瞬时感受电位香草酸亚家族蛋白1受体在慢性偏头痛大鼠模型中的作用研究

目的本研究通过炎性汤(IS)反复刺激SD大鼠上矢状窦区硬脑膜建立慢性偏头痛(CM)大鼠模型,探讨瞬时感受电位香草酸亚家族蛋白1(TRPV1)受体在CM发病过程中的作用,为研究CM发病机制和治疗药物提供理论依据。方法 72只SD大鼠随机数字表法分为空白对照组(A组)、假手术组(B组)、CM模型组(C组)及TRPV1受体拮抗剂Capsazepine组(D组),采用免疫组织化学染色、Western-Blot、Real-time PCR技术检测大鼠硬脑膜、三叉神经节(TG)、三叉神经脊束尾侧核(TNC)中的TRPV1受体、降钙素基因相关肽(CGRP)表达量变化。结果 TRPV1受体和CGRP在CM大鼠硬脑膜、TG及TNC上的表达量均增加(P<0.05),通过侧脑室注射Capsazepine药物后明显缓解大鼠疼痛,且TRPV1受体、CGRP表达量均明显下降(P<0.05)。结论 TRPV1受体通过影响CGRP释放参与CM神经源性炎症反应及痛觉传导,提示TRPV1可能通过TRPV1-CGRP信号通路参与CM病理生理过程。

宫颈癌患者血清WNT1诱导信号通路蛋白1、瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员7水平及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)、瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员7(TRPM7)水平及临床意义。方法选取150例宫颈癌患者和164例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者。采用酶联免疫吸附法检测两组患者血清WISP1水平,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组患者血清TRPM7 mRNA水平。宫颈癌发生的影响因素采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估血清TRPM7 mRNA、WISP1单独及联合检测对宫颈癌的诊断价值。结果宫颈癌患者血清TRPM7 mRNA、WISP1水平均明显高于CIN患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。宫颈癌患者中文化程度为初中及以下、孕次≥3次、产次≥2次、合并高危人乳头瘤病毒(HPV)感染的比例均明显高于CIN患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,TRPM7 mRNA水平升高、WISP1水平升高、合并高危HPV感染均是宫颈癌发生的独立危险因素(P﹤0.01)。ROC曲线显示,TRPM7 mRNA、WISP1联合检测诊断宫颈癌的AUC为0.944(95%CI:0.921~0.966),高于二者单独检测(P﹤0.05)。结论宫颈癌患者血清TRPM7 mRNA、WISP1水平较高,二者联合检测可提高对宫颈癌的诊断价值。

瞬时感受器电位香草酸受体3促进胶质瘤U251细胞系增殖和侵袭

目的 研究瞬时感受器电位香草酸受体3(TRPV3)通道蛋白对胶质瘤U251细胞系增殖和侵袭的影响及分子机制。方法应用siRNA技术敲除U251细胞中TRPV3的表达,MTT方法检测细胞的增殖能力,Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。结果 敲除TRPV3表达后U251细胞增殖和侵袭能力下降,磷酸化的CaMKⅡ和cyclin D1的表达也受到抑制。结论 TRPV3通道蛋白能够促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭能力。其机制是TRPV3通道开放,细胞外Ca2^+内流,cyclin D1过表达促进细胞的增殖。

基于PGE2/PKC/TRPV1信号通路研究热敏灸对膝骨性关节炎兔镇痛效应机制

目的观察热敏灸对膝骨性关节炎(KOA)兔血清PGE2、背根神经节PKC、穴区皮肤TRPV1的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法36只雄性普通级新西兰兔随机分为空白组(6只)、假手术组(6只)、造模组(24只)。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15d,假手术组关节腔内注射等量的0.9%NaCl溶液。造模成功后,造模组随机分成模型组(6只),艾灸组(18只),艾灸组艾灸“犊鼻”穴,每日1次,每次40 min,共7 d,根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组(10只)和非热敏灸组(7只),空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,肉眼、光镜下观察膝关节滑膜形态学变化;ELISA法检测血清PGE2表达;Real-time PCR法检测各组兔背根神经节PKC mRNA、穴区皮肤TRPV1 mRNA的含量。结果(1)干预后模型组兔膝关节腔内有大量积液,滑膜增生肥厚,伴有血管增生及大量炎症细胞成团聚集;热敏灸及非热敏灸组关节腔内积液减少,滑膜异常增生改善。(2)与空白组比较,模型组血清PGE2含量明显上升(P<0.01);与模型组比较,热敏灸组、非热敏灸组血清PGE2含量下降,差异有统计学意义(均P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组血清PGE2含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)与空白组比较,模型组背根神经节PKC mRNA、穴区皮肤TRPV1 mRNA含量升高,差异有统计学意义(均P<0.01);与模型组比较,热敏灸及非热敏灸组PKC、TRPV1 mRNA表达下降,差异有统计学意义(均P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组PKC、TRPV1 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论热敏灸可抑制PGE2、PKC、TRPV1的高表达,从而抑制痛觉过敏,减轻KOA滑膜炎性反应,缓解关节损害,这可能是热敏灸治疗KOA的效应机制之一。

四神丸调控p38 MAPK/JNK/TRPV1信号通路改善脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏敏感性

目的:探讨四神丸改善腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏敏感性的作用及其可能机制。方法:40只雄性SPF级大鼠随机分为空白组、模型组、四神丸低、高剂量组(3.51、7.02 g·kg^(-1))、培菲康组(0.54 g·kg^(-1))。除空白组外,其余均以母子分离刺激+番泻叶水煎剂灌胃构建脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征大鼠模型。给予相应药物干预后:观察大鼠一般情况,测量大鼠6 h排便颗粒及腹壁撤退反射实验(AWR)最小容量阈值,酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胃泌素(GAS)、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠结肠组织形态,甲苯胺蓝染色法观察大鼠结肠组织肥大细胞脱颗粒情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)、蛋白酶激活受体2(PAR2)蛋白表达,免疫组化法检测结肠组织TRPV1蛋白含量,免疫荧光法检测结肠组织神经肽P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)蛋白阳性表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠6 h排便颗粒显著增加(P<0.01),AWR最小容量阈值显著降低(P<0.01),TNF-α含量显著升高(P<0.01),GAS、CORT、ACTH含量明显降低(P<0.05,P<0.01),肥大细胞脱颗粒率升高(P<0.01),TRPV1的阳性表达明显升高(P<0.05),SP、CGRP蛋白阳性表达明显升高(P<0.05,P<0.01),p38 MAPK、JNK、TRPV1、PAR2蛋白表达量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,四神丸高剂量组AWR最小容量阈值显著升高(P<0.01),四神丸高剂量组、培菲康组排便频率明显下降(P<0.05,P<0.01),TNF-α含量明显降低(P<0.05,P<0.01),GAS、CORT、ACTH含量明显升高(P<0.05,P<0.01),肥大细胞脱颗粒率下降(P<0.01),TRPV1阳性表达下降(P<0.05),SP、CGRP表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),p38 MAPK、JNK、TRPV1、PAR2蛋白表达量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:四神丸可改善脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏敏感性,其机制可能与调控p38 MAPK/JNK/TRPV1信号通路相关。

TRPV1通道蛋白在呼吸系统的研究进展

瞬时感受器电位离子通道蛋白（transient receptor potential ion channel protein，TRP）是细胞膜或细胞器膜上的一类非选择性Ca2＋通道蛋白，通过影响细胞内Ca2＋浓度来发挥众多的生理、病理功能。在TRP家族中，瞬时感受器电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid1 ，TRPV1）是目前分布最广、研究最多、最为关注的TRP通道蛋白，多数研究发现TRPV1在炎症的产生和痛觉的传递中发挥重要作用。本文就TRPV1在呼吸系统中的表达、功能调节和临床应用等方面作一综述。

艾灸对慢性溃疡性结肠炎小鼠内脏高敏及结肠组织炎性反应的影响

目的:观察艾灸“足三里”对慢性溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体1(TNF-R1)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)、瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)表达的影响,探讨艾灸改善慢性UC内脏高敏的可能机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠按体质量随机分为正常组、正常+艾灸组、模型组、模型+艾灸组,每组10只。以2.5%的葡聚糖硫酸钠循环3个周期饮用法建立慢性UC模型。正常+艾灸组和模型+艾灸组小鼠予以“足三里”艾灸,每次20 min,每周连续干预5 d,休息2 d,共4周。评价各组小鼠治疗前后的疾病活动指数(DAI)评分;测定各组小鼠腹壁回撤反射(AWR)最小容量阈值以观察小鼠肠道敏感性;测量各组小鼠结肠长度;HE染色观察各组小鼠结肠组织病理变化;过碘酸雪夫染色检测各组小鼠结肠组织杯状细胞中的黏液素分泌;Masson染色观察各组小鼠肠道纤维化情况;免疫荧光染色法检测各组小鼠结肠组织类胰蛋白酶阳性细胞数(即肥大细胞数)及TNF-α表达水平;免疫组织化学法检测各组小鼠结肠组织TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达水平。结果:艾灸治疗后,与正常组相比,模型组小鼠DAI评分升高(P<0.001),AWR最小容量阈值降低(P<0.01),结肠长度缩短(P<0.001),结肠组织炎性浸润明显,深入基底层,黏液素分泌减少(P<0.01),胶原纤维增加(P<0.001),结肠组织中肥大细胞数量增加(P<0.001),TNF-α、TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达水平均明显升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。与模型组相比,模型+艾灸组小鼠DAI评分降低(P<0.01),AWR最小容量阈值升高(P<0.001),结肠长度增加(P<0.001),炎性细胞浸润减少,黏膜肠腺结构完整性增加,黏液素分泌增多(P<0.01),胶原纤维减少(P<0.001),结肠组织中肥大细胞数量减少(P<0.001),TNF-α、TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达水平均明显降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。正常+艾灸组小鼠各项指标与正常组相比差异无统计学意义。结论:艾灸可减轻慢性UC小鼠内脏高敏,减轻肠道肥大细胞炎性浸润及纤维化损伤,该效应可能与艾灸下调结肠TNF-α、TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达有关。

直肠内脱垂患者手术前后直肠黏膜TRPV1、TRPA1与5-HT表达变化及生活质量分析

目的探讨直肠内脱垂(internal rectal prolapse,IRP)患者手术前后直肠黏膜感觉相关信号瞬时感受器电位香草酸受体(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、瞬时受体电位通道A1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)与5-羟色胺(5-serotonin,5-HT)的表达变化,同时评价手术治疗对患者生活质量的改善情况。方法以2015年1月至2016年12月于本院接受手术治疗的79例IRP患者为例,在术前1 w和术后3个月进行电子结肠镜检查,于齿状线上4 cm处取黏膜活检2块,行5-HT、TRPV1和TRPA1免疫组化染色,采用图像分析法分析免疫反应阳性情况,同步采用GIQLI及SF-36评价患者生活质量,采用WC评分表评价便秘改善情况。结果与术前1 w相比,术后3个月直肠黏膜的5-HT、TRPV1和TRPA1阳性表达均显著下降(均P<0.05),手术前后在不同性别之间的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。与术前1 w相比,术后3个月的WC评分显著下降(P<0.05),GIQLI评分及SF-36评分均显著提高(均P<0.05),手术前后在不同性别之间的评分差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论直肠内脱垂患者术后直肠黏膜TRPV1、TRPA1与5-HT阳性表达显著下降,患者术后生活质量得到显著改善。

TRPV4活化调控TXNIP表达在急性大鼠肾损伤中的作用及分子机制

目的观察TRPV4通道活化是否诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)损伤,并探讨可能的分子机制。方法利用不同浓度的TRPV4激动剂4α-PDD刺激NRK-52E细胞,应用Calcein-AM/PI双染色和LDH释放实验检测NRK-52E细胞损伤情况。Western blot检测TXNIP的表达,siRNA沉默TXNIP表达对4α-PDD诱导的NRK细胞损伤的影响。结果 4α-PDD诱导NRK-52E细胞损伤,表现为Calcein-AM染色的活细胞数下降,PI染色的死细胞增加,同时LDH释放增加,且这种损伤作用呈时间和剂量依赖。4α-PDD诱导TXNIP表达,且表达呈时间和剂量依赖。利用siRNA沉默表达TXNIP可明显降低TRPV4活化导致的NRK-52E损伤。结论 TRPV4活化通过上调TXNIP的表达导致NRK细胞的损伤,通过调控TRPV4/TXNIP很可能为保护肾损伤提供新的理论依据。

YZG-330通过P38 MAPK信号通路调节TRPM8离子通道发挥降温作用

实验室前期研究发现化合物YZG-330能够使小鼠降低体温,该作用可被腺苷A1受体(adenosine A1 receptor,A1R)拮抗剂DPCPX拮抗,本文基于A1R下游信号通路对YZG-330的作用机制进行进一步探究。通过测量小鼠肛温进行YZG-330药效学评价;采用Western blot技术检测小鼠下丘脑组织匀浆中瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)离子通道和P38蛋白及其磷酸化水平;通过Ca^(2+)荧光探针Fluo-3AM负载细胞,检测YZG-330对小鼠下丘脑细胞内Ca^(2+)含量的影响。YZG-330可剂量依赖性地降低小鼠体温,P38选择性抑制剂SB-203580(20 mg·kg^(-1),i.p.)可显著抑制YZG-330的降温作用。TRPM8拮抗剂(每只小鼠0.1μg,i.c.v.)可以部分拮抗YZG-330(0.25 mg·kg^(-1)和1 mg·kg^(-1),i.p.)的降温效果。腹腔注射给予小鼠YZG-330(2 mg·kg^(-1),i.p.)可显著上调小鼠下丘脑组织中P38磷酸化水平,A1R拮抗剂DPCPX(5 mg·kg^(-1),i.g.)可有效抑制该变化;YZG-330还可显著上调小鼠下丘脑组织中TRPM8表达量,SB-203580可非常显著地抑制YZG-330引起的TRPM8上调;YZG-330(0.1~10μmol·L^(-1))可剂量依赖性地升高小鼠下丘脑细胞内Ca^(2+)浓度,A1R抑制剂DPCPX(0.5和1μmol·L^(-1))与TRPM8拮抗剂(1μmol·L^(-1))均可抑制YZG-330的升高胞内Ca^(2+)浓度的作用。综上所述,YZG-330发挥降温作用的机制之一是通过激活A1R,促进P38蛋白磷酸化,进而上调TRPM8离子通道表达量并激活该通道开启,导致胞内Ca^(2+)含量上升,通过负调节下丘脑体温调定点导致体温下降。本文中所有动物实验均获得中国医学科学院药物研究所伦理委员会批准。