瞬时感受电位香草酸亚家族蛋白1受体在慢性偏头痛大鼠模型中的作用研究

目的本研究通过炎性汤(IS)反复刺激SD大鼠上矢状窦区硬脑膜建立慢性偏头痛(CM)大鼠模型,探讨瞬时感受电位香草酸亚家族蛋白1(TRPV1)受体在CM发病过程中的作用,为研究CM发病机制和治疗药物提供理论依据。方法 72只SD大鼠随机数字表法分为空白对照组(A组)、假手术组(B组)、CM模型组(C组)及TRPV1受体拮抗剂Capsazepine组(D组),采用免疫组织化学染色、Western-Blot、Real-time PCR技术检测大鼠硬脑膜、三叉神经节(TG)、三叉神经脊束尾侧核(TNC)中的TRPV1受体、降钙素基因相关肽(CGRP)表达量变化。结果 TRPV1受体和CGRP在CM大鼠硬脑膜、TG及TNC上的表达量均增加(P<0.05),通过侧脑室注射Capsazepine药物后明显缓解大鼠疼痛,且TRPV1受体、CGRP表达量均明显下降(P<0.05)。结论 TRPV1受体通过影响CGRP释放参与CM神经源性炎症反应及痛觉传导,提示TRPV1可能通过TRPV1-CGRP信号通路参与CM病理生理过程。

瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4基因敲除对小鼠血脂和脂肪组织的影响

目的探讨瞬时感受器电位离子通道V亚家族成员4(TRPV4)基因敲除对小鼠血脂水平以及脂肪组织的影响。方法观察野生型C57BL/6J小鼠和TRPV4基因敲除(TRPV4^(-/-))小鼠在高脂饮食饲养后体质量、脂肪质量、血脂水平变化以及肩胛间棕色脂肪组织(iBAT)、腹股沟白色脂肪组织(iWAT)及附睾白色脂肪组织(eWAT)的激活情况;利用3T3-L1脂肪细胞观察TRPV4激动剂对脂肪棕色化基因PR结构域蛋白16(PRDM16)表达的影响。结果在高脂饮食喂养16周后,TRPV4^(-/-)小鼠的血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均较野生型小鼠升高,差异有统计学意义(P<0.05);体质量和脂肪组织质量均较野生型小鼠减轻,但差异无统计学意义(P>0.05),TRPV4^(-/-)小鼠脂肪组织呈棕色化趋势较野生型小鼠明显;加入TRPV4激动剂后,3T3-L1脂肪细胞PRDM16基因和蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论TRPV4基因敲除能够升高血脂水平并促进脂肪组织棕色化。

抑制瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型通道对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后细胞凋亡与新生血管生成的作用

目的探讨抑制瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)通道对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)细胞凋亡和血管形成的影响。方法将30只SD大鼠分为对照组、RIRI组和RIRI+HC-067047组,每组10只。采用高眼压法建立大鼠RIRI模型,RIRI+HC-067047组在造模后5、10 h通过侧脑室注射HC-067047(5μmol/μL),对照组和RIRI组给予同等剂量的生理盐水。测量各组大鼠治疗后第7天、第14天与第21天的体质量,于治疗第21天观察大鼠视网膜组织形态变化和视网膜组织神经细胞凋亡情况,检测各组大鼠视网膜组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白阳性表达情况,VEGF、核因子E2相关因子2(Nrf2)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的相对表达水平,以及色素上皮衍生因子(PEDF)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、Caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的相对表达水平。结果与对照组比较,治疗后第21天RIRI组大鼠体质量下降,RIRI组和RIRI+HC-067047组视网膜组织神经细胞凋亡增加,Caspase-3、VEGF蛋白阳性表达率增加,Nrf2、VEGF、HIF-1αmRNA相对表达水平升高,PEDF、Bcl-2蛋白表达水平下降而GFAP、Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与RIRI组比较,治疗后第21天,RIRI+HC-067047组视网膜神经细胞凋亡数目减少,Caspase-3、VEGF蛋白阳性表达率下降,Nrf2、VEGF、HIF-1αmRNA相对表达水平下降,PEDF、Bcl-2蛋白表达水平升高而GFAP、Caspase-3、Bax蛋白表达水平下降(均P<0.05)。结论抑制TRPV4通道可改善大鼠RIRI,其机制可能与抑制视网膜细胞凋亡与减少血管新生有关。

瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型抑制剂HC067047对脂多糖诱导的小鼠焦虑样行为的影响

目的探讨瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)抑制剂HC067047对脂多糖(LPS)模型小鼠焦虑样行为的影响。方法48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(NS)、模型组(LPS)和药物干预组(HC+LPS)。腹腔注射0.83 mg/kg LPS建立焦虑样小鼠模型,HC+LPS组于LPS注射前30 min腹腔注射HC067047(10 mg/kg),NS组及LPS组注射等体积溶媒;旷场实验以及社会交往实验观察小鼠焦虑样行为;免疫组织化学及Western blotting检测海马TRPV4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。结果免疫组织化学和Western blotting实验发现,与NS组相比,LPS组小鼠海马中TRPV4表达显著上调(P<0.0001);旷场实验中,与NS组比较,发现LPS组小鼠活动的总距离(P<0.0001)、在中央区域活动的距离(P<0.01)以及在中央区域活动的时间均明显减少(P<0.01),HC067047干预可增加LPS模型小鼠的活动总距离(P<0.05)、在中央区域活动的距离(P<0.001)以及在中央区域的活动时间(P<0.01);社会交往实验中,与NS组相比,LPS组小鼠与陌生小鼠的交往时间显著降低(P<0.01),HC067047干预后能显著增加LPS模型小鼠与陌生小鼠的交往时间(P<0.01);Western blotting检测发现,LPS组小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.001)和eNOS(P<0.001)的表达显著高于NS组,但HC067047干预后可使LPS模型小鼠海马中iNOS(P<0.05)、nNOS(P<0.01)、eNOS(P<0.01)的表达明显降低。结论抑制TRPV4的表达能够改善LPS所致小鼠焦虑样行为,该过程可能与抗氧化应激有关。

基于瞬时受体电位香草素亚家族4信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响

目的:基于瞬时受体电位香草素亚家族4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响。方法:自新生SD大鼠膝关节软骨组织提取软骨细胞,进行体外培养,取第1代软骨细胞分别加入不同培养液进行干预。空白组仅加入常规培养液,牛蒡子苷元组加入含10μmol牛蒡子苷元的培养液,牛蒡子苷元联合阻断剂组加入含10μmol牛蒡子苷元和10μmol GSK205的培养液,激动剂组加入含1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂联合激动剂组加入含10μmol GSK205和1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂组加入含10μmol GSK205的培养液。分别于干预24 h和72 h后以CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,48 h后以Western blot法检测软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平。结果:(1)软骨细胞增殖测定结果。干预24 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.03±0.72,1.32±0.11,1.01±0.05,1.33±0.34,1.04±0.50,1.10±0.06;F=18.309,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组、阻断剂组的吸光度与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.632,P=0.840,P=0.164);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.834);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.498);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。干预72 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.66±0.02,2.21±0.05,1.84±0.04,1.92±0.07,1.71±0.10,1.74±0.08;F=37.629,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.001,P=0.000);阻断剂联合激动剂组、阻断剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.326,P=0.104);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组及阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.010),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.098);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。(2)软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平测定结果。5组软骨细胞中软骨蛋白聚糖水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,20.74±5.01,4.20±0.66,22.87±1.82,2.09±0.63;F=194.544,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的软骨蛋白聚糖水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.136,P=0.593);牛蒡子苷元组的软骨蛋白聚糖水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.305);牛蒡子苷元联合阻断剂组的软骨蛋白聚糖水平低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.310);激动剂组的软骨蛋白聚糖水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。5组软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,2.94±0.11,1.92±0.17,2.04±0.12,0.78±0.09;F=58.701,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);阻断剂联合激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平低于空白组(P=0.032);牛蒡子苷元组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000),与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.193);激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。结论:牛蒡子苷元可通过TRPV4信号通路促进体外培养软骨细胞的增殖及软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖的表达。

宫颈癌患者血清WNT1诱导信号通路蛋白1、瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员7水平及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)、瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员7(TRPM7)水平及临床意义。方法选取150例宫颈癌患者和164例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者。采用酶联免疫吸附法检测两组患者血清WISP1水平,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组患者血清TRPM7 mRNA水平。宫颈癌发生的影响因素采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估血清TRPM7 mRNA、WISP1单独及联合检测对宫颈癌的诊断价值。结果宫颈癌患者血清TRPM7 mRNA、WISP1水平均明显高于CIN患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。宫颈癌患者中文化程度为初中及以下、孕次≥3次、产次≥2次、合并高危人乳头瘤病毒(HPV)感染的比例均明显高于CIN患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,TRPM7 mRNA水平升高、WISP1水平升高、合并高危HPV感染均是宫颈癌发生的独立危险因素(P﹤0.01)。ROC曲线显示,TRPM7 mRNA、WISP1联合检测诊断宫颈癌的AUC为0.944(95%CI:0.921~0.966),高于二者单独检测(P﹤0.05)。结论宫颈癌患者血清TRPM7 mRNA、WISP1水平较高,二者联合检测可提高对宫颈癌的诊断价值。

瞬时感受器电位V亚家族离子通道——温度感受器

生物体可以感受广泛的温度范围,其中温度超过43℃或低于15℃还可引起伤害性痛觉。近年来在哺乳动物中已经发现6个与温度有关的通道,其中4个属于瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)V亚家族成员。这些通道组织分布非常广泛,功能上属于钙渗透性通道,可被多种理化刺激激活。它们具有不同的温度阈值,并受一些理化因素的调节。

瞬时感受器电位C亚族蛋白6通道与肿瘤发生的研究进展

细胞内游离钙离子(Ca2+)与肿瘤关系密切,直接参与调控肿瘤的生长、侵袭、转移和分化。瞬时感受器电位(TRP)是细胞膜上的一种非选择性阳离子通道,且被认为是最可能的钙库操纵性钙通道和受体操纵性钙通道的分子基础。TRP通道C亚族蛋白(TRPC)在多种细胞中表达。近年研究多发现调控Ca2+进入细胞的TRPC6通道与多种癌症的发生和浸润转移有关。如果能阻遏此过程,可能对肿瘤的治疗提供一个新的思路。现对近年来TRPC6通道与肿瘤的关系的相关研究作一综述。

微小RNA-202-5p介导瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2表达调节三阴性乳腺癌干细胞的自我更新能力的机制

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-202-5p通过瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2(TRPV2)调节三阴性乳腺癌(TNBC)干细胞的自我更新能力.方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测干细胞中的miR-202-5p表达量.RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测TRPV2、雌激素相关受体B(Esrrb)、性别决定区Y框蛋白2(Sox2)、八聚体结合转录因子4(Oct4)、以及干细胞表面标志物CD133和CD13的mRNA以及蛋白质的表达.并进一步展开肿瘤干细胞特性获得实验.应用SPSS 21.0统计软件分析.结果 miR-202-5p在TNBC干细胞中低表达(1.00±0.17比0.58±0.20,t=2.771,P<0.05).miR-202-5p mimic+ shTRPV2处理后,Esrrb、Sox2、Oct4、CD133 、CD13的mRNA[Esrrb(1.10±0.09)比(0.39 ±0.04),t=22.800,P<0.05]、Sox2[(1.10±0.08)比(0.41 ±0.06),t =21.820,P<0.05]、Oct4[(1.00 ±0.09)比(0.43 ±0.07),t=15.810,P<0.05]、CD133[(1.01 ±0.09)比(0.41 ±0.07),t=6.640,P<0.05]和CD13[(0.99 ±0.09)比(0.40±0.07),=16.360,P<0.05])和蛋白表达呈降低趋势,细胞成球能力[(1.03±0.06)比(0.43±0.05),t=24.290,P<0.05]、克隆形成能力[(65.00±4.76)比(28.44±3.88),t=18.830,P<0.05]、增殖能力[(18.43 ±1.88)比(9.02±1.22),t=13.280,P<0.05]显著降低;而miR-202-5pinhibitor处理后Esrrb、Sox2、Oct4、CD133 、CD13的mRNA(Esrrb[(1.11 ±0.08)比(2.11±0.16),t=17.680,P <0.05]、Sox2[(1.09 ±0.06)比(2.15 ±0.10),t =28.740,P<0.05]、Oct4[(0.98 ±0.07)比(2.09 ±0.19),t=17.340,P<0.05]、CD133[(1.01±0.07)比(2.22 ±0.10),t=31.350,P<0.05]和CD13[(0.94 ±0.05)比(2.32 ±0.11),t=36.120,P <0.05])和蛋白表达增加,细胞成球能力[(1.47±0.09)比(1.83 ±0.10),t=8.460,P <0.05]、克隆形成能力[(77.23±6.00)比(110.37±11.25),t=8.220,P <0.05]、增殖能力[(20.42±2.04)比(30.68 ±2.82),t =9.320,P <0.05]显著提升.结论 TNBC细胞中的miR-202-5p上调抑制TRPV2基因的表达,抑制TNBC干细胞自我更新能力的获得.

壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗带状疱疹后神经痛的临床效果及其对TRPV1的影响

目的观察壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗带状疱疹后神经痛(PHN)的临床效果,以及对瞬时受体电位阳离子通道亚家族Ⅴ成员1(TRPV1)的影响。方法将96例PHN患者随机分为观察组(n=32)、对照1组(n=32)、对照2组(n=32),分别给予壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗、中医针灸围刺治疗、加巴喷丁胶囊口服治疗。治疗后第42天评价3组的临床疗效。在治疗前、治疗后第21天、治疗后第42天,评估3组患者的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分,检测其静脉血和穴位血的TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平。结果治疗后,观察组、对照1组、对照2组总有效率分别为93.75%(30/32)、81.25%(26/32)和68.75%(22/32),观察组的总有效率高于对照2组(P<0.05)。3组患者的疼痛VAS评分随治疗时间的延长而降低(P<0.05),其中,治疗后第42天,对照2组、对照1组、观察组患者的疼痛VAS评分依次降低(P<0.05)。观察组和对照1组的静脉血和穴位血TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平随着治疗时间延长而降低(P<0.05),其中,治疗后第21天、第42天,对照2组、对照1组、观察组静脉血和穴位血TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平依次降低(P<0.05)。结论壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗PHN疗效显著,镇痛效果优于中医针灸围刺及加巴喷丁胶囊口服治疗,其作用机制可能是通过下调TRPV1的表达来抑制炎症介质进一步释放,从而降低痛觉过敏,缓解疼痛。

新型Ca^(2+)通道TRPV5和TRPV6的研究进展

TRPV5和TRPV6为瞬时感受器电位通道(TRP)的亚家族成员,是新发现的高选择性的Ca2+跨膜转运通道,其主要负责Ca2+由细胞外向细胞内的主动跨膜运输,在机体内参与多项生理活动的调节,本文作者从TRPV5和TRPV6的结构、电生理特性和调控相关因素等方面进行论述。

TRPV4在皮肤免疫性大疱病中的表达及意义

目的探讨TRPV4蛋白在寻常型天疱疮(PV)、大疱性类天疱疮(BP)、疱疹样皮炎(DH)、获得性大疱性表皮松解症(EBA)中的作用机制。方法用免疫组化方法检测正常皮肤组织、PV、BP、DH及EBA皮损组织中TRPV4蛋白的表达量。结果 TRPV4在PV(61.90%)、BP(81.81%)、DH(72.22%)、EBA(68.42%)的阳性率均低于正常皮肤组织(93.33%),且各类疾病间亦存在表达差异(PV<EBA<DH<BP)。结论 TRPV4蛋白的低表达可能影响着皮肤连接的形成或修复,参与皮肤免疫性大疱病的发生、发展。

大麻二酚对载脂蛋白E基因敲除小鼠空间记忆障碍的调节及作用机制研究

目的研究大麻二酚(CBD)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠空间记忆障碍的调节作用及其作用机制。方法将18只ApoE^(-/-)小鼠采用随机数字表法分为ApoE^(-/-)组和ApoE^(-/-)+CBD组,每组9只。ApoE^(-/-)+CBD组小鼠每天予CBD 10 mg/kg腹腔注射,ApoE^(-/-)组小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续注射21 d。最后一次注射后,通过旷场实验和新物体识别实验研究CBD对ApoE^(-/-)小鼠学习记忆能力和焦虑情绪的影响;采用免疫印迹法检测小鼠大脑皮层和海马组织中相关蛋白的表达;培养原代神经元,分为野生型(WT)组、WT+CBD组、ApoE^(-/-)组、ApoE^(-/-)+CBD组4组,观察各组神经元的分化情况。结果ApoE^(-/-)+CBD组小鼠的新物体识别指数明显高于ApoE^(-/-)组,差异有统计学意义(P<0.05)。与WT组比较,ApoE^(-/-)组神经元轴突长度和胞体大小明显缩小,差异均有统计学意义(P<0.01);与ApoE^(-/-)组比较,ApoE^(-/-)+CBD组神经元轴突长度和胞体大小均明显增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。与ApoE^(-/-)组比较,ApoE^(-/-)+CBD组小鼠大脑皮层中瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员2(TRPV2)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(AKT)及磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ型亚基α和δ(CaMKIIα/δ)表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CBD可抑制ApoE基因敲除小鼠的空间记忆障碍,减弱ApoE基因敲除小鼠大脑神经元分化障碍,这些作用主要是通过TRPV2/AKT/CaMKIIα/δ通路实现的。

TRPV2基因敲除对胶质瘤U87MG细胞增殖能力的影响

目的:探讨瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2(TRPV2)基因敲除对胶质瘤U87MG细胞增殖及细胞周期进展的影响。方法:通过锌指核酶敲除U87MG细胞的TRPV2基因;Western Blot测定TRPV2蛋白的表达;Brdu掺入实验及Western Blot测定TRPV2基因敲除对U87MG细胞增殖的影响;流式细胞技术测定TRPV2基因敲除对U87MG细胞细胞周期进展的影响。结果:TRPV2蛋白在U87MG细胞中转录表达;靶向TRPV2的锌指核酶能有效地阻断U87MG细胞内TRPV2基因在蛋白水平上的表达。TRV2-/-U87MG细胞Brdu阳性率为(47.37±4.03)%,处于S期细胞的百分率为(20.14±0.47)%,均显著高于TRV2+/+U87MG细胞(P<0.01);PCNA表达量为U87MG TRV2+/+细胞的(1.47±0.19)倍(P<0.01)。结论:TRPV2基因敲除能明显促进U87MG细胞的增殖和细胞周期的进展。

牛蒡子苷元基于机械敏感离子通道对软骨细胞转录因子和胶原蛋白表达的影响

目的:基于机械敏感离子通道探讨牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和胶原蛋白表达的影响。方法:分离并培养原代小鼠软骨细胞。将细胞分为空白组(常规培养基)、ARG组(10μmol/L)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)抑制剂组(GSK2193874,10 nmol/L)、ARG+抑制剂组(10μmol/L ARG+10 nmol/L GSK2193874)和TRPV4激动剂组(GSK1016790A,10 nmol/L),各组给予相应干预。细胞培养24 h后,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)表达,PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和ColⅡ的mRNA表达水平,Western blot检测转录因子SOX9、RUNX2及ColⅠ、ColⅡ的蛋白表达水平。结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著,而激动剂组较弱。与ARG组或抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ蛋白表达更显著。②与空白组相比,ARG组、抑制剂组和ARG+抑制剂组ColⅡmRNA表达量显著增高(P<0.05,P<0.01),ColⅠmRNA表达量明显降低(P<0.01),而激动剂组ColⅡmRNA表达量显著降低(P<0.01)。与ARG组相比,抑制剂组和ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01),而激动剂组ColⅠmRNA表达量增高(P<0.01),ColⅡmRNA表达量降低(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组ColⅡ和ColⅠ的mRNA表达量均显著增高(P<0.05)。③与空白组相比,ARG组ColⅡ蛋白表达量显著上调(P<0.01),ColⅠ、SOX9和RUNX2蛋白表达量降低(P<0.05,P<0.01);抑制剂组ColⅡ蛋白表达量亦明显增多(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量明显降低(P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ蛋白表达量显著升高(P<0.01),SOX9蛋白表达量显著降低(P<0.05),ColⅠ和RUNX2蛋白表达无明显变化(P>0.05);激动剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.01),RUNX2蛋白表达量明显增高(P<0.01),ColⅠ蛋白表达量无明显变化(P>0.05)。④与ARG组相比,抑制剂组ColⅡ和ColⅠ蛋白表达量均显著增高(P<0.05,P<0.01);ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均明显增高(P<0.01);激动剂组ColⅡ蛋白表达量降低(P<0.01),ColⅠ和RUNX2蛋白表达量升高(P<0.01)。与抑制剂组相比,ARG+抑制剂组细胞的ColⅡ、ColⅠ和RUNX2蛋白表达量均显著增多(P<0.05),SOX9蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:ARG可上调软骨细胞ColⅡ表达,抑制ColⅠ表达,调节转录因子SOX9和RUNX2,促进软骨细胞分化成熟。其作用与TRPV4抑制剂相似,两者合用对ColⅡ的调控作用更显著。

IL-18通过调节TRPV4/Smad7信号通路促进皮肤鳞状细胞癌的增殖

目的:探讨白介素18(Interleukin-18,IL-18)对皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma,CSCC)增殖的影响及可能分子机制。方法:采用外源性IL-18刺激皮肤鳞状细胞癌A431细胞和Colo-16细胞24 h、48 h和72 h,通过CCK-8检测细胞的增殖能力;48 h后qRT-PCR和Western blot检测刺激前后瞬时感受器电位离子通道家族蛋白4(Transient Receptor Potential Vanilloid 4,TRPV4)和Smad7以及p-Smad7的表达。外源性IL-18刺激皮肤鳞状细胞癌A431细胞和Colo-16细胞12 h后,采用TRPV4激动剂G3给药处理A431细胞和Colo-16细胞36 h,通过MMT检测细胞增殖能力,qRT-PCR和Western blot检测刺激前后TRPV4的表达和Smad7以及p-Smad7的表达。结果:外源性IL-18刺激A431细胞和Colo-16细胞可显著促进其增殖,抑制TRPV4的表达而激活p-Smad7的表达;TRPV4激动剂G3可以部分抵消外源性IL-18对A431细胞和Colo-16细胞的增殖作用。结论:IL-18可能通过下调TRPV4激活Smad7信号通路促进皮肤鳞状细胞癌增殖作用。

TRPV2基因的RNAi对前列腺癌PC-3细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2(TRPV2)基因沉默对前列腺癌PC-3细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。方法构建针对TRPV2基因的小分子干扰RNA(siRNA)序列,在脂质体的介导下转染PC-3细胞;用RT-PCR测定TRPV2mRNA的表达;MTT法测定siRNA对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞技术测定siRNA对PC-3细胞周期的影响;Tran-swell侵袭实验测定siRNA对PC-3细胞侵袭能力的影响。结果 TRPV2mRNA在激素非依赖PC-3细胞和DU145细胞中转录表达,而在激素依赖LNCaP细胞中未转录表达。靶向TRPV2的siRNA(siRNA-TRPV2)能有效地阻断PC-3细胞TRPV2基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),且随着转染时间的延长而减少,转染72h后TRPV2mRNA的表达减少至对照组的15%。siRNA转染组穿过Matrigel膜的细胞数为(46.0±6.7),显著少于阴性对照组(92.0±9.4)和空白对照组(109.0±8.1)(P<0.01)。结论 TRPV2在激素非依赖前列腺癌细胞PC-3和DU145中转录表达。针对TRPV2的siRNA在体外能有效地抑制PC-3细胞株的TRPV2mRNA的转录,能显著抑制细胞的侵袭能力,但对细胞增殖和细胞周期没有显著影响。

TRPV4活化调控TXNIP表达在急性大鼠肾损伤中的作用及分子机制

目的观察TRPV4通道活化是否诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)损伤,并探讨可能的分子机制。方法利用不同浓度的TRPV4激动剂4α-PDD刺激NRK-52E细胞,应用Calcein-AM/PI双染色和LDH释放实验检测NRK-52E细胞损伤情况。Western blot检测TXNIP的表达,siRNA沉默TXNIP表达对4α-PDD诱导的NRK细胞损伤的影响。结果 4α-PDD诱导NRK-52E细胞损伤,表现为Calcein-AM染色的活细胞数下降,PI染色的死细胞增加,同时LDH释放增加,且这种损伤作用呈时间和剂量依赖。4α-PDD诱导TXNIP表达,且表达呈时间和剂量依赖。利用siRNA沉默表达TXNIP可明显降低TRPV4活化导致的NRK-52E损伤。结论 TRPV4活化通过上调TXNIP的表达导致NRK细胞的损伤,通过调控TRPV4/TXNIP很可能为保护肾损伤提供新的理论依据。

臭氧在大鼠神经病理性疼痛治疗中对TRPV4的影响

目的通过观察大鼠瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4(TRPV4)的变化,进一步探讨臭氧治疗神经病理性疼痛的作用机制。方法健康雌性SD大鼠72只,体重150~180 g,3~4月龄,采用随机数字表法将其随机分为3组(n=24):对照组(C组),仅暴露坐骨神经;神经病理性疼痛组(NP组),结扎右侧坐骨神经;臭氧注射组(CY组),结扎右侧坐骨神经,大鼠右后肢出现跛行、缩足等症状后局部注射35μg/ml臭氧0.5 ml,连续注射7 d。于制模前,制模后1、3、5、7 d及注射臭氧后3、5、7 d测定大鼠术侧足底机械缩足反应阈值(MWT)。分别于注射臭氧后3、5、7 d处死8只大鼠,采用免疫组织化学和RT-PCR方法测定背根神经节TRPV4的阳性细胞数与mRNA表达水平。结果与C组比较,NP组和CY组制模后各时点MWT较低,TRPV4阳性细胞计数较高,TRPV4的mRNA均上调(P均<0.05);与NP组比较,CY组制模后各时点MWT较高,TRPV4阳性细胞计数较低,TRPV4的mRNA均上调(P均<0.05)。结论臭氧可能通过介导TRPV4的表达,对神经病理性疼痛发挥镇痛作用。

YZG-330通过P38 MAPK信号通路调节TRPM8离子通道发挥降温作用

实验室前期研究发现化合物YZG-330能够使小鼠降低体温,该作用可被腺苷A1受体(adenosine A1 receptor,A1R)拮抗剂DPCPX拮抗,本文基于A1R下游信号通路对YZG-330的作用机制进行进一步探究。通过测量小鼠肛温进行YZG-330药效学评价;采用Western blot技术检测小鼠下丘脑组织匀浆中瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)离子通道和P38蛋白及其磷酸化水平;通过Ca^(2+)荧光探针Fluo-3AM负载细胞,检测YZG-330对小鼠下丘脑细胞内Ca^(2+)含量的影响。YZG-330可剂量依赖性地降低小鼠体温,P38选择性抑制剂SB-203580(20 mg·kg^(-1),i.p.)可显著抑制YZG-330的降温作用。TRPM8拮抗剂(每只小鼠0.1μg,i.c.v.)可以部分拮抗YZG-330(0.25 mg·kg^(-1)和1 mg·kg^(-1),i.p.)的降温效果。腹腔注射给予小鼠YZG-330(2 mg·kg^(-1),i.p.)可显著上调小鼠下丘脑组织中P38磷酸化水平,A1R拮抗剂DPCPX(5 mg·kg^(-1),i.g.)可有效抑制该变化;YZG-330还可显著上调小鼠下丘脑组织中TRPM8表达量,SB-203580可非常显著地抑制YZG-330引起的TRPM8上调;YZG-330(0.1~10μmol·L^(-1))可剂量依赖性地升高小鼠下丘脑细胞内Ca^(2+)浓度,A1R抑制剂DPCPX(0.5和1μmol·L^(-1))与TRPM8拮抗剂(1μmol·L^(-1))均可抑制YZG-330的升高胞内Ca^(2+)浓度的作用。综上所述,YZG-330发挥降温作用的机制之一是通过激活A1R,促进P38蛋白磷酸化,进而上调TRPM8离子通道表达量并激活该通道开启,导致胞内Ca^(2+)含量上升,通过负调节下丘脑体温调定点导致体温下降。本文中所有动物实验均获得中国医学科学院药物研究所伦理委员会批准。