短期低频脉冲磁场诱导经典瞬时感受器电位通道1对肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力的影响

背景:力量素质是人类进行身体活动的必备要素,短暂的低频脉冲磁场刺激可诱导和激活经典瞬时感受器电位通道1(classical transient receptor potential channel 1,TRPC1),并引发小鼠骨骼肌生长与重塑,从而对肌组织产生一系列生理支持效应,该机制是否会引发人体骨骼肌生理结构与工作能力的变化,并作为一种全新的人体肌力提升手段尚无研究。目的:选用可激活TRPC 1的特定低频脉冲磁场作为外源性刺激,以观察并验证短期刺激对人体肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力的影响。方法:选择普通成年健康受试者27例,随机分为训练组、照射组、训练+照射组,每组9例。训练组采用抗阻训练,训练+照射组每次接受10 min低频脉冲磁场刺激(强度1.5 mT,频率3300 Hz)后即刻进行抗阻训练,照射组只进行10 min低频脉冲磁场刺激,试验周期9 d,间隔48 h进行1次训练或照射,为了观察低频脉冲磁场与抗阻训练结合是否会产生增益效果,训练组与训练+照射组在5次训练前后采集最大自主收缩力的肌电信息,照射组只在第1,3,5次进行最大自主收缩力测试,跟踪肌力变化情况。试验后观察3组受试最大自主收缩力值、1次重复最大力量、耐力持续时间、中值频率的变化。结果与结论:①在试验过程中,所有被试的最大自主收缩力值变化与时间交互效应显著(P<0.01),随时间的推进均出现显著变化,各组内最大自主收缩力值变化与时间交互显著(P<0.05),组间无交互效应;②各组被试后测最大自主收缩力值、1次重复最大力量、耐力持续时间、中值频率相比前测均显著提升,其中训练组各指标提升率依次为19%,23%,28%,18%,训练+照射组提升率依次为11%,10%,53%,18%,照射组各指标提升率依次为28%,18%,27%,6%;③训练+照射组的中值频率显著高于照射组(P<0.05),与训练组无显著性差异;④通过对训练组与训练+照射组每次训练前后的最大自主收缩力肌电均方根振幅平均值对比发现,训练组前2次训练后最大自主收缩力肌电均方根振幅平均值显著下降(P<0.05)。⑤结果证实:在强度1.5 mT,频率3300 Hz的脉冲磁场短期刺激方案下,人体肱二头肌最大自主收缩力值和力量耐力显著提升,低频脉冲磁场诱导TRPC1促进肌组织工作能力提升这一机制在人体上得到有效验证;在最大力量提升效果上,低频脉冲磁场刺激与该试验进行传统抗阻训练的两组最终力量水平一致;抗阻训练结合脉冲磁场刺激在训练过程中可体现出更好的抗疲劳能力,以及保持肌力稳定增长的功效,这种结合在训练初期可在相同负荷下使局部肌群更多的运动单位获得训练刺激,提升整体训练效率;在力量耐力提升效果上,低频脉冲磁场刺激可使肌肉等长收缩时间延长,抗疲劳能力提升,低频脉冲磁场刺激结合抗阻训练相比单纯进行低频脉冲磁场刺激可带来更加有效的力量耐力增益效果。

短期低频脉冲磁场诱导经典瞬时感受器电位通道1对局部肌肉肌力提升后的保持与衰减变化轨迹

背景:短暂的低频脉冲磁场刺激可诱导和激活经典瞬时感受器电位通道1,并可提升人体局部肌肉(如肱二头肌)的最大自主收缩力与力量耐力。目的:通过可激活经典瞬时感受器电位通道1的特定低频脉冲磁场作为肌力提升手段,并观察短期刺激对人体肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力提升后的变化衰减过程。方法:选取普通成年健康受试者27例,随机等分为训练组、照射组、训练+照射组。训练+照射组每次接受10 min低频脉冲磁场刺激后即刻进行抗阻训练,照射组只进行10 min低频脉冲磁场刺激,训练组采用抗阻训练,试验时间为8周,在正式试验的第1-12天进行短期肌力提升方案及力量水平后测,随后6周观察各组最大自主收缩力与力量耐力的衰减变化过程。结果与结论:(1)所有被试者随着试验时间的不断推进,最大自主收缩力值变化显著(P <0.01),时间交互效应明显,组间无交互效应,时间与分组交互效应不显著。(2)与初测值相比,照射组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,2,3,4周均显著高于初测值;训练组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,4周均显著高于初测值;与后测值相比,照射组最大自主收缩力值肌力衰减跟踪的第5,6周显著低于后测值;训练组最大自主收缩力肌力衰减跟踪的第5,6周显著低于后测值;训练+照射组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,5,6周显著低于后测值。(3)通过对3组最大自主收缩力变化曲线进行相关性分析可以看出,照射组整体最大自主收缩力肌力变化与训练组及训练+照射组最大自主收缩力变化趋势高度正相关,变化趋势高度一致。与照射组相比,训练组与训练+照射组最大自主收缩力具有更强的正相关性。(4)各组被试随着时间的推进,中值频率值均发生显著性变化(P <0.01),时间交互效应明显,时间点和分组交互作用对中值频率值变化具有显著性影响(P <0.05)。(5)与初测值相比,照射组肌力衰减中值频率值跟踪的第2周显著高于初测值;训练+照射组所有肌力衰减中值频率值跟踪的第2周显著高于初测值;与后测值相比,照射组肌力衰减中值频率值跟踪均与后测无显著性差异;训练组肌力衰减中值频率值跟踪的第1,4周显著低于后测值;训练+照射组肌力衰减中值频率值跟踪的第1,2周显著低于后测值。(6)3组受试者力量耐力中值频率值变化曲线进行相关性分析可以看出,照射组与训练组和训练+照射组之间具备较低的正相关性,与训练组相比,训练+照射组与照射组之间的相关程度略高。(7)结果显示,在强度1.5 mT、频率3 300 Hz的脉冲磁场短期刺激方案使肌力增强后,最大自主收缩力衰减到初测值的周期为6周,与该试验抗阻训练的衰减周期及提升后的衰减速度一致,在衰减过程中相比进行抗阻训练的2组变化波动较小,无疲劳累积的影响,肌力保持水平较佳。力量耐力提升后至少可保持6周。相比抗阻训练的力量耐力变化,低频脉冲磁场刺激可免于疲劳累积的影响,抗疲劳能力持续增长与保持水平较好,抗阻训练结合脉冲磁场可观察到对耐力水平带来一定影响与增益效果,减少衰减过程的波动,利于耐力水平的保持。

经典瞬时感受器电位通道对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响

目的:探讨经典瞬时感受器电位通道(TRPC)对内皮细胞和平滑肌细胞增殖所引起的阻塞性病变的影响。方法:选取人体尸检标本的颈动脉中明显有动脉粥样硬化的组织进行处理后经染色检测其TRPC6蛋白表达情况。取小鼠饲养高脂饲料12周后建模对比常规喂养组的TRPC6斑块表达情况。基因敲除后,动脉动脉粥样硬化斑块中的平滑肌细胞及胶原纤维含量情况、血管壁增厚及血流阻力情况。结果:TRPC6在人体动脉粥样硬化斑块中的表达显著更高,经免疫组织化学(IHC)染色其平均光密度显著更高。小鼠模型组(0.004±0.010)高于对照组(0.063±0.012),差异有统计学意义(P<0.05)。基因敲除后,模型小鼠的动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞含量(16.55±1.12)显著少于之前的(28.21±2.23),差异有统计学意义(P<0.05);平滑肌细胞(27.26±2.51)显著高于之前的(20.92±1.61),差异有统计学意义(P<0.05);而胶原纤维差异不明显。基因敲除后,能明显改善小鼠的血管壁增厚及血流阻力情况。结论:TRPC6在动脉粥样硬化斑块中的表达显著调高,提示其参与了动脉粥样硬化斑块的发生及发展过程。

瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4基因敲除对小鼠血脂和脂肪组织的影响

目的探讨瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4(TRPV4)基因敲除对小鼠血脂水平以及脂肪组织的影响。方法观察野生型C57BL/6J小鼠和TRPV4基因敲除(TRPV4^(-/-))小鼠在高脂饮食饲养后体质量、脂肪质量、血脂水平变化以及肩胛间棕色脂肪组织(iBAT)、腹股沟白色脂肪组织(iWAT)及附睾白色脂肪组织(eWAT)的激活情况;利用3T3-L1脂肪细胞观察TRPV4激动剂对脂肪棕色化基因PR结构域蛋白16(PRDM16)表达的影响。结果在高脂饮食喂养16周后,TRPV4^(-/-)小鼠的血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均较野生型小鼠升高,差异有统计学意义(P<0.05);体质量和脂肪组织质量均较野生型小鼠减轻,但差异无统计学意义(P>0.05),TRPV4^(-/-)小鼠脂肪组织呈棕色化趋势较野生型小鼠明显;加入TRPV4激动剂后,3T3-L1脂肪细胞PRDM16基因和蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论TRPV4基因敲除能够升高血脂水平并促进脂肪组织棕色化。

经典瞬时感受器电位通道在炎性痛及神经病理性痛大鼠背根神经节表达水平的差异

目的探讨背根神经节细胞经典瞬时感受器电位通道家族(TRPC)各亚型在炎性痛及神经病理性痛中表达是否存在差异性。方法选用Sprague-Dawley雄性大鼠,随机分为两大组:炎性痛组和神经病理性痛组。炎性痛组又随机分为:空白对照组,生理盐水对照组,蜜蜂毒炎性痛模型组;神经病理性痛组又随机分为:空白对照组,假手术组,坐骨神经分支选择性结扎模型组。测定各组大鼠机械刺激缩足反射阈值和热刺激缩足潜伏期;然后分别于蜜蜂毒处理后2 h及神经结扎后1周,检测各组大鼠背根神经节细胞内TRPC家族各亚型mRNA表达水平和各组背根神经节细胞内TRPC家族相应亚型蛋白表达水平。结果实时定量基因扩增荧光检测技术显示,背根神经节细胞TRPC3、4、5亚型的mRNA表达水平在蜜蜂毒炎性痛组显著增加(P<0.001);而在神经病理性痛组背根神经节细胞TRPC2 mRNA表达水平显著提高(P<0.001),同时TRPC3 mRNA表达水平却显著降低(P<0.05)。免疫组化结果显示蜜蜂毒炎性痛组大鼠背根神经节内TRPC3、4、5免疫阳性细胞数显著增加;而神经病理性痛组大鼠背根神经节内TRPC2免疫阳性细胞数显著增加。结论蜜蜂毒炎性痛模型及坐骨神经分支选择性结扎模型大鼠背根神经节细胞TRPC通道各亚型基因及蛋白表达水平存在差异,提示TRPC通道各亚型在炎性痛及神经病理性痛的发病中可能发挥着不同的作用。

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

【目的】观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道(TRPM6)mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】健康4～6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量(12±2)g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。第1天(1d)、21d、34d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA的表达。【结果】1d血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性:[(0.85±0.07vs.0.89±0.12)mmol/L、(2.48±0.14vs.2.49±0.07)mmol/L、0.51±0.08vs.0.49±0.06,P均>0.05];21d哮喘组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA表达水平均显著低于对照组:[(0.84±0.09vs.0.95±0.07)mmol/L、(2.39±0.14vs.2.44±0.09)mmol/L、0.32±0.06vs.0.52±0.05,P均<0.05];34d哮喘组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肾组织TRPM6mRNA表达水平亦显著低于对照组:[(0.67±0.10vs.0.94±0.10)mmol/L、(2.17±0.08vs.2.43±0.08)mmol/L、0.24±0.05vs.0.53±0.06,P均<0.05]。肾组织TRPM6mRNA表达水平与血浆Mg2+浓度呈正相关(r=0.630,P<0.001);肾组织TRPM6mRNA表达水平与红细胞内Mg2+浓度呈正相关(r=0.715,P<0.001)。【结论】肾组织TRPM6mRNA的低表达可能是导致C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。

肺动脉高压与经典瞬时感受器电位通道

肺动脉高压（PAH）的发病机制目前还不十分清楚，近来越来越多的研究发现经典瞬时感受器电位通道（TRPC）参与PAH的发生、发展。目前认为TRPC家族成员是构成质膜上受体操纵性钙通道和钙池操纵性钙通道的分子基础，TRPC作为主要的钙内流通道，参与多种生理及病理过程。TRPC通过多种机制影响肺动脉平滑肌细胞基础钙水平，在肺血管紧张度的调节及肺动脉平滑肌细胞增殖中发挥了重要作用。TRPC的研究为PAH发病机制的研究提供了一个新的思路。本文简要介绍TRPC与PAH的联系。

瞬时感受器电位离子通道4在大鼠背根神经节持续受压后异位放电中的作用

目的:利用在体神经纤维电生理技术记录大鼠背根神经节(DRG)持续受压(CCD)后的异位放电情况,明确瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)是否参与了CCD后受损DRG的异位放电。方法:共采用35只Wistar大鼠。制备大鼠DRG的CCD模型,分别于术前和术后测量损伤侧的机械痛阈和热辐射刺激缩爪反应潜伏期。利用在体神经纤维电生理技术分别记录正常组大鼠DRG及CCD组、CCD+钌红(RR)组、CCD+佛波醇(4α-PDD)组受损DRG神经元的异位放电情况。结果:持续压迫明显降低大鼠损伤侧的机械痛阈和热辐射刺激缩爪反应潜伏期(n=30,P<0.05);CCD组可以记录到受损DRG神经元的异位放电,放电率约为67%,而正常组DRG的异位放电率约为4.5%;以TRP家族阻断剂钌红(RR)100μm孵育受损DRG,较CCD组受损DRG神经元异位放电的频率和波幅均明显下降(n=10,P<0.05);以TRPV4特异性激动剂佛波醇(4α-PDD)10μm孵育受损DRG,较CCD组受损DRG异位放电频率和波幅均明显增加(n=10,P<0.05)。结论:CCD后受损DRG可出现异位放电,TRPV4参与了CCD后受损DRG的异位放电。

瞬时感受器电位离子通道香草素受体4下游信号分子的确定及其对大鼠背根神经节慢性压迫后痛觉过敏的作用

目的:探讨大鼠背根神经节慢性压迫CCD后瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)下游信号分子及其在痛觉过敏中的机制。方法:鞘内分别注射TRPV4拮抗剂钌红(RR)、TRPV4反义寡脱氧核苷酸(ASODN)和一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAME,检测CCD大鼠背根神经节DRG内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(nitrite)含量变化,并观测热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)的变化。结果:鞘内分别注射RR、TRPV4 AS ODN和L-NAME后,均能够显著降低CCD大鼠DRG内亚硝酸盐含量(P<0.05),CCD大鼠的热痛敏行为也能够显著改善(P<0.05)。结论:TRPV4及其下游信号分子NO参与介导CCD大鼠的热痛觉过敏。

瞬时感受器电位M7通道对RBL-2H3细胞增殖及凋亡的影响

【目的】观察瞬时感受器电位M7通道(TRPM7)在大鼠肥大细胞系RBL-2H3的表达,探讨其对RBL-2H3增殖和凋亡的影响。【方法】Western blot及细胞免疫荧光分别检测TRPM7在RBL-2H3的表达。通过离子通道阻断剂2-APB抑制TRPM7通道的表达,以WST-1法检测细胞增殖,流式细胞术及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。【结果】Westernblot及细胞免疫荧光法均检测到TRPM7在RBL-2H3的表达,细胞免疫荧光提示TRPM7主要表达于RBL-2H3细胞膜。100μmol/L和200μmol/L的2-APB可明显抑制TRPM7的表达。100μmol/L和200μmol/L的2-APB对RBL-2H3的增殖抑制率分别为(30.4±4.2)%和(42.0±0.8)%,早期凋亡率分别为(36.9±6.7)%和(49.3±1.8)%,总凋亡率分别为(40.2±7.0)%和(76.8±5.5)%。【结论】TRPM7通道表达于RBL-2H3肥大细胞系并参与其增殖和凋亡。

野百合碱对大鼠右心室心肌肥厚功能及规范性瞬时感受器电位6表达水平的影响

目的探讨腹腔注射野百合碱(MCT)对大鼠右心室心肌肥厚功能和规范性瞬时感受器电位6(TRPC6)表达水平的影响。方法采用随机数字表法将大鼠分为对照组(CON组)和MCT给药模型组(MCT组),各25只。CON组大鼠置于常压和正常氧浓度(21%)饲养箱中饲养3周,MCT组大鼠以2%MCT 60 mg/kg一次性腹腔注射,后常规饲养3周。记录两组大鼠右心室收缩压(RVSP)、心率(HR)、右心室内压力最大上升/下降速率(RV±dp/dtmax)、平均动脉压(MAP)以及右心室肥大指数(RVMI)。HE染色观察两组大鼠右心室心肌组织形态。并采用实时定量PCR(RT-PCR)检测TRPC6 mRNA表达水平,采用Western blotting方法检测TRPC6蛋白表达水平。结果饲养3周后,CON组大鼠死亡1只,MCT组大鼠死亡7只。MCT组和MCT组m SAP和HR比较,差异无统计学意义(P>0.05);MCT组RVSP、RVMI、RV+dp/dtmax高于CON组,RV-dp/dtmax低于CON组(P<0.05)。HE染色可见CON组大鼠右心室心肌细胞排列有序,胞核清晰;MCT组右心室心肌纤维粗大,细胞内肌原纤维数量增多,心肌纤维排列紊乱,细胞核深染,形状不整。CON组右心室心肌组织TRPC6 mRNA表达水平为(1.00±0.51),低于MCT组的(2.49±0.96)(t=-3.33,P<0.05)。CON组右心室心肌组织TRPC6蛋白表达水平为(1.00±0.46),低于MCT组的(2.90±0.32)(t=14.99,P<0.05)。结论 MCT可诱导SD大鼠产生右心室心肌肥大,并显著上调右心室心肌细胞编码TRPC6 mRNA和蛋白的表达水平,TRPC6可能参与右心室心肌肥大的发生发展。

瞬时感受器电位通道在人脑微血管内皮细胞机械牵张中的作用及其信号转导机制

目的观察瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)通道在人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)机械牵张刺激中的作用,并对其信号转导入胞内的机制进行初步探讨。方法 HBMEC体外培养,采用多功能小型生物撞击机给予机械牵张刺激,根据不同施加条件将细胞分为对照、单纯牵张、牵张+SKF-96365(非选择性TRP通道阻滞剂)、牵张+低分子量肝素(low molecular weight heparin,LMWH)、牵张+一氧化氮合酶抑制剂(N-nitro-l-arginine methyl ester,L-NAME)共5组。采用激光扫描共聚焦显微镜观察胞内游离Ca2+分布情况,流式细胞仪检测牵张前后胞内Ca2+荧光强度变化;Western blot检测牵张前后一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达情况。结果流式细胞仪检测结果显示,单纯牵张组和牵张+LMWH组细胞内游离Ca2+浓度较对照组显著升高(P<0.05);牵张+SKF-96365组胞内Ca2+浓度较单纯牵张组明显降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,单纯牵张组细胞eNOS蛋白表达水平明显增高(P<0.05);牵张+SKF-96365组和牵张+L-NAME组eNOS蛋白表达水平较单纯牵张组明显降低(P<0.05)。结论 HBMEC胞膜TRP通道可感知机械牵张刺激的激活,继而引起胞内游离钙离子浓度升高,其转导机制可能主要与胞外Ca2+内流相关。

人脐静脉内皮细胞中C-型瞬时型感受器电位通道3RNA干扰质粒构建及筛选

为了探讨C-型瞬时型感受器电位通道3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的作用,本实验针对GenBank中人TRPC3的cDNA序列设计合成短发卡RNA(shRNA),将其转染到HUVEC中,在激光共聚焦显微镜下观察细胞的转染效率,实时定量PCR和免疫印记检测TRPC3mRNA和蛋白表达及转染后的干扰效率。结果显示:(1)激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光,说明已成功将shTRPC3转入到HUVEC中;(2)转染48h后用G418进行稳定筛选后,TRPC3mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),干扰效率分别为71%和74%。由此可知,在HUVEC中成功构建了TRPC3干扰质粒。

大鼠RBL-2H3细胞瞬时感受器电位M7通道参与细胞存活及凋亡

背景:瞬时感受器电位M7是肥大细胞上重要的钙离子通道,但其在肥大细胞存活及凋亡过程中的作用仍未明确。目的:观察瞬时感受器电位M7通道对大鼠RBL-2H3细胞存活及凋亡的影响。方法:取对数生长期RBL-2H3细胞,①分别以50,100,200μmol/L瞬时感受器电位通道阻断剂2-APB进行干预,并以0.1%DMSO干预的细胞及正常培养的细胞作对照。②以瞬时感受器电位M7-siRNA反转录病毒载体转染RBL-2H3细胞,并设立空载体组和正常对照组。结果与结论:经过100,200μmol/L的2-APB作用72h后,RBL-2H3细胞数减少,吸光度值降低(P<0.05),细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05);RBL-2H3细胞转染si-瞬时感受器电位M772h后,吸光度值降低(P<0.05),细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05)。说明瞬时感受器电位M7通道参与了RBL-2H3细胞存活和凋亡过程。

瞬时感受器电位离子通道4相关的离子通道病

瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族香草素受体亚家族的成员之一,也是瞬时感受器电位离子通道家族中被阐述最多、最特别的一个。它具有使其编码的Ca^(2+)通道失活的多种突变倾向,侵袭骨骼系统、神经系统、呼吸系统等,且临床表型多样。目前,研究较多的是骨骼发育不良和周围神经病,但均只能推测TRPV4基因突变引起各种临床表现(骨骼、运动和感觉症状)的(病理)生理学机制。因此,明确此类疾病的发病机制、病因、分类、开发药理学的潜能,对TRPV4相关疾病的预防和治疗有重要意义。

经典瞬时受体电位通道在骨骼肌疾病中作用的研究进展

经典瞬时受体电位通道(TRPC)是位于细胞膜上的一类非选择性阳离子通道,对细胞正常的电生理活动具有重要的作用。病理状态下,TRPC对Ca^(2+)的选择性更高,它可破坏骨骼肌细胞内Ca^(2+)稳态,使其发生钙超载,进而发生多种骨骼肌疾病。研究TRPC通道在骨骼肌疾病中的作用与机制,有助于为该疾病治疗提供新思路。

瞬时感受器电位通道1在臭氧致小鼠肺组织炎症中的表达

目的探讨经典瞬时感受器电位通道1(TRPC1)在臭氧暴露下小鼠肺组织中的表达情况。方法采用臭氧暴露建立小鼠肺组织炎症模型,通过对小鼠行为学观察、支气管肺泡灌洗液的细胞分类计数和肺组织病理形态分析证实模型建立成功后,RTPCR法检测肺组织TRPC1 m RNA的表达,Western blot法和免疫组织化学染色法分别观察TRPC1蛋白在肺组织的表达和定位情况。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,臭氧组小鼠肺组织TRPC1 m RNA及其蛋白表达上调(P<0.05);免疫组织化学染色法进一步证实,臭氧组小鼠肺组织TRPC1蛋白在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、浸润的炎症细胞的表达均较对照组明显增强(P<0.05);相关性分析显示,小鼠肺组织中TRPC1 m RNA和蛋白的表达均与支气管肺泡灌洗液中白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数呈显著性正相关(P<0.01)。结论 TRPC1可能与小鼠肺组织炎症发病机制有关。

瞬时感受器电位通道在肿瘤增殖与迁移中的作用

瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)超家族成员是位于细胞膜上的一类广泛分布的非选择性阳离子通道,激活TRP通道多可引起胞质游离Ca^(2+)浓度升高,调节细胞增殖、迁移和转移。目前研究表明,TRP通道与多种肿瘤的发生和发展密切相关。该文对目前TRPC、TRPV和TRPM通道在肿瘤增殖与迁移中的作用进行综述。

线粒体氧化应激及m6A表观遗传调控TRPC6钙通道在肾病综合征发病中的作用研究

目的 初步探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)表观遗传修饰瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)通道失调在肾病综合征发病中的作用及潜在机理。方法 按照随机数字表法将小鼠足细胞分为4组:对照组、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组、嘌呤霉素氨基核苷(PAN)处理组、TBHQ+PAN处理组。对照组为正常完全培养液,TBHQ组培养液中加入10 nmol/L TBHQ,PAN处理组培养液中加入PAN 50μg/mL,TBHQ+PAN处理组培养液中加入10 nmol/L TBHQ以及PAN 50μg/mL,刺激24 h收集细胞。应用膜片钳证实PAN损伤诱导TRPC6通道激活机理及1,4,5-肌醇三磷酸(IP3)受体拮抗剂TBHQ对电流的影响,检测对照组、PAN处理组、TBHQ组和TBHQ+PAN处理组细胞TRPC6通道电流变化。通过葡萄糖氧化酶(GO)建立足细胞氧化应激模型。另外按照随机数字表法将足细胞分为4组:空白对照组、GO组、姜黄素组、姜黄素+GO组。GO组给予GO 3.5 kU/L,姜黄素组给予Nrf2激动剂(姜黄素)40μmol/L,姜黄素+GO组给予姜黄素40μmol/L和GO 3.5 kU/L处理,给药处理8~12 h后收集细胞。检测各组Nrf2和特异性调控蛋白NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)、TRPC6及Transgelin蛋白和线粒体调控蛋白表达变化。通过SRAMP对TRPC6通道m6A位点进行精准预测,对PAN诱导足细胞损伤模型公共数据库GSE124622进行2次生物信息学分析。结果 对照组与TBHQ组电流比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PAN处理组电流升高,而TBHQ+PAN组电流减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与GO组比较,姜黄素+GO组Nrf2、NQO-1、TRPC6及Transgelin蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,GO组线粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达均降低,Drp1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与GO组比较,姜黄素+GO组粒体调控蛋白Mfn2、Opa1蛋白表达升高,Drp1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);空白对照组与姜黄素组TRPC6/Transgelin及线粒体调控蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。TRPC6通道序列存在多个m6A修饰位点,均具有被甲基转移酶(METTL)3、METTL14、肾母细胞肿瘤1相关蛋白(WTAP)和去甲基化酶ALKB同源蛋白(ALKBH)、m6A去甲基化酶(FTO)调控的潜在可能。对12个m6A调节基因进行表达分析,发现m6A调节基因的表达在PAN诱导足细胞损伤中发生显著差异。结论 TRPC6介导钙离子内流可被氧化应激激活参与足细胞损伤,激活Nrf2可以减少钙过负荷所致线粒体损伤而保护足细胞。TRPC6序列中存在多个高m6A修饰靶点,肾病综合征发病机理可能通过m6A修饰足细胞TRPC6离子通道,m6A相关调控基因在肾病足细胞损伤中发生明显变化。

重度子痫前期孕妇脐动脉血管平滑肌中经典瞬时受体电位通道6的表达

目的探索人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical arterial smooth muscle cells,HUASMCs)中瞬时受体电位通道6 (transient receptor potential canonical 6,TRPC6)与重度子痫前期的关系,为发现新型治疗方法提供基础理论依据。方法选取西南医科大学附属医院2018年4-11月产科住院病人经阴道分娩或剖宫产分娩的10例重度子痫前期孕妇为病例组,并匹配同期产科住院的10例健康产妇作为对照组;取分娩后的任意段脐动脉血管,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR experiment,QPCR)与蛋白免疫印迹技术(Western blotting)测量TRPC6的表达。结果 QPCR结果显示,正常孕妇组HUASMCs的TRPC6相对表达量为9.583±0.913,重度子痫前期孕妇组HUASMCs的TRPC6相对表达量为8.447±0.982,两组差异有统计学意义(P=0.003)。Western blotting结果也显示正常孕妇组HUASMCs的TRPC6表达显著低于重度子痫前期孕妇组(P <0.001)。结论重度子痫前期孕妇组HUASMCs中TRPC6的mRNA及蛋白表达水平均高于正常孕妇组,提示重度子痫前期的发病可能与TRPC6的表达上调相关。