网络药理学、分子对接结合实验验证探讨知母皂苷AⅢ治疗胶质母细胞瘤的作用机制

目的基于网络药理学、分子对接和体外实验验证探索知母皂苷AⅢ(TIA)治疗胶质母细胞瘤(GBM)的潜在靶点及其信号通路。方法利用Pharmmapper数据库预测TIA的作用靶点,通过GeneCards数据库获得GBM相关的疾病靶点;通过STRING数据库得到交集靶点的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络图,并使用Cytoscape 3.6.0软件进行筛选和分析;交集靶点通过DAVID数据库进行基因本体(GO)功能注释分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,采用分子对接技术考察TIA与关键靶点的结合能力。最后,采用GBM细胞U-87MG、U251进行体外细胞实验,运用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞存活率、Transwell迁移测定实验检测细胞迁移能力,采用Western blot实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验及药物亲和反应的靶点稳定性(DARTS)实验等验证网络药理学分析结果。结果网络药理学预测结果显示,TIA作用靶点与GBM疾病靶点存在65个潜在共用靶点;GO分析结果主要集中在炎症应答、细胞增殖的正向调节等过程;KEGG富集分析显示,TIA通过免疫球蛋白G Fcγ受体(FcγR)介导的吞噬作用、谷胱甘肽代谢等信号通路发挥作用;分子对接分析结果显示,TIA与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的结合潜能最强。体外细胞实验结果显示,TIA呈选择性和剂量依赖性抑制人GBM细胞U-87MG和U251的体外增殖和迁移,并通过靶向亲和MMP-2,抑制其表达而发挥作用。结论TIA可能通过靶向结合MMP-2并抑制其表达而抑制GBM细胞的体外增殖和迁移。

知母皂苷AⅢ对肝癌细胞Akirin2基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的:研究Akirin2在人肝癌组织中的表达及知母皂苷AⅢ(TA-Ⅲ)抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖和促进凋亡的潜在机制。方法:应用RT-qPCR法和免疫组织化学法检测103例肝癌组织中Akirin2的表达。应用MTT法分别检测Akirin2过表达组、Akirin2 inhibitor组以及不同浓度TA-Ⅲ(0、5、10、20、40 mol/L)、紫杉醇组(80 g/ml)干预后对HepG2细胞增殖活力的影响;平板克隆实验和流式细胞术分别检测Akirin2过表达、Akirin2抑制以及TA-Ⅲ干预后对HepG2细胞克隆、凋亡的影响;Akirin2和凋亡蛋白采用WB法检测。TA-Ⅲ(40 mol/L)处理HepG2细胞的同时转染Akirin2 mimics(TA-Ⅲ+Akirin2过表达组),比较过表达Akirin2对TA-Ⅲ干预细胞增殖、凋亡的影响。结果:肝癌患者肝癌组织中Akirin2呈显著高表达(P<0.05),且Akirin2的高表达与患者的不良预后独立相关(P<0.05)。Akirin2过表达组的细胞增殖能力、克隆能力显著高于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率低于对照组(P<0.05)。Akirin2 inhibitor组的细胞增殖能力、克隆能力显著低于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。TA-Ⅲ处理组的HepG2细胞增殖活力显著抑制,细胞增殖活性抑制与干预浓度、时间成正比。TA-Ⅲ不同浓度处理HepG2细胞增殖活力、细胞克隆能力、Akirin2蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡蛋白显著高于对照组(P<0.05)。Akirin2过表达后,TA-Ⅲ对HepG2细胞的细胞增殖能力细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的影响作用被部分逆转。结论:Akirin2在肝癌中呈显著高表达,TA-Ⅲ可通过抑制Akirin2表达抑制癌细胞增殖,促进凋亡。

液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ质量浓度及其药物代谢动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ(TA-Ⅲ)的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并考察其药物代谢动力学(PK)特征。方法色谱柱为Agilent XDB-C_(8)柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-2 mmol/L乙酸铵(55∶45,V/V),流速为250μL/min,柱温为35℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源,以负离子多离子反应监测方式进行检测。将12只大鼠随机分为知母单煎液组和知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组,各6只,采用建立的LC-MS/MS法测定两组大鼠血浆中TA-Ⅲ的浓度(以人参皂苷Rg_(2)为内标)。结果TA-Ⅲ质量浓度在0.3~3000 ng/mL范围内与TA-Ⅲ和内标峰面积比值线性关系良好,定量下限为0.3 ng/mL,精密度、准确度、提取回收率、基质效应、残留效应、稳定性试验结果均符合方法学要求。与知母单煎液组比较,知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液组大鼠TA-Ⅲ的血药浓度-时间曲线下面积增大,0-∞的平均滞留时间(MRT_(0-∞))和消除半衰期(t_(1/2))均显著延长(P<0.01)。结论该方法操作简便、结果准确可靠,可用于测定大鼠体内TA-Ⅲ的血药浓度。知母-黄柏(1∶1,m/m)合煎液促进了TA-Ⅲ的吸收,可延长其MRT_(0-∞)和t_(1/2)。

基于细胞代谢组学技术的知母皂苷元作用于肝癌细胞HepG2机制研究

目的通过细胞代谢组学实验探究知母皂苷元作用于肝癌HepG2的抗肿瘤机制。方法采用液质联用和核磁技术研究知母皂苷元作用于肝癌细胞HepG2后的代谢机制,应用正交偏最小二乘判别分析方法筛选潜在生物标志物,应用MetaboAnalyst和KEGG PATHWAY数据库查找相关的代谢途径。结果共鉴定筛选出谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、柠檬酸盐和2-酮戊二酸等51种生物标志物,寻找到丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路;苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成代谢通路;酮体的合成与降解的代谢途径等5条主要代谢通路。结论知母皂苷元作用于HepG2细胞后,可以引起肝癌HepG2细胞内代谢物较为广泛的变化。其中代谢标志物主要涉及氨基酸代谢和能量代谢,最终抑制了肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡。

知母皂苷B-Ⅱ对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用及机制研究

目的用体内外实验探讨知母皂苷B-Ⅱ(TB-Ⅱ)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的治疗作用及可能的作用机制。方法体外棕榈酸(100μmol/L)处理人肝癌细胞(HepG2),同时加入不同浓度TB-Ⅱ干预24 h,检测细胞TG水平变化。将C75BL/6J小鼠随机分为正常饮食(NCD)组、高脂饮食(HFD)组、TB-Ⅱ低剂量组(HFD+LTB-Ⅱ)、TB-Ⅱ高剂量组(HFD+HTB-Ⅱ),NCD组喂以普通饲料,其余组均以高脂饲料喂养16周建立NAFLD动物模型,TB-Ⅱ低、高剂量组每天分别予50、100 mg/kgTB-Ⅱ灌胃;监测小鼠体质量、脂肪重量、生化指标及肝脏病理评估肝损伤程度,并通过实时定量PCR(RT-PCR)方法检测肝组织脂代谢相关基因变化。结果TB-Ⅱ处理后HepG2细胞TG水平下降;TB-Ⅱ治疗可使HFD小鼠体质量下降,血清转氨酶、TC、TG、LDL-C及肝组织TC和TG水平也显著下降,同时肝脏病理明显改善。其中脂质合成相关基因SREBP-1c、FAS及ACC1表达明显下降,并伴随脂肪酸β氧化关键基因CPT1、PPARα表达上调。结论TB-Ⅱ可通过调控肝细胞脂质合成及脂肪酸氧化延缓高脂诱导的NAFLD进程。

知母皂苷AⅢ通过调节Notch信号通路调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的机制

目的探讨知母皂苷AⅢ(TSAⅢ)对骨肉瘤细胞(HOS)增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)等的影响及其潜在机制。方法用10μmol/L及20μmol/L的TSAⅢ处理人HOS细胞,另设阴性对照组(Ctrl组)与γ分泌酶抑制剂(DAPT)阳性药物对照组,CCK8、平板克隆、划痕实验与Transwelll来评估TSAⅢ对HOS细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测TSAⅢ对EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、细胞间紧密连接蛋白1(CLDN1)、N-钙黏附蛋白(N-cad)及波形蛋白(Vimentin)表达影响;流式细胞术检测TSAⅢ对骨肉瘤HOS细胞凋亡影响,Western blot检测TSAⅢ对抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)蛋白及促凋亡蛋白BCL-2相关X蛋白(BAX)表达影响。构建HOS细胞小鼠模型,分为Ctrl组、DAPT组、TSAⅢ10μmol/L组及TSAⅢ20μmol/L组,21 d后比较各组小鼠肿瘤体积变化,肿瘤组织免疫组化染色比较各组Ki67、凋亡标志物半胱天冬氨酸酶-3剪切体(Cleaved Caspase3)及Vimentin表达差异;免疫荧光比较E-cad与N-cad表达差异。Western blot检测不同浓度TSAⅢ(0、10、20μmol/L)、不同时长TSAⅢ(0、6、12 h)与Notch激动剂Jagged1对Notch通路相关蛋白表达影响。结果CCK8结果显示,与Ctrl组比较,10μmol/L及20μmol/L TSAⅢ处理48 h时,细胞增殖受抑制程度最明显(P<0.01);平板克隆、划痕实验与Transwelll结果显示,TSAⅢ可以抑制HOS细胞增殖、迁移与侵袭;Western blot结果显示,TSAⅢ促进E-cad与CLDN1蛋白表达,且抑制N-cad与Vimentin蛋白表达。流式细胞术结果显示,TSAⅢ促进骨肉瘤HOS细胞凋亡;Western blot结果显示,TSAⅢ抑制BCL-2蛋白表达,促进BAX蛋白表达。动物实验结果显示,TSAⅢ抑制肿瘤增长;免疫组化结果显示,Ki67表达减少,Cleaved-Caspase3及Vimentin表达增加;免疫荧光结果显示,TSAⅢ促进E-cad表达,并抑制N-cad表达。Western blot结果显示,Notch通路相关蛋白表达随TSAⅢ处理时间与浓度的增加而下降,而Jagged1可以解除TSAⅢ对Notch通路的抑制。结论TSAⅢ可能通过抑制Notch信号通路来抑制骨肉瘤HOS细胞增殖、迁移及侵袭。

知母皂苷对脂多糖引起的大鼠学习记忆障碍和炎症反应的影响

目的观察知母皂苷(SAaB)是否对脂多糖(LPS)引起的大鼠学习记忆障碍和炎症反应有改善作用。方法大鼠随机分为对照组、LPS损伤组、LPS+SAaB(20、40mg·kg-1)组。对照组和LPS损伤组大鼠灌胃给予0.2%的二甲基亚砜,SAaB组大鼠灌胃给予SAaB。连续给药7d后,左侧脑室内单次注射LPS30μg/只大鼠,注射量为5μl,正常对照组大鼠注射等量的生理盐水。脑室注射后d2进行大鼠Morris水迷宫实验,连续6d,训练期间继续给药。水迷宫实验结束后,Nissl染色观察海马CA1区锥体神经元改变;白细胞介素-1β(IL-1β)分别与integrinαM和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)双重免疫荧光染色观察IL-1β表达部位;Westernblot检测海马IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平。结果 SAaB(40mg·kg-1·d-1)能明显改善LPS所致大鼠学习记忆能力损伤,表现在明显缩短大鼠的逃避潜伏期,增加大鼠在原平台象限的游泳时间占总游泳时间的百分比;海马CA1区锥体神经元损伤较LPS组明显减轻,对抗LPS引起的IL-1β及iNOS的蛋白表达水平增加;激光共聚焦实验结果显示IL-1β主要在小胶质细胞表达,少量在星形胶质细胞表达。结论 SAaB能改善LPS引起的大鼠学习记忆障碍,抑制其海马的炎症反应。

知母中的两种新呋甾皂苷

目的研究知母根茎的化学成分。方法采用水煎提取、大孔吸附树脂SP825柱色谱、反相C18柱色谱等进行分离,并通过化学手段和光谱分析(FAB-MS,1HNMR,13CNMR,1H-1HCOSY)鉴定其化学结构。结果从知母根茎中分离得到6种甾体皂苷,分别鉴定为:(25S)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β,3β,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(知母皂苷N,1),知母皂苷E1(2),(25S)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β,3β,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(知母皂苷O,3),知母皂苷E2(4),(25R)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-羟基-5α-呋甾-2α,3β,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(purpureagitosid,5),marcogenin-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranoside(6)。结论化合物1和3为新化合物,命名为知母皂苷N和知母皂苷O,化合物5为首次从知母中分离得到。

知母皂苷对小鼠血糖的影响

目的研究知母皂苷对正常小鼠和糖尿病小鼠糖耐量及空腹血糖的影响,探讨其降糖作用机制。方法测定知母皂苷对α-葡萄糖苷酶活性的抑制;正常小鼠口服给药,测定空腹血糖和糖耐量;四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型口服给药,测定空腹血糖及糖耐量。结果知母皂苷对正常小鼠无降血糖作用,但可使糖耐量曲线趋于平缓;知母皂苷能够显著提高糖尿病小鼠糖耐量,降低实验性糖尿病小鼠的空腹血糖。结论知母皂苷具有一定的降糖作用。

知母皂苷抑制血小板聚集的活性成分筛选及构效关系分析

目的筛选从知母中分离的甾体皂苷抑制血小板聚集的活性成分并对其进行构效关系分析。方法雄性Wistar大鼠心脏取血,离心分离获得富血小板血浆,分别加入呋甾烷型或螺甾烷型甾体皂苷化合物孵育3min后,以二磷酸腺苷(ADP)诱导大鼠血小板聚集,采用比浊法检测血小板聚集情况,通过比较不同甾体皂苷化合物对ADP诱导血小板聚集的抑制作用分析化合物的构效关系。结果 8个呋甾烷型甾体皂苷均无抑制血小板聚集的活性;4个螺甾烷型甾体皂苷在不同程度上抑制了血小板聚集,其中知母皂苷AⅢ作用最强,随后依次是知母皂苷AⅠ、知母皂苷AⅢ异构体和知母皂苷Ⅲ,而萨尔萨皂苷元没有活性;在苷元结构C-3位连接不同类型糖基的甾体皂苷抑制血小板聚集的作用不同,其中C-3位糖基为葡萄糖(D-Glc)时能完全抑制血小板聚集,而连接其他糖基如半乳糖(D-Gal)、阿拉伯糖(D-Ara)、核糖(D-Rib)、鼠李糖(L-Rha)或甘露糖(D-Man)时,抑制活性有不同程度的减弱。结论知母皂苷AⅢ是知母抑制血小板聚集的主要有效活性成分之一;甾体皂苷抑制血小板聚集的活性与其结构密切相关;第31、52、2位上的基团类型可影响甾体皂苷抑制血小板聚集的生物活性。

知母皂苷通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞功能的影响,以及对NF-κB-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-NO信号通路的调节。方法以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型,采用Griess法和ELISA法分别检测SAaB干预下,RAW264.7炎症细胞中的NO、iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 RAW264.7细胞在LPS(10 mg·L^(-1))诱导下,NO、iNOS、TNF-α、IL-6的含量以及NF-κB p65蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。SAaB(0.3、3、30 mg·L^(-1))可明显降低RAW264.7炎症细胞中NO、iNOS、TNF-α和IL-6的含量(P<0.01),且明显下调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SAaB可通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路,抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能。

知母皂苷元对高糖引起的体外培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的探讨知母皂苷元(sarsasapogenin,Sar)对高糖引起的海马神经元损伤是否有保护作用。方法选用出生0～24 h Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠,取海马,进行海马神经元体外培养,培养7 d用于实验。实验分为正常对照组、高糖组、高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组;对照组:加入等量含0.1%DMSO培养基;高糖处理组:分别加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h;高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组:先加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)作用1 h,然后加入葡萄糖(50 mmol.L-1)作用48 h;应用MTT方法观察细胞活力,免疫荧光和Western免疫印迹方法观察神经元突触素表达的改变。应用Hoechst 33258核染色检测神经元凋亡。应用Western免疫印迹方法观察caspase-3和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白表达改变。结果加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h可使培养神经元细胞活力明显降低,神经元突触素蛋白表达明显降低。另外高糖也可引起神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较对照组明显提高。在加入高糖前加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗高糖引起的这些变化。培养海马神经元突触素蛋白表达较高糖组(50 mmol.L-1)明显增加,神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较高糖组明显降低。结论 Sar对高糖引起的海马神经元损伤具有明显的保护作用。

知母皂苷对Aβ_(25-35)引起的巨噬细胞炎症介质释放的抑制作用及信号转导机制

目的观察知母皂苷(SAaB)是否能对抗淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)引起的巨噬细胞炎症介质释放并探讨其信号转导通路的影响。方法小鼠腹腔巨噬细胞培养24 h,加入不同浓度SAaB(10、30和100μmol·L-1)或加入不同的阻断剂(诱导性一氧化氮合酶阻断剂SMT、MEK1的特异性阻断剂PD98059、p38MAPK特异性阻断剂SB203580和PI3K特异性阻断剂LY294002),之后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)继续培养。Aβ25-35作用2 h后,采用Westernblot观察巨噬细胞磷酸化Akt/PKB蛋白表达水平的改变。Aβ25-35作用48 h后,取巨噬细胞培养上清液分别测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的含量变化。结果 PD98059和LY294002均可明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加和磷酸化Akt/PKB表达明显增加。SMT可完全对抗Aβ25-35引起的NO释放增加。SAaB可明显抑制Aβ25-35引起的TNF-a和NO的产生增加,并呈明显的浓度依赖性。SAaB也可明显抑制Aβ25-35引起磷酸化Akt/PKB表达增加。结论 SAaB能够明显的抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞炎症因子释放,这种抑制作用部分通过SAaB抑制Akt/PKB信号转导通路产生。

知母皂苷B对大鼠海马注射β-AP（25～35）致tau蛋白磷酸化的影响

目的观察大鼠双侧海马注射β淀粉样肽[β-AP(25￣35)]后,海马内p53、Wnt途径抑制剂DKK和磷酸化tau蛋白表达变化,并用此动物模型观察知母皂苷B的作用。方法用RT-PCR法检测p53和DKKmRNA表达的变化,用免疫组化法检测磷酸化的tau蛋白。结果AD模型组海马内神经元的tau蛋白过度磷酸化,而p53和DKKmRNA的表达与假手术对照组相比也显著增多;而知母皂苷B给药治疗组均可使这种现象得到明显改善。结论知母皂苷B可通过抑制β-AP引起的p53及其后续的DKK的表达增加而有效改善AD大鼠脑内神经元的tau蛋白过度磷酸化。

知母中知母皂苷BⅡ的TLC鉴别及HPLC法含量测定

目的:建立知母药材中知母皂苷BⅡ的 TLC 鉴别及 HPLC 含量测定方法。方法:TLC 法,展开剂:氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,显色剂:10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。HPLC 法,色谱柱:HiQ-sil C_(18)(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-水(53:47),流速:0.8 mL·min^(-1),检测:蒸发光散射检测器(ELSD),漂移管温度:100℃,气体流速:2.6L·min^(-1)。结果:3批药材中知母皂苷 BⅡ成分的 TLC 分离效果均较好,HPLC 法测得知母皂苷 BⅡ的平均回收率为97.7%,RSD 为1.8%。结论:该方法准确可靠,可用于知母药材质量控制。

知母皂苷对脂多糖引起星形胶质细胞炎症因子释放的影响及机制

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AC)炎症因子释放的抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响。方法实验设对照组、LPS组、SAaB组和阻断剂组。ELISA法和Griess法分别测定各组AC培养液中TNF-α和NO的含量;Western blot检测AC磷酸化JNK和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变;免疫荧光染色法观察AC的磷酸化ATF-2蛋白表达水平。结果 AC在LPS(10mg.L-1)刺激下TNF-α和NO的分泌、磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10μmol.L-1)可明显抑制LPS引起的TNF-α和NO产生增加以及磷酸化ATF-2蛋白表达水平;SAaB(1、10、100μmol.L-1)则可明显降低TNF-α和NO产生,下调磷酸化JNK、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2的蛋白表达水平。结论 SAaB能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层AC炎症因子的释放,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关。

知母皂苷元对拟痴呆大鼠β-淀粉样肽沉积及胆碱能系统功能的影响

目的 观察知母皂苷元 (ZMS)对拟痴呆大鼠模型脑内 β 淀粉样肽沉积及胆碱能系统功能的作用。 方法 单侧基底核内联合注射 β 淀粉样肽2 5-3 5片段 (β AP2 5-3 5)和兴奋性氨基酸建立大鼠拟痴呆模型 ,然后将模型动物分为假手术组 37、模型组和ZMS组 ,采用免疫组织化学方法和图像分析法测定β AP2 5-3 5沉积斑块的面积。用避暗法及跳台法测定动物的学习记忆功能 ,用放射配基结合分析法分别测定脑胆碱乙酰转移酶 (ChAT)活性和M受体密度。结果 一次性脑内联合注射 β AP +IBO后 ,模型大鼠脑内有明显的 β AP斑块沉积 ,而模型大鼠喂服ZMS 6 0d后 ,能有效地减少β AP沉积的面积 ,同时ZMS能明显改善模型动物的学习记忆功能 ,并提高模型动物脑内ChAT活性和M受体密度。结论 ZMS可能对脑内 β AP的沉积有一定的清除作用 。

知母总皂苷对慢性温和应激小鼠的保护作用及机制研究

目的探讨知母总皂苷(total timosaponin,TT)对慢性温和应激模型小鼠的保护作用并分析其可能的作用机制。方法建立小鼠慢性温和应激模型,测量小鼠对蔗糖水的摄取量,采用避暗实验考察小鼠学习记忆能力,放射免疫法测定小鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇含量,酶联免疫法测定海马脑源性神经生长因子(BDNF)含量。结果 TT(25、50 mg.kg-1,qd×21 d)可显著增加慢性温和应激模型动物的蔗糖水消耗量,延长动物逃避潜伏时间、减少逃避错误次数。生化结果显示,TT能够降低血浆ACTH和皮质醇的含量,提高海马组织内BDNF含量。结论 TT能够改善慢性温和应激模型小鼠的抑郁状态和学习记忆能力,其机制与抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进以及提高模型动物海马BDNF含量有关。

知母商品药材中的皂苷类成分含量测定

目的：考察市场流通商品知母药材的品质。方法：采用高效液相-蒸发光散射法测定不同流通地区的商品知母药材中皂苷类成分的含量、结果：知母皂苷E1、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B、知母皂苷AⅢ的平均回收率分别为100．31％（RSD为1．93％）、99．22％（RSD为1．72％）、101．80％（RSD为2．04％）、101．54％（RSD为1．76％），4种皂苷类成分的含量之和为4．4502％～6．2854％。结论：知母商品药材中皂苷类成分含量存在一定的差异，其品质差异的影响因素有待进一步考察。