短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1与耳鼻咽喉科疾病

短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1（short palate lung and nasal epithelium clone 1,是近年发现的一个特异性表达在呼吸道的天然免疫分子，其结构与杀菌／渗透性增加蛋白（bactericidal/permeability increasing protein, BPI）相似，且具有明显的疏水性，在免疫防御中发挥着重要的作用，参与对外界刺激的反应，与耳鼻咽喉科多种疾病包括感染、变态反应和肿瘤等相关。本文将对SPLUNC1在耳鼻咽喉科的新进展做一综述。

PLUNC基因启动子区多态位点C-1888T与变应性鼻炎易感性

目的分析变应性鼻炎患者中腭、肺及鼻咽上皮克隆(palate,lung and nasal epithelium clone,PLUNC)基因表达变化,探讨PLUNC基因启动子区多态位点C-1888T是否与变应性鼻炎的易感/风险相关。方法选取2021年1月至2022年2月在广西中医药大学附属瑞康医院就诊治疗的变应性鼻炎患者225例,同时选取150例正常人为对照组,抽取外周血,比较PLUNC基因在两组人群中的表达差异;鉴定变应性鼻炎患者C-1888T多态位点3种基因型,检测不同基因型的表达频率及不同基因型中PLUNC基因的mRNA表达水平。结果变应性鼻炎患者外周血中PLUNC基因的表达较正常人群降低(P=0.000);C-1888T多态位点TT基因型及T等位基因频率显著高于对照组,且TT型外周血PLUNC基因mRNA表达水平显著低于CC型及CT型,差异有统计学意义(P=0.000)。结论变应性鼻炎患者PLUNC基因表达水平下调,C-1888T多态位点为TT型的个体更易患变应性鼻炎(OR=9.375,P=0.000)。

鼻息肉组织中核转录因子-κB、Toll样受体2及上皮克隆蛋白的表达及其意义

目的探讨鼻息肉组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和腭、肺及鼻咽上皮克隆蛋白(PLUNC)的表达及其意义。方法采用回顾性研究,收集本院90例鼻息肉组织标本(病例组),另收集45例正常鼻甲黏膜组织标本(对照组)。采用苏木精-伊红染色检测两组嗜酸性粒细胞浸润程度,根据免疫组化法检测两组NF-κB p65、TLR2及PLUNC的分布及其表达水平,对病例组鼻息肉组织中NF-κB p65、TLR2及PLUNC的表达情况进行相关性分析。结果相比对照组,病例组鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞阳性率升高(P<0.01)。病例组鼻息肉组织中NF-κB p65和TLR2表达阳性率高于对照组,PLUNC表达阳性率低于对照组(P<0.001)。鼻息肉组织中TLR2与NF-κB p65表达呈正相关,PLUNC与NF-κB p65、TLR2均呈负相关(P均<0.05)。结论鼻息肉组织中NF-κB p65、TLR2表达升高、PLUNC表达降低,三者表达强度有关。

RACE法克隆湖羊SPLUNC1基因及序列分析

通过克隆湖羊短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)基因的cDNA序列,为研究其蛋白的结构和功能奠定基础。参照GenBank上牛、山羊的SPLUNC1基因的cDNA序列,设计简并引物,分别扩增出5′和3′端目的片段,测序后进行拼接,获得湖羊SPLUNC1基因cDNA全长序列,并对序列进行分析。结果表明:克隆的湖羊SPLUNC1基因cDNA序列全长为1 091bp(GenBank登录号KJ749828),其中开放阅读框为768bp,共编码255个氨基酸。构建的氨基酸进化树结果显示湖羊SPLUNC1与预测绵羊的氨基酸同源性最高,山羊次之。

巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白对体外培养的绵羊肺炎支原体生长的影响

为研究重组巴什拜羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)对体外培养的绵羊肺炎支原体(MO)生长的影响,本研究以不同浓度(10μg/mL、20μg/mL及40μg/mL)的rSPLUNC1添加于MO培养液中进行培养,并采用平板菌落计数和荧光定量PCR方法检测其对MO的增殖水平。结果显示:平板菌落计数中,3个rSPLUNC1浓度组菌落数分别比对照组减少37.25%(p<0.01)、48.74%(p<0.01)及67.23%(p<0.01);荧光定量PCR检测结果显示,2 h后实验组MO 16S rRNA拷贝数降低,4 h时拷贝数最低,3个rSPLUNC1浓度组的拷贝数比对照组降低2.96%(p>0.05)、92.57%(p<0.01)、93.75%(p<0.01)。研究表明,rSPLUNC1对体外培养的MO具有显著的抑制作用。

重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊免疫调节作用,本研究将6只巴什拜羊分为A组,18只盘羊杂交羊随机分为B、C、D组,对实验羊人工感染MO后第5 d,C组气管注射巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白、D组气管注射盘羊杂交羊重组SPLUNC1蛋白,每天150μg/只;A、B组每天气管注射等量的生理盐水作为对照组。采用ELISA方法检测各组羊血清中MO抗体水平以及IL-8、IL-12、IL-13表达水平。结果显示,感染前所有实验羊MO抗体均为阴性,感染后第14 d所有实验羊MO抗体均为阳性;IL-8水平在感染后第14 d^21 d,A、C、D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01)。IL-12水平在感染后第14 d,A、C和D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01),第21 d时,A、C和D组极显著低于B组(p<0.01)。IL-13水平在感染后第5 d,A组显著低于B、C和D组(p<0.05),在第7 d^21 d,A、C、D组显著和极显著低于B组(p<0.05;p<0.01;p<0.01)。实验数据表明重组SPLUNC1蛋白对盘羊杂交羊具有明显的免疫调节作用。本研究为绵羊支原体肺炎的治疗提供了实验依据。

鼻咽癌相关固有免疫分子及其潜在临床转化前景

鼻咽癌是我国南方常见恶性肿瘤,目前其早期诊断仍面临巨大的困难。本课题组运用基因组学、转录组学、蛋白质组学和组织微阵列等高通量技术大规模筛选鼻咽癌分子标记物,发现在鼻咽上皮分泌的两类重要的固有免疫分子——腭、肺及鼻咽上皮克隆蛋白家族和乳转铁蛋白,不仅是构成机体天然防御系统的重要组成部分,还通过特定的信号转导通路引起一系列的生物学效应,影响鼻咽癌的发生、发展进程,有望应用于鼻咽癌的早期诊断、个体化治疗及临床预后。

复发性鼻息肉患者PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表达及意义

目的探讨复发性鼻息肉患者腭、肺及鼻咽上皮克隆(PLUNC)蛋白、Toll样受体2(TLR-2)蛋白和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达及意义。方法选取2016年1月至2017年10月在我院治疗的鼻息肉患者75例,其中初发性鼻息肉患者40例(初发组)、复发性鼻息肉患者35例(复发组),同时选取40例正常中鼻甲黏膜者作为对照组,采用免疫组织化学法检测PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表达情况。结果复发组PLUNC蛋白阳性表达率为17.14%,明显低于初发组和对照组(P<0.05);初发组PLUNC蛋白阳性表达率为45.00%,明显低于对照组(P<0.05);复发组TLR-2和HO-1蛋白阳性表达率为91.43%和85.71%,明显高于初发组和对照组(P<0.05);初发组TLR-2和HO-1蛋白阳性表达率为52.50%和55.00%,明显高于对照组(P<0.05);PLUNC与TLR2、HO-1蛋白表达呈负相关(rs=-0.622和-0.534,P<0.05),TLR2和HO-1蛋白表达呈正相关(rs=0.466,P<0.05)。结论鼻息肉患者PLUNC蛋白表达下调,而TLR2和HO-1蛋白表达上调,3种蛋白的表达与鼻息肉复发有一定的相关性,且三者之间存在相关关系。

盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因克隆及序列分析

为了克隆盘羊与巴什拜羊杂交后代短鄂、肺及鼻咽上皮细胞克隆1(SPLUNC1)基因cDNA全长序列,本研究根据GenBank上已公布的牛、山羊的SPLUNC1基因序列来设计简并引物,以盘羊与巴什拜羊杂交F1代为材料,克隆出盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因的片段序列,再利用RACE法克隆其SPLUNC1基因3′端和5′端,测序后拼接获得SPLUNC1基因全长cDNA序列。结果显示,盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因的cDNA全长为1117 bp,5′非编码区(UTR)为84 bp,3′UTR为265 bp,开放阅读框(ORF)为768 bp,编码255个氨基酸。预测该基因编码蛋白的等电点5.006,分子量26.57 kDa。系统进化分析表明,盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1氨基酸序列与绵羊的氨基酸序列同源性最高。本研究克隆了盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因全长cDNA序列,为后续深入研究该杂交后代SPLUNC1基因的功能奠定基础。

新型抗菌肽α4-短肽体外对铜绿假单胞菌的抑制作用

目的探讨抗菌肽α4-短肽体外对铜绿假单胞菌生长的抑制作用,为临床治疗以铜绿假单胞菌为主的肺部感染性疾病提供新思路。方法体外观察α4-短肽对铜绿假单胞菌标准株PAO1体外生长曲线和生物膜形成的影响,并分析α4-短肽对PAO1刺激后巨噬细胞(RAW264.7)炎症水平的影响。选取若干株临床耐药菌株,体外观察α4-短肽对其生长曲线的影响。结果α4-短肽可抑制PAO1生长及生物膜的形成,8μmol/L时效果达最佳(P<0.001)。α4-短肽预处理RAW264.7后,由PAO1引起的IL-6和TNF-α的mRNA表达下调,8μmol/L时效果最佳(P<0.001)。分离得到4株铜绿假单胞菌多重耐药菌株和2株肺炎克雷伯菌耐药菌,α4-短肽对其生长均产生较好的抑制作用。结论α4-短肽能较好地抑制铜绿假单胞菌生长及其生物膜形成,降低铜绿假单胞菌导致的炎症水平,并对临床耐药菌株有较好的抑制效果。

湖羊SPLUNC1基因序列的生物信息学分析

以湖羊SPLUNC1基因为研究对象,利用生物信息学方法对其编码的蛋白进行理化性质、信号肽、跨膜区域、亚细胞定位、二级结构、三级结构、保守区域分析,并构建系统发育树。结果表明,湖羊SPLUNC1蛋白的分子量为26.53 ku,理论等电点为5.07。SPLUNC1蛋白N端存在信号肽,亚细胞定位在细胞外。SPLUNC1蛋白质的二级结构主要为α螺旋和无规则卷曲。该蛋白由4股反平行的肽段形成的β折叠片和2个α螺旋组成的桶形结构域组成。系统发育树分析表明,湖羊的SPLUNC1蛋白在山羊、牛、猪、人、小鼠中,与山羊首先聚为一类,后与牛聚为一类,这与动物学分类结果一致。

天然免疫相关蛋白分子SPLUNC1载体构建及蛋白稳定表达

固有免疫应答在保护机体避免细菌感染中发挥着重要作用,如果固有免疫应答出现紊乱,则会加重感染和炎症反应。在呼吸道,黏膜分泌的多种蛋白如杀菌性/通透性增强蛋白（bactericidal/permeabilityincreasing protein,BPI）等能够通过参与固有免疫应答来清除呼吸道入侵的细菌,避免呼吸道感染[1]。

重组SPLUNC1抑菌及调节NE活性的研究

为研究重组绵羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)的抑菌活性及对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性的调节作用,本实验采用微量稀释法测定rSPLUNC1对巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌生长的抑制作用;采用显色底物检测法测定rSPLUNC1对NE活性的调节作用。抑菌检测结果表明10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL rSPLUNC1能够极显著地抑制巴氏杆菌、大肠杆菌的生长(p<0.01),并且呈剂量效应;显色底物检测结果表明10μg/mL和20μg/mL^40μg/mL rSPLUNC1可以显著和极显著地提高绵羊肺炎支原体(Mo)感染的外周中性粒细胞NE的活性(p<0.05,p<0.01)。表明rSPLUNC1能够抑制革兰氏阴性菌的生长并提高NE活性,可能有助于机体抵御呼吸道的感染。

LPS对A549和Hela细胞SPLUNC1蛋白表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对人肺腺癌上皮A549细胞和人子宫颈癌上皮Hela细胞短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)蛋白表达的影响。方法将两类细胞各随机分为对照组、实验组,CCK-8法观察LPS与细胞增殖活性的时间-反应和剂量-反应关系,筛选各自的最佳效应浓度和作用时间,以LPS最佳效应浓度和作用时间处理后,免疫组化和免疫荧光定量法检测两类细胞SPLUNC1蛋白相对表达量的变化。结果 LPS对A549细胞的最佳效应浓度为20 mg/L,最佳效应时间为12 h,对Hela细胞的最佳效应浓度为40 mg/L,12~24 h为其最佳效应时间窗。SPLUNC1在两类细胞中均呈阳性表达,LPS处理后表达均显著上调(P <0. 05),两类细胞间比较,LPS处理后Hela细胞SPLUNC1相对表达量高于A549细胞(P <0. 05),较对照的增量值(Δ)也明显大于A549细胞(P <0. 05)。结论 SPLUNC1在宫颈癌细胞中存在表达,可能是肺腺癌和宫颈癌病变中的保护性因子,具有潜在的临床应用价值。

盘羊杂交羊SPLUNC1融合蛋白的真核表达

为构建盘羊杂交羊SPLUNC1基因的真核表达载体并在巴斯德毕赤酵母中表达,从盘羊杂交羊口腔上颚的上皮细胞中提取总RNA,并反转录成c DNA,以该c DNA为模板采用逆转录PCR(RT-PCR)法克隆盘羊杂交羊SPLUNC1基因开放阅读框,并克隆到p PIC9K载体中,构建真核表达载体p PIC9K-SPLUNC1,再将重组质粒电转至毕赤酵母GS115中进行表达,表达产物经Ni-NTA琼脂亲和层析纯化,并利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western Blot)方法检测。结果显示,目的基因大小758 bp,重组表达质粒p PIC9K-SPLUNC1经双酶切、PCR及测序鉴定构建成功;表达产物经SDS-PAGE分析,可见大小为25.96 ku的目的条带,且在72 h表达量最大;纯化后经SDS-PAGE和Western Blot分析,可见大小为25.96 ku的目的条带。研究结果表明,利用真核表达系统在体外成功表达并纯化了盘羊杂交羊r SPLUNC1蛋白,为深入研究盘羊杂交羊SPLUNC1蛋白的生物学功能奠定基础。

脂多糖诱导SPLUNC1基因的表达

目的了解脂多糖(LPS)对人支气管上皮细胞(HBECs)增殖的影响,通过观察不同浓度脂多糖(LPS)不同时间诱导HBECs的短上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)基因表达情况,探讨SPLUNC1在呼吸道感染中的作用。方法采用0.01、0.1、1.0、10 mg/L LPS诱导HBECs,通过噻唑蓝(MMT)法检测LPS对HBECs增殖的影响,诱导HBECs 2、4、8、16、24 h后通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测SPLUNC1基因表达情况,结果以SPLUNC1/GAPDH基因拷贝数比值表示。结果 0.01、0.1、1.0、10 mg/L的LPS均可抑制HBECs的生长[吸光度(A值):0.48±0.03、0.37±0.01、0.30±0.03、0.27±0.02,相对生长指数:94.12%、72.55%、58.82%、52.94%],并能诱导SPLUNC1基因表达上调;在同一浓度组,LPS刺激细胞2 h后SPLUNC1基因表达开始上调,随着时间延长逐渐升高,呈时间依赖性[0.01 mg/L组2、4、8、16、24 h分别为0.19±0.03、0.24±0.04、0.26±0.03、0.44±0.05、0.51±0.07;0.1 mg/L组分别为0.43±0.02、0.52±0.05、0.60±0.06、0.63±0.08、0.68±0.05;1.0 mg/L组分别为0.44±0.02、0.48±0.02、0.50±0.03、0.58±0.05、0.70±0.06;10 mg/L组分别为0.34±0.03、0.38±0.04、0.68±0.05、0.96±0.08、0.98±0.07],不同时间点组间比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论 LPS可抑制HBECs的生长,能诱导HBEC细胞SPLUNC1基因表达上调,并在一定浓度范围内表达呈时间依赖性,推测SPLUNC1可能参与细菌感染最初的防御。

感染绵羊肺炎支原体后绵羊SPLUNC1 mRNA表达水平监测

为检测绵羊感染绵羊肺炎支原体(MO)前后的短腭、肺及鼻咽上皮克隆基因1(SPLUNC1)表达水平变化,对6只巴什拜羊和6只盘羊杂交羊分别人工感染MO,在感染前(第0天)和感染后第5、14、21天,采集口腔喉咽部的上腭组织,用Real-time PCR方法检测SPLUNC1mRNA的表达水平。结果:感染后两组羊SPLUNC1 mRNA的相对表达水平均升高,在感染后第14~21天,巴什拜羊SPLUNC1 mRNA水平均极显著高于盘羊杂交羊(P<001)。该结果说明在临床上表现为抗MO感染的巴什拜羊,体内可表达高水平的SPLUNC1 mRNA,这为巴什拜羊抗MO感染的机理研究提供一定的参考依据。

肺炎链球菌诱导SPLUNC1表达及白藜芦醇对SPLUNC1表达的影响

目的探讨肺炎链球菌(SP)感染时短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)的宿主防御作用,及白藜芦醇(Res)对SPLUNC1表达的影响,为SP感染性疾病的治疗提供新的思路。方法根据感染复数(MOI)不同将SP感染BEAS-2B细胞分为对照组、MOI20 SP组和MOI50 SP组;根据Res药物浓度不同将Res预处理MOI20 SP感染BEAS-2B细胞分为12.5Res+SP组、25Res+SP组、50Res+SP组(Res终浓度分别为12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)。通过CCK-8法检测细胞活性,并选出SP、Res最佳作用浓度及时间。正式实验分为对照组、Res组、SP组和Res+SP组,采用实时定量PCR法和ELISA法检测各组SPLUNC1 m RNA及蛋白表达。结果随SP感染时间延长,细胞活性呈降低趋势;与对照组和MOI20 SP组相比,MOI50 SP组细胞活性有下降趋势;与MOI20 SP组相比,25Res+SP组细胞活性增强(P<0.05),50Res+SP组细胞活性降低(P<0.05)。以MOI20 SP菌悬液和25μmol/L Res进行正式实验。SP组和Res+SP组随感染时间延长,BEAS-2B细胞SPLUNC1m RNA水平表达先增高,后降低(P<0.05);与SP组相比,各时间点Res+SP组SPLUNC1 m RNA及蛋白表达水平均增高(P<0.05);与对照组相比,仅Res组SPLUNC1 m RNA及蛋白表达水平随时间延长未见明显改变(P>0.05)。结论 SP感染可以诱导SPLUNC1表达,发挥宿主防御作用,Res可以在感染发生时上调SPLUNC1的表达,以浓度及时间依赖的方式加强细胞保护。

姜黄素对子宫颈癌Hela细胞凋亡及SPLUNC1蛋白表达的影响

目的探讨姜黄素对子宫颈癌Hela细胞凋亡及对短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)表达的影响。方法取对数生长期Hela细胞,分别设置对照组(姜黄素0μmol/L)、实验A组(姜黄素4μmol/L)、实验B组(姜黄素8μmol/L)、实验C组(姜黄素16μmol/L)、实验D组(姜黄素32μmol/L)、实验E组(姜黄素64μmol/L)、实验F组(姜黄素128μmol/L),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定姜黄素对子宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡形态,异硫氢酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SPLUNC1蛋白的表达。结果与对照组比较,实验各组细胞增殖抑制率均明显增加(P均<0.05),且除实验F组外,细胞增殖抑制率随姜黄素剂量增加而增加,呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P均<0.05);其半数抑制浓度(IC50)=43.32μmol/L。对照组细胞形态正常,实验C、D、E组出现了典型的细胞凋亡形态变化,细胞核碎裂、固缩。与对照组比较,实验C、D、E组凋亡率随姜黄素剂量增加而增加,差异有统计学意义(P均<0.05);与对照组比较,实验C、D、E组SPLUNC1蛋白表达随姜黄素剂量增加而下降。结论在一定浓度范围内,姜黄素可明显促进子宫颈癌Hela细胞凋亡,抑制Hela细胞的增殖,其作用可能与下调SPLUNC1的表达相关。

SPLUNC1-Ig融合蛋白在CHO细胞中的稳定表达及活性初步分析

目的 构建短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1（SPLUNC1）-Ig融合蛋白表达体系并初步分析其活性.方法 在质粒PGEM-T easy-SPLUNC1基础上联合应用大引物法和巢式PCR实现目的序列147位碱基的定点突变,亚克隆于表达载体PDH3,构建PDH3-SPLUNC1的表达质粒.稳定转染CHO/dhfr-细胞完成SPLUNC1-Ig融合蛋白的表达,并在氨甲喋呤（MTX）加压下筛选出稳定表达的细胞株,应用ELISA检测蛋白表达的水平.利用蛋白A亲和层析系统纯化获得的SPLUNC1-Ig融合蛋白,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹进行鉴定,经ELISA、Western免疫印迹分析SPLUNC1-Ig融合蛋白的特异性和活性.结果 经酶切及测序结果证实预定位点已突变,琼脂糖凝胶电泳出现大小为768 bp的目的条带;测序发现SPLUNC1基因的147位碱基A均已突变成C,证实PDH3-SPLUNC1表达质粒构建成功.RT-PCR扩增出768 bp大小的SPLUNC1基因.ELISA检测CHO/dhfr-细胞上清表明SPLUNC1-Ig融合蛋白在3个月内稳定表达,水平与时间的延长无关.经亲和层析获得SPLUNC1-Ig融合蛋白,SDS-PAGE电泳可见相对分子质量约52 500大小的条带.Western免疫印迹也在45 000与66 200之间出现与预测位置相符的特异目的条带.SPLUNC1-Ig融合蛋白浓度为0.39 mg/L时与脂多糖结合活性明显高于阴性对照,6.25 mg/L时与脂多糖结合的A450值基本达到平台期.Western免疫印迹也显示未变性的脂多糖可与SPLUNC1-Ig融合蛋白结合,而变性后却不能与之结合.结论 建立了非切胶纯化的定点突变方法,顺利实现了表达质粒的构建.成功构建SPLUNC1-Ig融合蛋白表达体系,其分泌的目的蛋白具有蛋白的天然结构和体外活性.