mirRNA质粒和RAN干扰技术下调人脐血干细胞基因的研究

目的探讨microRNA(miR)30为基础的shRNA干扰技术能否有效下调人脐血干细胞的基因。方法应用不同的第2代慢病毒包装质粒在293T细胞中包装病毒,检测病毒滴度和人脐血CD34+细胞转染效率。结果第2代慢病毒包装质粒可在人293T细胞中产生高滴度病毒(2×106TU/mL以上)。与包装质粒pCMV-dR8.91(6.8%~17.4%,平均14.2%)相比,pCMV-dR8.74(psPAX2)(12.3%~31.8%,平均26.5%,P<0.05)产生的病毒转染脐血干细胞的效率更高。结论应用shRNAmir和RNA干扰技术可有效下调人脐血CD34+细胞的基因。

沉默二肽基肽酶Ⅳ/CD26对上皮性卵巢癌SKOV3细胞侵袭及增殖的影响

目的:探讨沉默二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ/CD26)对卵巢癌SKOV3细胞侵袭、增殖及克隆能力的影响,为卵巢癌靶向治疗提供新的理论依据。方法:采用shCD26、shGAPDH及shNC(空质粒)分别转染SKOV3细胞,通过细胞质内绿色荧光信号计算3组细胞的转染效率。RT-PCR及Western blot分别检测转染前后细胞中DPPⅣmRNA及蛋白的表达,基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力,流式细胞检测细胞周期变化,CCK-8及平板克隆形成实验检测细胞增殖及克隆能力。结果:shCD26、shGAPDH及shNC组细胞的转染效率分别为59%、64%和60%;差异无统计学意义(P>0.05)。shNC、shCD26、shGAPDH及未转染组(non-tranfected)组中DPPⅣmRNA相对表达量分别为1.20±0.11、0.80±0.01、2.15±0.15和1.32±0.04;shCD26组中DPPⅣmRNA和蛋白表达均显著低于其余3组(P<0.05)。shCD26组、shNC组和non-transfected组的穿膜细胞数分别为37±4.08、65±4.74和66.8±3.82,克隆数分别为8.3±0.57、13.33±1.52和14.0±1.0sh。shCD26组的穿膜细胞数、克隆数及细胞活力均显著低于shNC组、non-transfected组(P<0.05)。shCD26组细胞的G0/G1期比率增加,而S及G2/M期比率降低,与shNC组、nontransfected组比较,差异显著(P<0.05)。结论:DPPⅣ可能具有促进SKOV3细胞侵袭、增殖及克隆形成等作用。