瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4基因敲除对小鼠血脂和脂肪组织的影响

目的探讨瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4(TRPV4)基因敲除对小鼠血脂水平以及脂肪组织的影响。方法观察野生型C57BL/6J小鼠和TRPV4基因敲除(TRPV4^(-/-))小鼠在高脂饮食饲养后体质量、脂肪质量、血脂水平变化以及肩胛间棕色脂肪组织(iBAT)、腹股沟白色脂肪组织(iWAT)及附睾白色脂肪组织(eWAT)的激活情况;利用3T3-L1脂肪细胞观察TRPV4激动剂对脂肪棕色化基因PR结构域蛋白16(PRDM16)表达的影响。结果在高脂饮食喂养16周后,TRPV4^(-/-)小鼠的血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均较野生型小鼠升高,差异有统计学意义(P<0.05);体质量和脂肪组织质量均较野生型小鼠减轻,但差异无统计学意义(P>0.05),TRPV4^(-/-)小鼠脂肪组织呈棕色化趋势较野生型小鼠明显;加入TRPV4激动剂后,3T3-L1脂肪细胞PRDM16基因和蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论TRPV4基因敲除能够升高血脂水平并促进脂肪组织棕色化。

瞬时感受器电位离子通道4在大鼠背根神经节持续受压后异位放电中的作用

目的:利用在体神经纤维电生理技术记录大鼠背根神经节(DRG)持续受压(CCD)后的异位放电情况,明确瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)是否参与了CCD后受损DRG的异位放电。方法:共采用35只Wistar大鼠。制备大鼠DRG的CCD模型,分别于术前和术后测量损伤侧的机械痛阈和热辐射刺激缩爪反应潜伏期。利用在体神经纤维电生理技术分别记录正常组大鼠DRG及CCD组、CCD+钌红(RR)组、CCD+佛波醇(4α-PDD)组受损DRG神经元的异位放电情况。结果:持续压迫明显降低大鼠损伤侧的机械痛阈和热辐射刺激缩爪反应潜伏期(n=30,P<0.05);CCD组可以记录到受损DRG神经元的异位放电,放电率约为67%,而正常组DRG的异位放电率约为4.5%;以TRP家族阻断剂钌红(RR)100μm孵育受损DRG,较CCD组受损DRG神经元异位放电的频率和波幅均明显下降(n=10,P<0.05);以TRPV4特异性激动剂佛波醇(4α-PDD)10μm孵育受损DRG,较CCD组受损DRG异位放电频率和波幅均明显增加(n=10,P<0.05)。结论:CCD后受损DRG可出现异位放电,TRPV4参与了CCD后受损DRG的异位放电。

瞬时感受器电位离子通道香草素受体4下游信号分子的确定及其对大鼠背根神经节慢性压迫后痛觉过敏的作用

目的:探讨大鼠背根神经节慢性压迫CCD后瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)下游信号分子及其在痛觉过敏中的机制。方法:鞘内分别注射TRPV4拮抗剂钌红(RR)、TRPV4反义寡脱氧核苷酸(ASODN)和一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAME,检测CCD大鼠背根神经节DRG内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(nitrite)含量变化,并观测热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)的变化。结果:鞘内分别注射RR、TRPV4 AS ODN和L-NAME后,均能够显著降低CCD大鼠DRG内亚硝酸盐含量(P<0.05),CCD大鼠的热痛敏行为也能够显著改善(P<0.05)。结论:TRPV4及其下游信号分子NO参与介导CCD大鼠的热痛觉过敏。

瞬时感受器电位离子通道蛋白V4在肝脏疾病中的作用机制

瞬时感受器电位离子通道蛋白V4(TRPV4)属于瞬时感受器电位离子通道家族中的一员,是一种非选择性阳离子通道,其广泛分布在多种组织及器官中。近年来越来越多的研究介绍了TRPV4通道蛋白与肝纤维化、肝癌、多囊性肝病等肝脏疾病的密切关系。本文主要对TRPV4与肝脏疾病的有关文献进行分析,归纳总结TRPV4与肝脏疾病之间确切的信号通路及可能的潜在机制,以期临床应用及进一步研究。

瞬时感受器电位离子通道4相关的离子通道病

瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族香草素受体亚家族的成员之一,也是瞬时感受器电位离子通道家族中被阐述最多、最特别的一个。它具有使其编码的Ca^(2+)通道失活的多种突变倾向,侵袭骨骼系统、神经系统、呼吸系统等,且临床表型多样。目前,研究较多的是骨骼发育不良和周围神经病,但均只能推测TRPV4基因突变引起各种临床表现(骨骼、运动和感觉症状)的(病理)生理学机制。因此,明确此类疾病的发病机制、病因、分类、开发药理学的潜能,对TRPV4相关疾病的预防和治疗有重要意义。

瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白在气道压力诱导大鼠气道黏液高分泌中的作用

目的探讨机械通气产生的气道压力对大鼠气道黏液高分泌的影响及机制。方法 48只SD大鼠分为4组,实施麻醉和气管切开后接小动物呼吸机进行机械通气。①对照组(8只):大鼠气管插管后自主呼吸;②机械通气组:对大鼠采用压力控制通气模式机械通气,根据气道压力水平再分10、20、30 cmH2O 3个亚组,每个亚组8只大鼠,机械通气6 h;③钌红干预组(8只):施加机械通气前鼠尾静脉注射瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白(transient receptorpotential vanilloid 4,TRPV4)非特异性阻断剂钌红(ruthenium red,RR)进行预处理;④4α-PDD干预组(8只):机械通气前鼠尾静脉注射4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4-α-Phorbol-12,13-didecanoate,4α-PDD)进行预处理。实验完毕后收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。采用ELISA法检测BALF中MUC5AC蛋白含量,RT-PCR法检测大鼠肺组织MUC5ACmRNA的表达水平。结果与对照组相比,机械通气组MUC5AC在蛋白及转录水平表达均增加,呈压力依赖性。30 cmH2O亚组MUC5AC蛋白及mRNA转录水平分别为[(0.71±0.10)、(6.23±0.54)]明显高于对照组[(0.29±0.05)、(1.68±0.35)](P<0.01)。在30 cmH2 O压力水平下MUC5AC的表达增加可被RR干预减弱[(0.41±0.06)、(4.15±0.22)](P<0.05),被4α-PDD干预增强[(1.12±0.09)、(8.47±0.35)](P<0.05)。结论 机械通气产生的气道压力可以通过作用于TRPV4诱导MUC5AC表达增加,这可能是压力诱导气道黏液高分泌的调节机制之一。

基于瞬时受体电位香草素亚家族4信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响

目的:基于瞬时受体电位香草素亚家族4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响。方法:自新生SD大鼠膝关节软骨组织提取软骨细胞,进行体外培养,取第1代软骨细胞分别加入不同培养液进行干预。空白组仅加入常规培养液,牛蒡子苷元组加入含10μmol牛蒡子苷元的培养液,牛蒡子苷元联合阻断剂组加入含10μmol牛蒡子苷元和10μmol GSK205的培养液,激动剂组加入含1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂联合激动剂组加入含10μmol GSK205和1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂组加入含10μmol GSK205的培养液。分别于干预24 h和72 h后以CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,48 h后以Western blot法检测软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平。结果:(1)软骨细胞增殖测定结果。干预24 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.03±0.72,1.32±0.11,1.01±0.05,1.33±0.34,1.04±0.50,1.10±0.06;F=18.309,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组、阻断剂组的吸光度与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.632,P=0.840,P=0.164);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.834);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.498);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。干预72 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.66±0.02,2.21±0.05,1.84±0.04,1.92±0.07,1.71±0.10,1.74±0.08;F=37.629,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.001,P=0.000);阻断剂联合激动剂组、阻断剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.326,P=0.104);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组及阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.010),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.098);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。(2)软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平测定结果。5组软骨细胞中软骨蛋白聚糖水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,20.74±5.01,4.20±0.66,22.87±1.82,2.09±0.63;F=194.544,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的软骨蛋白聚糖水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.136,P=0.593);牛蒡子苷元组的软骨蛋白聚糖水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.305);牛蒡子苷元联合阻断剂组的软骨蛋白聚糖水平低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.310);激动剂组的软骨蛋白聚糖水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。5组软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,2.94±0.11,1.92±0.17,2.04±0.12,0.78±0.09;F=58.701,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);阻断剂联合激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平低于空白组(P=0.032);牛蒡子苷元组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000),与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.193);激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。结论:牛蒡子苷元可通过TRPV4信号通路促进体外培养软骨细胞的增殖及软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖的表达。

温敏离子通道蛋白TRPV4受热激活参与相关疾病发生的机制研究进展

发热是机体应对感染和损伤的一种病理性防御反应。瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族的成员,在机体中广泛表达,对体温具有负调节作用。当机体温度升高激活TRPV4或使其表达增多时,可引起脑水肿和癫痫发作的加剧;TRPV4的活性及正常表达影响新生儿面部与心脏缺陷和精子活动趋热性。通过对TRPV4的多方面研究,有望揭示TRPV4受热激活下与疾病的具体机制,探索新的药物作用靶点和开发新的药物等。

瞬时受体电位离子通道与玫瑰痤疮

玫瑰痤疮发病机制尚未完全明确,神经源性炎症和神经血管功能失调均参与其中。瞬时受体电位(TRP)离子通道蛋白在初级感觉神经元和非神经细胞中广泛表达,近年研究表明TRP家族中瞬时受体电位香草酸亚型(TRPV)1~4、瞬时受体电位锚蛋白(TRPA)1和M型瞬时受体电位(TRPM)8可能与玫瑰痤疮发病相关。该文主要对上述离子通道与玫瑰痤疮病理生理过程的关系作一综述。

瞬时感受器电位V亚家族离子通道——温度感受器

生物体可以感受广泛的温度范围,其中温度超过43℃或低于15℃还可引起伤害性痛觉。近年来在哺乳动物中已经发现6个与温度有关的通道,其中4个属于瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)V亚家族成员。这些通道组织分布非常广泛,功能上属于钙渗透性通道,可被多种理化刺激激活。它们具有不同的温度阈值,并受一些理化因素的调节。

瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4激动剂对缺血再灌注肾损伤的保护作用及机制

目的 观察瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4（TRPV4）激动剂对缺血再灌注肾损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 建立大鼠肾缺血再灌注模型,将实验动物随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组、治疗组（各8只）.治疗组大鼠给TRPV4激动剂GSA1016790A（30 μg/kg）,缺血再灌注组给予相同量的生理盐水,假手术组不夹闭肾蒂,余处理同缺血再灌注组.各组分别检测血清肌酐、尿素氮水平,组织病理检查,同时行免疫组织化学、Western blot及实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测肾组织中TRPV4及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达.结果 GSK1016790A可以改善缺血再灌注急性肾损伤的组织损伤.与缺血再灌注组比较,治疗组中血清肌酐及尿素氮水平显著降低[（228.4±32.62） μmol/L比（123.62±21.23） μmol/L、（35.65±13.9） μmol/L比（20.93±9.6）μmol/L,P＜0.05],免疫组织化学及Real-time PCR检测显示TRPV4及eNOS的表达明显升高（P＜0.05）.结论 TRPV4激动剂GSA1016790A可通过血管舒张改善缺血再灌注急性肾损伤.

微小RNA-202-5p介导瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2表达调节三阴性乳腺癌干细胞的自我更新能力的机制

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-202-5p通过瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2(TRPV2)调节三阴性乳腺癌(TNBC)干细胞的自我更新能力.方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测干细胞中的miR-202-5p表达量.RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测TRPV2、雌激素相关受体B(Esrrb)、性别决定区Y框蛋白2(Sox2)、八聚体结合转录因子4(Oct4)、以及干细胞表面标志物CD133和CD13的mRNA以及蛋白质的表达.并进一步展开肿瘤干细胞特性获得实验.应用SPSS 21.0统计软件分析.结果 miR-202-5p在TNBC干细胞中低表达(1.00±0.17比0.58±0.20,t=2.771,P<0.05).miR-202-5p mimic+ shTRPV2处理后,Esrrb、Sox2、Oct4、CD133 、CD13的mRNA[Esrrb(1.10±0.09)比(0.39 ±0.04),t=22.800,P<0.05]、Sox2[(1.10±0.08)比(0.41 ±0.06),t =21.820,P<0.05]、Oct4[(1.00 ±0.09)比(0.43 ±0.07),t=15.810,P<0.05]、CD133[(1.01 ±0.09)比(0.41 ±0.07),t=6.640,P<0.05]和CD13[(0.99 ±0.09)比(0.40±0.07),=16.360,P<0.05])和蛋白表达呈降低趋势,细胞成球能力[(1.03±0.06)比(0.43±0.05),t=24.290,P<0.05]、克隆形成能力[(65.00±4.76)比(28.44±3.88),t=18.830,P<0.05]、增殖能力[(18.43 ±1.88)比(9.02±1.22),t=13.280,P<0.05]显著降低;而miR-202-5pinhibitor处理后Esrrb、Sox2、Oct4、CD133 、CD13的mRNA(Esrrb[(1.11 ±0.08)比(2.11±0.16),t=17.680,P <0.05]、Sox2[(1.09 ±0.06)比(2.15 ±0.10),t =28.740,P<0.05]、Oct4[(0.98 ±0.07)比(2.09 ±0.19),t=17.340,P<0.05]、CD133[(1.01±0.07)比(2.22 ±0.10),t=31.350,P<0.05]和CD13[(0.94 ±0.05)比(2.32 ±0.11),t=36.120,P <0.05])和蛋白表达增加,细胞成球能力[(1.47±0.09)比(1.83 ±0.10),t=8.460,P <0.05]、克隆形成能力[(77.23±6.00)比(110.37±11.25),t=8.220,P <0.05]、增殖能力[(20.42±2.04)比(30.68 ±2.82),t =9.320,P <0.05]显著提升.结论 TNBC细胞中的miR-202-5p上调抑制TRPV2基因的表达,抑制TNBC干细胞自我更新能力的获得.

瞬时感受器电位离子通道蛋白A1及其参与口颌面疼痛的研究进展

疼痛是一种与组织损伤或潜在组织损伤相关的不愉快的主观感觉和情感体验。目前,包括颞下颌关节疼痛及偏头痛在内的口颌面疼痛的发病机制尚未完全清楚。在疼痛过程中发挥作用的细胞因子较多,瞬时感受器电位离子通道蛋白(transient receptor potential ion channel protein,TRPs)是一类非选择性阳离子通道蛋白家族,近年研究发现,该蛋白家族亚族TRPA中的成员TRPA1与痛觉的产生关系密切。现就TRPA1及其参与口颌面疼痛的研究进展做一综述。

慢性阻塞性肺疾病患者血清MCP-4、TRPC6水平与肺功能及病情严重程度的关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清单核细胞趋化蛋白4(MCP-4)、经典瞬时感受器电位通道蛋白-6(TRPC-6)水平与肺功能及病情严重程度的关系。方法 选取2020年6月至2023年6月期间109例慢阻肺患者作为慢阻肺组,同期选取109例健康体检者作为对照组。根据全球慢阻肺倡议(GOLD),按照1秒用力呼气容积(FEV_(1))占预计值的百分比(FEV_1%)进行严重程度分级,将慢阻肺患者划分为轻度组30例,中度组34例,重度组27例,极重度组18例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MCP-4、TRPC6的表达水平;Pearson法分析血清MCP-4、TRPC6和肺功能之间的相关性;多因素Logistic回归分析影响慢阻肺发生的因素。结果 与对照组相比,COPD组患者MCP-4、TRPC6表达水平均显著升高(P<0.05)。COPD组深吸气量(IC)、呼气峰值流速(PEF)、FEV_(1)%、1秒率(FEV_(1)/FVC)水平均低于对照组,残总比(RV/TLC)水平高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度、重度、极重度组COPD患者的MCP-4、TRPC6表达水平分别依次显著升高(P<0.05)。与轻度组相比,中度、重度、极重度组COPD患者IC、PEF、FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC水平依次显著降低,RV/TLC水平依次显著升高(P<0.05)。根据Pearson相关性分析,COPD患者MCP-4、TRPC6表达水平均与RV/TLC存在正相关性(P<0.05),与IC、PEF、FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC存在负相关性(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现,MCP-4、TRPC6、RV/TLC是影响COPD发生的危险因素(P<0.05),IC、PEF、FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC是影响COPD发生的保护因素(P<0.05)。结论 COPD患者血清MCP-4、TRPC6表达水平显著升高,与肺功能及疾病严重程度密切相关。

瞬时感受器电位C亚族蛋白6通道与肿瘤发生的研究进展

细胞内游离钙离子(Ca2+)与肿瘤关系密切,直接参与调控肿瘤的生长、侵袭、转移和分化。瞬时感受器电位(TRP)是细胞膜上的一种非选择性阳离子通道,且被认为是最可能的钙库操纵性钙通道和受体操纵性钙通道的分子基础。TRP通道C亚族蛋白(TRPC)在多种细胞中表达。近年研究多发现调控Ca2+进入细胞的TRPC6通道与多种癌症的发生和浸润转移有关。如果能阻遏此过程,可能对肿瘤的治疗提供一个新的思路。现对近年来TRPC6通道与肿瘤的关系的相关研究作一综述。

有效抑制大鼠背根神经节细胞TRPV4通道小干扰RNA的筛选

目的:以不同浓度以及序列的小干扰RNA(SiRNA)转染,培养大鼠的背根神经节(DRG),观察对神经元形态、活性变化以及瞬时感受器电位离子4(TRPV4)通道功能的影响,筛选转染这种神经元的SiRNA。方法:取新生大鼠腰背段全部DRG,将处理好的DRG神经元进行培养,将神经元随机分为正常对照组、SiRNA不同浓度组、错配组,进行SiRNA转染,然后培养相应时间后观察各组神经元在荧光显微镜的形态学特点,并用四甲基偶氮唑兰比色法(MTT)分析各组神经元细胞生长活性的改变。另外利用Fluo3荧光探针,观察SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应,采用酶联免疫法方法观察KCl刺激下各组细胞释放P物质的改变。结果:荧光显微镜下观察适宜浓度组SiRNA转染DRG神经元形态较正常组无明显差异。MTT法比较10-40nM各组神经元活性的差异无显著性意义。而SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应以及细胞释放P物质的改变有显著差异。结论:40-80nMSiRNA可以有效转染DRG细胞,未对DRG神经元活性产生显著影响,这为研究TRPV4通道功能提供了一个有效的方法。

肠胶质细胞系TRPV4依赖性Ca^(2+)内流、ATP释放与炎症因子表达

目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在调节肠胶质细胞外Ca^(2+)内流中的作用及其意义。方法收集大鼠肠胶质细胞系CRL-2690、大鼠肠上皮细胞系IEC6和人胚肾细胞系HEK293T样本,采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法检测TRPV4的mRNA、蛋白表达与定位;将CRL-2690细胞依次分为GSK组与GSK+HC组,低渗组与低渗+HC组,GdCl_(3)组与GdCl_(3)+HC组以及CaCl_(2)组与CaCl^(2+)HC组,采用Fura-2荧光探针和单细胞荧光Ca^(2+)检测仪评估CRL-2690细胞中TRPV4通道活性。将CRL-2690细胞分为对照组、GSK组与GSK+HC组,通过荧光素-荧光素酶实验测量细胞ATP的释放水平;采用RT-qPCR检测炎症相关基因GFAP、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA表达。结果在大鼠肠胶质细胞系CRL-2690中检测到TRPV4 mRNA和蛋白表达;TRPV4特异性激动剂GSK1016790A和低渗透压刺激明显增强了CRL-2690细胞内钙荧光强度,而TRPV4特异性抑制剂HC067047可抑制此作用(0.43038±0.06365 vs 0.00423±0.00578,P<0.0001);钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)激活诱导的外Ca^(2+)内流也可被HC067047所抑制(P<0.05);功能上,激活TRPV4可促ATP释放、EGC反应性增生标志物GFAP和炎症因子IL-1β、IL-6的表达,并抑制抗炎因子IL-10的表达,该作用可被HC067047所抑制(P<0.05)。结论激活TRPV4可引起肠胶质细胞外Ca^(2+)内流,并促进ATP释放与炎症因子表达,可能参与肠道炎症的发生。

间向性骨发育不良一家系及其瞬时感受电位香草酸家族4基因突变

目的总结问向性骨发育不良1家系中患者的临床特征和遗传学资料，以提高对本病的认识和诊断水平。方法先证者为1岁男童，患儿母亲26岁，分析其临床表现、影像学资料、瞬时感受电位香草酸家族4（TRPV4）基因突变检测结果。结果患儿主要表现为大头、前额突出、鼻梁低平、面中部发育不良、胸廓窄长、胸骨隆起、肋骨外翻、脊柱后凸、四肢较躯干相对短小。x线片显示椎体扁平，脊柱后凸，肋骨增宽，后端杯口状变形，四肢长管状骨干骺端扩张，骨骺出现延迟，发育小，形态不规则。其母身高、面容正常，脊柱侧突。X线片显示胸椎向右侧侧弯畸形，椎体密度减低，形态异常，椎间隙变窄，股骨及胫骨干骺端未见异常。先证者和母亲TRPV4基因检测发现均存在1个c．2396〉T（P．P799L）的杂合突变，为已知突变。结论先证者和母亲均为TRPV4基因突变导致的先天骨骼畸形，先证者具有间向性骨发育不良的典型改变，母亲症状轻。TRPV4基因相关的脊柱骨骺发育异常患者的临床表型、影像学改变存在较高的异质性，基因突变检测是确诊的关键。

TRPV4在介导大鼠背根神经节持续受压后机械和热痛敏中的作用

目的:观察持续机械压迫(CCD)对瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)基因、蛋白表达及功能的影响,明确TRPV4是否参与CCD导致的机械和热痛敏。方法:建立CCD模型后,分别于手术前及手术后第7天、第14天及第28天取材前测量运动功能、机械刺激缩爪反应阈值和热辐射刺激缩爪反应潜伏期。为了测量TRPV4反义核苷酸干扰对机械和热痛阈值的影响,在蛛网膜下腔内注入TRPV4寡脱氧核苷酸(ODN)40μg/d,每天1次,第7天后测量大鼠行为学变化。使用实时定量RT-PCR检测TRPV4基因表达的变化,Western blot检测TRPV4蛋白质表达量的变化,激光共聚焦检测低渗溶液和佛波醇(4α-PDD)刺激背根神经节(DRG)神经元后细胞内钙离子浓度的变化。结果:所有动物在损伤前后步态均正常,持续压迫明显降低大鼠的机械和热痛阈,TRPV4干扰可部分逆转该痛敏。持续机械压迫可以明显增加TRPV4基因和蛋白的表达,手术后第7天,第14天和第28天,TRPV4mRNA的表达分别为假手术组大鼠的4.29倍、2.95倍和2.48倍,蛋白表达量分别为假手术组大鼠的4.34倍,3.88倍和2.47倍。持续机械压迫后,对低渗溶液和4α-PDD产生反应的DRG神经元的比例数增加,细胞内钙的峰值增高。这种反应被TRPV4反义ODN所抑制。结论:CCD可以上调TRPV4的基因、蛋白表达,敏化通道的功能;TRPV4参与介导CCD导致的机械和热痛敏。

TRPV4和PKCε在糖尿病大鼠背根神经节神经元中的表达

目的探讨糖尿病不同时期蛋白激酶Cε(PKCε)和瞬时性受体电位通道4(TRPV4)在大鼠DRG神经元中的表达及意义。方法采用经典糖尿病模型,检测不同病程糖尿病大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4的表达。用免疫荧光方法,观察背根神经节(DRG)在痛性糖尿病神经病变(PDN)过程中PKCε和TRPV4阳性细胞的变化。结果 PKCε和TRPV4在正常大鼠的背根神经节中均有表达。在糖尿病大鼠中,PKCε和TRPV4的表达水平都出现先升高后降低的现象。其中,PKCε在糖尿病第4周的表达水平最高,TRPV4在糖尿病第1周的表达水平最高。结论高糖慢性刺激可导致DRG神经元PKCε和TRPV4的表达改变,在短期内有明显的增加,但2者高峰出现的时间不同。TRPV4的增加依赖于PKCε,而后者错后的高峰说明其参与更多的细胞内机制。