菊花矮化类病毒两种检测方法的建立与比较

菊花矮化类病毒可通过接种寄主植物和电泳方法进行检测。正反向电泳法可从相当于 2 8mg鲜重的菊花样品中检测到菊花矮化类病毒RNA ,并可同时检测 10 - 2 0个样品材料。生物检测则需要较大的空间、严格的温度条件和较长时间 。

中国水稻矮化类病毒病的研究进展

水稻矮化类病毒病是我国水稻常见的病毒病之一,近年来,在我国十几个省市都有普遍发生,且有逐年上升的趋势。就水稻矮化类病毒病发病概况、分类、发病症状、传播途径及发病机理等方面进行了概述,简要介绍了水稻矮化类病毒基因组研究的情况,并较为详细地介绍了水稻矮化类病毒病抗病材料的筛选、抗性基因定位及克隆等方面的研究进展。系统地分析了当前水稻矮化类病毒病研究中存在的问题,并就今后如何进一步深入开展水稻矮化类病毒病的研究进行了展望。

杏和李树啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析

从无明显症状表现的24个杏样品,37个李样品的1年生枝条表皮中抽提低分子RNA进行DIG-cDNA斑点杂交、RT-PCR、正反向聚丙烯酰胺凝胶电泳(Return-PAGE)和生物学检测。结果表明:杏有3个样品,李有6个样品带有啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)。从这9个样品中选a5、a17、p6、p16进行克隆和测序分析。所得序列与GenBank中已报道的HSVd序列同源性达99.0%～99.7%,且序列变异与地域、寄主等无明显相关性,说明HSVd的序列是比较保守的。

山西省枣树上啤酒花矮化类病毒的检测及序列分析

［目的］ 从枣树样品中分离鉴定啤酒花矮化类病毒（HSVd）。［方法］ 从山西省农业科学院果树研究所国家枣种质资源圃采集70份枣树叶片样品，提取小分子RNA后通过Northern杂交、RTPCR进行检测，并对阳性样品中的类病毒进行克隆测序，利用生物学软件对所得序列进行分析。 ［结果］ 70份枣树样品中有1份样品感染HSVd，克隆测序后，共获得13条HSVd序列，它们与GenBank上首次报道的HSVd序列相似性为92.6%~92.8% 。［结论］ 本研究首次在国内报道了枣树上分离得到的HSVd序列，HSVd枣树分离物与已报道的HSVd分离物差异较大。

两种非放射性标记DNA探针检测菊花矮化类病毒的比较

以含菊花矮化类病毒（Chrysanthemumstuntviroid.CSV）全长序列的重组质粒PUC为模板DNA，加入通用引物，在聚合酶链式反应系统中制备地高辛标记的CSVcDNA探针和生物素标记的CSVcDNA探针。用这两种探针检测感染菊花矮化类病毒的菊花样本均为阳性反应，而检测健康对照的结果为阴性。采用PCR-微量板杂交法，地高辛标记的探针检测CSVcDNA的吸光值明显高于生物素标记的探针检测的吸光值，采用斑点杂交法，地高辛标记的cDNAN针能够检测CSVRNA的最低含量为50fg，而生物素标记的cDNA探针能够检测CSVRNA的最低含量为5pg。

菊花矮化类病毒双向电泳检测

菊花矮化类病毒(CSV),是菊花的一个重要病害,引起植株严重矮化,花序变小而降低或失去其观赏价值。在1945～1947年,菊花矮化病在美国大流行,使30%～60%植株失去商品价值。此病在美国、加拿大、英国、荷兰有分布,在我国也有报道。但它在菊花生产中的重要性,它的分布及流行情况不清楚。在1987～1989年,我们在这方面做了一些工作。

微量板杂交法和斑点杂交法检测菊花矮化类病毒的比较

利用狄高辛(DIG)标记制备菊花矮化类病毒(CSV)特异性探针,由反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行CSV RNA的反转录和cDNA的扩增,然后比较2种核酸杂交方法——微量板杂交和斑点杂交检测CSV的灵敏度。本研究结果表明,30 mg干燥样本抽提的CSV RNA被稀释400倍,取4 μL(约750 pg样本抽提的RNA)经RT-PCR,其产物再用10×SSC稀释100倍,采用微量板杂交仍可以很容易得到阳性结果,而采用斑点杂交法,同样条件下PCR产物被稀释8倍就不易得到阳性结果。所以,微量板杂交法比斑点杂交法具更高的灵敏度。

柑橘3种病毒类病原多重RT-PCR检测技术的建立及应用

【目的】建立柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)、柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)和啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid,HSVd)的多重RT-PCR检测体系。【方法】设计多重RT-PCR引物,分析其特异性,确定其最佳浓度比、最适退火温度及灵敏度,在此基础上对福建地区的柑橘样品进行检测。【结果】确定了CYVCV-F/R、CTV-F/R和HSVd-F/R等3对引物的最佳浓度比例为1∶1∶2,最适退火温度为52.9℃,灵敏度结果显示该体系可检测模板稀释到10^(-2)的阳性样品。应用该体系对采自福建部分地区的157份柑橘样品进行检测,结果发现,CYVCV、CTV和HSVd的检出率分别为47.1%、56.7%和22.9%。【结论】成功建立了柑橘CYVCV、CTV和HSVd病原的多重RT-PCR检测方法,为该类病害的检测提供准确、快速的检测方法。

菊花矮化类病毒的分子检测与序列分析

菊花矮化病由菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSVd)引起。从北京、海南万宁、合肥和哈尔滨共采集了122个野生及商业种植的菊花样品,使用改进的CTAB法提取菊花总RNA后,通过斑点杂交检测CSVd,应用RT-PCR对阳性样品进行克隆、测序。斑点杂交结果表明,在检测的122个样品中有14个样品感染了CSVd,感染率为11.5%;除哈尔滨外的其余3个地区均有CSVd的发生。序列比较分析结果表明,中国的CSVd分离物与韩国和日本分离物的序列最为接近,对其二级结构进行分析发现,与CSVd的参考序列(NC002015)相比,所获得的中国CSVd分离物的序列中虽然有21个碱基发生了突变(大多位于二级结构上的致病区内),但并未影响其折叠成稳定的拟棒状结构。

啤酒花矮化类病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、灵敏、特异的定量检测啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,设计了2对引物及特异探针,体外转录制备了RNA标准品,绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。建立的定量标准曲线C t值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9988,扩增效率为95%;该方法的特异性好,与啤酒花潜隐类病毒(HLVd)、葡萄黄斑类病毒1(GYSVd-1)、葡萄黄斑类病毒2(GYSVd-2)和桃潜隐花叶类病毒(PLMVd)均无交叉反应;灵敏度为1.0×102拷贝/μL,比普通RT-PCR高10倍;试验内及试验间重复性试验的变异系数均小于3%。研究表明该方法适用于实际样品中HSVd的快速定量检测。

山东局从法国进境葡萄砧木中截获啤酒花矮化类病毒

2013年4月山东出入境检验检疫局从法国进境的葡萄砧木中截获啤酒花矮化类病毒（Hop stunt viroid，HSVd），这是系统内首次在进境葡萄砧木上截获该类病毒。利用RT-PCR方法初步筛选出疑似感染有啤酒花矮化类病毒（HSVd）的样品，并对阳性样品的类病毒进行克隆测序，序列比对分析；提取小分子RNA后通过Northern杂交；确认在进境的葡萄砧木中检出了有害生物啤酒花矮化类病毒。

啤酒花矮化类病毒属属级寡核苷酸芯片筛查方法的建立

啤酒花矮化类病毒属是重要的植物类病毒属,目前尚无有效的筛查方法。通过对该属类病毒的核苷酸序列进行分析筛选,设计了8条用于该属类病毒筛查的属级特异性探针并制备了寡核苷酸芯片。应用啤酒花矮化类病毒标准样品对该芯片进行验证,结果表明所建立的属级芯片可以特异性检测啤酒花矮化类病毒,可检测到2ng/μL的总RNA。该芯片可用于啤酒花矮化类病毒属类病毒的筛查,为该属类病毒的检疫与防控提供技术支撑。

法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析

为检测法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd),对其进行了RTPCR检测及序列测定,并构建系统进化树比较了不同地域来源HSVd间的分子差异性。结果表明基于HSVd基因序列设计合成的1对引物能够扩增出302 bp大小的目标片段,而健康植株无此扩增产物。法国葡萄砧木中检出的HSVd分离物,与国内外已报道毒株的核酸序列同源性达90%~97%,与已报道的HSVd全基因组序列间差异较小,表明HSVd的序列变异与地域、寄主等无明显相关性。

柑桔木质陷孔病类病毒贵州分离物的分子鉴定

从采自贵州感染了啤酒花矮化类病毒(Hopstunt viroid,HSVd)的柑桔植株中抽提总核酸,通过一对鉴别引物,经RT-PCR扩增初步筛选出柑桔木质陷孔病类病毒(Citrus cachexia viroid,CCaVd)。扩增该类病毒的全长核苷酸片段,通过克隆和测序,结果发现,该片段全长298 bp,与GenBank中报道的木质陷孔病类病毒分离物同源性达到96%以上。这是中国发生的木质陷孔病类病毒的分子生物学特征的首次报道。

类病毒——已知的最小传染性病原体

一、类病毒的发现和类病毒病 过去认为病毒是最小的传染性病原体。1971—1972年,当美国人Diener和西德人Snger研究马铃薯纺锤形块茎病和柑桔裂皮病时,发现引起这两种病害的病原体不是病毒,而是一种比病毒简单得多的、不含蛋白质的小分子核糖核酸。其核酸的分子量(12,000道尔顿)只有最小的病毒核酸的十分之一。

桃树病毒病研究现状与防控对策

【导读】近年来，桃树病毒的侵染日益严重，严重影响了桃产业的正常发展。目前．桃树上已经报道的病毒和类病毒病原主要有苹果褪绿叶斑病毒、李属坏死环斑病毒、李痘病毒、李矮缩病毒、樱桃绿环斑驳病毒、杏假褪绿叶斑病毒和李树皮坏死茎纹孔伴随病毒、桃潜隐花叶类病毒和啤酒花矮化类病毒等。

河南开封与湖北荆门地区菊花病毒病的检测与比较分析

病毒病是影响菊花生产的重要因素,为了解河南开封地区与湖北荆门地区菊花生产中的病毒发生情况,比较不同地区菊花感染病毒病的区别,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测技术,对常在菊花中出现的5种病毒:菊花B病毒(Chrysanthemum virus B,CVB)、番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)、菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSVd)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)进行检测。结果表明,菊花B病毒、番茄不孕病毒是使菊花感病的优势病毒,在河南开封地区较为常见,而马铃薯X病毒仅在较少的开封菊花品种中检测到,菊花矮化类病毒、马铃薯Y病毒在开封菊花中均未检测到。而湖北荆门地区菊花病毒种类较少,除少数品种检测到菊花B病毒外,番茄不孕病毒、菊花矮化类病毒、马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒均未被检测到。以上结果说明,菊花B病毒、番茄不孕病毒可以作为病毒病的首要防治目标,可以减少对其他病毒的施药防治,从而减少施药对菊花生长的影响,以及减少菊花的种植成本和工作量。

属级芯片筛查技术在马铃薯纺锤块茎类病毒属检测中的应用

建立马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid)类病毒有效的芯片筛查技术,对该属类病毒进行筛查。分析了该属类病毒序列,得到19条具有属级鉴定特征的探针。这些探针符合GC含量在40%与60%之间、单个核苷酸含量不大于50%、无多于4个核苷酸的连续重复及不形成多于6个核苷酸的发卡结构的标准;将探针点制到玻璃片基上制备芯片。芯片探针有效性实验结果表明,菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSVd)及番茄雄性株类病毒(Tomato planta macho viroid,TPMVd)样品杂交可获得有效信号;灵敏度实验结果表明,该芯片可检测到200 pg/μL的总RNA。该芯片可用于Pospiviroid类病毒的筛查。

甜樱桃斑果病研究进展及其防治

类病毒是一类单链、闭合环状低分子量的致病性RNA,大小为246~463bp,无蛋白质外壳包裹,是目前发现的最小病原物。类病毒侵染性强,可导致被侵染的细胞或组织发生异常,侵染后造成类似病毒感染的矮化、斑驳、叶变形、裂皮、斑果和坏死等症状。从类病毒的危害症状、检测及鉴定、致病机理、传播及防治等方面介绍了引起甜樱桃斑果病的啤酒花矮化类病毒。