基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

基于药效团和分子对接探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1介导的减毒机制

目的:本研究利用药效团、分子对接及实时反转录PCR(RT-PCR)方法探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1(TRPV1)介导的减毒机制。方法:采用Discovery Studio 4.0软件构建基于TRPV1激动剂分子共同特征的TRPV1激活药效团,虚拟筛选出草乌中的潜在活性成分;对草乌成分及诃子制草乌中引入的诃子成分进行Autodock vina分子对接研究;根据结果选出代表性成分,采用实时反转录PCR验证是否可促进心肌细胞中TRPV1 mRNA表达。结果:药效团共筛选出草乌中包括毒性较大的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱及次乌头碱在内的13个成分,分子对接结果表明这13个成分及诃子制草乌引入的诃子成分均有潜力与TRPV1结合。RT-PCR实验中没食子酸和新乌头碱在浓度≥25μmol/L时,均可明显促进大鼠H9c2心肌细胞中TRPV1 mRNA表达的增加,随着给药浓度的增大表达量增加,新乌头碱促进TRPV1 mRNA表达的作用更强。药效团、分子对接结果表明诃子和草乌中均含有多种具备TRPV1激活潜力的成分。结论:实验证明新乌头碱、没食子酸均可在一定程度上激活TRPV1通道,可作为TRPV1的激动剂。根据结果推测,诃子可能会通过拮抗草乌中的活性成分与TRPV1的结合,从而降低草乌通过TRPV1介导的毒性;也可能是诃子制草乌在引入没食子酸等诃子成分后,可在安全剂量范围内使TRPV1通道快速脱敏从而实现减毒。

合募配穴针刺对肠易激综合征模型大鼠脊髓背根神经节PAR-2、TRVP1及相关致敏细胞因子表达的影响

目的观察合募配穴针刺对肠易激综合征(IBS)大鼠脊髓背根神经节(DRG)蛋白酶活化受体-2(PAR-2)、P物质(SP)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)和降钙素相关肽(CGRP)表达的影响,探讨合募配穴针刺对内脏高敏感性的可能作用机制。方法采用雄性SD大鼠慢性应激结合束缚法制备肠易激综合征模型。随机分为空白组、模型组、合募针刺组和药物组。造模成功后,合募针刺组对大肠下合穴上巨虚和募穴天枢穴进行电针干预;药物组给予匹维溴胺灌胃。采用腹部回撤反射(AWR)对大鼠进行内脏敏感性评估并观察大鼠体质量变化情况,用免疫组织化学方法检验脊髓L5-S1段PAR-2、TRVP1、SP和CGRP的表达。结果 AWR评分中,治疗前合募针刺组和模型组与空白组比较差异明显(P<0.01),治疗后合募针刺组与模型组比较有显著性差异(P<0.01),针刺治疗IBS内脏高敏感性有效;治疗后模型组大鼠与空白组比较,脊髓背根神经节中PAR-2、SP、TRVP1和CGRP的IOD值显著升高(P<0.01);合募针刺组和药物组与模型组比较,脊髓背根神经节中PAR-2、SP、TRVP1和CGRP的IOD值明显降低(P<0.01)。结论合募配穴针刺干预机制可能是通过PAR-2、TRVP1降低SP和CGRP在DRG神经元中的表达来降低IBS大鼠的内脏高敏感性。

PAR4在背根神经节感觉神经元的表达及与TRPV1和CGRP的共存

目的:研究蛋白酶活化受体4(PAR4)在小鼠背根神经节(DRG)感觉神经元的表达,及与瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)和降钙素基因相关肽(CGRP)的共存,为探讨PAR4在感觉神经伤害性刺激信号传导中的作用提供形态学依据。方法:免疫荧光组织化学双标方法结合激光共聚焦显微镜技术。结果:DRG内大量的感觉神经元表达PAR4。PAR4阳性胞体多为中、小型神经元,并可见部分阳性神经纤维。免疫荧光双标显示许多PAR4阳性神经元表达TRPV1或与CGRP共存。几乎所有的TRPV1阳性神经元均表达PAR4,大部分CGRP标记神经元呈PAR4阳性,另外还可见到许多CGRP/TRPV1双标神经元。结论:小鼠DRG初级感觉神经元广泛的表达PAR4,该受体可能通过影响TRPV1和CGRP参与伤害性刺激的调节。

芩百清肺浓缩丸对感染后咳嗽豚鼠SP、M2受体及TRPV1的影响

目的:分析芩百清肺浓缩丸治疗感染后咳嗽(PIC)的效应机制。方法:烟熏、辣椒素雾化吸入联合脂多糖腹腔注射进行PIC造模。以阿斯美为对照,0.14 g/m芩百水溶液以1 mL/100 g体质量灌胃给药10 d。辣椒素雾化吸入诱咳。ELISA法测定血清P物质(SP),支气管肺泡灌洗液(BALF)中SP、瞬时感受器电位阳离子通道香草酸受体1(TRPV1)含量。RT-PCR法测定BALF和肺组织中TRPV1、M2受体mRNA水平。Western Blot法检测肺组织TRPV1、M2受体蛋白表达水平。结果:与模型组比较,芩百组与阿斯美组血清和BALF中SP含量显著减少(P<0.05),BALF中TRPV1含量显著减少(P<0.05),BALF中TRPV1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),肺组织中TRPV1蛋白表达显著降低(P<0.05),BALF和肺组织M2受体mRNA表达水平、肺组织M2受体蛋白表达显著增加(P<0.05)。与阿斯美组比较,芩百组BALF中SP含量显著减少(P<0.05),肺组织TRPV1 mRNA表达水平显著增加(P<0.05),肺组织M2受体mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05),BALF中M2受体mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论:TRPV1激活在PIC发病中作用更大。芩百清肺浓缩丸能够降低PIC的SP水平、降低TRPV1基因表达、修复和上调M2受体。

TRPV1通道蛋白在呼吸系统的研究进展

瞬时感受器电位离子通道蛋白（transient receptor potential ion channel protein，TRP）是细胞膜或细胞器膜上的一类非选择性Ca2＋通道蛋白，通过影响细胞内Ca2＋浓度来发挥众多的生理、病理功能。在TRP家族中，瞬时感受器电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid1 ，TRPV1）是目前分布最广、研究最多、最为关注的TRP通道蛋白，多数研究发现TRPV1在炎症的产生和痛觉的传递中发挥重要作用。本文就TRPV1在呼吸系统中的表达、功能调节和临床应用等方面作一综述。

检测TNFα与PTEN在肝细胞癌中的价值研究

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌最常见的类型,大约占所有原发性肝癌的70%-90%[1-3]。HCC的早发现、早治疗是提高患者生存率的关键要素。Jianjun Zhu等发现,肿瘤坏死因子α(TNFα)能够通过瞬时受体电位通道促使Ca^(2+)从细胞外流入细胞内,从而激活钙蛋白酶/IAP/caspase3信号通路促进HCC细胞凋亡[4]。Hang X等发现NEDD4基因沉默将导致磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达增加,从而使STAT3、AKT和ERK1/2表达失活,最终抑制HCC细胞生长[5]。Zhang G等实验表明MAGI1能够通过上调PTEN表达从而抑制HCC细胞的迁移和侵袭[6]。本试验通过检测HCC患者TNFα与PTEN表达水平,分析二者在HCC中的诊断价值。

半夏调中颗粒介导MC-PAR-2-TRPV1通路调控非糜烂性反流病大鼠模型内脏高敏感的作用机制

目的通过观察半夏调中颗粒干预非糜烂性反流病(NERD)内脏高敏感性模型大鼠的痛觉行为学改变、组织学变化以及内脏高敏感相关因子的表达,探讨半夏调中颗粒治疗NERD的机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为6组,造模后对照组与模型组予以生理盐水干预;半夏调中颗粒组与奥美拉唑组分别予以相应药物干预;PAR-2拮抗剂组予以PAR-2拮抗剂干预;半夏调中颗粒+PAR-2激动剂组予以半夏调中颗粒和PAR-2激动剂同时干预。14天后观察大鼠一般情况、机械缩足反射阈值、食管组织形态改变、肥大细胞计数、RT-PCR及Western Blot法检测食管组织PAR-2、TRPV1、CGRP及SP表达。结果与对照组相比,模型组大鼠敏感阈值降低(P<0.05),食管组织可见微炎性改变,肥大细胞计数增高(P<0.05),PAR-2等内脏高敏感相关因子蛋白与mRNA表达升高(P<0.05);与模型组相比,PAR-2拮抗剂组、半夏调中颗粒组、奥美拉唑组大鼠的敏感阈值降低(P<0.05),食管组织炎性改变不明显,肥大细胞计数下降(P<0.05),PAR-2等因子表达均不同程度地降低(P<0.05);而半夏调中颗粒+PAR-2激动剂组与模型组无明显差异(P>0.05)。结论半夏调中颗粒能通过介导肥大细胞-PAR-2-TRPV1通路,下调CGRP、SP等神经递质的表达水平,缓解NERD模型大鼠的食管内脏高敏感状态,可能是其治疗NERD的作用机制之一。

火针对化疗所致神经病理性疼痛大鼠外周敏化的镇痛作用机制

目的:从外周敏化角度探讨火针治疗奥沙利铂诱导的神经病理性疼痛(NP)大鼠外周敏化的镇痛机制。方法:SD大鼠随机分为正常组(n=6)、模型组(n=6)、火针组(n=6)和药物组(n=6)。采用腹腔注射奥沙利铂(4 mg/kg)建立NP大鼠模型。造模后的第1、3、5天(即实验的第24、26、28天),火针组行火针L4—L6“夹脊”治疗,药物组行普瑞巴林(100 mg/kg)腹腔注射治疗。Von Frey丝检测大鼠缩足阈值(PWT)代表机械痛阈值,ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、趋化因子12(CXCL12)含量,HE染色法观察大鼠穴区皮肤病理形态,甲苯胺蓝染色法观察各组大鼠穴区皮肤肥大细胞数量,免疫组织化学法检测大鼠穴区皮肤类胰蛋白酶(TPS)、瞬时受体电位香草酸通道1(TRPV1)、蛋白酶活化受体2(PAR2)阳性表达,Western blot法检测大鼠背根神经节(DRG)中TRPV1和PAR2蛋白的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠造模后的PWT降低(P<0.05),血清IL-6、TNF-α、CXCL12含量升高(P<0.05),穴区皮肤肥大细胞数量增加(P<0.05),穴区皮肤TPS、TRPV1和PAR2蛋白阳性表达升高(P<0.05)。与模型组相比,火针组和药物组大鼠干预后的PWT升高(P<0.05),血清IL-6、TNF-α、CXCL12含量,穴区皮肤TPS、TRPV1、PAR2蛋白阳性表达降低(P<0.05);药物组DRG中TRPV1和PAR2蛋白表达量降低(P<0.05)。HE染色结果显示,模型组大鼠穴区表皮层增厚,细胞排列层次紊乱,细胞间水肿明显,真皮层内可见大量炎性细胞浸润;药物组、火针组穴区表皮层较薄,细胞排列层次较清晰,组织水肿和炎性细胞浸润情况均较模型组减轻。结论:火针可以改善奥沙利铂诱导的NP大鼠的机械痛阈、降低外周炎性因子的水平,该作用可能与抑制肥大细胞活化,抑制穴区局部TPS、TRPV1和PAR2蛋白的表达有关。

YZG-330通过P38 MAPK信号通路调节TRPM8离子通道发挥降温作用

实验室前期研究发现化合物YZG-330能够使小鼠降低体温,该作用可被腺苷A1受体(adenosine A1 receptor,A1R)拮抗剂DPCPX拮抗,本文基于A1R下游信号通路对YZG-330的作用机制进行进一步探究。通过测量小鼠肛温进行YZG-330药效学评价;采用Western blot技术检测小鼠下丘脑组织匀浆中瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)离子通道和P38蛋白及其磷酸化水平;通过Ca^(2+)荧光探针Fluo-3AM负载细胞,检测YZG-330对小鼠下丘脑细胞内Ca^(2+)含量的影响。YZG-330可剂量依赖性地降低小鼠体温,P38选择性抑制剂SB-203580(20 mg·kg^(-1),i.p.)可显著抑制YZG-330的降温作用。TRPM8拮抗剂(每只小鼠0.1μg,i.c.v.)可以部分拮抗YZG-330(0.25 mg·kg^(-1)和1 mg·kg^(-1),i.p.)的降温效果。腹腔注射给予小鼠YZG-330(2 mg·kg^(-1),i.p.)可显著上调小鼠下丘脑组织中P38磷酸化水平,A1R拮抗剂DPCPX(5 mg·kg^(-1),i.g.)可有效抑制该变化;YZG-330还可显著上调小鼠下丘脑组织中TRPM8表达量,SB-203580可非常显著地抑制YZG-330引起的TRPM8上调;YZG-330(0.1~10μmol·L^(-1))可剂量依赖性地升高小鼠下丘脑细胞内Ca^(2+)浓度,A1R抑制剂DPCPX(0.5和1μmol·L^(-1))与TRPM8拮抗剂(1μmol·L^(-1))均可抑制YZG-330的升高胞内Ca^(2+)浓度的作用。综上所述,YZG-330发挥降温作用的机制之一是通过激活A1R,促进P38蛋白磷酸化,进而上调TRPM8离子通道表达量并激活该通道开启,导致胞内Ca^(2+)含量上升,通过负调节下丘脑体温调定点导致体温下降。本文中所有动物实验均获得中国医学科学院药物研究所伦理委员会批准。

利用知识发现工具Arrowsmith探讨龙血竭及其有效成分治疗缺血性脑卒中的潜在作用机制

目的:探讨龙血竭治疗缺血性脑卒中的可能机制。方法:运用非相关文献知识发现工具Arrowsmith在线软件,通过分析龙血竭和缺血性脑卒中两个主题词文献集合的中间词,探求潜在机制。结果:Arrowsmith软件的初步探索结果显示龙血竭及其有效成分对环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV_1),一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS),电压门控性钾通道1.3(voltage-gated potassium channel 1.3,Kv1.3)及转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)具有调节作用,同时在缺血性脑卒中过程中上述指标也出现异常表达。结论:龙血竭治疗缺血性脑卒中的机制可能与下调缺血性脑组织中COX-2和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达、拮抗TRPV_1和Kv1.3通道、上调内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和TGF-β_1的表达有关,可为进一步开展机制验证性研究提供参考。

针刺合募配穴对肠易激综合征大鼠结肠内脏高敏相关因子的影响

目的:观察针刺合募配穴对肠易激综合征(IBS)大鼠结肠组织中类胰蛋白酶(Try)、蛋白酶活化受体2(PAR-2)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV 1)、P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,探讨针刺合募配穴治疗IBS的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组和合募针刺组,每组10只。采用慢性应激结合束缚方法建立IBS大鼠模型。合募针刺组针刺"上巨虚""天枢"穴,30min/d,药物组予匹维溴胺(15mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,均治疗14d。观察大鼠体质量,检测大鼠结直肠扩张(CRD)容量阈值和腹壁回撤反射(AWR)评分,甲苯胺兰染色法观察结肠组织肥大细胞(MC)计数,免疫组化法检测结肠组织Try表达水平,Western blot法检测结肠组织中PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP的表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠体质量显著降低(P<0.01),在CRD检测中腹部抬高和臀部抬高容量阈值明显降低(P<0.01),AWR评分、结肠组织MC计数及Try、PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,药物组、合募针刺组大鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.05),在CRD检测中腹部抬高和臀部抬高容量阈值明显升高(P<0.05,P<0.01),AWR评分、结肠组织MC计数及Try、PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP表达水平均显著降低(P<0.01)。合募针刺组结肠组织PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP表达水平较药物组降低更显著(P<0.05)。结论:针刺合募配穴可降低IBS大鼠结肠组织中Try、PAR-2、TRVP 1、SP和CGRP的表达水平,减轻IBS的高敏反应。