牦牛源短小芽胞杆菌TS1的分离鉴定及其生物学特性研究

[目的]本试验旨在研究一株牦牛源短小芽孢杆菌(命名:TS1)的分离鉴定、抗逆性、对常用抗菌药物的耐药性以及对常见致病菌的抑菌活性,初步探索其作为益生菌添加剂在畜牧养殖中应用的可行性。[方法]对健康牦牛新鲜粪便进行100℃水浴处理10 min以筛选具有抗逆性的芽胞杆菌,进行形态学、生理生化特征及16S rRNA序列分析鉴定,通过测量生长曲线、耐酸、耐胆盐试验、药敏试验及抑菌试验等方法对其生物学特性进行研究,通过全基因测序分析其可能产生抗菌物质的类型。[结果]TS1为短小芽胞杆菌且具有耐酸、耐胆盐生长特性;TS1对于12种常见的抗菌药物敏感,且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌具有抑菌作用。测序分析显示该菌株可编码与Amylocyclicin同源性达48.90%的一种新型抗菌肽,进而发挥其抗菌活性。[结论]短小芽胞杆菌TS1有一定的抗逆性和潜在的益生能力及广谱抗菌效果,并且在畜禽肠道微生物系统中对抗生素耐药性传递的风险较低,适合作为益生菌添加剂类抗生素替代产品。

短小芽胞杆菌E_(601)对电子线抗性的研究

短小芽胞杆菌Ｅ６０１对电子线抗性的研究耿彦生１袁洽２张印法３李涛２我国已确定短小芽胞杆菌Ｅ６０１为钴－６０γ射线的指示菌。与钴－６０γ射线相比，电子线能量高、剂量率大，用于灭菌可缩短时间，降低费用，目前工业上已考虑用电子线替代γ射线进行辐照灭菌。为...

γ射线对短小杆菌E601芽胞杀灭机理的初步研究

试验表明，γ射线照射后短小杆菌Ｅ６０１芽胞核心电子密度的降低较其外壳损坏迅速。在甘油保护下，照射后芽胞死亡减缓。用３Ｈ－ＴｄＲ标记检测，照时后芽胞ＤＮＡ减少，照射后再以ＤＴＴ与ＳＤＳ溶解芽胞外壳可使ＤＮＡ减少加剧；而加甘油后照射则使ＤＮＡ减少率明显下降。据此推测，γ射线照射可能使水水解产生·ＯＨ，进而使芽胞结构损伤及ＤＮＡ被破坏而死亡．

短小芽胞杆菌AR03对烟草炭疽病的抑制作用

为测定短小芽胞杆菌AR03菌株对烟草炭疽病菌的室内拮抗活性和盆栽防治效果,采用平板拮抗法初步筛选菌株拮抗活性,采用抑制菌丝生长法及抑制孢子萌发法筛选该菌株菌悬液的抑菌浓度,采用喷雾法进行防治效果测定。AR03菌株对烟草炭疽病菌的拮抗活性很强,能显著抑制菌丝生长、孢子萌发和病害发生,浓度为1×107 cfu/mL的AR03发酵液能有效抑制菌丝的生长和孢子萌发,AR03菌悬液(1×108 cfu/mL)对炭疽病的盆栽防治效果为83.03%,与对照药剂25%三唑酮可湿性粉剂的防治效果相当。AR03菌株是一株优良的广谱高效生防菌株。

短小芽胞杆菌产碱性木聚糖酶发酵条件的研究

碱性木聚糖酶在碱性条件下催化水解木聚糖,广泛应用于造纸、纺织等领域。着重对短小芽胞杆菌M-11产碱性木聚糖酶的发酵条件进行初步的探索。研究了菌株的生长曲线、确定最佳接种龄为16 h、最佳接种量为1%;确定最适碳源浓度为7%、最适单一氮源为氯化铵、其浓度为1.0%、最适无机盐为氯化铁、其浓度为3 mmol/L;在此基础之上进行6因素3水平的正交试验,确定最适产酶培养基组成:麸皮5%,接种量3%,氯化铵1.2%,氯化铁3.5 mmol/L,硫酸镁0.03%,氯化钠5 mmol/L,磷酸氢二钾0.4%;最适培养条件:接种龄16 h,初始pH 8.0,温度37℃,300 mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速220 r/min,发酵周期48 h。通过对发酵条件的优化使发酵液酶活达613 IU/mL。无机氮源为其最适氮源,因此短小芽胞杆菌M-11在碱性木聚糖酶的产品开发上优于短小芽胞杆菌M-26。

GFP标记的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)转座突变株的构建初探

以水稻叶面附生菌短小芽孢杆菌(B.pumilus)为研究对象,通过构建pMOD-egfp-Tetr转座复合体,采用电击转化法对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的转化子。对转化子进行了遗传稳定性分析和分子鉴定,并且在荧光显微镜下观察到了强烈的绿色荧光,研究结果表明外源DNA已经成功整合进细菌的基因组中,gfp基因在短小芽孢杆菌中实现了组成型表达。

短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因克隆及功能分析

为了研究短小芽胞杆菌Bacillus pumilus DX01菌株的抑菌相关基因的功能,采用PCR方法从DX01基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建原核表达载体pET2-TasA,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得TasA基因的融合表达蛋白,分别利用悬滴法和平板打饼法检测融合蛋白对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)分生孢子萌发和对玉米小斑病菌及水稻稻瘟病菌菌丝体生长的抑制活性,结果表明TasA融合蛋白对这2种植物病原真菌的生长有着显著的抑制作用。TasA基因包含1个780bp的完整开放阅读框(GenBank:KC692521),编码259个氨基酸残基;该序列与B.subtilis菌株PEBS2501(GenBank::FJ713581)、B.amyloliquefaciens HF-01(GenBank:JF781312)和B.subtilis菌株BWST7003(GenBank:AP012496)同源抑菌蛋白基因序列相似性达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析检测到约32.3kDa的融合蛋白;经Ni-NTA柱纯化后的融合蛋白对供试病原菌均有显著的抑制作用。经测定发酵液的TasA融合蛋白产率为28μg/mL,短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因具有良好的抑菌效果。

短小芽胞杆菌Bacillus pumilus HR10增殖扩繁培养基组分优化

短小芽胞杆菌Bacillus pumilus HR10是1株优良的菌根辅助细菌(Mycorrhiza Helper Bacteria,MHB),无论单独接种或与外生菌根真菌(Ectomycorrhizal Fungi,EMF)黄色须腹菌(Rhizopogen luteous)互作,都能显著促进马尾松(Pinus massoniana)的生长。应规模应用需要,从10种碳源、8种氮源及8种无机盐中以单因素试验初步筛选出主要组分,在此基础上采用正交试验及响应面分析法优化短小芽胞杆菌HR10增殖扩繁的培养基成分。结果表明,该菌株增殖扩繁培养基最佳组分配比为黄豆粉10.332 g/L,玉米粉7.296 g/L,蛋白胨10.718 g/L,KCl 2.5 g/L,KH2PO42.5 g/L。研究结果为菌根辅助细菌短小芽胞杆菌B.pumilus HR10菌剂开发应用提供了参考依据。

海洋短小枯草芽胞杆菌的鉴定及抑菌活性分析

对从连云港东西连岛海泥样品中分离得到的菌株Bacillus pumilus HX2-2的分类地位、生长条件和抑菌活性进行了研究。经过形态特征、生理生化性质及16S r DNA序列分析鉴定,该菌属于短小芽胞杆菌。不同温度、盐度、pH培养条件下测定菌液吸光度OD600值,表明该菌是一株轻度嗜盐菌,最适温度、盐度、pH分别为30℃、3%、7.0~8.0。在不同病原真菌的平板抑菌活性试验中,该菌对草莓尖胞镰刀菌、马铃薯炭疽病菌和水稻立枯丝核菌表现出显著的抑菌作用。菌株B.pumilus HX2-2是一株短小芽胞杆菌,具有广谱抑菌活性,具有进一步研究的价值。

紫外诱变选育高产碱性木聚糖酶优良短小芽胞杆菌

以短小芽胞杆菌M-11为研究对象,选育碱性木聚糖酶高产优良短小芽胞杆菌,并对其发酵条件进行研究.对短小芽胞杆菌M-11用紫外线（UV）诱变,用刚果红平板染色法初筛、摇瓶发酵复筛及稳定性筛选,选育出高产碱性木聚糖酶突变菌株M-11-2,研究发酵条件.结果表明：突变菌株M-11-2基础产酶活力500～600 IU·mL-,是M-11酶活314.93 IU·mL-1的1.5倍;摇瓶发酵产酶活力811.28 IU·mL-1,是原始菌株M-11（613 IU·mL-1）1.3倍;发酵罐发酵产酶活力2 703.68 IU·mL-,发酵液产酶能力1600000IU·L-1（以成品酶活计）,发酵条件：发酵周期24h,温度37℃,培养基：麸皮7.0％、氯化钠7.0 mmol· L-1、硫酸锌5.0mmol·L-1、硫酸镁0.02％、酵母膏1.0％、氯化铵1.0％、磷酸氢二钾0.4％,pH调节至8.0.因此,采用紫外线诱变方法,成功选育出高产碱性木聚糖酶的短小芽胞杆菌菌株,稳定性良好,适宜发酵工程应用的优良菌株.

短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus UN-31-C-42)对青海藏系羊蹄脱毛效果研究

通过L9（34）正交试验确定产脱毛蛋白酶菌株Bacillus pumilus UN-31-C-42的最佳产酶条件为：温度34℃,pH值7.0,发酵时间48h;结果表明该菌株对藏系羊蹄具有良好的脱毛效果,最佳脱毛时间为24h。

短小芽胞杆菌的益生作用及其生物降解功能

短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)是一种重要的微生物资源,能够分泌活性较强的代谢产物,在农业、工业、医药等领域具有良好的应用前景。就目前短小芽胞杆菌对动植物的抗菌、抗病毒、改善农作物品质等益生作用及其生物降解功能进行综述,总结并分析降解过程中可能存在的问题,为进一步研究短小芽胞杆菌的生物学功能及其在多个领域的应用提供参考。

短小芽胞杆菌抗辐射力影响因素的研究

目的 ]研究短小芽胞杆菌抗辐射力的影响因素 ,使其作为电离辐射灭菌指示菌的应用标准化、规范化。 [方法 ]应用 60 Coγ射线对不同存在状态的短小芽胞杆菌进行辐照 ,测定D10 值并对其差异进行显著性检验。 [结果 ]短小芽胞杆菌E60 1悬浮于蒸馏水中D10 值为 1 76kGy ,低于 2 %牛血清、2 %基质液和 10 %基质液中的D10 值 ,差异有显著性 ;干燥芽胞的D10 值在滤纸菌片和布菌片低于塑料膜菌片和可溶性菌片 ,可溶性菌片又高于塑料菌片 ;短小芽胞杆菌布菌片干燥不同时间后D10 值有差异 ,干燥 10 0minD10 值小于干燥 3 0min。 [结论 ]有机物对短小芽胞杆菌具有保护作用 ,可使其D10 值增高。干燥芽胞的抗辐射力除受共存有机物影响外 ,载体及芽胞干燥程度对其也有影响。

棉花枯萎病拮抗短小芽胞杆菌筛选鉴定及生防研究

为获得对棉花枯萎病有较好生防效果的拮抗细菌,从健康海岛棉植株根围土壤中分离筛选棉花枯萎病拮抗细菌,探索研究拮抗菌株的抑菌作用,为其生物防治提供潜在资源菌。采用平板对峙法,以海岛棉枯萎病尖孢镰刀菌为靶标菌,从土壤中分离到的120株细菌菌株中筛选拮抗菌株。测定拮抗细菌发酵液抑菌活性,通过促芽和盆栽试验筛选生防效果最好的菌株,同时测定该菌株对棉花枯萎病的抑菌效果和耐盐碱性。基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定菌株分类地位。从120株细菌中筛选到1株对棉花枯萎病拮抗作用很强的菌株,编号为KX-33。促芽分析和盆栽试验结果表明,菌株KX-33能明显缩短出芽时间,促进棉苗生长。对病原菌DD64、DD89、DD11和DD22防效分别为75.32%、72.77%、69.48%和68.81%,均显著高于对照药剂处理(P<0.05)。耐盐碱分析表明,菌株KX-33具一定的耐盐碱性。菌株KX-33镜检为革兰氏阳性菌、呈杆状、有芽胞,16S rDNA和序列与Bacillus pumilus(FJ763643.1)同源性最高。海岛棉根围土壤微生物中含有棉花枯萎病拮抗细菌,经鉴定菌株KX-33为短小芽胞杆菌Bacillus pumilus,促生和抑菌作用显著,在海岛棉枯萎病生物防治中具有潜在的应用价值。

短小芽胞杆菌HLK8-1的分离鉴定及抑菌特性分析

从海南翁田镇凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）养殖场筛选获得1株能抑制副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）等多种病原菌的芽胞杆菌HLK8-1。经形态特征分析、16S r DNA序列分析及Biolog微生物自动鉴定系统鉴定为短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）;菌株生长及抑菌性能研究表明该菌株抑菌物质主要产生在生长对数期及平台期;相对于盐度及初始p H等因素,该菌株的抑菌性能受温度影响较大;菌株在p H值范围为7.0-8.5,盐度范围为0-0.2%,温度为30℃等条件下表现出较高的生长水平及抑菌性能;共培养试验表明该菌能将水体中的副溶血弧菌数量控制在较低水平,培养24 h时实验组10^5cfu/mL,而对照组10^8cfu/mL。该菌抑制多种水产病原菌,对水体环境耐受能力强,具有防治水产养殖病原菌的应用潜力,且易于培养,抑菌物质分泌到胞外便于分离提取,亦具有发酵工程应用潜力。

基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化

利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C147T/A334G/T371A,其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示,3个突变氨基酸分别位于第1个α螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个β折叠之间的转角以及第5个β折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后,酶学性质测定表明:突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍,Km值由8.24mmol/L降低至7.17mmol/L;在pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。

碱性木聚糖酶产酶菌株—芽胞杆菌M-26的选育

从造纸厂的废水中采集样品,以木聚糖为唯一碳源初筛菌株,然后用刚果红透明圈平板选育,最后通过摇瓶发酵选育出碱性木聚糖酶高产菌株M-26,基础产酶活力达330 IU/mL;通过菌种形态学、培养特征和16S rDNA鉴定为短小芽胞杆菌;酶学性质研究表明:最适作用温度和pH分别为55℃和8.0,且具有一定的耐碱性;通过发酵条件研究,M-26最高产酶活力可达625 IU/mL。

复合芽胞杆菌共培养条件的响应面优化研究

在前期筛选出了具有耐盐、促生能力的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)SC-12和具有高效广谱抗病能力的解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BZ6-1,而且两株菌不存在拮抗作用。为了获得活菌数高、经济效益好的复合芽胞杆菌菌剂,以上述两株菌为研究对象,以活菌数为指标,采用单因素法、最陡爬坡法和Box-Behnken响应面法设计并优化共培养条件,并在100 L发酵罐中进行了验证试验。获得的最佳共培养条件如下:SC-12与BZ6-1的菌落数比例为2∶1(v/v);培养温度为30℃;培养时间为16 h;接种量为3%(v/v);转速为132 r/min;pH值为7.6。以优化后的培养条件进行两个菌株的共培养,得到的菌落数为11.00×10^(8) cfu/mL,比原始发酵得到的菌落数增加了39.20%;在100 L发酵罐中发酵的菌落数达到10.30×10^(8) cfu/mL,比原始发酵的菌落数增加了43.00%。

短小芽胞杆菌E_(601)抗电离辐射性的研究

目的 短小芽胞杆菌Ｅ６０１ 已在中国确定为辐射灭菌指示菌。为使指示菌在灭菌过程中的应用标准化、规范化，保证灭菌质量，需要对其固有抗辐射性和影响因素，以及如何制备抗辐射稳定的生物指示剂作详尽研究。方法 应用钴６０γ射线和高能电子束对短小芽胞杆菌Ｅ６０１ 进行辐照，测定不同条件下的Ｄ１０ 值。结果 ①因载体、介质不同，Ｄ１０ 值变化在１ ．６０ ～２．５３ｋＧｙ 之间。②不同温度下保存一年，指示菌片芽胞抗辐射性无明显变化。但随着保存时间延长，菌片上存活菌数逐渐减少。③载体、介质影响存活率，电子束与钴６０ 结果一致。结论 短小芽胞杆菌Ｄ１０ 值在１ ．６０～２．５３ｋＧｙ 之间，且抗性稳定。本试验条件下制备的可溶性菌片抗力高，Ｄ１０ 值为２ ．５３ｋＧｙ，可长期保存。

生防菌Y26的鉴定、发酵优化及其杀线虫活性测定

为防治黄瓜根结线虫病,本实验室前期从黄瓜根际土壤分离出的一株细菌Y26,测定其发酵液对根结线虫的生物活性,经发酵液处理后的根结线虫校正死亡率为95.12%,卵孵化的相对抑制率为83.51%,故菌株Y26可作为根结线虫生防菌资源;通过形态学观察及分子生物学方法鉴定菌株Y26为短小芽胞杆菌Bacillus pumilus;通过Plackett-Burma法和响应面分析试验得到菌株Y26发酵优化的条件是:玉米粉2.14%,豆饼粉3%,K_(2)HPO_(4)0.57%,MgSO_(4)·7H_(2)O 0.21%,种龄12 h,pH为7.2,接种量2%,培养温度28℃,装瓶量为50 mL/250 mL,发酵优化后,菌液中芽胞浓度提高25.69%,10%发酵液对根结线虫的校正死亡率从优化前的78.03%提高到93.32%。研究结果表明,经发酵优化后的Y26菌液杀线虫活性显著提高,可作为杀线生物菌剂开发应用。