带电短肽T_(7)+、T_(6)-对α-淀粉酶活性和构象的影响

利用带不同电荷的短肽T_(7)+、T_(6)-,探讨正电荷短肽T_(7)+和负电荷短肽T_(6)-对α-淀粉酶的活性和构象的影响。将短肽加入α-淀粉酶体系后,测定其相对酶活、米氏常数(Km)、活化能、Zeta电位等指标。为了更清晰地观察不同带电量的短肽对α-淀粉酶构象的影响,通过紫外吸收光谱、荧光光谱、同步荧光光谱、圆二色光谱进一步考察α-淀粉酶构象的变化。结果表明,将带电短肽加入α-淀粉酶的酶促反应中,正电荷短肽T7+抑制α-淀粉酶酶活,当短肽质量浓度为10^(-7)g/mL时,α-淀粉酶相对酶活降低2.40%,同时也使α-淀粉酶与可溶性淀粉的亲和力降低,活化能升高,Zeta电位增加。负电荷短肽T_(6)-促进α-淀粉酶酶活,当短肽质量浓度为10^(-7)g/mL时,α-淀粉酶相对酶活升高1.40%,同时也使α-淀粉酶与可溶性淀粉的亲和力升高,活化能降低,Zeta电位增加。光谱分析表明,不同带电短肽使α-淀粉酶的紫外-可见吸收光谱、荧光光谱以及二级结构发生不同程度的改变。这表明不同带电短肽可以发挥与电场相似的作用,即电场在作用于蛋白质时,产生的电场力促使蛋白质构象发生改变,人工设计合成短肽所带的表面电荷影响酶表面电荷的分布,进而导致酶的活性和构象发生改变。

对短肽型肠内营养制剂不耐受的克罗恩病活动期患者药学监护1例

炎症性肠病(IBD)是一组病因尚未明确的慢性非特异性肠道炎性疾病。近几十年来,全球IBD发病率持续增高,首例病例出现在经济社会高度发达的北美及欧洲,近十年来我国病例明显增多[1-2]。克罗恩病(CD)属于IBD的一种,以腹痛、腹泻、体质量下降为主要临床表现,青少年多发,发病高峰年龄为18~35岁,男性略多于女性[3-4]。多数患者预后较差,病情迁延不愈,故治疗目的多为诱导和维持缓解,同时预防并发症,改善生存质量[2]。在CD治疗中,肠内营养不仅是营养支持,还是控制炎性反应的治疗手段之一,除纠正营养不良和降低营养风险外,还可诱导和维持CD缓解[5-6]。本文以1例CD活动期患者营养方案为例,探讨临床药师在肠内营养的品种选用及实施过程的监护及分析。

新型抗菌肽α4-短肽体外对铜绿假单胞菌的抑制作用

目的探讨抗菌肽α4-短肽体外对铜绿假单胞菌生长的抑制作用,为临床治疗以铜绿假单胞菌为主的肺部感染性疾病提供新思路。方法体外观察α4-短肽对铜绿假单胞菌标准株PAO1体外生长曲线和生物膜形成的影响,并分析α4-短肽对PAO1刺激后巨噬细胞(RAW264.7)炎症水平的影响。选取若干株临床耐药菌株,体外观察α4-短肽对其生长曲线的影响。结果α4-短肽可抑制PAO1生长及生物膜的形成,8μmol/L时效果达最佳(P<0.001)。α4-短肽预处理RAW264.7后,由PAO1引起的IL-6和TNF-α的mRNA表达下调,8μmol/L时效果最佳(P<0.001)。分离得到4株铜绿假单胞菌多重耐药菌株和2株肺炎克雷伯菌耐药菌,α4-短肽对其生长均产生较好的抑制作用。结论α4-短肽能较好地抑制铜绿假单胞菌生长及其生物膜形成,降低铜绿假单胞菌导致的炎症水平,并对临床耐药菌株有较好的抑制效果。

短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)对酒精性肝损伤保护作用的研究

该研究采用一种短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)分别处理人源肝细胞LO2和酒精性肝损伤小鼠,从体内和体外分别进行验证,研究AKRA是否能够缓解由偶氮二异丁脒盐酸盐(2,2′-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)在肝细胞内引起的氧化应激和食用酒精在实验动物体内造成的酒精性肝损伤。取处于对数生长期的LO2细胞,分为正常组和AKRA处理组,采用细胞增殖-毒性检测法(cell counting kit-8,CCK8)测定并计算细胞活力。采用AAPH诱导LO2细胞氧化损伤;然后以不同浓度AKRA处理细胞,检测LO2细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽还原型(glutathione,GSH)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)评价氧化、自噬和炎症相关标志性蛋白表达情况;利用食用酒精灌胃小鼠制备酒精性肝损伤病理模型同时,通过腹腔注射高、中、低剂量AKRA注射液,连续30 d,处死小鼠并观察肝组织病理形态学改变;并进行小鼠生理生化和肝脏中氧化相关指标的检测。结果提示,AKRA在0~6.4 mg/mL对LO2细胞增殖无明显影响和毒性作用,细胞活力正常;AKRA能够不同程度改善由AAPH处理引起的CAT、GSH、SOD等抗氧化酶的活性改变,并降低MDA含量;进一步研究发现,AKRA可促进核因子E-2-相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)与Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)解离,并进入细胞核,调控下游抗氧化及抗炎蛋白的表达水平;AKRA促进P62蛋白(sequestosome 1)降解,LC3蛋白(light chain 3)生成,从而提高自噬活性。此外,AKRA腹腔注射后,酒精引起的小鼠肝组织细胞变性程度较轻;血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)下降,总胆固醇(total cholesterol,T-cho/TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平降低,而高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平升高,氧化相关指标CAT、GSH及SOD活性出现不同程度的改善和MDA含量降低。通过该研究可知,短肽AKRA可能通过调控肝细胞抗氧化水平,提高自噬活性及抗炎能力达到缓解肝损伤的目的。

高抗氧化活性玉米醇溶蛋白短肽-黄色素复合物制备技术研究

采用单因素试验及正交试验,提取玉米蛋白粉中的醇溶蛋白-黄色素复合物,确定最佳提取条件为温度70℃,时间180 min,乙醇体积分数75%,料液比1∶12,醇溶蛋白提取率60.73%,黄色素提取量0.37 mg/g玉米蛋白粉。采用不同蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白-黄色素复合物,制备高抗氧化活性短肽-黄色素复合物,根据分子量分布和DPPH自由基清除率结果得出,经碱性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶复合处理得到的玉米醇溶蛋白短肽-黄色素复合物,DPPH自由基清除率最高,达到84.10%。

短肽型肠内营养制剂对不同部位受累克罗恩病患者的临床及内镜疗效研究

目的探讨短肽型肠内营养制剂对不同部位受累克罗恩病患者的临床及内镜疗效。方法选取2020年1~6月收治的30例克罗恩病患者作为研究对象,根据不同部位受累分为小肠受累组(n=18例)和非小肠受累组(n=12例),所有患者均采用短肽型肠内营养制剂治疗。比较两组患者入组后0 d、14 d、28 d、56 d克罗恩疾病活动指数(CDAI)、疾病活动性指标[血沉(ESR)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)]及入组后第56天肠黏膜愈合情况。结果入组后14 d、28 d、56 d两组患者CDAI评分均呈下降趋势,且在同一时间小肠受累组CDAI评分均低于非小肠受累组(P<0.05);入组后14 d、28 d、56 d两组患者ESR、hs-CRP水平均呈下降趋势,且在同一时间小肠受累组ESR、hs-CRP水平均低于非小肠受累组(P<0.05);入组56 d小肠受累组克罗恩病简化内镜评分(SES-CD)低于非小肠受累组(P<0.05)。结论短肽型肠内营养制剂对小肠受累组克罗恩病患者的临床及内镜疗效优于非小肠受累组。

短肽型营养制剂治疗重症急性胰腺炎的效果及对ARDS、MODS发生率的影响

目的探讨短肽型营养制剂治疗重症急性胰腺炎(SAP)的效果及对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官功能障碍(MODS)发生率的影响。方法选取2019年7月至2020年9月我院收治的60例SAP患者作为研究对象,根据治疗方法将其分为对照组和观察组,各30例。两组患者均接受常规治疗,对照组在此基础上加肠外营养支持治疗,观察组在对照组的基础上加短肽型营养制剂肠内营养支持治疗。比较两组的治疗效果。结果治疗后,观察组的血红蛋白(Hb)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)水平高于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的内毒素、D-乳酸、二胺氧化酶、血淀粉酶水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的C-反应蛋白(CRP)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、热休克蛋白70(HSP-70)、人可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平低于对照组(P<0.05)。观察组的ARDS、MODS发生率低于对照组(P<0.05)。结论短肽型营养制剂治疗SAP的效果显著,能够改善患者的肠黏膜功能,抑制炎症因子表达,降低ARDS、MODS发生率,提高患者的生活质量。

折叠短肽基超分子螺旋的结构调控与同质多晶

以丙氨酰胺基硫脲为β-转角结构模板,于其N-端和C-端分别修饰以噻吩和间碘代苯基,合成折叠短肽分子1,通过吸收光谱、圆二色光谱、核磁共振波谱、X射线单晶衍射、X射线粉末衍射和理论计算等方法,验证了其分子内存在β-转角折叠结构,并探究了其超分子螺旋结构特征.结果揭示了折叠短肽分子1在乙腈中的同质多晶现象:在乙腈中加热冷却后,静置片刻即析出的块状晶体A,为动力学稳态晶体,仅形成一重氢键超分子螺旋结构;静置过夜或缓慢挥发得到的针状晶体B,为热力学稳态晶体,包含氢键和卤键双重超分子螺旋,组成二维螺旋平面,并借助乙腈溶剂参与的氢键作用和尺寸效应,形成稳定的超分子三维结构.晶体B的形成依赖于乙腈溶剂的存在,在其他溶剂如甲醇、三氯甲烷和乙酸乙酯中只形成晶体A.实验结果借助晶体结构直观阐明了动力学、热力学以及溶剂调控下超分子螺旋的结构特征,对超分子螺旋的构筑和调控研究具有借鉴意义.

自组装短肽系统及其材料学应用

模仿天然蛋白质的氨基酸序列设计自组装短肽作为纳米材料近年来引起了人们极大的兴趣。本文介绍了几个发展较为成熟的自组装短肽材料以及它们在纳米医学和纳米生物技术等领域的应用,阐述了自组装短肽作为新型纳米材料的巨大潜力。

褐飞虱中肠内膜结合短肽P2S的筛选

【目的】筛选与褐飞虱Nilaparvata lugens中肠内膜相结合的短肽,探索能阻断褐飞虱传播水稻病毒的新方法。【方法】通过改良的膜饲喂法和噬菌体短肽文库展示技术,模拟褐飞虱正常取食的行为,筛选能够与其中肠内膜结合的短肽。将筛选到的短肽与加强绿色荧光蛋白进行融合表达,经纯化后,将融合蛋白饲喂给褐飞虱若虫,通过荧光显微镜观察饲喂后若虫的中肠。【结果】使用改良的膜饲喂法,16h后褐飞虱若虫的取食率达到91%,24h后达到95%。经形态学验证,确定了一种短肽与褐飞虱中肠内膜具有结合活性,并将其命名为P2S。【结论】改良了针对褐飞虱的膜饲喂法,筛选并验证了能够与褐飞虱中肠内膜结合的活性短肽P2S。研究结果为阻断相关的水稻病毒与褐飞虱中肠内膜间的相互作用研究提供了科学依据,也为褐飞虱新型膜穿孔毒素蛋白的研究提供了理论基础。

玉米功能短肽的制备及其类超氧化物歧化酶活性研究

目的制备具有类超氧化物歧化酶 (SOD)活性的玉米功能短肽 ,并与SOD进行活性比较。方法以玉米蛋白粉为原料 ,采用酶水解的方法 ,经SephadexG 2 5分离 ,以TNBS法测定各组分的平均链长 ,用邻苯三酚自氧化法测定各组分的抗氧化活性 ,同时与SOD进行活性比较。结果含有 2～ 6个氨基酸残基的玉米功能短肽 ,对邻苯三酚自氧化具有较好的抑制作用 ,玉米功能短肽 (浓度 10mg ml)的抑制率为 2 1.78%。

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。

中性蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化

为了探究酶法制备鸡骨泥短肽的最佳工艺,该文研究了以中性蛋白酶酶解鸡骨泥时各因素对短肽得率和羟自由基清除率的影响,以及鸡骨泥肽清除超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)的能力。试验探究了酶解过程中不同底物浓度、酶浓度、反应温度和反应时间对短肽得率和羟自由基清除率的影响,采用响应曲面优化得到了以短肽得率为目标的中性蛋白酶酶解鸡骨泥的最优工艺,当反应液p H值为7.2,反应温度42℃,反应时间2 h,底物质量分数5%,酶添加量200 mg/g,该条件下制备鸡骨泥肽,测得其短肽得率为56.16%,羟自由基清除率为54.12%。采用该酶解工艺制备鸡骨泥肽,测得其对超氧阴离子自由基最高清除率为56.01%,对DPPH自由基最高清除率为81.57%,说明鸡骨泥肽具有一定的抗氧化活性,研究结果为酶法制备鸡骨泥肽提供参考。

短肽5－氟尿嘧啶前体药物的合成及其抗肿瘤活性研究

短肽５－氟尿嘧啶前体药物的合成及其抗肿瘤活性研究罗毅，卓仁禧，范昌烈（武汉大学化学系，武汉，４３００７２）关键词氨基酸，短肽，５－氟尿嘧啶，抗肿瘤活性５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）是一种治疗癌症的广谱性抗代谢药物，但由于其毒副作用较大，从而限制了它在临床上...

噬菌体表达短肽模拟脂多糖类脂A表位的研究

目的：得到拟类脂Ａ的六肽。方法：用抗类脂Ａ的单克隆抗体筛选噬菌体随机六肽库，经四轮筛选后进行ＥＬＩＳＡ检测，用得到的１５个阳性克隆分别免疫小鼠，并将使小鼠产生抗ＬＰＳ抗体的１０个克隆进行测序，将保守序列进行肽合成。结果：得到保守序列为ＬｙｓＰｈｅＳｅｒＳｅｒＡｒｇ，即ＫＦＳＳＲＸ。固相合成此小肽可与其１Ｂ６抗体结合，且此结合可被ＬＰＳ抑制。

中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备花生短肽的研究

【目的】为了充分利用花生榨油之后的副产物,提高产品附加值,建立花生短肽制备工艺,研发功能性花生短肽产品。【方法】通过比较酶种类、底物浓度、酶解温度、酶解时间对水解度与短肽得率的影响,采用二次回归正交旋转组合设计优化分步酶解制备花生短肽的最佳工艺。【结果】中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备短肽的最佳工艺参数为:Neutrase水解花生分离蛋白2.04 h后加入Protamex继续酶解1.96 h,Neutrase添加量为5 200 U·g-1底物,Protamex添加量为422.32 U·g-1底物,水解温度44.83℃,底物浓度8%,在此条件下,短肽得率为83.93%,水解度为38.25%,花生短肽纯度为93.85%±0.44%。经高效液相色谱测定,分子量小于1 000 D的水解产物占98.88%。【结论】采用Neutrase与Protamex分步酶解花生分离蛋白制备花生短肽,与现有碱性蛋白酶酶解制备花生短肽方法相比,避免了后续脱盐步骤,简化了工艺,且具有制备条件温和,DH和TCA-NSI高,纯度高,分子量集中分布于1 000 D以下等特点。

短肽型肠内营养制剂对行机械通气肺炎患儿的营养支持研究

目的观察儿童重症监护室(PICU)行机械通气的重症肺炎患儿营养不良及营养风险发生情况,探讨短肽型肠内营养制剂的营养支持效果。方法选取2017年10月至2018年10月于PICU住院治疗且需机械通气的重症肺炎患儿68例为研究对象,采用前瞻性随机对照法将患儿随机分为对照组和试验组。通过鼻饲管分别给予试验组短肽型肠内营养制剂,对照组整蛋白型肠内营养制剂。评估两组患儿的年龄别体重Z值、STRONGkids营养风险评分和小儿危重病评分。检测两组患儿入院时、出院前的血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)水平,观察两组患儿的胃肠耐受性和临床治疗效果指标。结果68例机械通气患儿中有26例(38%)存在营养不良,包括中度营养不良10例(15%),重度营养不良16例(24%);出院时有10例(15%)存在营养不良。63例(93%)患儿存在中、高营养风险,包括中度营养风险21例,高度营养风险42例,极危重组和危重组中的中、高营养风险检出率明显高于非危重组(P<0.05)。与对照组相比,试验组患儿的机械通气时间、总住院时间缩短,血清PA水平和体重增长率增加,在胃肠道耐受性方面试验组优于对照组(P<0.05);两组呼吸机相关肺炎发生情况及疾病转归情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论行机械通气肺炎患儿的营养不良及营养风险检出率较高。短肽型肠内营养制剂有助于改善行机械通气肺炎患儿的治疗效果,更适用于需机械通气危重患儿的营养支持治疗。[中国当代儿科杂志,2020,22(11):1209-1214]

蛋白短肽苦味成因与脱苦技术研究进展

蛋白短肽具有多种加工和功能特性,但其苦味限制了其在食品工业中的应用。本文论述了蛋白短肽苦味的构效关系,阐释了制备工艺对蛋白短肽苦味的影响,简介了苦味的评价方法,重点对蛋白短肽的物理方法与酶法脱苦技术进展进行了综述,并对目前存在问题的解决作了初步探讨,对开发应用前景加以展望。

玉米和大豆短肽的自由基清除活性与还原力的对比研究

为了比较高纯度大豆短肽和玉米短肽的体外生物活性，本研究在分析蛋白质含量、氨基酸组成和分子量分布等理化性质的基础上，测定了自由基清除能力和还原力。结果表明：玉米短肽和大豆短肽的蛋白质含量高达90％以上，相对分子质量分布在411.33和423.57左右，含量最多的必须氨基酸亮氨酸在10％以上；玉米短肽和大豆短肽使0.2mmol／L的DPPH·减少50％时的浓度SC50分别是29.48mg／mL和52.59mg／mL，小于抗坏血酸的1／2500；在2.73-27.3mg／mL浓度范围内，玉米短肽的还原能力略高于大豆短肽。结论：玉米短肽的抗氧化效果优于大豆短肽。

玉米短肽的制备及其抗氧化活性的研究

酶解玉米蛋白对生产高营养且易于吸收、高附加值的具有生物学功能特性的生物产品具有重要意义。本文通过AlcalaseAF2.4L和风味蛋白酶在适当条件下酶解玉米蛋白,酶解2h,水解度可达31%,短肽得率超过70%以上。经SephadexTMG-25进行分离,对其分离后的各组分进行抗氧化活性的研究,经测定,玉米短肽在浓度为1mg/ml时对邻苯三酚(PR)的自氧化抑制率达43.9%,相当于5U/mlSOD的抗氧化活性。