人补体受体1型衍生分子融合基因CR1-SCR2D的构建、表达及生物学活性鉴定

目的构建和表达具有抑制补体生物活性的双功能域人补体受体1型衍生分子CR1-SCR2D。方法基于我室前期工作,将CR1-SCR1-3、人工α螺旋肽段linker、SCR15-17 3个DNA片段依次克隆到改造载体pPIC9k(+)和pPICZαB,构建出表达质粒pPICZαB-CR1-SCR2D;电转化毕赤酵母X-33得到阳性重组子,甲醇诱导目的蛋白CR1-SCR2D表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达结果;经纯化获得CR1-SCR2D并进行糖基化鉴定后,用CH50和AH50法鉴定目的蛋白在体外抑制补体的生物活性。结果成功构建了目的基因的表达质粒pPICZαB-CR1-SCR2D,基因测序正确;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中实现了分泌表达;经镍柱纯化后得到较纯的CR1-SCR2D,糖基化鉴定证明其存在糖基化;CH50法和AH50法结果显示CR1-SCR2D均有较CR1-SCR1-3和CR1-SCR15-17更好的抑制补体生物学活性。结论成功构建了双功能域人补体受体1型衍生分子融合基因CR1-SCR2D,在毕赤酵母中实现了CR1-SCR2D的分泌表达,该融合蛋白对经典/MBL途径及旁路途径补体激活均具有较好的抑制作用。

中国辽宁汉族人群D17S518基因座多态性分析

目的:调查D17S518基因座在辽宁汉族人群中的频率分布,并为法医学亲子鉴定和个人识别提供基础数据。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术,对中国辽宁省无血缘关系的汉族个体120例血液样本进行D17S518基因座分型。通过DNA序列分析确定其等位基因,并计算相关法医学参数。结果:在无血缘关系汉族个体120例中,检出D17S518基因座的5种等位基因及12种基因型。(1)根据DNA序列分析结果,将扩增片段长度为88bp、90bp、94 bp、98 bp、100 bp的5种等位基因分别命名为D17S518*15、D17S518*16、D17S518*18、D17S518*20和D17S518*21。(2)12种基因型及频率分别为:15/15型为12例(10%),16/16型为13例(10.7%),18/18型为3例(2.5%),15/16型为21例(17.5%),15/18型为23例(19.2%),15/20型为6例(5%),15/21型为2例(1.7%),16/18型为20例(16.7%),16/20型为8例(6.7%),16/21型为5例(4.2%),18/20型为4例(3.3%),18/21型为3例(2.5%)。(3)5种等位基因频率分别为:D17S518*15=0.317、D17S518*16=0.333、D17S518*18=0.233、D17S518*20=0.075、D17S518*21=0.042。(4)对D17S518基因座群体行数据分析,获得法医学应用参数:杂合度(H)为0.767,个人识别几率(DP)为0.872,偶合几率(Pm)为0.128,非父排除率(PE)为0.539,多态信息含量(PIC)为0.68。结论:D17S518基因座在中国辽宁省地区汉族群体中具有良好的多态性分布,有较高的遗传多态性,在法医学上具有较高的应用价值。