QF-PCR技术中短串联重复序列杂合度分析及与染色体核型结果的比较研究

目的使用QF-PCR技术对产前样本进行快速诊断,分析多重短串联重复序列(STR)标记杂合度以及三体峰型,为QF-PCR试剂盒STR位点的设计提供研究基础。方法选取2020年9月至2021年7月在中山市博爱医院产前诊断中心进行介入性产前诊断的525例样本作为研究对象,运用QF-PCR技术对13、18、21及性染色体非整倍体进行快速诊断,使用GeneMapper 5.0软件查看并记录STR分型结果图。结果13、18、21及X染色体的STR标记中杂合度最高分别为D13S742、D18S386、D21S1414、DXS8377;杂合度最低的分别为D13S628、D18S391、D21S1433、DXS981。QF-PCR技术发现异常样本共计31例(5.9%),其中三体型27例(21三体19例,18三体6例,13三体2例),X单体1例,染色体其他异常3例;检测到18和21三体中均有4例STR标记为2∶1或者1∶2的双峰;STR位点均为单峰2例,STR位点仅一个双峰23例。结论与传统染色体核型分析比较,QF-PCR技术能更快速诊断常见染色体非整倍体的数目异常,具有简便快速、特异性高的优点。在设计QF-PCR试剂盒时需要选择D13S742、D18S386、D21S1414等杂合度高的STR位点。

鲤科鱼类系统进化过程中SINEs的插入事件

短散在核重复序列(SINEs)是真核生物基因组内的移动元件,已被广泛应用于系统发育研究。文中报道了用SINE的插入事件和细胞色素b基因来研究鲤科鱼类的进化.结果显示:细胞色素b基因和SINEs插入事件在大的鲤科鱼类分类上都支持形态学的分类结果,将整个鲤科鱼类分为雅罗鱼系和鲃系;两种分子标记所获结果的不同之处在于野鲮亚科的进化地位.SINEs插入事件的分析结果显示该亚科的进化地位比较原始,而细胞色素b序列的结果则显示其相对较晚的进化起源.尽管在该研究中分析的物种较少,但为SINEs在鲤科鱼类插入事件的研究提供了基础.

肝豆状核变性家系6例产前诊断

目的:探讨运用多个短串联重复序列(STR)多态性位点单体型分析对肝豆状核变性(WD)携带者进行筛查及产前诊断的方法。方法:选择D13S296、D13S301和D13S3163个位点,采用PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳等分析方法,对6例WD家系进行产前诊断。结果:6例WD家系中共检出2例受累胎儿。3例携带者胎儿,1例正常胎儿;经出生后或引产后脐带血验证,均与产前诊断结果相符。结论:联合应用多个遗传多态性位点进行连锁分析可对WD家系进行准确快速的产前诊断。

两种遗传标记系统鉴定母血中有核红细胞来源

目的探讨母血中胎儿有核红细胞的鉴定方法及其对无创性产前诊断的意义。方法86例孕妇外周血,以血红蛋白γ链染色结合显微操作分离获取胎儿有核红细胞。经PEP扩增胎儿细胞基因组后,共70例进行SRY基因检测;32例进行X-STR位点DXS101、DXS6797分析并与双亲基因型对比,判断模板细胞来源及胎儿性别。结果所有孕妇血样均检出胎儿有核红细胞。SRY基因判断胎儿性别的准确率为97.14%(68/70)。联用DXS101、DXS6797对胎儿细胞鉴定及性别判断的准确率达100%(32/32)。16例同时接受2种方法,检测结果均一致。结论采用SRY基因或多X-STR位点作为母血中胎源细胞鉴定系统,两种方法均能有效判断细胞来源,且各有优缺点,两者结合将有更广阔的应用前景。

1例胎儿唐筛18三体高风险孕妇产前羊水细胞X染色体STRs相关位点基因拷贝数、细胞核型分析

目的对1例胎儿唐氏筛查结果为18三体高风险孕妇的产前羊水细胞X染色体短串联重复序列(STRs)相关位点基因拷贝数、细胞染色体核型进行分析,明确胎儿的遗传学诊断。方法采集1例唐氏筛查结果为18三体高风险的孕妇羊水细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(达瑞生物、瑞典Devyser紧凑型V3非整倍体检测试剂盒和中德美联AGCU19X-STRs多重荧光扩增试剂盒)扩增羊水细胞DNA,检测X染色体上STRs相关位点,测算基因拷贝数,并分析其羊水细胞染色体核型。结果该孕妇产前羊水细胞X染色体Xq13区基因存在2个拷贝,其他区域基因仅有1个拷贝。X染色体上DXS10159、DXS10164、DXS10162、DXS10079、DXS10074等5个位点上有不平衡双峰,而其余14个XSTRs位点均为单峰。羊水细胞染色体核型为46,X,+ma[r33]/45,X[67]。结论唐筛18三体高风险孕妇的羊水细胞丢失部分X染色体,羊水细胞染色体核型为46,X,+ma[r33]/45,X[67]嵌合体核型。

四配子异源嵌合体导致的真两性畸形机制研究

目的 :报告 1例四配子异源嵌合体导致的真两性畸形并讨论其发病机制。 方法 :对 1例外生殖器模糊的患者外周血的淋巴细胞、经培养的皮肤成纤维细胞、两种不同性腺组织的成纤维细胞进行染色体核型分析 ,同时用X和Y染色体探针进行双色荧光原位杂交 (FISH) ;对患者红细胞血型、人类白细胞抗原 (HLA)和 77个短重复序列 (STR)微卫星标记进行检测 ;对患者性腺的 2种不同组织进行组织病理学检查 ;同时对患者的父母进行红细胞血型、HLA和STR检测。 结果 :患者外周血淋巴细胞、皮肤成纤维细胞、呈白色和黄色性腺组织的成纤维细胞染色体核型均为 4 6 ,XX/ 4 6 ,XY ;FISH检测所有细胞都显示了XX或XY的杂交信号。 4 6 ,XY的核型在外周血淋巴细胞、皮肤成纤维细胞和白色性腺组织的成纤维细胞中占优势 ;4 6 ,XX的核型在黄色性腺组织的成纤维细胞中占优势。外周血淋巴细胞及 3种不同组织培养物的STR位点检测、ABO血型分析和HLA检测都显示有 2个不同的单倍体来自父亲 ,1个单倍体来自母亲。组织病理学检查患者同一性腺上有两种不同组织 ,呈白色的组织是睾丸 ,呈黄色的组织是卵巢。 结论 :性腺组织病理学检查、染色体核型分析、FISH是鉴定真两性畸形患者的有效方法 ,红细胞血型、HLA和STR可为鉴定四配子异源嵌合体提供?

多重荧光定量PCR技术快速诊断唐氏综合征方法的建立及临床应用

目的:建立适合中国广东地区人群特点的唐氏综合征快速产前诊断技术,并评价其临床应用价值。方法:选取21号染色体上杂合度较高的3个短串联重复序列(STR,D21S1411、D21S1412、D21S1270)作为遗传标记,采用多重荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)扩增技术,对广东地区106例无亲缘关系的正常人外周血DNA进行分析,计算这3个STR位标的多态性信息含量(PIC);用该方法对25例唐氏综合征患儿外周血和10例正常孕妇羊水的DNA进行检测,并与染色体核型分析结果进行对照分析。结果:21号染色体上的3个STR(D21S1411、D21S1412、D21S1270)的PIC分别为0.913、0.835、0.856,确立了QF-PCR产前诊断唐氏综合征的方法。对25例唐氏综合征患儿外周血和10例孕妇羊水同时进行QF-PCR检测与染色体核型分析,两种方法均检测到27例唐氏综合征,结果吻合。结论:本研究所选STR位标在中国广东人群中呈现较高的遗传多态性,符合Hardy-W e inberg平衡定律;所构建的QF-PCR技术产前诊断唐氏综合征具有准确、快速、高效等特点,有较高的临床使用价值。

STR-PCR在产前诊断胎儿唐氏综合征中的应用

目的:研究通过多重荧光定量PCR诊断胎儿染色体非整倍体用于临床快速产前诊断的可行性。方法:从孕中期羊水中提取胎儿DNA,通过多重荧光定量PCR使用STR对13、18、21号染色体进行非整倍体筛查,筛查结果异常者再进行快速诊断。用PCR诊断的羊水标本同时使用"金标准"染色体核型分析法做对比。结果:34例羊水标本中2例标本由于母血污染严重未行PCR检测,1例标本经PCR及核型分析均失败,29例标本经PCR和核型分析诊断为正常染色体,2例标本经PCR和核型分析诊断为21-三体。结论:通过STR-PCR法使用多重荧光酶联聚合反应探针产前诊断胎儿唐氏综合征是临床快速产前诊断的有效方法之一。

STR连锁分析在Wilson病基因诊断中的应用

本文选择与Wilson病致病基因紧密连锁的3个STR序列D(13)S(228)、D(13)S(301)、D(13)S(137)为遗传标记，用扩增片段长度多态性（AmP－FLP）方法对中国人群的多态性进行了检测，发现具有高度多态性，多态信息量（PIC）分别为0．60、0，78、0、79，联合这3个STR序列对2个WD家系进行单体型连锁分析，确定了家系各成员的基因型。表明STR连锁分析可对WD家系进行症状前及产前基因诊断。

基于上转换发光共振能量转移的CRISPR/Cas12a生物传感系统用于HPV16 DNA双信号检测

传统的纯核结构的上转换纳米材料用于生物传感时,存在表面猝灭效应或者因发光共振能量转移(LRET)效率不高导致灵敏度低等缺点,对目标物的灵敏检测有一定的局限性.本文通过多步高温共沉淀,介导壳层外延成长法,合成了NaYF_(4)∶Yb^(3+),Er^(3+)(C-UCNPs)核层发光和NaYF_(4)@NaYF_(4)∶Yb^(3+),Er^(3+)@NaYF_(4)(CSS-UCNPs)内壳层发光能量限域型上转换纳米材料,并表征了材料的晶型、形貌、表面配体、元素组成和发光共振能量转移效率.结果表明,该材料具有表面猝灭效应低、发光共振转移效率较高的优势,随后将其与成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas)12a-纳米金系统结合,实现了人乳头瘤病毒DNA(HPV16 DNA)的比色定性和上转换发光定量分析,检出限为69.8 pmol/L,双信号检测有效提高了检测结果的准确性.此外,本方法不仅特异性强,还能识别单碱基错配的HPV16 DNA,提高了DNA片段的容错率.

产前诊断69, XXX纯合子三倍体一例

报告收治的1例24岁,孕21周,有不良孕产史,血清学产前筛查示18-三体综合征高风险,四维彩色超声检查示异常,且无创产前基因检测结果示性染色体非整倍体高风险的孕妇情况,通过短串联重复序列(short tandem repeat,STR)片段分析技术和羊水细胞培养染色体核型分析技术进行深入的遗传学检测和分析,胎儿羊水染色体核型为69,XXX;STR片段分析结果示胎儿为三倍体患者,致病原因是双雌受精,且在羊水样本中未见母源污染,胎儿考虑为纯合子三倍体,经遗传咨询后,孕妇选择了终止妊娠。在产前诊断中联合STR检测不仅可以排除母源污染的影响,还可以对染色体数目异常进行检测。

遗传学检验与临床

广东汉族人群21号染色体4个短串联重复序列多态性;两个Y染色体短串联重复序列基因座的遗传多态性;母体血浆中胎儿DNA分析在性连锁遗传病产前诊断中的应用;多重PCR法检测Y染色体微缺失;

染色体畸变检测在自然流产绒毛组织染色体核型分析中的应用价值

目的：探讨染色体畸变检测技术（高通量测序及短串联重复序列）在自然流产绒毛组织染色体核型检测中的临床应用价值。方法对27例妊娠后发生自然流产者的绒毛组织同时行细胞培养染色体核型分析和染色体畸变检测，比较两种方法的检测结果，分析其临床应用价值。结果（1）两种方法成功率的比较：27例样本经细胞培养染色体核型分析成功23例，成功率85％（23／27）；染色体畸变检测成功26例，成功率为96％（26／27）；差异无统计学意义（P＞0．05）。（2）绒毛培养失败4例的检测：经染色体畸变技术检测成功3例，其结果均为阳性。（3）两种方法阳性率比较：23例样本核型分析结果发现染色体正常10例，异常13例，阳性率为57％；26例样本经染色体畸变检测发现染色体正常3例，异常23例，阳性率为85％，差异有统计学意义（χ2＝6．387，P＜0．05）。（4）核型分析与染色体畸变检测发现染色体数目异常分别为52％（12／23）和50％（13／26）；细胞培养染色体核型分析正常的10例标本中，经染色体畸变技术检测7例存在微缺失／微重复。结论染色体畸变检测技术对染色体非整倍体、异倍体和片段缺失／重复异常的检测精准性高、成功率高，对自然流产病因遗传学检测具有重要意义和实用价值。

人胚胎干细胞系HUES4的培养和染色体核型分析

目的建立人胚胎干细胞无动物源性饲养层培养方法,同时对长时间体外培养的人胚胎干细胞核型变化进行分析。方法人胚胎干细胞系HUES4细胞分别培养于小鼠胚胎成纤维细胞和人包皮成纤维细胞饲养层,并对其干细胞特性进行鉴定;在培养传代过程中,收获P27、P34、P41和P44细胞进行染色体核型分析,P27细胞还进行DNA短串联重复序列多态性分析。结果生长于人包皮成纤维细胞饲养层的HUES4细胞碱性磷酸酶染色以及SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81抗原阳性,SSEA-1抗原阴性。所检测的4代细胞中均见46,XY/46,XY,t（9;15）（q22;q26）核型嵌合现象,且异常核型百分比随传代次数增加有上升的趋势。结论培养人胚胎干细胞的饲养层细胞可由无动物源性的饲养层细胞替代;长期体外培养有增加细胞染色体核型异常的风险。

广西地区唐氏综合征干预分析

目的：探讨广西地区唐氏综合征（Downsyndrome，DS）妊娠临床特点、筛查价值及短串联重复序（Shorttan—demrepeat，STR）分析快速产前诊断的可行性。方法：对29946例产前诊断孕妇的绒毛、羊水或脐血进行染色体核型分析，采用荧光定量PCR法分析97例标本21号染色体5个STR。结果：Ds总检出率为0．89％，其中绒毛、羊水或脐血Ds检出率分别为0．39％、0．76％和1．39％。主要指征为血清Ds筛查高风险、高龄和超声异常发现，其Ds检出率分别为1．10％、0．65％和2．03％，其他指征合并以上3种指征者Ds检出率分别为1．69％、1．72％和3．75％。DS再发风险率为1．15％，其余指征组检出率为0～0．77％。STR分析显示21号染色三体核型18例，与染色体核型结果一致。结论：广西地区Ds主要在妊娠中晚期确诊，常规筛查方案能有效检出Ds，多项产前诊断指征者提示胎儿DS风险较大，STR位点可用于Ds快速产前诊断。

定量荧光PCR快速检测2322例胎儿常见染色体非整倍体结果分析

目的回顾性分析应用定量荧光PCR(quantitive fluorescent PCR,QF-PCR)快速检测2322例产前诊断标本常见染色体非整倍体结果,评价QF-PCR在胎儿常见染色体非整倍体产前诊断中的应用价值。方法应用QF-PCR对2015年1月至2016年12月共2322例产前诊断标本针对13,18,21,X及Y染色体非整倍体进行快速诊断,同时所有标本进行染色体核型分析并进行结果比较。结果 QF-PCR检出胎儿染色体非整倍体99例,其中13三体3例,18三体19例,21三体62例,X单体6例,XXX 5例,XXY 2例,XXYY合并18三体1例,三倍体(69,XXX)1例。上述染色体数目异常结果与核型分析完全一致。另外,QF-PCR结果显示1例为46,XX男性综合征,提示1例为21号染色体部分三体和3例为X染色体嵌合体。而核型分析为染色体结构异常的QF-PCR均未检出。结论 QF-PCR能快速、准确地诊断13、18、21、X及Y染色体非整倍体数目异常,且对嵌合体有一定的提示作用,可弥补核型分析结果时间过长带来的不足,最大程度缓解孕妇及其家属的焦虑。

亲子鉴定中高龄父母生育二孩检出唐氏综合征1例

本院法医学鉴定中心在对一亲子鉴定案例进行鉴定分析时发现父母均为高龄，其中1份检材的短串连重复序列（STR）分型图上D21S11和PentaD基因座上同时出现3条荧光峰（即三等位基因），疑为唐氏综合征（DS），后经染色体核型检查确诊为DS，现报道如下。