织学分析,比较肾小球硬化指数、肾小管间质损伤程度及单核/巨噬细胞浸润程度。结果与相应的假手术组比较,野生型DOCA-盐高血压组和TRPV1-/-DOCA-盐高血压组的血压显著升高,24 h尿白蛋白和尿8-异构前列腺素排泄量显著增加,肌酐清除率显著下降(P均<0.05);肾小球硬化指数和肾小管间质损伤程度显著升高,且单核/巨噬细胞浸润数量显著增加(P均<0.05)。除血压外,TRPV-/-DOCA-盐高血压组上述病理变化均显著高于野生型DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。RS504393处理组的上述异常变化显著弱于相应的DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。除假手术组外,DOCA-盐高血压组和DOCA-盐高血压-RS504393组的血压差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论在野生型和TRPV1-/-小鼠中,CCR2阻断剂均可抑制DOCA-盐高血压所致的肾脏损害及肾内单核/巨噬细胞浸润,并且其抑制作用在TRPV1-/-小鼠中明显增强,提示TRPV1受体可能通过抑制CCR2所介导的单核/巨噬细胞浸润来减轻盐敏感性高血压所造成的肾脏损害。

瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型抑制剂HC067047对脂多糖诱导的小鼠焦虑样行为的影响

目的探讨瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)抑制剂HC067047对脂多糖(LPS)模型小鼠焦虑样行为的影响。方法48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(NS)、模型组(LPS)和药物干预组(HC+LPS)。腹腔注射0.83 mg/kg LPS建立焦虑样小鼠模型,HC+LPS组于LPS注射前30 min腹腔注射HC067047(10 mg/kg),NS组及LPS组注射等体积溶媒;旷场实验以及社会交往实验观察小鼠焦虑样行为;免疫组织化学及Western blotting检测海马TRPV4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。结果免疫组织化学和Western blotting实验发现,与NS组相比,LPS组小鼠海马中TRPV4表达显著上调(P<0.0001);旷场实验中,与NS组比较,发现LPS组小鼠活动的总距离(P<0.0001)、在中央区域活动的距离(P<0.01)以及在中央区域活动的时间均明显减少(P<0.01),HC067047干预可增加LPS模型小鼠的活动总距离(P<0.05)、在中央区域活动的距离(P<0.001)以及在中央区域的活动时间(P<0.01);社会交往实验中,与NS组相比,LPS组小鼠与陌生小鼠的交往时间显著降低(P<0.01),HC067047干预后能显著增加LPS模型小鼠与陌生小鼠的交往时间(P<0.01);Western blotting检测发现,LPS组小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.001)和eNOS(P<0.001)的表达显著高于NS组,但HC067047干预后可使LPS模型小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.01)、eNOS(P<0.01)的表达明显降低。结论抑制TRPV4的表达能够改善LPS所致小鼠焦虑样行为,该过程可能与抗氧化应激有关。

瞬时受体电位通道香草醛亚型-5通过调控NF-κB通路改善免疫微环境治疗小鼠动脉粥样硬化的作用机制

目的:分析瞬时受体电位通道香草醛亚型-5(transient receptor potential vanilloid type 5,TRPV5)对载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E gene knockout,ApoE^(−/−))小鼠动脉粥样硬化发病机制的影响。方法:构建过表达TRPV5的携带绿色荧光蛋白重组腺病毒(adeno-associated virus-TRPV5-green fluorescent protein,AAV-TRPV5-GFP),将其转染RAW264.7细胞以及经静脉注射到ApoE^(−/−)小鼠体内。ApoE^(−/−)小鼠喂食含21%脂肪和0.15%胆固醇的西方式高脂食物8周后,随机分为2组:AAV-TRPV5-GFP组(n=10)和AAV-GFP组(n=10)。采用油红O染色检测主动脉病变大小,ELISA试剂盒法测定血脂、炎症因子水平,高效液相色谱法测定细胞的胆固醇酯,液体闪烁光谱法检测细胞的3H-胆固醇放射性,以及蛋白质印迹法分析胆固醇转运、炎症调节蛋白表达。结果:与0周相比,ApoE^(−/−)小鼠血管组织中的TRPV5水平随着西方饮食喂养时间延长持续降低。在西方饮食喂养第14周时,与AAV-GFP组小鼠相比,AAV-TRPV5-GFP组小鼠整个主动脉的油红O阳性区域减少,主动脉根部病变显著减小,并且小鼠血浆甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6水平显著降低,血浆高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平显著提高并改善了HDL功能。此外,注射AAV-TRPV5-GFP的ApoE^(−/−)小鼠的腹腔巨噬细胞中磷酸化β-连环素(phosphoβ-catenin,P-β-catenin)和磷酸化核因子κB(phospho nuclear factor kappa-B,P-NF-κB)的表达水平低于AAV-GFP小鼠。体外实验中,与转染AAV-GFP的细胞相比,转染AAV-TRPV5-GFP的RAW264.7细胞的油红O染色降低了34.4%,细胞胆固醇含量降低43.9%,胆固醇外流至载脂蛋白AI(apolipoprotein AI,apoAI)增加了38.3%。蛋白质印迹法显示:转染AAVTRPV5-GFP的RAW264.7细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)、B类1型清道夫受体(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)、过氧化酶活化增生受体γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPAR-γ)、肝X受体α(liver X receptorα,LXR-α)蛋白水平显著增高(均P<0.05),而清道夫受体A1(scavenger receptor A1,SR-A1)和低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)蛋白水平显著降低(均P<0.05)。结论:TRPV5通过调节巨噬细胞中的胆固醇转运和抑制炎症因子的释放来防止动脉粥样硬化。

N-乙酰天冬氨酰谷氨酸肽酶抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平瞬时感受器电位香草酸受体1表达的影响

目的：研究鞘内注射N-乙酰天冬氨酰谷氨酸（N-acetylaspartylglutamate,NAAG）肽酶抑制剂（2-PMPA）对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及脊髓水平瞬时感受器电位香草酸受体1（TRPV1）表达的影响.方法：取鞘内置管成功的雄性SD大鼠24只,体重200～250 g,随机分为3组（n=8）：假手术组（sham组）、坐骨神经慢性压迫性损伤组（CCI组）和2-PMPA治疗组（2-PMPA组）.sham组只暴露坐骨神经,但不结扎,术后鞘内注射生理盐水;CCI组坐骨神经结扎后鞘内注射生理盐水;2-PMPA组坐骨神经结扎后鞘内注射2-PMPA 100 μg.所有组每次给药剂量均为10μl,每日1次,连续7d.分别于术前及术后7d时,以热缩足潜伏期（TWL）和机械缩足阈值（MWT）测定大鼠痛阈,然后处死大鼠,采用免疫荧光和Western blot法测定脊髓水平TRPV1的表达.结果：三组大鼠术后7dTWL和MWr值分别为（17.8±1.1）、（5.5±1.0）、（12.0±1.4）s和（13.1±1.2）、（4.3±0.9）、（10.5±1.0）g.与sham组比较,CCI组术后7d时TWL和MWT值均降低,脊髓TRPV1表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与CCI组比较,2-PMPA组术后7d时TWL和MWT值均升高,脊髓TRPV1表达水平显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：鞘内注射NAAG肽酶抑制剂可以有效地治疗神经病理性疼痛,其作用机制可能与抑制脊髓水平TRPV1的表达有关.

鼻内针刺对兔变态反应性鼻炎模型鼻黏膜病理学的作用及瞬时感受器电位香草酸受体1-P物质轴相关的调控机制

目的通过鼻内针刺明确鼻黏膜的病理学变化并通过瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)-P物质(SP)轴在实验性变应性鼻炎鼻黏膜中分布及表达情况,探讨其可能的信号传导机制。方法采用卵清蛋白及氢氧化铝凝胶方法建立变应性鼻炎动物模型。25只新西兰大耳兔随机分成正常组、模型组、假针刺组、针刺外迎香组和鼻内针刺组,每组各5只。观察鼻内针刺对动物行为学、鼻黏膜病理学及动脉血中嗜酸性粒细胞(EOS)计数和Ig E含量影响,采用HE染色法明确鼻黏膜EOS的分布,采用免疫组织化学方法观察鼻黏膜及TRPV1及SP的分布和表达情况。结果行为学评分结果发现,与模型组相比,假针刺组行为学计分下降不明显,针刺外迎香组和鼻内针刺组行为学计分有下降趋势,鼻内针刺组下降程度更显著。血常规中EOS计数结果显示,模型组与正常组相比,EOS计数稍增多但差别无显著性(P>0.05);鼻内针刺组与模型组相比,EOS计数有减少趋势,差别也无显著性(P>0.05)。ELISA法检测Ig E发现,与正常组相比,模型组血清中Ig E含量明显增多(P<0.05);与模型组相比,假针刺组血清中Ig E含量未见明显变化(P>0.05),针刺外迎香组和鼻内针刺组血清Ig E含量有下降趋势(P<0.05),但鼻内针刺组血清Ig E含量较针刺外迎香组下降更为明显,两组差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,与正常组相比,模型组和假针刺组EOS浸润明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,鼻内针刺组和外迎香组EOS浸润程度减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,与正常组相比,模型组和假针刺组鼻黏膜TRPV1及SP表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,鼻内针刺组和外迎香组TRPV1、SP表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论鼻内针刺可以通过减少嗜酸性粒细胞在鼻黏膜的趋化及血清中Ig E含量来缓解变应性鼻炎模型的鼻部症状。

脓毒症大鼠肠道瞬时感受器电位香草酸受体1及降钙素基因相关肽的表达及作用

目的:观察脓毒症对大鼠肠道动力的影响,并探讨瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)和降钙素基因相关肽(CGRP)在脓毒症肠动力障碍中的作用。方法:雄性清洁型SD大鼠20只,随机分为对照组和脓毒症组,每组10只。脓毒症组大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水。12h后以每只大鼠2mL碳素墨汁灌胃,测定小肠墨汁推进率;免疫组化法检测大鼠小肠黏膜TRPV1及CGRP的表达水平。结果:脓毒症组大鼠小肠墨汁推进率明显低于对照组,小肠黏膜TRPV1、CGRP的阳性表达评分明显高于对照组(P<0.05)。结论:脓毒症大鼠肠动力障碍可能与肠道TRPV1、CGRP的表达上调相关。

肾上腺素、瞬时受体电位香草酸1通道和P物质在急性脊髓损伤大鼠并发肺损伤中的变化及意义

目的探讨肾上腺素、瞬时受体电位香草酸1(TRPV1)通道和P物质在大鼠急性脊髓损伤(ASCI)并发肺损伤中的变化及意义。方法将228只雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(90只)、ASCI组(108只)、双侧肾上腺切除组(15只)、双侧肾上腺切除后ASCI组(15只)。采用改良Allen’s打击模型(打击锤质量为10 g,打击高度为25 mm)于T10脊髓节段制备ASCI模型,假手术组仅暴露T10节段脊髓,双侧肾上腺切除后ASCI组于肾上腺切除术5 d后制作ASCI模型。采用高效液相色谱法检查大鼠血清肾上腺素水平。取大鼠肺组织标本,计算肺湿干质量比以反映肺组织水肿变化,采用H-E染色检测肺组织病理学变化,采用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法检测肺组织中TRPV1蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验检测肺组织中P物质的含量。结果脊髓损伤后2、6、12、24、48、72 h,ASCI组大鼠血清肾上腺素水平均高于假手术组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。脊髓损伤后24、48、72 h,ASCI组大鼠肺水肿和肺损伤组织病理学变化逐渐加重,损伤1周时开始恢复。脊髓损伤后24、48、72 h,ASCI组大鼠肺组织TRPV1蛋白表达量和P物质含量均较假手术组升高,差异均有统计学意义(P均<0.05,P均<0.01)。脊髓损伤后72 h,双侧肾上腺切除后ASCI组肺组织水肿和组织病理学变化均较ASCI组减轻。结论肾上腺素可能参与大鼠ASCI并发的肺水肿和肺损伤进程,这种效应可能与肺组织中TRPV1、P物质的表达上调有关;双侧肾上腺切除预处理可减轻ASCI并发的肺水肿和肺损伤程度。

针灸预处理对无水乙醇致急性胃黏膜损伤大鼠香草酸亚型1、降钙素基因相关肽蛋白表达的影响

目的 探讨针灸预处理抗无水乙醇致急性胃黏膜损伤的可能机制。方法 将52只SD大鼠分为四组:正常组、模型组、预灸组和预针刺组,每组13只。针灸预处理中脘、足三里,20分钟/穴、1次/天,连续7天,无水乙醇灌胃制备急性胃黏膜损伤模型,评估胃黏膜损伤(ulcer index, UI)指数,苏木精—伊红(hematoxylin-eosin staining, HE)染色法观察胃黏膜组织的病理改变,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)观察血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、三叶因子1(trefoil factor 1,TFF1)的浓度,免疫组织化学法分析大鼠胃黏膜组织香草酸亚型1 (transient receptor potential vanilloid 1, TRPV1)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide, CGRP)蛋白表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠UI指数评分升高,胃黏膜组织表面出现充血、糜烂等病理表现,提示模型制备成功。与正常组相比,模型组大鼠TNF-α、IL-6浓度上升(P<0.05);EGF浓度下降(P<0.05);TFF1浓度有下降趋势,但无统计学意义(P>0.05);TRPV1、CGRP蛋白表达水平上升(P<0.05)。与模型组相比,预灸组和预针刺组大鼠TNF-α、IL-6浓度下降(P<0.05);EGF水平上升(P<0.05);TFF1浓度有上升趋势,但无统计学意义(P>0.05);预灸组和预针刺组大鼠TRPV1、CGRP蛋白表达水平下降(P<0.05)。与预针刺组相比,预灸组大鼠TNF-α、IL-6浓度下降(P<0.05);EGF水平上升(P<0.05);TFF1浓度有上升趋势,但无统计学意义(P>0.05);TRPV1、CGRP蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 针灸预处理可能是通过调节TRPV1、CGRP蛋白表达水平实现对急性胃黏膜损伤大鼠保护效应的。

加巴喷丁对感染后咳嗽大鼠肺组织瞬时受体电位香草酸亚型1、P物质、降钙素基因相关肽的影响研究

目的:观察加巴喷丁对感染后咳嗽(PIC)大鼠肺泡灌洗液(BALF)和肺组织瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量的影响,探讨加巴喷丁对PIC气道神经源性炎症的干预作用。方法:60只大鼠随机分为三组:正常组、模型组和西药组(加巴喷丁组)。依据文献方法建立PIC大鼠模型。每组大鼠经过相应处理共10d,观察3min内大鼠咳嗽次数的变化,各组大鼠BALF、血清中TRPV1、SP、CGRP含量采用ELISA法检测,肺组织TRPV1、SP、CGRP蛋白表达采用免疫组化检测,并进行半定量评分,支气管和肺组织标本行HE染色,光镜观察其病理改变。结果:①咳嗽次数比较:模型组大鼠咳嗽次数明显增多,与正常组相比,差异有统计学意义(P<0.05);经西药干预后,大鼠咳嗽次数明显减少,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②各组大鼠BALF中TRPV1、SP、CGRP含量比较:正常组大鼠BALF中TRPV1、SP、CGRP均轻度表达,模型组以上各指标均明显升高,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05);经西药干预后,西药组大鼠BALF中TRPV1、SP、CGRP表达均减低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠肺组织病理学变化:正常组支气管黏膜无水肿,可见少量炎性细胞浸润。模型组支气管黏膜水肿,上皮脱落,肺泡壁轻度水肿,上皮变性、坏死、脱落,间质充血、水肿,可见大量炎性细胞浸润。西药组病理改变类似模型组,但总体炎性改变较模型组轻。各组大鼠肺组织TRPV1、SP、CGRP免疫组化检测结果比较:与正常组比较,模型组、西药组大鼠肺组织TRPV1、SP、CGRP蛋白均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,西药组大鼠肺组织TRPV1、SP、CGRP蛋白表达减低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加巴喷丁能够减少PIC大鼠BALF和肺组织TRPV1、SP、CGRP的表达,可能是通过干预TRPV1、SP、CGRP来降低PIC气道神经源性炎症。

抑制瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型通道对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后细胞凋亡与新生血管生成的作用

目的探讨抑制瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)通道对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)细胞凋亡和血管形成的影响。方法将30只SD大鼠分为对照组、RIRI组和RIRI+HC-067047组,每组10只。采用高眼压法建立大鼠RIRI模型,RIRI+HC-067047组在造模后5、10 h通过侧脑室注射HC-067047(5μmol/μL),对照组和RIRI组给予同等剂量的生理盐水。测量各组大鼠治疗后第7天、第14天与第21天的体质量,于治疗第21天观察大鼠视网膜组织形态变化和视网膜组织神经细胞凋亡情况,检测各组大鼠视网膜组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白阳性表达情况,VEGF、核因子E2相关因子2(Nrf2)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的相对表达水平,以及色素上皮衍生因子(PEDF)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、Caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的相对表达水平。结果与对照组比较,治疗后第21天RIRI组大鼠体质量下降,RIRI组和RIRI+HC-067047组视网膜组织神经细胞凋亡增加,Caspase-3、VEGF蛋白阳性表达率增加,Nrf2、VEGF、HIF-1αmRNA相对表达水平升高,PEDF、Bcl-2蛋白表达水平下降而GFAP、Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与RIRI组比较,治疗后第21天,RIRI+HC-067047组视网膜神经细胞凋亡数目减少,Caspase-3、VEGF蛋白阳性表达率下降,Nrf2、VEGF、HIF-1αmRNA相对表达水平下降,PEDF、Bcl-2蛋白表达水平升高而GFAP、Caspase-3、Bax蛋白表达水平下降(均P<0.05)。结论抑制TRPV4通道可改善大鼠RIRI,其机制可能与抑制视网膜细胞凋亡与减少血管新生有关。

瞬时受体电位香草酸亚型1激活通过抑制线粒体通透性转换孔开放保护急性心肌梗死小鼠的心肌细胞抗凋亡

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)在心肌缺血激活后可传导心绞痛信号,释放神经肽,减轻心肌梗死后的心肌细胞凋亡。目前,TRPV1激活抑制心肌梗死后细胞凋亡的具体机制尚不清楚。线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放与心肌细胞缺血再灌注损伤密切相关,抑制其开放可保护心肌缺血后的心肌细胞抗凋亡。本研究证明,TRPV1激活通过抑制MPTP开放而减少心肌细胞凋亡。首先,本研究利用左冠状动脉前降支结扎术建立了TRPV1基因敲除(TRPV1-/-)和野生型(WT)小鼠心肌梗死模型,辅以环孢素A(CSA)预处理抑制MPTP开放,比较观察TRPV1、MPTP在心肌梗死中的作用。心肌组织切片氯化三苯基四氮唑(TTC)染色显示,心肌缺血24 h,TRPV1-/-小鼠的心肌梗死面积明显大于WT型小鼠。而经CSA预处理的TRPV1-/-小鼠比TRPV1-/-小鼠梗死面积明显减小。TUNEL检测心肌细胞凋亡指数(AI)揭示,WT型心肌梗死小鼠的AI明显低于TRPV1-/-心肌梗死小鼠,而CSA预处理明显降低TRPV1-/-小鼠心肌细胞的AI。Western印迹检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、Bcl-2、Bax、p53和细胞色素C(Cyt-C)水平。结果证明,TRPV1的激活可抑制MPTP的开放,减少线粒体Cyt-C的外溢,降低胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3的表达。GENMEN光度法检测MPTP开放实验显示,激活的TRPV1明显抑制了MPTP的开放。本研究证实,急性心肌梗死后的TRPV1激活可能通过抑制MPTP开放而抵抗心肌细胞凋亡,对心肌起保护作用。