白蚁肠道元基因组来源高温β-葡萄糖苷酶Bgl17的酶学性质

【目的】对短角球白蚁(Globitermes brachycerastes)肠道元基因组文库中筛选得到的一个新型β-葡萄糖苷酶编码基因bgl17进行酶学性质研究。【方法】通过克隆与异源表达得到纯的Bgl17酶蛋白,根据Bgl17对底物的水解活性测定其稳定性及动力学参数,利用薄层层析确定其水解产物。【结果】该酶属于糖基水解酶第一家族(GHF1),对其特异性底物4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p NPGlc)的最适反应温度为70°C,最适p H为5.0。在最适反应条件下,该酶以p NPGlc为底物比活力为115.69 U/mg,以水杨苷为底物比活力为297.39 U/mg。以p NPGlc为底物时,其动力学参数Km值和Vmax分别为0.81 mmol/L和227.27μmol/(m L·min)。在稳定性方面,该酶在50°C处理1 h仍可保持50%的活性,在p H 5.0和6.0条件下,该酶的半衰期为1 h。【结论】该酶在较高的温度下具有较高的活性,且对水杨苷水解活性高,这点不同于已知的β-葡萄糖苷酶,推测其更有利于木质纤维素复杂结构的降解;该酶的最适温度远高于白蚁生存环境温度,可为研究白蚁降解纤维素的机理提供参考。