超声改性对蓝莓果胶与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷相互作用的影响

本文以不同超声处理(688、1376、2063 W/cm^(2),10、20、30 min)对蓝莓中水溶性果胶、螯合性果胶、碳酸钠可溶性果胶进行超声改性,并探讨改性果胶结构与果胶-矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)相互作用的关系。实验结果表明,超声改性使果胶与C3G之间的相互作用增强。超声功率2063 W/cm^(2)处理10 min后,与未经超声改性相比,三种果胶均表现出与C3G的最大结合量(提高到约2~6倍),但长时间超声(20~30 min)不利于改性果胶与C3G的相互作用。经超声改性后,果胶-C3G复合物的粒径变小,Zeta电位增加,物理稳定性提高。在三种不同的果胶样品中,超声处理引起了果胶分子量的降低和甲基酯化,促进了支链结构的降解,提高了游离羧基的数量,并增加了结构网络空隙,超声处理对果胶结构特性的改变促进了果胶与C3G之间的相互作用。

2种黑豆球蛋白与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的相互作用研究

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)在不同pH值环境中的主要存在形式不同,其抗氧化能力也有所差异。黑豆蛋白是一种常见的膳食蛋白,具有作为不稳定生物活性化合物载体的潜力,了解黑豆球蛋白与C3G的相互作用机制有利于它们在食品体系中的应用。通过多种光谱学分析和分子对接实验研究了pH值为2.0、5.0和7.0时黑豆β-伴大豆球蛋白(7S)和大豆球蛋白(11S)与C3G的相互作用及其对C3G氧化稳定性和抗氧化能力的影响。研究结果表明,pH值为2.0和5.0时,C3G与7S和11S结合不仅导致Tyr残基周围的疏水环境减少,极性增加,而且使7S和11S中α-螺旋增加,β-折叠比例下降。pH值为7.0时,C3G的存在使7S和11S中α-螺旋和β-折叠的占比呈增加趋势,但β-转角比例降低。此外,C3G与7S和11S结合是一个放热过程,在不同pH值条件下,C3G与7S和11S主要通过氢键和范德华力相互作用使7S和11S静态荧光猝灭。7S和11S均在pH值为7.0时对C3G亲和力最强。分子对接结果表明,7S上的GLU229、ARG356和PRO101残基,11S上的ARG161、VAL162、ILE171和THR176残基在与C3G结合中起关键作用。在不同pH值条件下,7S、11S与C3G结合后均显著增强了C3G的氧化稳定性和抗氧化能力。

高效液相色谱法测定黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷方法的建立

本试验建立一种高效液相色谱法测定黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的方法。结果表明:本方法可有效分离目标色谱峰。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在0.20~50.0μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(R^(2)为0.999894),精密度RSD为0.1%,重复性RSD为0.2%~1.3%,检出限和定量限分别为0.1 mg/kg、0.3 mg/kg。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷低、中、高浓度回收率分别为96.5%、98.4%、100.7%。该方法线性良好,准确度和精密度高,重复性和回收率较好,适用于黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的测定。

高糖高脂环境下抑制自噬对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护胰岛β细胞损伤的影响

目的:探究高糖高脂(HGHF)环境下矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对胰岛β细胞损伤的影响及作用机制。方法:采用含10、20、30、40、50μmoL/L C3G的培养液处理胰岛β细胞24h,以未经处理的胰岛β细胞作为对照组,CCK-8法检测各处理组细胞活力;使用含25mmoL/L葡萄糖与0.5mmoL/L棕榈酸的培养液建立HGHF环境,并添加含10、20、30、40、50μmoL/L C3G处理胰岛β细胞24h,以未经处理的胰岛β细胞作为对照组,25mmoL/L葡萄糖与0.5mmoL/L棕榈酸诱导的胰岛β细胞作为HGHF组,CCK-8法检测各处理组细胞活力。实验分为对照组、HGHF组、HGHF+C3G组、HGHF+C3G+3-MA组,进行相应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测各组细胞活性氧(ROS)水平,比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平,ELISA法测定各组细胞胰岛素分泌情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞中自噬相关基因5(Atg5)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1的mRNA表达水平,蛋白质免疫印记(Western blot)测定各组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化型半胱天冬酶-3(Cleaved Caspase-3)的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,不同浓度(10、20、30、40、50μmoL/L)C3G组胰岛β细胞活力升高(P<0.05),HGHF组胰岛β细胞活力下降(P<0.05);与HGHF组比较,在HGHF环境下加入20、30、40、50μmoL/L C3G能够显著提高胰岛β细胞活力(P<0.05)。与HGHF组比较,HGHF+C3G组细胞活力升高(P<0.05),ROS含量和MDA含量下降(P<0.05),SOD活性和GSH-Px含量上升(P<0.05),胰岛素分泌水平增加(P<0.05),Atg5、LC3、Beclin-1的mRNA相对表达量上调(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白相对表达量上调(P<0.05),Bax、Cleaved Caspase-3的蛋白相对表达量下调且Bcl-2蛋白相对表达量上调(P<0.05)。而在HGHF环境下添加C3G处理的同时使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用,C3G对HGHF环境下胰岛β细胞的保护作用消失。结论:C3G对HGHF环境下的胰岛β细胞起到保护作用,其能够提高细胞活力,抑制氧化应激损伤,该作用可能与促进自噬相关。

HPLC法测定不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量

目的:建立黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定方法,测定5个不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。方法:采用HPLC法测定黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量,色谱柱采用Phenomenex LunaSu C18柱(250mm×4.60mm,5μm);流动相A相为0.5%磷酸溶液,B相为水-乙腈(50:50),进行梯度洗脱;流速0.8mL/min;检测波长520nm;柱温30℃;进样量10μL。结果:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准曲线回归方程为:Y=2×107X-33120(r=0.9998),在0.1041～1.041μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为92.4%、92.5%和95.5%,不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量范围为5.263～12.829mg/g。结论:所用方法简便、准确,可用于不同产地黑豆皮的质量控制。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)通过靶向TOPK抑制结直肠癌细胞的增殖

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对结直肠癌增殖的影响及机制。方法采用体外结合及体外激酶实验检测C3G与T细胞淋巴因子活化杀伤细胞来源的蛋白激酶(TOPK)的结合能力及对其活性的影响;采用软琼脂试验检测C3G对结肠癌细胞克隆形成能力的影响;采用MTS法测定C3G的细胞毒性;采用大肠杆菌BL21表达GST-组蛋白H3融合蛋白;采用慢病毒感染的方法,检测C3G对沉默TOPK的结肠癌细胞克隆形成能力的影响;Western blot法检测HCT116细胞中C3G对TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化的水平;建立结肠癌患者癌组织异种移植小鼠模型,免疫组织化学染色法检测组蛋白H3的磷酸化水平。结果C3G在体外直接与TOPK结合并抑制TOPK活性;C3G以浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞的增殖及克隆形成;沉默TOPK降低结肠癌细胞对C3G的敏感性;C3G以时间和浓度依赖的方式抑制TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化水平;另外,C3G抑制患者来源的结肠癌组织异种移植瘤小鼠体内肿瘤的生长。结论C3G通过靶向TOPK抑制结直肠癌的生长。

矢车菊-3-O-葡萄糖苷与牛血清白蛋白相互作用的光谱学研究

应用紫外吸收光谱、荧光光谱和同步荧光光谱法研究了矢车菊-3-O-葡萄糖苷与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,结果表明:矢车菊-3-O-葡萄糖苷能使BSA发生内源荧光猝灭,属静态猝灭机理。25℃和30℃下,矢车菊-3-O-葡萄糖苷与BSA的静态猝灭速率常数分别为3.7×104 L.mol-1,4.1×104 L.mol-1,结合常数为1.1×105 L.mol-1,1.5×105 L.mol-1,结合位点数为1。根据Fòrster非辐射能量转移机理,矢车菊-3-O-葡萄糖苷与BSA之间的作用距离约为5.6 nm,能量转移效率为0.085。热力学分析表明矢车菊-3-O-葡萄糖苷与BSA存在疏水相互作用,矢车菊-3-O-葡萄糖苷对BSA构象影响较小。

高效液相色谱法测定阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量

目的:建立以HPLC-紫外检测器测定阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的方法。方法:分别采用水和1%盐酸水溶液为溶剂,使矢车菊素-3-O-葡萄糖苷分别呈中性醌式碱和烊阳离子构型,比较两种构型对测定波长、色谱峰分离度、供试品制备方法、响应因子和标准曲线,以及对含量测定结果的影响。结果:采用烊阳离子构型,即供试品和对照品用1%盐酸水溶液为溶剂,以DIKMA C_(18)(4.6 mm×250 mm×5μm)柱为分析柱,乙腈-0.5%磷酸溶液(12∶88,V/V)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为520 nm。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷烊阳离子构型在0.002419～0.077412 mg/mL范围呈线性关系,y=37029.5438x-7.6051(R^2=0.9999),回收率为98.31%(RSD%=1.44%),3批阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量为0.1158～0.1663 mg/g。结论:采用矢车菊素-3-O-葡萄糖烊阳离子构型,以HPLC-紫外检测器测定阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的方法操作简便、灵敏、结果准确、重复性好。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷进入巨噬细胞的荧光检测

利用荧光技术探索矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin 3-O-glucoside,C3G)在体外培养的巨噬细胞中的分布。首先采用荧光分光光度法扫描C3G的特异激发波长和发射波长,再利用激光共聚焦技术探讨C3G进入小鼠和人巨噬细胞的过程以及C3G在细胞中的定位,并分析C3G孵育时间对细胞内荧光强度变化的影响。结果表明:在488 nm和520 nm的激发波长下,C3G孵育15 min的细胞质内开始呈现绿色和红色荧光,并且随着孵育时间的变化,细胞内荧光强度逐渐增强,其中孵育60 min可观察到荧光布满细胞核,其荧光强度是孵育前的6.45倍。研究表明采用特异波长的激光共聚焦断层扫描技术可示踪到花色苷在干预细胞内的分布,结果显示花色苷C3G可快速穿过巨噬细胞的细胞膜和核膜,直达细胞核。

桑叶中山奈酚-3-O-芸香糖苷水热酸控质子化作用

KR(山奈酚-3-O-芸香糖苷)具有药理高附加值。采用水热酸控醇提法提制桑叶中KR,优化获得KR浸提适宜参数,构建动力学模型,探究KR的传质溶浸过程。结果表明:投加柠檬酸质量浓度0.050 g/L,桑叶与45%的乙醇溶液质量体积比为1∶20 g/mL,80℃水热反应釜中处理40 min,2.00 g桑叶可溶浸KR 16.09 mg/g,是自动中药煲水热浸提KR(0.41 mg/g)的40倍;SEM(扫描电镜)显示水热酸控反应后桑叶表面孔隙明显增多增大,FT-IR(傅里叶变换红外光谱)表明水热酸控反应有利于桑叶C-O、C-H等键水裂解,KR溶浸满足一级动力学模型,溶出速率为-3.45 min-1,为桑叶高值化开发提供理论依据。

桑椹矢车菊-3-O-葡萄糖苷的提取及在不同果桑品种中的含量和稳定性测定

矢车菊-3-O-葡萄糖苷(C3G)是桑椹花青素的主要成分之一。以8个果桑品种的桑椹鲜果为材料,采用超声波辅助酸性有机溶剂浸提法提取C3G,并初步建立桑椹C3G含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法。以体积比为44∶6的0.2%磷酸-乙腈作为提取溶剂,当料液质量浓度为0.125 g/mL时,桑椹C3G的浸提效率较高;不同桑品种桑椹鲜果中的C3G含量存在极显著差异,其中果桑品种台湾46C的桑椹C3G含量最高,质量分数高达0.133 7%左右,而果桑品种桂花蜜的桑椹C3G含量极低,质量分数为0.000 6%。桑椹鲜果冷冻(-20℃)保存可减缓C3G的降解;常温(25℃)保存4 h桑椹中的C3G比较稳定,7 h后C3G的降解率达22.949 1%左右,48 h后降解率高达58.169 2%左右。果桑品种台湾46C的桑椹中富含C3G,桑椹鲜果采摘后应及时提取C3G,并在密闭、低温环境中储藏。

乳清蛋白/矢车菊素-3-O-葡萄糖苷纳米粒的制备

采用纳米粒度仪、透射电镜、傅里叶红外光谱技术研究乳清蛋白(whey protein,WP)/矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)纳米粒的微观结构变化,并分析纳米粒的体外消化稳定性和贮藏稳定性。WP 80℃水浴加热30 min后,调节pH值至中性,以C3G与WP体积比1∶80混匀,再加入8 mmol/L CaCl2制备纳米粒,此时纳米粒子的直径为(275.51±3.15)nm,PdI值为(0.28±0.01),电位为(-16.92±1.04)mV,包埋率为(97.09±2.39)%,载药量为(2.43±0.05)%。透射电镜表明WP包埋C3G后,纳米粒子由空心纳米球状变为典型的“核-壳”结构。红外光谱结果显示WP二级结构与C3G结合后发生改变,α-螺旋和β-转角减少,β-反向折叠和无规卷曲增加。在模拟体外消化中,WP-C3G纳米粒中C3G释放率达到(87.25±3.72)%,与未结合WP的C3G相比,其降解率下降(51.34±0.52)%。在避光贮藏20 d后,C3G的最终保留率为(42.62±2.33)%,而WP-C3G中C3G的保留率为(64.14±1.70)%。结果表明,C3G与WP结合后能够有效改善其胃肠消化稳定性和贮藏稳定性。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制。通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力以及一氧化氮(nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;利用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯活性氧荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;通过逆转录定量聚合酶链式反应和Western blot法分别测定相关mRNA和蛋白表达水平。结果表明,C3G(6.25~25.00μmol/L)能显著抑制H2O2诱导RAW264.7细胞活性降低(P<0.05)。C3G显著降低H2O2诱导RAW264.7细胞内ROS过表达、MDA水平和NO释放(P<0.05),显著增加SOD和GSH-Px活力(P<0.05)。此外,与空白对照相比,400μmol/L H2O2处理组中,蛋白激酶Mst1/2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白Keap1的mRNA及蛋白相对表达水平显著上调(P<0.05),而细胞中核因子E2相关因子和下游抗氧化酶HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平显著下调(P<0.05);而采用C3G干预RAW264.7细胞,上述相关mRNA及蛋白的相对表达水平被逆转。结论:C3G对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤保护作用,可能与激活Mst/Nrf2信号通路和提高抗氧化酶活性有关。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制动力学

通过超滤-高效液相色谱、酶动力学以及分子对接等方法研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制的机制。结果表明,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷以可逆非竞争性的方式抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性。此外,荧光猝灭分析结果表明,在疏水作用力驱动下,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷可与两种酶结合生成复合物。分子对接结果显示,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷通过氢键与疏水作用力与α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的关键氨基酸残基相互作用,其结合能分别为-7.8 kcal/mol和-9.8 kcal/mol。本研究为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为功能性膳食食品中α-淀粉酶/α-葡萄糖苷酶的潜在抑制剂的开发提供了新思路。

矢车菊-3-O-葡萄糖苷及其代谢物原儿茶酸对杂环胺诱导细胞损伤的修复机制

目的:研究矢车菊-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)及其主要代谢物原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对杂环胺诱导细胞损伤的修复机制。方法:分别采用2-氨基-3-甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]quinoline,IQ)和2-氨基-1-甲基-6-苯基-咪唑[4,5-b]吡啶(2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine,PhIP)诱导HepG2细胞损伤,利用细胞毒性实验(cell counting kit-8,CCK-8)、Hoechst33258染色法、流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术,评价C3G和PCA对杂环胺诱导损伤细胞的存活情况、细胞周期以及凋亡和DNA损伤关键基因表达的影响。结果:C3G和PCA能够显著提高杂环胺损伤细胞的存活率(P<0.05),并使细胞发生S期阻滞。与IQ单独损伤组相比,C3G和PCA均可显著降低GADD45α和促凋亡基因Bim的mRNA水平,并显著提高抑凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的mRNA水平(P<0.05);与PhIP单独损伤组相比,C3G和PCA能够促进大多数促凋亡基因表达。结论:C3G和PCA能够通过减少DNA损伤和细胞凋亡修复IQ和PhIP诱导的细胞损伤,当细胞损伤严重至无法逆转时,可促进细胞凋亡,减少癌变。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对水中丙溴磷的光降解抑制效应

为明确丙溴磷在水中的光降解行为和黄酮类化合物矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对丙溴磷光降解作用效应和机制,研究了高压汞灯光照下矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对不同初始浓度丙溴磷光降解的影响,分别通过PNDA捕获羟基自由基和离子色谱法研究了丙溴磷光降解过程中羟基自由基和溴离子含量变化情况,并利用LC-MS-MS确定了丙溴磷光降解的初级产物。结果表明:高压汞灯光照下,3种浓度丙溴磷(5、25和50μmol·L^(-1))的光降解半衰期分别为8.97、12.36和13.15 min;加入摩尔浓度比1∶5的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后,丙溴磷的光降解半衰期分别延长了1.65倍、3.93倍和5.71倍。丙溴磷光降解过程中产生了羟基自由基,加入矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后羟基自由基含量骤减;丙溴磷光降解反应体系中丙溴磷的降解摩尔量与溴离子产生摩尔量呈1∶1关系,而加入矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后,溴离子产生摩尔量显著减少。丙溴磷初级光降解产物是O-(2-氯苯基)-O-乙基-S-丙基-硫代磷酸酯,添加矢车菊素-3-O-葡萄糖苷后不改变丙溴磷的光降解路径。研究结果将有助于明确丙溴磷在环境中的行为,尤其是环境中的黄酮类化合物对于丙溴磷光降解的影响效应,从而为评估丙溴磷使用后的潜在环境安全风险提供依据。

复配条件对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷与β-胡萝卜素复合模拟体系物化稳定性的影响

为探讨富含花色苷及类胡萝卜素的复合果蔬汁中花色苷及类胡萝卜素的降解机制,选择自然界中分布最广、含量最多的花色苷及类胡萝卜素——矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)及β-胡萝卜素为对象,构建模拟体系,研究金属离子、pH值、糖种类及含量对C3G和β-胡萝卜素稳定性的影响。结果表明,C3G和β-胡萝卜素热降解均符合一级反应动力学,且两者的降解反应均为吸热非自发反应。C3G和β-胡萝卜素经复合后,C3G的稳定性无显著变化,而β-胡萝卜素稳定性降低。此外,不同糖种类及浓度对复合模拟体系中的C3G和β-胡萝卜素热降解的影响不同。糖类对C3G的促降解作用依次为果糖>蔗糖>葡萄糖,且随糖浓度的增大,花色苷稳定性逐渐增加。而3种糖类对β-胡萝卜素的作用不显著,且随糖浓度的增大,β-胡萝卜素稳定性逐渐下降。研究结果为富含花色苷及类胡萝卜素的复合果蔬汁的研发提供了理论依据。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷及矢车菊素对破骨细胞的调节作用

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷是一种花色苷类物质,在自然界中广泛存在,含量高,该物质失去葡萄糖苷时为矢车菊素,是一种常见的花色素。大量流行病学研究表明,花色苷类物质具有预防骨质疏松症的作用,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷及其花色素能够通过NF-κβ信号通路抑制破骨细胞增殖、分化和成熟,抑制多种破骨细胞标志性蛋白表达,但其调节NF-κβ信号通路的作用位点和机制目前尚不清楚。本文就矢车菊素和矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对破骨细胞的作用及机制进行综述,希望能为骨质疏松症的防治提供研究思路。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H_2O_2诱导细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人胚肾HEK-293细胞氧化损伤的保护作用。方法:通过检测细胞活力、活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)水平考察C3G对氧化损伤细胞的影响,并采用Western blot法和q RTPCR检测Nrf2和Keap1的蛋白表达量和m RNA表达量变化。结果表明:C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于H_2O_2损伤组(p <0.05),并呈浓度依赖性提高; H_2O_2损伤组的DCF荧光强于对照组,ROS相对含量增加到近2倍,1.25、5、20μmol/L C3G预处理后细胞荧光强度逐渐减弱,ROS相对量呈浓度依赖性降低; C3G预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低; 1.25、5、20μmol/L C3G处理后,Nrf2的m RNA表达和蛋白表达量均呈浓度依赖性上调,Keap1蛋白表达量显著低于H_2O_2损伤组(p <0.05),5和20μmol/L C3G对Keap1的m RNA下调作用明显。结论:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对HEK-293细胞有保护作用,可降低细胞ROS和MDA水平,其作用机制可能是通过激活Nrf2/Keap1信号通路以抵抗H_2O_2导致的细胞氧化损伤。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对人原代成骨细胞JNK/FOXO1的影响

目的观察矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人原代成骨细胞增殖作用及对c-Jun氨基末端激酶/叉头盒蛋白O1(JNK/FOXO1)的影响。方法收集2017年6月至2018年6月沈阳医学院附属中心医院60~90周岁的骨质疏松且股骨颈或股骨粗隆间骨折行人工股骨头或全髋置换的患者的松质骨组织,分离培养体外成骨细胞。MTT法检测control组(含0μmol/L C3G的α-MEM培养液)、C3G组(含100μmol/L C3G的α-MEM培养液)人原代成骨细胞细胞的增殖活力;实时荧光定量PCR法检测control组和C3G组FOXO1、转录激活因子-4(ATF4)和骨保护素(OPG)mRNA表达的情况。使用JNK通路抑制剂(SP600125)对细胞进行处理,实时荧光定量PCR法检测SP600125-control组和SP600125+C3G组FOXO1 mRNA表达的情况。结果C3G组人原代成骨细胞增殖率高于control组,差异有统计学意义(P<0.05)。C3G组人原代成骨细胞FOXO1、ATF4和OPG mRNA表达量低于control组,差异有统计学意义(P<0.05)。SP600125-control组和SP600125-C3G组FOXO1的mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论C3G可能通过JNK通路影响FOXO1基因水平促进人原代成骨细胞增殖。