知母须根总皂苷纯化工艺及其延长秀丽隐杆线虫寿命的作用机制研究

目的考察知母须根总皂苷富集纯化的最佳工艺,并对其延长秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)寿命的作用及机制进行研究。方法以知母须根总皂苷得率、总皂苷含量等为指标,考察大孔树脂型号、上样液浓度、吸附流速、上样体积、洗脱溶剂浓度及体积对富集结果的影响。以秀丽隐杆线虫为实验模型,以0.5、1.0、2.0 mg·mL^-1知母须根总皂苷进行干预,测定秀丽隐杆线虫寿命、后代数目、运动能力;采用qPCR法测定知母须根总皂苷(1.0 mg·mL^-1)干预后秀丽隐杆线虫体内daf-16、daf-2、sod-3、ctl-2等基因的表达情况。结果最佳树脂型号为AB-8,上样液浓度为0.2 g·mL^-1,吸附流速及洗脱流速均为1.0 mL·min-1,洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为3倍柱体积,所富集的总皂苷纯度>50%。与空白对照组比较,1.0 mg·mL^-1浓度的知母须根总皂苷可显著延长秀丽隐杆线虫的平均寿命,提高线虫的半数致死天数(P<0.05)、产卵数目及运动频率(P<0.01);显著提高线虫体内sod-3、daf-16和ctl-2基因的表达量(P<0.01,P<0.001),降低daf-2基因的表达量(P<0.05)。结论优选的工艺稳定可行,可用于知母须根总皂苷的富集纯化;知母须根总皂苷能延长秀丽隐杆线虫的寿命,其机制可能与Insulin/IGF-1信号通路有关。