瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6对子宫内膜癌细胞周期的调控作用

目的探讨子宫内膜癌组织中瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员6(TRPC6)的表达变化及其对子宫内膜癌细胞周期的调控作用。方法应用qRT-PCR技术和蛋白质印迹法检测30例正常子宫内膜、30例不典型增生和32例子宫内膜癌组织中TRPC6的表达。分别用SKF59636(TRPC6阻断剂)和小干扰RNA(siRNA)干扰两种方法阻断TRPC6的作用,观察子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞周期的变化。结果子宫内膜癌组织中的TRPC6 mRNA和蛋白表达量均高于不典型增生组织和正常子宫内膜组织(P<0.01)。SKF96365呈剂量依赖性方式将细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少;转染siRNA可将子宫内膜癌细胞阻滞于G2/M期,使G0/G1期细胞减少,同时上调磷酸化细胞分裂周期蛋白2(pCDC2)的表达。结论子宫内膜癌组织中TRPC6表达增高,TRPC6可能通过影响pCDC2蛋白表达参与子宫内膜癌细胞周期调控。

桔梗素D通过下调成纤维细胞TRPC6表达改善小鼠肺纤维化

目的探究桔梗素D(PD)对肺纤维化的影响及其机制。方法博来霉素(BLM)气道内滴入构建C57BL/6J小鼠肺纤维化模型,再予PD(10 mg/kg)灌胃,28 d后处死小鼠。分组如下:对照组(control)、BLM(10 mg/kg)模型组、BLM(10 mg/kg)+PD(10 mg/kg)组。肺组织石蜡切片HE染色、免疫组化和天狼星红染色评估小鼠肺组织纤维化程度和瞬时受体电位离子通道亚族C成员6(TRPC6)的表达与分布。Westernblot检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。小鼠原代肺成纤维细胞体外培养,分别用PD、TRPC6抑制剂醋酸落叶松酯(LA)预处理后加入转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞,根据加入的TGF-β1和PD浓度不同分组如下:control组、TGF-β1(10 ng/mL)组、PD(2.5μmol/L)+TGF-β1组、PD(5μmol/L)+TGF-β1组和PD(10μmol/L)+TGF-β1组,LA处理分组如下:control组、TGF-β1(10 ng/mL)组和LA(10μmol/L)+TGF-β1组,测定细胞存活率、collagenⅠ、α-SMA和TRPC6的表达水平、活性氧(ROS)生成水平、线粒体膜电位、细胞增殖能力等指标。利用网络药理学方法结合文献分析PD作用于肺纤维化可能通过的机制。结果PD可明显减轻BLM诱导小鼠模型的肺部纤维化程度、减少α-SMA表达(P<0.05)。CCK-8结果显示PD、TGF-β1和LA的最适宜刺激浓度分别是10μmol/L、10 ng/mL和10μmol/L;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色结果显示PD能够有效抑制肺成纤维细胞增殖;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色显示PD能有效减少TGF-β1诱导的细胞ROS生成(P<0.0001);线粒体膜电位检测(Jc-1染色)结果显示PD能有效缓解TGF-β1诱导的细胞线粒体膜电位下降(P<0.001);蛋白电泳结果显示PD能显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA和collagenⅠ的表达(P<0.05)。网络药理学结合文献分析发现PD可能通过TRPC6作用于肺纤维化。免疫组织化学结果显示PD明显减轻了BLM诱导的肺组织TRPC6表达。蛋白电泳结果显示PD可明显抑制TGF-β1诱导的TRPC6表达(P<0.05);使用LA可明显抑制细胞TRPC6、α-SMA、collagenⅠ的表达(P<0.05)。结论PD可降低小鼠肺纤维化,其机制可能与下调TRPC6并减少ROS产生有关。

子宫内膜息肉患者TRPC3和TRPC6蛋白表达的临床意义及与孕酮抵抗的相关性研究

目的探究子宫内膜息肉中瞬时受体电位通道C亚族3(TRPC3)、瞬时受体电位通道C亚族6(TRPC6)蛋白表达与孕酮抵抗的相关性。方法选取石家庄市第六医院2021年2月至2023年2月期间收治的65例子宫内膜息肉患者作为子宫内膜息肉组,于同期同一医院选取65例因不孕症进行宫腔镜检查的患者作为正常子宫内膜对照组。采用免疫组化法检测正常子宫内膜组织和子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6、孕酮受体(PR)蛋白表达情况;采用Spearman等级相关分析探究子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6与PR的相关性;采用Logistic回归分析子宫内膜息肉发生的影响因素。结果子宫内膜息肉组和正常子宫内膜对照组慢性子宫内膜炎、肥胖所占比例比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与正常子宫内膜组织相比,子宫内膜息肉组织中TRPC3蛋白(56.92%vs.84.46%,χ^(2)=12.048,P=0.001)、TRPC6蛋白(53.85%vs.83.08%,χ^(2)=12.861,P<0.001)阳性表达率升高,PR蛋白(86.15%vs.46.15%,χ^(2)=23.224,P<0.001)阳性表达率降低。Spearman等级相关性分析显示,子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6与PR表达呈负相关(r=-0.289、-0.323,P<0.05);TRPC3、TRPC6、慢性子宫内膜炎、肥胖是影响子宫内膜息肉发生的相关因素(P<0.05)。结论子宫内膜息肉组织中TRPC3、TRPC6与PR表达呈负相关,且是发生子宫内膜息肉的影响因素。

去窦弓神经对自发性高血压大鼠主动脉TRPC3及TRPC6表达的影响

目的:研究去窦弓神经(Sinoaortic denervated,SAD)对自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rat,SHR)主动脉瞬时受体电位通道C3(Transient receptor potential canonical 3,TRPC3)及TRPC6亚型表达的影响,探讨TRPC3及TRPC6与血压变异(Blood pressure variability,BPV)的关系。方法:14只10周龄雄性SHR随机分为SAD组和假手术组,各7只。术后8周在清醒、自由活动状态下测定两组大鼠24 h动脉血压及BPV,采用逆转录多聚酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测主动脉组织TRPC3及TRPC6信使核糖核苷酸(Messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)与免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测其蛋白的表达。结果:术后8周,两组大鼠24 h平均收缩压(Systolic blood pressure,SBP)和舒张压(Diastolic blood pressure,DBP)比较无显著性差异;SAD组24 h收缩压变异(Systolic blood pressure variability,SBPV)显著高于假手术组大鼠(P<0.05),SAD组24 h舒张压变异(Diastolic blood pressure variability,DBPV)亦显著高于假手术组大鼠(P<0.01),主动脉组织TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达均显著高于假手术组大鼠(P<0.01),差异均有统计学意义。结论:SAD组大鼠SBPV和DBPV升高,同时TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达升高,提示TRPC3及TRPC6的升高与其BPV升高密切相关,TRPC3及TRPC6可能参与BPV的调控。

TRPC6在结节性硬化症癫痫患者皮层脑组织中的表达

目的研究瞬时受体电位通道蛋白C6(TRPC6)在结节性硬化症(TSC)癫痫患者皮层脑组织的表达与分布,探讨TRPC6通道参与结节性硬化致痫的可能机制。方法收集手术切除并经病理检测证实是TSC癫痫患者的皮层脑组织标本18例,与7例正常对照皮层脑组织比较,通过采用Western blot、免疫组化、免疫荧光双标,检测TRPC6在正常脑组织与TSC病理标本中的表达分布情况。结果 Western blot蛋白检测结果显示,在TSC和对照大脑皮质(CTX)TRPC6均在相应的分子量94KDa处有特异性蛋白条带,与CTX比较,TSC组TRPC6条带与内参GAPDH条带灰度值之比显著增高(P<0.05);免疫组化及免疫荧光双标结果显示,TRPC6在TSC病灶中免疫强度明显增高,且特异性高表达于皮层损伤区致痫灶中的异构神经元,包括特征性的巨形细胞(GCs)、异形神经元(DNs)。结论 TRPC6在结节性硬化症患者致痫皮层脑组织中表达异常增高,特异性的细胞分布模式可能与癫痫发病密切相关。

TRPC6在肝细胞癌发生发展中的作用及机制研究

肝癌分原发性和继发性两种,起源于肝脏上皮的称为原发性肝癌,其中90%以上为肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC),是全球第6大常见恶性肿瘤,且是肿瘤致死的第3位常见原因,其发病率还在逐年上升。肝细胞癌发病机制不完全明确,治疗方面效果欠理想。研究表明,肝细胞癌的发生发展与细胞内的钙信号关系密切。