蜂针疗法对银屑病样小鼠模型皮肤中TRPV1、TRPM8含量的影响

目的:观察蜂针疗法对咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型疗效,并观察其对TRPV1和TRPM8的影响。方法:40只白变种实验室(BALB/c)小鼠随机分为空白对照组3只和银屑病模型组37只,银屑病建模成功27只后再随机分为模型组、本维莫德乳膏组(阳性对照组)和蜂针疗法组,每组各9只。从实验第22天开始治疗,阳性治疗组外涂本维莫德乳膏1次/d,10 mg/次;蜂针疗法组每周采用蜂针治疗1次,1针/次,留针2 s后拔除,共3周。观察各组小鼠皮损情况,并应用HE染色观察皮损病理状态;免疫组化法观察皮损中TRPV1、TRPM8的表达情况;ELISA法检测IL-17水平;RT-PCR法检测皮损处TRPV1和TRPM8 mRNA表达水平。结果:实验结束时,阳性对照组、蜂针疗法组血清IL-17含量与治疗前相比显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后与模型组相比,血清IL-17含量亦下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。蜂针治疗后模型小鼠皮损中TRPV1表达含量较空白对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);阳性对照组、蜂针疗法组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。蜂针治疗后,蜂针疗法组小鼠皮损中TRPM8含量较模型组显著降低(P<0.05),阳性对照组下降不明显(P>0.05)。结论:蜂针治疗能有效改善银屑病患者皮疹及咪喹莫特诱导银屑病样小鼠皮损,同时发现蜂针治疗后皮损中TRPV1含量有所恢复、TRPM8含量有所减少,可见银屑病的发生与皮肤中冷热敏通道存在密切关系。

瞬时受体电位通道M8调控NCR1/NKP46通路抑制胶质瘤细胞免疫逃逸的作用研究

目的:探讨瞬时受体电位通道M8(TRPM8)对胶质瘤细胞免疫逃逸的影响,并初步探究可能的作用机制。方法:通过实时荧光定量PCR法检测人正常胶质细胞株(SVGp12)与3种胶质瘤细胞株(U251、U373、T98G)中TRPM8基因表达;将U251细胞随机分为空白对照组、TRPM8-siRNA组、NC-siRNA组、pcDNA3.1-TRPM8组和pcDNA3.1-NC组,利用脂质体分别将TRPM8-siRNA、NC-siRNA、pcDNA3.1-TRPM8和pcDNA3.1-NC转染至U251细胞中,采用实时荧光定量PCR法和Western blot检测细胞中TRPM8基因和蛋白表达,CCK-8法、集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖、克隆形成及凋亡情况,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK92细胞对U251细胞的杀伤作用,ELISA法检测TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ水平,流式细胞术、Western blot检测细胞调节区域因子1(NCR1)与自然杀伤因子蛋白46(NKP46)的表达。结果:3种胶质瘤细胞株U251、U373、T98G中TRPM8 mRNA表达水平均显著高于正常胶质细胞株SVGp12,其中U251细胞最高;与空白对照组相比,TRPM8-siRNA组TRPM8 mRNA和蛋白的相对表达量均下调(P<0.01),细胞活性下降(P<0.05),细胞克隆形成数目减少(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01),NK92细胞对U251细胞的杀伤率提高(P<0.01),细胞上清液中TNF-α、IL-2、IL-6及IFN-γ水平均下降(P<0.01),同时,NCR1、NKP46表达也明显增加(P<0.01);与空白对照组相比,pcDNA3.1-TRPM8组TRPM8 mRNA和蛋白的相对表达量均上调(P<0.01),细胞活性升高(P<0.05),细胞克隆形成数目增加而凋亡率下降(P<0.01),NK92细胞对U251细胞的杀伤率下降(P<0.01),细胞上清液中TNF-α、IL-2、IL-6及IFN-γ水平均升高(P<0.01),NCR1、NKP46表达减少(P<0.01)。结论:抑制TRPM8表达能够调控胶质瘤微环境中免疫抑制状态,增强NK92细胞杀伤U251细胞的能力,削弱肿瘤细胞的免疫逃逸能力,这可能与调控NCR1/NKP46通路相关。

TRPM8介导的冷刺激耐受机制

大量流行病学研究已经证明,寒冷天气会引起或加重慢性气道炎症疾病,比如哮喘及慢性阻塞性肺疾病(COPD)的咳嗽、咳痰和喘息等症状[1-2]。近年来大量的研究关注于冷空气刺激作用于气道的分子生物学机制,其中介导冷感觉的瞬时受体电位M8型(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)引起了人们高度关注。

瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立

目的建立瞬时受体电位通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型。方法通过显微注射法将pcDNA3.1-h Trpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疫印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达。结果将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系。子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加。结论通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型。

冰片通过TRPM8减轻小鼠心肌梗死后炎症反应并抑制心脏重构

目的:研究冰片(borneol)对小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)后炎症反应和心脏重构的作用及可能机制。方法:8周龄野生型(wild-type,WT)C57BL/6小鼠和瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(transient receptor potential cation channel subfamily M member 8,TRPM8)基因敲除(TRPM8 gene knockout,TRPM8−/−)小鼠随机分为假手术组和MI组,再分别用生理盐水(对照组)或冰片(冰片组)灌胃。绘制小鼠MI后生存曲线,28 d后超声心动图检测心脏功能,多导生理记录仪测量血流动力学参数,病理染色观察MI面积、心肌肥大和间质纤维化,并检测梗死交界区心肌中炎症反应情况。结果:在WT小鼠中,梗死交界区心肌组织中TRPM8表达显著增加(P<0.05),冰片对心脏中TRPM8表达无影响(P>0.05),但可提高小鼠生存率,缩小MI面积,抑制MI后心脏重构,改善心脏功能(P<0.05或P<0.01);在TRPM8−/−小鼠中,冰片对小鼠生存率、MI面积、心肌肥大、心肌纤维化和心脏功能未见明显影响(P>0.05)。在WT小鼠中,冰片可减少中性粒细胞和巨噬细胞的浸润(P<0.01),抑制炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)过度表达(P<0.05或P<0.01);而在TRPM8−/−小鼠中,冰片对炎症细胞数量和炎症因子表达未见明显影响(P>0.05)。结论:TRPM8可能是冰片在心脏的作用靶点;冰片可能通过TRPM8减轻MI后炎症反应和抑制心脏重构,改善小鼠MI后的心脏功能。

薄荷醇通过激活瞬时受体电位M8(TRPM8)促进BEAS-2B人支气管上皮细胞的细胞因子分泌

目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)在薄荷醇诱导BEAS-2B人支气管上皮细胞表达气道上皮源性细胞因子白细胞介素25(IL-25)、IL-33和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)中的作用及其相关信号转导机制。方法用2 mmol/L薄荷醇处理BEAS-2B细胞1、2、3、4 h,选择IL-25、IL-33、TSLP或Ca^(2+)表达较高的时间组,通过小干涉RNA(siRNA)特异性敲低TRPM8(si-TRPM8),采用细胞内钙离子螯合剂1,2-二(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸四乙酰氧甲基酯(BAPTA-AM)及核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)处理。CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测IL-25、IL-33和TSLP mRNA表达;ELISA检测培养上清液IL-25、IL-33和TSLP蛋白水平;Fluo-4 AM负载结合流式细胞术检测胞内Ca^(2+)荧光强度;Western blot法检测si-TRPM8对BEAS-2B细胞合成TRPM8蛋白的干扰效率及NF-κB p65蛋白表达的影响。结果与空白对照组比,薄荷醇组IL-25、IL-33、TSLP mRNA及蛋白、胞内Ca^(2+)水平和NF-κB p65蛋白表达均增加;敲低TRPM8后,抑制薄荷醇诱导的Ca^(2+)、IL-25、IL-33、TSLP和NF-κB p65表达增加,BAPTA-AM和PDTC均可抑制薄荷醇诱导的IL-25、IL-33和TSLP的高表达。结论薄荷醇通过激活TRPM8引起Ca^(2+)浓度升高、激活NF-κB通路诱导BEAS-2B支气管上皮细胞IL-25、IL-33和TSLP的分泌。

瞬时受体电位通道M8在冷刺激致骨关节炎中的作用

瞬时受体电位通道（TRP）M8是一种非选择性阳离子通道蛋白,广泛分布于各种细胞组织中。该通道能被22℃-27℃的冷刺激或冷却剂如薄荷醇激活,产生Ca^2＋内流为主的跨膜电压变化,参与冷感觉形成,并具有调控疼痛及细胞增殖、分化、凋亡的作用。该文就TRPM8在冷刺激致骨关节炎中的作用作一综述。

瞬时受体电位M8离子通道功能及其翻译后修饰调节机制

瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)又称冷及薄荷醇感受器,位于细胞膜或细胞器膜上,是瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道超家族中的一员。TRPM8通道分布广泛,是一个非选择性阳离子通道,可作为冷热传感器和冷痛传感器进行信号传导,参与众多生物过程的调节,在维持细胞内外稳态、控制离子进出细胞方面具有重要作用。研究发现,蛋白质翻译后修饰(post-translational modification,PTM)通过调控TRPM8通道的功能,进而影响多种疾病的发生和发展。因此,探究TRPM8的翻译后修饰的过程,对深入了解TRPM8的功能及调控机制是十分必要的。目前,已报道的TRPM8翻译后修饰包括磷酸化、泛素化和糖基化等,它们能够调控蛋白质的相互作用和改变TRPM8离子通道的活性,从而调控细胞增殖、迁移和凋亡。值得注意的是,TRPM8的表达与前列腺癌、膀胱癌和乳腺癌等多种癌症密切相关。本文将从TRPM8离子通道的结构出发,系统地阐述TRPM8蛋白翻译后修饰和激动剂、拮抗剂以及一些蛋白质对TRPM8通道活性的调节,同时总结TRPM8在前列腺癌、膀胱癌和乳腺癌中的新进展,为癌症治疗提供新方向和新思路。

果王素对Lewis肺腺癌小鼠移植瘤瞬时受体电位M8的影响

目的观察果王素(Kiwi fruit essence)对C57BL/6J小鼠接种Lewis肺腺癌细胞后移植瘤生长的影响并探讨其作用机制。方法将32只接种Lewis肺腺癌细胞的C57BL/6J小鼠按随机数字表法分成4组:对照组、低剂量果王素组(60mg/kg)、中剂量果王素组(120mg/kg)、高剂量果王素组(240mg/kg),每组8只。Lewis肺腺癌细胞接种于小鼠后第4天,对照组给予0.3ml生理盐水灌胃,每日1次,果王素组分别给予0.3ml相应剂量药物进行干预,每日1次,小鼠于接种肿瘤细胞后第24天均断颈法处死并剥离皮下移植瘤。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测小鼠移植瘤瞬时受体电位M8(Transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)mRNA表达水平, Western blot法检测TRPM8蛋白表达水平。结果与对照组相比,果王素组小鼠皮下移植瘤体积、质量均不同程度减小,皮下移植瘤组织TRPM8 mRNA和蛋白表达均不同程度降低(P<0.05)。与低剂量果王素组相比,中剂量和高剂量果王素组小鼠皮下移植瘤体积、质量均减小,皮下移植瘤组织TRPM8 mRNA和蛋白表达均降低,且高剂量组各指标降低更明显(P<0.05)。结论果王素可通过抑制TRPM8表达抑制肺腺癌小鼠移植瘤的生长。

过表达TRPM8在SCN5A错义突变后对肥大细胞功能的影响

目的探究过表达瞬时受体电位阳离子通道M8(TRPM8)在心脏钠通道基因(SCN5A)错义突变后对肥大细胞功能的影响。方法构建TRPM8基因过表达载体及SCN5A干扰载体并分别转染入人肥大细胞HMC-1中,转染成功后用CCK8检测细胞增殖能力,qPCR、Western blot法检测TRPM8与SCN5A的表达情况,中性红染色计算肥大细胞脱颗粒百分率,比色法测定β-氨基己糖苷酶释放率。结果TRPM8基因过表达及SCN5A干扰载体成功构建;与空白对照组相比,过表达TRPM8与干扰SCN5A后均抑制了HMC-1细胞的增殖能力,过表达TRPM8对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用低于干扰SCN5A组(P<0.05);与干扰SCN5A组相比,干扰SCN5A的同时过表达TRPM8后对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用有所降低(P<0.05);与空白对照组相比,过表达TRPM8降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率,干扰SCN5A后增强了HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P<0.05);与干扰SCN5A后相比,在干扰SCN5A的同时过表达TRPM8可降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P<0.05);干扰SCN5A后可下调HMC-1细胞中TRPM8的表达(P<0.05)。结论TRPM8可以抑制SCN5A错义突变后对肥大细胞的激活作用,并可能通过调控SCN5A来减缓肠易激综合征患者疼痛等不适症状。

鞘内注射PDTC对神经病理性痛大鼠TRPM8受体表达的影响

目的探讨NF-κB参与TRPM8受体在大鼠神经病理性痛觉调制中的作用。方法鞘内置管成功的SPF级健康雄性SD大鼠36只,4～6周龄,体重180～200g,采用随机数字表法分为三组:假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和NF-κB阻滞剂PDTC组(PDTC组),每组12只。鞘内置管成功后第3天,NP组和PDTC组采用坐骨神经缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)法制备大鼠神经病理性痛模型;S组只游离坐骨神经不做损伤处理。三组大鼠术后1d开始连续鞘内注射,连续14d(2次/天),PDTC组鞘内注射PDTC 20μg/10μl(20μg PDTC溶于10μl生理盐水),注射完成后10μl生理盐水冲管,S组和NP组分别鞘内注射等容量生理盐水,三组大鼠分别于术前1d、术后1、3、7、10和14d鞘内给药后30min测定冷痛阈、热痛阈和机械痛阈。分别在术后7、14d处死大鼠,采用Western blot法检测背根神经节(DRG)中TRPM8受体和NF-κB p65蛋白含量。结果与S组比较,术后1～14dNP组冷痛阈明显降低、热痛阈明显缩短、机械痛阈明显降低(P<0.05);与NP组比较,术后3～14dPDTC组冷痛阈明显增多、热痛阈明显延长、机械痛阈明显升高(P<0.05)。与S组比较,术后7、14dNP组TRPM8受体和NF-κB p65蛋白含量明显升高(P<0.05);与NP组比较,术后7、14dPDTC组TRPM8受体和NF-κB p65蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论大鼠DRG中TRPM8和NF-κB p65表达上调参与神经病理性痛的发生发展,抑制NF-κB活化可以减少TRPM8受体的表达上调并且改善大鼠痛觉过敏的症状。

反流性食管炎模型中TRPV1与TRPM8的关系

背景:研究表明瞬时受体电位(TRP)通道在胃食管反流病(GERD)中发挥重要作用,其中TRPV1和TRPM8在反流性食管炎(RE)中是否存在联系的文献报道尚少。目的:探讨豚鼠RE模型中TRPV1和TRPM8的表达变化以及两者间的关系。方法:将30只3~4周龄雄性豚鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和模型组,每组10只。模型组予含0.5%胃蛋白酶的0.1 mol/L HCl食管灌注,阴性对照组予0.9%NaCl溶液食管灌注,每天1次,连续14 d;空白对照组自由饮用无菌水14 d。实验第15天解剖取材,观察食管下段肉眼和组织学改变,以蛋白质印迹法和(或)real⁃time PCR检测食管组织TRPV1、TRPM8、G蛋白亚基GNAQ、紧密连接蛋白和炎症细胞因子表达,以免疫荧光技术检测TRPV1、TRPM8共定位。结果:模型组可见食管黏膜充血、上皮增生、炎性细胞浸润,食管组织炎症细胞因子表达增高,紧密连接蛋白表达降低,提示RE模型制备成功。与阴性对照组相比,模型组食管组织TRPV1、GNAQ mRNA和蛋白表达增高,TRPM8 mRNA和蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。食管黏膜固有层可见TRPV1与TRPM8共表达。结论:RE模型中TRPV1与TRPM8通道间存在某种平衡机制,G蛋白耦连受体信号通路及其下游TRPV1/TRPM8可能共同参与了GERD的发生、发展。

郭江涛/杨帆研究员团队解析哺乳动物低温受体TRPM8的结构

2022年6月3日,浙江大学基础医学院郭江涛/杨帆研究员团队在《自然·通讯》(Nature Communications)在线发表了题为“Structures of a mammalian TRPM8 in closed state”的研究论文(DOI:10.1038/s41467-022-30919-y)。研究人员首先解析了小鼠瞬时受体电位(TRP)M8(MmTRPM8)在apo状态下的冷冻电镜结构,揭示了apo状态下完整的TRPM8通道孔区结构域,为解释TRPM8对钙离子的通透性提供了结构基础。

哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达

目的观察哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达。方法 SPF级雌性Balb/c小鼠16只,随机分为哮喘组和对照组,每组8只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型,末次激发后留取肺组织,采用荧光实时定量RT-PCR技术检测支气管肺组织中TRPM8与TRPA1的mRNA表达水平。结果哮喘组肺组织中TRPM8与TRPA1 mRNA水平分别为(0.619 1±0.213 1)和(0.272 2±0.167 1),明显高于对照组(0.347 1±0.221 1和0.107 9±0.041 5),差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达上调,可能是冷刺激诱发哮喘发作的分子机制。

TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义

目的观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义。方法应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达。结果免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达。TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P<0.05)。免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达。Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织。结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节。

肺腺癌表达TRPM8蛋白的意义

目的:探讨肺腺癌表达瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(TRPM8)蛋白的意义。方法:收集112例肺腺癌患者的肿瘤组织标本,对其进行4~5年临床随访。免疫组织化学染色检测肿瘤组织中TRPM8蛋白的表达,分析TRPM8蛋白表达与肺腺癌患者临床特征及预后的关系。培养A549肺腺癌细胞,通过感染慢病毒上调细胞中TRPM8蛋白的表达,CCK-8法及集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,划痕实验及Transwell实验观察细胞迁移和侵袭。培养H1299肺腺癌细胞,通过感染慢病毒上调细胞中TRPM8表达后,分别在免疫缺陷小鼠左右臀部皮下注射对应空载体细胞及上调TRPM8的细胞,分析TRPM8对移植瘤生长的影响。结果:肺腺癌组织存在TRPM8表达。TRPM8蛋白高表达的肺腺癌患者,其4~5年累积生存率高于TRPM8蛋白低表达的患者(P=0.017),且其肿瘤最大径小于低表达的患者(P=0.028)。上调A549细胞中TRPM8的表达后,细胞活力较空载体组和亲本细胞组显著减弱,形成的集落数显著减少,处于S期的细胞比例显著升高,迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01)。与空载体对照细胞株比较,上调H1299细胞中TRPM8的表达后,其在免疫缺陷小鼠皮下的移植瘤生长速率显著下降,肿瘤重量显著降低(P<0.01)。结论:TPRM8在肺腺癌中具有抑癌作用,低表达TRPM8蛋白的肺腺癌患者预后不良。

TRPM8通道介导的自噬调节可能通过JNK信号通路影响肾癌细胞的存活

目的:探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)与肾癌细胞增殖及凋亡的关系。方法:qRT-PCR检测肾癌细胞(A498、GRC-1、786-0)中TRPM8的表达水平。利用shRNA转染A498细胞来构建TRPM8低表达的稳定细胞株,qRT-PCR和Western blotting验证shRNA的干扰效率。细胞集落形成实验检测沉默TRPM8后A498细胞的增殖能力;流式细胞术检测沉默TRPM8后A498细胞的凋亡能力;自噬检测试剂盒检测沉默TRPM8后A498细胞的自噬通量的变化;Western blotting检测沉默TRPM8后自噬相关标志物(ATG3、ATG5、ATG6、ATG7和ATG12)的变化和c-Jun N末端激酶(JNK)通路相关蛋白的表达。结果:TRPM8在肾癌细胞中高表达;转染TRPM8 shRNA后,TRPM8的表达明显降低(P<0.01);沉默TRPM8后,A498细胞的增殖能力明显下降(P<0.01),凋亡率明显增高(P<0.01);转染TRPM8 shRNA,A498细胞的自噬通量也明显减少(P<0.05),且ATG3、ATG5、ATG6、ATG7和ATG12蛋白的表达也下降(均P<0.05);沉默TRPM8后,JNK的磷酸化水平降低(P<0.05);使用JNK抑制剂(SP600125)后,ATG5和ATG7蛋白水平明显降低(均P<0.05)。结论:沉默TRPM8通道介导的自噬调节通过JNK信号通路可抑制肾癌细胞的增殖,促进其凋亡。

TRPM8在胰腺导管腺癌中的表达及意义

目的检测TRPM8在胰腺导管腺癌中的表达情况并分析其临床意义。方法收集我院肝胆外科自2008年至2010年40例行手术切除的胰腺导管腺癌病例的临床病理资料,分别采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)、免疫组织化学和Western blotting的方法检测TRPM8 mRNA和蛋白水平的表达情况,并分析其与各临床病理参数之间的关系。结果 TRPM8在mRNA和蛋白水平表达一致。TRPM8mRNA在胰腺导管腺癌患者癌组织中表达明显高于正常组织[(0.0512±0.0498)vs(0.0008±0.0005),P<0.05]。单因素和多因素分析发现TRPM8的表达是一个独立的预后因素。2年无病生存率和总生存率,TRPM8阳性染色组明显低于阴性染色组(48%vs 18%,58%vs 22%),差异具有统计学意义(P<0.05)。临床病理特征评估结果:TRPM8的高表达与胰腺导管腺癌组织的分化程度、TNM分期及淋巴结转移之间存在显著性相关(P<0.05),与肿瘤大小、患者年龄、性别等无关。结论 TRPM8在胰腺导管腺癌中表达上调并与一些临床病理特征密切相关,提示TRPM8可能是反映胰腺导管腺癌发生发展、侵袭、转移及预后的重要生物学指标。

有关TRPM8通道的中医药研究进展

TRPM8是TRP基因超家族中的一个亚型,可被温度、渗透压、PH值及机械力等激活发生一系列病理生理反应。现代医学对其研究相对深入,阐述较完善,中医药对其调控机制的研究较少。本文对近几年中医药对TRPM8的研究进行整理总结。对中医药治疗疾病的作用机制进行更深一步的探讨,使TRPM8有望成为新的药物作用靶点。

瞬时受体电位阳离子通道8型及瞬时受体电位香草酸亚型1对急性结肠炎小鼠肠道炎症及感觉传导的影响

目的探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)及瞬时受体电位阳离子通道8型(TRPM8)蛋白在急性结肠炎小鼠肠道中的表达、相互作用及对炎症和内脏感觉的影响。方法本实验采用30只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为3组, 分别为对照组、模型组、干预组, 每组10只。模型组与干预组小鼠使用质量浓度为30 g/L的DSS共7 d构建结肠炎模型, 同时干预组每天予以0.3%WS-12溶液灌肠, 连续7 d试剂处理。每天同一时间观察记录小鼠生命活力、毛发及体重变化、粪便性状, 测量粪便隐血情况, 进行疾病活动指数(DAI)评分, 并根据病理切片计算组织病理评分;腹壁反射撤退试验检测各组肠道敏感性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织炎性因子:白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、缓激肽(BK)活性表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测结肠组织紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin), TRPV1、TRPM8、降钙素基因相关肽α亚单位(CGRP-Gαq)蛋白表达水平。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测结肠组织炎性因子IL-1β、IL-6 mRNA及内脏敏感蛋白TRPV1、TRPM8及Gαq蛋白mRNA表达水平;免疫组织化学法检测结肠组织炎性细胞CD4+T淋巴细胞水平。两组间比较采用t检验。结果 (1)WS-12可以改变肠道TRPV1、TRPM8及Gαq蛋白表达量:模型组小鼠肠道TRPV1蛋白表达水平高于对照组(2.58±0.25比1.00±0, t=12.130, P<0.01)、模型组Gαq蛋白表达水平明显高于对照组(2.33±0.51比1.00±0, t=6.984, P<0.01)。模型组TRPM8蛋白表达低于对照组(0.70±0.10比1.00±0, t=8.001, P<0.01), 而经WS-12干预后, 干预组TRPV1蛋白表达水平低于模型组(1.49±0.21比2.58±0.25, t=11.580, P<0.01)、干预组Gαq蛋白蛋白表达水平低于模型组(1.34±0.14比2.33±0.51, t=5.021, P<0.01), 而干预组TRPM8蛋白表达高于模型组(1.60±0.32比0.70±0.10, t=6.914, P<0.01)。(2)WS-12可减轻肠道炎症程度:模型组小鼠结肠长度较对照组变短[(4.01±0.72) cm比(7.47±0.55) cm, t=11.960, P<0.01]、模型组DAI评分高于对照组[(3.70±0.48)分比(0.20±0.42)分, t=17.26, P<0.01], 模型组苏木精-伊红(HE)组织病理评分高于对照组[(7.10±0.74)分比(0.20±0.42)分, t=25.680, P<0.01], 组织间CD4^(+)T淋巴细胞表达水平升高, 浸润明显。而经WS-12干预后, 干预组结肠长度变长[(5.95±0.85) cm比(4.01±0.72) cm, t=6.734, P<0.01], 干预组DAI评分低于模型组[(2.10±0.74)分比(3.70±0.48)分, t=5.737, P<0.01]及干预组HE组织病理评分低于模型组[(4.80±0.79)分比(7.10±0.74)分, t=6.734, P<0.01], CD4^(+)T淋巴细胞表达量降低(P均<0.01)。模型组小鼠肠道IL-1β、IL-6、TNF-α、BK表达水平明显高于对照组[IL-1β:(107.70±7.86) ng/ml比(23.59±2.26) ng/ml, t=30.190;IL-6:(62.49±6.61) pg/ml比(5.26±1.13) pg/ml, t=27.190;TNF-α:(184.40±11.19) pg/ml比(33.45±6.37) pg/ml, t=37.060;BK:(65.69±7.53) pg/ml比(12.84±4.12) pg/ml, t=19.470, P均<0.01], WS-12干预组上述指标低于模型组[IL-1β:(42.84±10.45) ng/ml比(107.70±7.86) ng/ml, t=14.230;IL-6:(14.18±5.91) pg/ml比(62.49±6.61) pg/ml, t=17.190;TNF-α:(92.71±3.39) pg/ml比(184.40±11.19) pg/ml, t=8.569;BK:(16.46±3.96) pg/ml比(65.69±7.53) pg/ml, t=18.31, P均<0.01]。(3)WS-12可改善肠道上皮通透性:模型组小鼠肠道ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显低于对照组(0.58±0.18比1.00±0, t=10.180;0.64±0.19比1.00±0, t=6.466, P<0.01)。而经WS-12干预后, 干预组ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显高于模型组(0.88±0.11比0.58±0.18, t=6.674;0.82±0.12比0.64±0.19, t=3.314, P均<0.01)。(4)WS-12干预后可改善肠道敏感性:模型组小鼠在不同压力(20、40、60、80 mmHg)直肠扩张下AWR评分均明显高于对照组[(0.8±0.4)分比(0.1±0.3)分, t=4.200;(1.8±0.4)分比(0.5±0.5)分, t=6.091;(2.7±0.5)分比(1.7±0.4)分, t=4.629;(3.8±0.4)分比(2.8±0.6)分, t=4.160, P均<0.01], 予WS-12干预后, 小鼠肠道敏感性明显降低, 其AWR评分虽然高于对照组, 但在不同压力下均较模型组有不同程度的降低[(0.4±0.3)分比(0.8±0.4)分, t=1.897;(1.1±0.3)分比(1.8±0.4)分, t=4.200;(1.9±0.3)分比(2.7±0.5)分, t=4.382;(2.9±0.3)分比(3.8±0.4)分, t=5.400, P均<0.01]。结论 TRPV1和TRPM8之间可能存在平衡机制维持肠道正常功能。WS-12可以通过激活TRPM8通道对小鼠急性结肠炎起一定的治疗作用。