液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ质量浓度及其药物代谢动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ(TA-Ⅲ)的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并考察其药物代谢动力学(PK)特征。方法色谱柱为Agilent XDB-C_(8)柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-2 mmol/L乙酸铵(55∶45,V/V),流速为250μL/min,柱温为35℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源,以负离子多离子反应监测方式进行检测。将12只大鼠随机分为知母单煎液组和知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组,各6只,采用建立的LC-MS/MS法测定两组大鼠血浆中TA-Ⅲ的浓度(以人参皂苷Rg_(2)为内标)。结果TA-Ⅲ质量浓度在0.3~3000 ng/mL范围内与TA-Ⅲ和内标峰面积比值线性关系良好,定量下限为0.3 ng/mL,精密度、准确度、提取回收率、基质效应、残留效应、稳定性试验结果均符合方法学要求。与知母单煎液组比较,知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组大鼠TA-Ⅲ的血药浓度-时间曲线下面积增大,0-∞的平均滞留时间(MRT_(0-∞))和消除半衰期(t_(1/2))均显著延长(P<0.01)。结论该方法操作简便、结果准确可靠,可用于测定大鼠体内TA-Ⅲ的血药浓度。知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液促进了TA-Ⅲ的吸收,可延长其MRT_(0-∞)和t_(1/2)。

基于网络药理学探讨知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的作用机制

目的通过网络药理学探讨知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌(NPC)的作用靶点及分子机制。方法利用Swiss Target Prediction数据库获取知母皂苷A-Ⅲ作用靶点,通过GeneCards数据库检索NPC相关疾病靶点,将其与知母皂苷A-Ⅲ作用靶点映射,使用Cytoscape 3.6.1软件构建知母皂苷A-Ⅲ-鼻咽癌疾病靶点网络图,并运用DAVID数据库进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。结果获得知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的潜在靶点31个,化合物-关键靶点-通路网络图显示关键靶点主要包括PRKCA、IGF1R、VEGFA和KDR等。GO功能富集分析获得分子功能条目13个、生物过程条目55个和细胞组成条目10个,KEGG通路富集得到20条相关通路,涉及蛋白多糖通路、癌症信号通路和PI3K-Akt信号通路等信号通路。结论基于网络药理学多靶点、多通路的整体作用特点,预测了知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的作用靶点和潜在作用机制,以期为下一步实验研究提供科学依据。

知母皂苷A-Ⅲ调控ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴在非小细胞肺癌中的作用机制研究

目的:研究知母皂苷A-Ⅲ(timosaponin A-Ⅲ,TAⅢ)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)生长的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度TAⅢ(5、10、15、20、25、30μmol/L)处理非小细胞肺癌细胞A549,使用CCK8法检测细胞活力。以定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1-内含子转录因子1(adenosine diphosphate ribosylation factor guanylate kinase 1-intronic transcript 1,ASAP1-IT1)、Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在组织及细胞中的表达。以EDU、流式细胞术和Western blot检测ASAP1-IT1、DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶3β(DNA(cytosine-5-)-methyltransferase 3 beta,DNMT3b)、YAP1对细胞增殖情况、细胞凋亡率及其相关基因(Bax和caspase-3)与抗凋亡基因Bcl2的影响。亚硫酸氢盐测序聚合酶链式反应(Bisulfite sequencing PCR,BSP)分析检测ASAP1-IT1与YAP1的关系。RNA免疫沉淀法(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)和qRT-PCR法检测ASAP1-IT1与DNMT3b之间的相互作用。免疫共沉淀实验(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测DNMT3b与YAP1之间的关系。采用qRT-PCR方法检测TAⅢ对ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴相关基因表达的影响。结果:ASAP1-IT1和YAP1在NSCLC组织和A549细胞中表达上调,而DNMT3b表达下调,加入TAⅢ可逆转这些效应。沉默ASAP1-IT1和YAP1、过表达DNMT3b或应用TAⅢ可增加A549细胞凋亡率和细胞凋亡相关指数。TAⅢ有逆转沉默或过表达ASAP1-IT1、DNMT3b和YAP1的作用。最后发现ASAP1-IT1与DNMT3b相互作用,而DNMT3b与YAP1相互作用。结论:ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴通过调节细胞增殖和凋亡促进NSCLC进展。TAⅢ通过调节ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴抑制肺癌细胞增殖,促进其凋亡。

知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷C对照品的制备与鉴定

目的:研究知母中知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷C对照品的制备方法,并对其进行鉴定。方法:采用大孔吸附树脂、硅胶色谱、Sephadex LH-20色谱、反相ODS色谱分离制备对照品,采用红外、质谱、核磁等波谱方法进行结构鉴定。结果:从知母中分离得到知母皂苷A-Ⅲ与知母皂苷C对照品,纯度均>98%。结论:本试验结果可为知母皂苷的新药开发提供物质基础。

比色法测定大蒜提取物中大蒜总皂苷含量

目的:建立一种大蒜提取物中总皂苷含量的测定方法。方法:以知母皂苷A-Ⅲ为对照品,香草醛-高氯酸比色法测定大蒜提取物中总皂苷含量。结果:知母皂苷A-Ⅲ在20.16～181.44μg与吸光度呈良好线性关系,回归方程为Y=4.839X+0.066,r=0.999 5(n=9),平均回收率100.6%,RSD 1.5%。结论:该方法简单,准确性、重复性良好,可作为大蒜提取物中总皂苷质量控制方法。