非小细胞肺癌矮小同源盒基因2和Ras相关结构域蛋白家族1A基因甲基化的意义

目的:探究矮小同源盒基因(SHOX2)和Ras相关结构域蛋白家族1A(RASSF1A)基因甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)浸润、转移的关系。方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)分析NSCLC及其相应癌旁组织中SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化状态,分析其甲基化状态与患者临床病理特征的关系。结果:NSCLC癌组织中SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化率分别为68.97%(80/116)、33.62%(39/116),明显高于癌旁正常组织中的12.93%(15/116)、10.34%(12/116)(P<0.05);SHOX2和RASSF1A基因甲基化分布情况与NSCLC患者性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、分化程度无关(P>0.05),与其TNM分期、病理分型、淋巴结转移以及患者生存时间有关(P<0.05),TNM分期中Ⅲa+Ⅲb期患者SHOX2基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),鳞癌患者基因甲基化率明显高于腺癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2年患者(P<0.05);TNM分期中Ⅲa+Ⅲb期患者RASSF1A基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),腺癌患者基因甲基化率明显高于鳞癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2年患者(P<0.05)。结论:SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化可能是NSCLC发生浸润以及转移的原因之一,检测SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化可为NSCLC的诊断及预后评估提供参考价值。

高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测诊断早期肺结节的价值

目的:探究高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液(BALF)中矮小同源盒基因2(SHOX2)、Ras相关区域家族A1(RASSF1A)基因甲基化检测诊断早期肺结节的价值。方法:选取2021年5月—2022年5月某院就诊并经纤维支气管镜(FB)检查的肺结节患者100例,FB下收集患者的BALF,通过实时荧光定量PCR法测定BALF中SHOX2和RASSF1A基因甲基化状态,同时收集高分辨CT三维重建检查、BALF检测结果。依据病检结果将患者分为恶性结节组(n=40)和良性结节组(n=60),分析高分辨CT三维重建检查、BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测对早期肺结节的诊断价值,并绘制ROC曲线评价各检测方法在早期肺结节诊断中的效能。结果:SHOX2甲基化诊断恶性结节的敏感度为50.00%,AUC为0.708,RASSF1A甲基化诊断恶性结节的敏感度为52.50%,AUC为0.713,2基因甲基化联合诊断恶性结节的敏感度为75.00%,AUC为0.767。高分辨CT三维重建诊断恶性结节的敏感度为72.50%,特异度为73.33%,AUC为0.729,BALF对恶性结节的诊断敏感度为25.00%,特异度为100.00%,AUC为0.625。2基因甲基化联合+高分辨CT三维重建诊断恶性肺结节的AUC为0.890,敏感度与特异度分别为90.00%和73.33%,其诊断效能高于2基因甲基化联合+BALF细胞学分析和高分辨CT三维重建+BALF细胞学分析(Z=2.453、2.736,P均<0.05)。结论:高分辨CT三维重建联合BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测在肺结节良恶性诊断中的鉴别效能较高,值得在临床中应用。

同源异形盒A10基因启动子区甲基化及蛋白表达与子宫内膜异位症的关系

目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症(endome-triosis,EM)患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10(homeobox-A10,HOXA10)基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与HOXA10基因异常甲基化和蛋白表达的关系及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(SP法)检测36例EM患者中异位内膜组织(异位内膜组)、在位内膜组织(在位内膜组)及12例正常对照者子宫内膜组织(对照组)中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化状况和HOXA10蛋白表达情况。结果①36例EM患者的异位、在位内膜组织中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化率分别为38.9%、25.0%;其甲基化均发生在临床Ⅲ、Ⅳ期;12例正常子宫内膜组织中HOXA10基因均未发生甲基化;三组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。②EM患者在位、异位内膜HOXA10的表达下降,无明显的分泌中、晚期峰;异位内膜基质HOXA10的表达显著降低,低于对照组正常内膜表达,其差异有统计学意义(P<0.05)。③异位内膜组织HOXA10的蛋白表达与HOXA10基因启动子甲基化呈负相关,相关系数rs=-0.368。结论EM患者异位内膜组织中存在HOXA10基因启动子区异常甲基化导致基因失活,在EM发生发展过程中起重要作用。

癌高甲基化1同源盒基因A9基因启动子甲基化在卵巢癌早期诊断中的意义

目的探讨癌高甲基化1(HIC1)、同源盒基因(HOX)A9基因启动子甲基化状态与卵巢肿瘤发生发展的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测33例卵巢癌、10例卵巢良性肿瘤及10例卵巢正常组织中HIC1、HOXA9基因启动子的甲基化状态。结果33例卵巢癌中HIC1和(或)HOXA9基因启动子甲基化的频率是52%(17/33),显著高于卵巢良性肿瘤及卵巢正常组织(15%,3/20,P<0.05);临床Ⅰ、Ⅱ期HIC1和(或)HOXA9基因甲基化的频率是64%(9/14),明显高于临床Ⅲ、Ⅳ期(26%,5/19,P<0.05);高分化组和中分化组HIC1和(或)HOXA9基因甲基化的发生率30%(7/23)低于低分化组(80%,8/10,P<0.05);HIC1和(或)HOXA9基因甲基化与卵巢癌组织学类型无明显相关性(P>0.05);HIC1和(或)HOXA9基因甲基化,患者患卵巢癌的风险增加5.7倍;病程早期HIC1和(或)HOXA9基因甲基化,患卵巢癌的风险增加5.0倍。结论HIC1和(或)HOXA9基因启动子甲基化与卵巢癌的发生有关,提示联合检测这2个抑癌基因的异常甲基化可用于卵巢癌的早期临床诊断。

低剂量CT结合SHOX2、RASSF1A甲基化在肺癌早期预警中的应用

目的探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值。方法选取2021年1月~2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组。2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性。结果低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67%、准确度97.78%均高于三者单一诊断效能(P<0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P<0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P<0.05)。结论低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后。

支气管抽吸物中矮小同源盒2和Ras相关结构域家族蛋白1ADNA甲基化检测对早期肺癌诊断价值的Meta分析

目的系统分析支气管抽吸物(包括支气管肺泡灌洗液和冲洗液)中矮小同源盒2(SHOX2)和Ras相关结构域家族蛋白1A(RASSF1A)DNA甲基化对肺癌的诊断效能。方法检索PubMed、Embase、The Cochrane Library、Web of Science、Clinical Trail、CNKI、万方数据库发表的关于SHOX2和RASSF1A甲基化对肺癌诊断价值的文献,检索日期截至2021年5月11日,进行数据提取和质量评价,使用Stata 16.0软件进行Meta分析。结果本研究共纳入20篇文献,中文文献8篇,英文文献12篇。Meta分析结果显示:SHOX2甲基化诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.90、7.50、0.30和0.86。RASSF1A甲基化诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和AUC分别为0.51、0.96、14.10、0.50和0.82。SHOX2和RASSF1A甲基化联合诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和AUC分别为0.78、0.87、5.80、0.26、0.90。结论支气管抽吸物中SHOX2和RASSF1A甲基化对肺癌的诊断价值较高,对CT检查可疑肺癌的患者,其可能是肺癌早期筛查的重要手段。

祛瘀通络解毒方联合中药外治方对糖尿病足溃疡面局部组织活化素Ⅰ型受体和人矮小同源盒基因2表达的影响

目的观察祛瘀通络解毒方联合中药外治方治疗糖尿病足溃疡的疗效以及对活化素Ⅰ型受体(Acvr1)和人矮小同源盒基因2(Shox2)表达的影响。方法将116例糖尿病足溃疡患者按照随机数字表法分为2组,对照组58例予中药外治方熏洗治疗,联合组58例在对照组治疗基础上加祛瘀通络解毒方治疗,2组均治疗4周。比较2组治疗前及治疗第7、14天溃疡面组织Acvr1、Shox2表达(免疫组化法),治疗前和治疗第7、14、28天血清Acvr1、Shox2水平(酶联免疫吸附法)及蛋白表达(Western blot法)、中医证候积分、疼痛视觉模拟评分(VAS)、溃疡面面积变化,统计比较2组肉芽组织形成时间、创面愈合时间、住院时间及临床疗效,采用Pearson检验分析血清Acvr1、Shox2水平与其他临床指标相关性。结果联合组总有效率96.55%(56/58),对照组总有效率77.59%(45/58),联合组临床疗效优于对照组(P<0.05)。随着治疗时间的延长,2组溃疡面组织Acvr1、Shox2表达及血清Acvr1、Shox 2水平和蛋白表达逐渐升高,中医证候积分及疼痛VAS逐渐降低,溃疡面面积逐渐缩小,各时间点两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后各时间点联合组与对照组同期比较差异也均有统计学意义(P<0.05)。联合组肉芽组织形成时间、创面愈合时间及住院时间均少于对照组(P<0.05)。血清Acvr1及Shox2水平与糖尿病病程、糖尿病足病程、中医证候积分、疼痛VAS、溃疡面面积、肉芽组织形成时间、溃疡创面愈合时间及住院时间呈显著负相关(P<0.05),Acvr1与Shox2呈显著正相关(P<0.05)。结论祛瘀通络解毒方联合中药外治方可有效提高糖尿病足溃疡的临床疗效,缩短创面愈合时间,提高Acvr1和Shox2表达,且二者有望成为糖尿病足新的治疗靶点。

同源异型盒基因甲基化与实体肿瘤的研究进展

自20世纪40年代Conrad首次描述表观遗传学以来，在正常生物学和疾病生物学中有表观遗传学知识逐渐被揭示。表观遗传的变化是有规律，不可逆的自然现象，受年龄、环境、生活方式和疾病的影响。表观遗传过程的分子基础比较复杂，

二倍体与同源四倍体茅苍术基因组DNA甲基化水平与模式的MSAP分析

为探究二倍体和同源四倍体茅苍术表观遗传差异,以不同倍性的茅苍术为试验材料,应用MSAP技术研究其基因组DNA甲基化水平及模式变化。本试验选用20对选扩引物,在茅苍术二倍体和同源四倍体中检测到的基因位点数分别为520和527,其相应的扩增总甲基化率为56.92%和55.03%,四倍体基因组DNA半甲基化率高于二倍体,而全甲基化率低于二倍体;四倍体与二倍体相比,DNA甲基化模式发生调整的基因位点占总检测位点的52.53%。本研究为深入揭示四倍体茅苍术的表观遗传调控机制奠定了基础。

微小RNA-375/矮小同源盒基因轴参与调控肺癌细胞吉西他滨敏感性的机制研究

目的探讨微小RNA-375(miR-375)靶向矮小同源盒基因(SHOX2)对肺癌细胞吉西他滨敏感性的影响。方法体外培养非小细胞肺腺癌细胞株A549细胞,作为空白对照组;转染miR-375模拟物质粒或空质粒至A549细胞,作为miR-375过表达组和阴性对照组。采用噻唑蓝法和Annexin V/PI双染法检测吉西他滨对各组细胞增殖和凋亡的影响。采用双荧光素酶报告基因方法验证miR-375与SHOX2的靶向关系。应用逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中miR-375和SHOX2基因的表达量;采用蛋白质印迹法检测各组细胞中SHOX2蛋白的表达量。采用荧光免疫检测法检测各组细胞β-连环蛋白表达情况。结果miR-375过表达组miR-375表达量明显高于空白对照组和阴性对照组[(1.45±0.11)比(1.00±0.05)、(0.97±0.11)](均P<0.05);且经不同浓度吉西他滨作用48 h后,miR-375过表达组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);吉西他滨对miR-375过表达组A549细胞的半数抑制浓度为4.405μmol/L。4.405μmol/L吉西他滨作用24 h后,miR-375过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组[(28±4)%比(12±4)%、(14±4)%](P<0.05)。经双荧光素酶报告基因分析,SHOX2是miR-375的下游靶基因。miR-375过表达组SHOX2 m RNA和蛋白表达量均明显低于空白对照组和阴性对照组[(0.39±0.08)比(1.00±0.07)、(1.02±0.09);(0.42±0.07)比(0.97±0.10)、(1.05±0.12)](均P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,miR-375过表达组细胞中β-连环蛋白表达量和进入细胞核的量明显减少。结论上调miR-375可抑制SHOX2激活Wnt/β-连环蛋白信号通路,从而增加A549细胞株对吉西他滨的敏感性。

肺泡灌洗液基因甲基化联合癌胚抗原、气道径向超声对肺癌的诊断价值

目的探讨肺泡灌洗液(BALF)中矮小同源盒基因2(SHOX2)和RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化联合癌胚抗原(CEA)、气道径向超声在肺癌诊断的价值。方法选取2019年7月至2020年6月于佛山市第二人民医院就诊经胸部CT提示肺结节或占位患者114例,根据病理诊断确认肺癌62例(肺癌组),肺良性病变52例(对照组)。在气道径向超声定位后收集患者BALF样本、外周静脉血,对BALF样本进行细胞学检查及实时荧光PCR法检测SHOX2和RASSF1A基因甲基化阳性率,对外周静脉血血清CEA水平进行检测。结果肺癌组SHOX2、RASSF1A基因任一甲基化阳性40例(64.52%),阴性22例,对照组任一甲基化阳性2例(3.85%),阴性50例,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤直径与肺泡灌洗液甲基化阳性率呈负相关(P<0.05);23例肺癌患者肺泡灌洗液CEA水平异常20例(86.96%),CEA联合任一甲基化阳性22例(95.65%);17例对照组CEA小于5 ng/ml的12例(70.59%),CEA联合基因甲基化双阴性的11例(64.71%);49例肺癌患者气道径向超声可探及明显回音图像,其中任一基因甲基化阳性34例(71.4%),无探及回音图像有13例,其中基因甲基化阴性8例(38.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌组患者经气道径向超声定位后获取的肺泡灌洗液甲基化阳性率更高。肺泡灌洗液SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合癌胚抗原、气道径向超声有助于肺癌的早期诊断。

苯丁酸钠和二甲基甲酰胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及同源盒基因(HOX)A5表达影响的比较

目的:观察苯丁酸钠(PB)和二甲基甲酰胺(DMF)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及同源盒基因(HOX)A5表达的影响。方法:应用MTT比色法,以梯度浓度的PB或DMF作用于MCF-7细胞,分别于24、48、72h对细胞增殖进行检测。HOXA5基因表达水平用基因组与β肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。结果:0.391～3.125mmol/L PB和0.5～8.0mmol/L DMF作用MCF-7细胞24～72h,随着PB浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率明显增加。随着DMF浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率也较明显地增加。RT-PCR法检测未处理乳腺癌MCF-7细胞中HOXA5基因表达0.460±0.065。应用0.781mmol/L和1.563mmol/L PB处理后,HOXA5基因表达水平分别为0.801±0.122、0.903±0.096,HOXA5基因表达明显上调,与用药前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。应用0.5mmol/L和1.0mmol/L DMF处理后,HOXA5基因表达水平分别为0.474±0.057、0.484±0.061,HOXA5基因表达无明显变化,与用药前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PB和DMF可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,PB对HOXA5基因mRNA水平的表达有明显的上调作用,DMF对HOXA5基因表达无显著影响。

家兔矮小同源盒基因(Shox2)的克隆和表达分析

为了研究新西兰白兔矮小同源盒基因(Shox2)序列,预测其结构和功能,以及研究Shox2基因的时空表达特征,本研究克隆了新西兰白兔Shox2基因全长CDS区,分析其编码蛋白的同源性、亲疏水性、二级和三级结构特点、系统进化树等生物信息学特征,并用Western blot法验证融合蛋白TrxA-Shox2。分别在胚胎中期(E20.5d)、胚胎后期(E28.5d)、幼龄期(出生后10d)、成年期(A)4个时间点采集3只动物的肾、大血管、真皮、心、大脑、肝、肺、脾、肌肉、胆囊共10种组织,采用实时荧光定量PCR技术研究Shox2基因的时空表达图谱。结果,成功克隆了新西兰白兔Shox2基因(登录号:KP726285)。Shox2基因CDS区全长666bp,翻译221个氨基酸。生物信息学分析显示,Shox2为碱性、不稳定蛋白,Shox2蛋白氨基酸二级结构中α-螺旋区域占61.99%,无规则卷曲区域占33.48%,延伸链占4.52%。Western blot验证了融合蛋白TrxA-Shox2的表达。家兔Shox2蛋白氨基酸序列与眼镜猴、猩猩、褐家鼠、人的氨基酸序列同源性较高,说明Shox2蛋白在进化中较保守。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,在E20.5d的家兔胚胎中,Shox2mRNA在肾、肌肉和胆囊的表达量高,在E28.5d时表达量较高的是脾、心,幼龄期时表达量较高的是真皮、肝,成年期时表达量较高的是真皮、脾。本研究成功克隆了新西兰白兔Shox2基因,预测了其结构和功能。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,不同的组织和不同时间特征的表达量变化可能与Shox2功能高度相关,并受到严格的调控。

胸水细胞学标本SHOX2和RASSF1A基因甲基化预测肺腺癌的临床价值

目的探析胸水细胞学标本矮小同源盒基因2(SHOX2)和RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化对预测肺腺癌的临床价值。方法收集80例患者的胸水标本,其中40例为可疑肺腺癌(观察组),40例为良性病变(对照组)。用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定胸水细胞学标本SHOX2、RASSF1A基因甲基化情况。比较两组的SHOX2、RASSF1A检测值差异,Logistic回归分析法探析SHOX2、RASSF1A基因与肺腺癌病情的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析SHOX2、RASSF1A在肺腺癌病情诊断预测中的应用价值。结果观察组的SHOX2、RASSF1A基因甲基化程度明显高于对照组;Logistic回归分析表明,SHOX2、RASSF1A基因甲基化高表达、强表达是肺腺癌的危险因素。ROC曲线分析得,SHOX2、RASSF1A基因甲基化联合预测肺腺癌病情结果的AUC(0.821,95%CI:0.727~0.915)最大,敏感度、特异性分别为87.5%、97.5%,并且SHOX2、RASSF1A甲基化检测结果联合液基细胞学诊断结果,有助于补充细胞学诊断上的漏诊。结论SHOX2、RASSF1A基因甲基化在肺腺癌中呈高表达,肺腺癌受检者的胸水细胞学标本SHOX2、RASSF1A基因甲基化水平高,可侧面说明患者病情恶化风险较高,可为肺腺癌的临床诊断及病情预测提供重要参考,同时也可作为细胞学病理诊断的补充,并且SHOX2、RASSF1A基因甲基化联合检测可作为可疑肺腺癌无创伤性辅助检查指标。

miR-375靶向调控人矮小同源盒基因2基因在人食管鳞状细胞癌中的表达

目的 miR-375在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)中低表达,但其调控的下游靶基因仍不明确。文中初步探讨miR-375在调控人食管鳞癌细胞中人矮小同源盒基因2(short stature homobox 2,SHOX2)的表达中的作用。方法运用生物信息学预测软件Target Scan、miRanda、Pic Tar、miRTarget2和PITA预测miR-375在SHOX2基因可能的作用位点。构建野生型SHOX2 3'UTR报告基因载体(p SHOX2-375-WT)及突变型SHOX2 3'UTR报告基因载体(p SHOX2-375-mut),测序鉴定。分7组转染:pmiR组、p SHOX2-375-WT组、p SHOX2-375-WT+miR-375组、p SHOX2-375-WT+miR-NC组、p SHOX2-375-mut组、p SHOX2-375-mut+miR-375组、p SHOX2-375-mut+miR-NC组,分别检测荧光素酶活性。转染miR-375的mimics于食管鳞癌细胞中,SHOX2 mRNA及蛋白表达分析。另检测食管鳞癌组织术后标本miR-375及SHOX2表达。结果 Target Scan、miRanda、Pic Tar、Mir Target2和PITA软件预测结果显示miR-375在SHOX2 3'UTR 1156-1170bp区域有且仅有1个保守作用位点。p SHOX2-375-WT+miR-375组荧光素酶活性(0.261±0.036)显著低于[pmiR(1.818±0.061)、p SHOX2-375-WT组(1.820±0.086)、p SHOX2-375-WT+miR-NC组(1.851±0.094)、p SHOX2-375-mut组(1.861±0.059)、p SHOX2-375-mut+miR-375组(1.896±0.048)、p SHOX2-375-mut+miR-NC组(1.760±0.062)],差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-375后EC9706细胞SHOX2 mRNA及蛋白较对照组相比表达受到抑制。食管鳞癌组织中的miR-375较癌旁组织表达降低,而SHOX2表达较癌旁组织表达增强。结论 miR-375在食管鳞癌细胞EC9706中靶向调控SHOX2基因的表达。

同源异型盒基因Msx-1在小鼠牙齿发育生物矿化过程中的表达研究

目的 研究同源异型盒基因Msx - 1在牙齿硬组织形成过程中的表达和意义。方法 采用原位杂交技术检测Msx - 1mRNA在出生后 1天、7天和 14天昆明小鼠磨牙和切牙牙釉质和牙本质形成过程中的表达。结果 磨牙中 ,Msx - 1mRNA主要表达于生后 1天到 7天正在极化的前成釉细胞和前成牙本质细胞、处于分泌期的成釉细胞和成牙本质细胞 ,7天时信号最强 ;随后其表达随细胞分化的成熟和牙釉质、牙本质基质形成的进展而逐渐下降。切牙中 ,牙冠部细胞中的表达与磨牙基本相似 ;但根尖部分唇侧未分化的颈环上皮细胞和外胚间充质细胞始终呈Msx - 1阳性表达。结论 同源异型盒基因Msx - 1转录主要发生于硬组织形成早期阶段 ,即成釉细胞和成牙本质细胞的极化和分泌阶段 ,提示Msx - 1可能参与了小鼠牙胚硬组织形成过程中细胞分化和生物矿化。

配对盒家族基因1甲基化与人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在子宫颈病变患者诊断中的应用

目的:分析配对盒家族基因1(PAX1)甲基化检测与人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测在子宫颈癌及癌前病变患者诊断中的临床应用价值。方法:回顾性分析2018年3月至2019年9月在郑州大学第一附属医院就诊的子宫颈病变406例患者。根据病理检查结果分为4组:子宫颈炎组(145例)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组(76例)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(119例)和子宫颈癌组(66例)。所有患者均行PAX1甲基化检测,其中同时行HPV E6/E7mRNA检测的患者有159例,比较两种检测方法在诊断子宫颈癌及癌前病变(高级别子宫颈上皮内瘤变)患者中的诊断效能。结果:子宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、子宫颈癌组的PAX1甲基化率分别为10.3%、13.2%、39.5%、83.3%,HPV E6/E7mRNA阳性率分别为50.0%、68.6%、84.0%、87.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。两种方法单独用于诊断子宫颈癌及癌前病变时,HPV E6/E7mRNA的敏感度为86.36%,特异度为43.01%;PAX1甲基化的敏感度为55.14%,特异度为88.69%;两者联合检测时敏感度为80.30%,特异度为88.18%。结论:PAX1甲基化在诊断子宫颈癌及癌前病变患者中具有较高的特异度,且在联合HPV E6/E7mRNA检测时具有更高的临床应用价值。

焦磷酸定量化检测配对盒家族基因1甲基化在宫颈癌诊断中的应用

目的检测配对盒家族基因1(PAX1基因)在不同程度宫颈病变组织中的甲基化表达水平,评估其作为宫颈上皮细胞癌变的分子标志物的诊断价值。方法 2011年1月—2013年4月在上海市闵行区中心医院妇科宫颈专科门诊就诊的121例患者的宫颈组织,以组织病理学诊断作为金标准,分为正常宫颈组(28例)、低级别病变组[病理诊断为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级,32例]、高级别病变组(病理诊断为CINⅡ或Ⅲ级,34例)和宫颈鳞癌组(27例)。采用焦磷酸测序法检测抑癌基因不同位置的甲基化情况。采用受试者ROC曲线确定宫颈组织PAX1基因甲基化表达水平对宫颈病变的诊断阈值。结果正常宫颈组、低级别病变组、高级别病变组和宫颈鳞癌组间年龄(F=4.31,P<0.01)和高危人乳头瘤毒阳性构成比(χ2=79.43,P<0.01)的差异有统计学意义。正常宫颈组宫颈组织PAX1基因甲基化定量水平为(4.92±4.45)%,低级别病变组为(5.55±5.05)%,高级别病变组为(10.21±14.39)%,宫颈鳞癌组为(41.97±23.02)%,差异有统计学意义(F=46.43,P<0.001);两两比较发现,除正常宫颈组与低级别病变组之间差异无统计学意义外(P>0.05),其他各组之间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。宫颈组织PAX1基因甲基化定量检测诊断宫颈鳞癌的ROC曲线AUC为0.883,敏感度为81%,特异度为93%,最佳界值为20.55%。宫颈组织PAX1基因甲基化定量检测诊断宫颈鳞癌和高级别病变的AUC为0.680,敏感度为57%,特异度为90%,最佳界值为8.97%。结论焦磷酸测序法PAX1基因甲基化水平定量检测较以往的定性分析有较大优势,对于宫颈癌临床诊断具有潜在应用价值。

BSP技术在萝卜-芥蓝异源四倍体及其亲本BZIP17同源基因甲基化检测中的应用

为探讨异源多倍体基因组中直系同源基因的表达调控机制，对重亚硫酸盐测序PCR（BSP）技术进行了改进优化。结果表明，改进的BSP技术检测到萝卜-芥蓝四倍体及其亲本BZIPl7同源基因启动子的甲基化水平为3．8％～18．8％，采用实时荧光定量PCR检测BZIPl7基因的相对表达量，且BZIPl7同源基因的表达调控与启动子甲基化等作用相关。因此，改进的BSP技术可应用到更多同源基因的甲基化检测中，以分析异源多倍体中同源基因的分子进化方式。

高危型人乳头瘤病毒感染患者宫颈脱落细胞JAM3/PAX1高甲基化诊断宫颈高级别病变

目的:传统的宫颈癌筛查手段——高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hrHPV)和宫颈脱落细胞学检测存在局限性。本研究通过检测宫颈脱落细胞中连接黏附分子3(junctional adhesion molecule 3,JAM3)/配对盒基因1(paired box gene 1,PAX1)高甲基化水平,并将其与液基薄层细胞学(liquid based cytology,LBC)进行比较,评价JAM3/PAX1甲基化对于宫颈高级别病变的诊断能力,以探索新的宫颈高级别病变的诊断模式,实现宫颈高级别病变“精准筛查”的目的。方法:回顾性收集2021年6月至2022年6月在中南大学湘雅三医院妇科阴道镜门诊接受检查的患者共136例,包括宫颈非高级别病变122例,高级别病变14例。研究的变量包括:基本临床信息(年龄、体重指数、是否绝经)、LBC、hrHPV、宫颈组织病理、阴道微生态结果、阴道镜结果(宫颈转化区类型)、JAM3(ΔCtJ)和PAX1(ΔCtP)基因甲基化的ΔCt值。首先通过logistic回归分析筛选影响宫颈高级别病变的影响因素,并进行相关性分析,然后用差异有统计学意义的变量构建条件推断树模型。结果:Logistic回归分析提示高级别宫颈病变组与非高级别宫颈病变组的PAX1与JAM3基因甲基化ΔCt值以及LBC检测结果差异均有统计学意义(均P<0.05)。相关性分析发现,宫颈病理结果与ΔCtP(r=-0.360,P<0.001)、ΔCtJ(r=-0.448,P<0.001)、LBC(r=-0.305,P<0.001)、菌群多样性(r=-0.183,P=0.037)呈负相关。条件推断树显示:当ΔCtJ>10.13时,全部为宫颈非高级别病变的患者;当ΔCtP>6.22时,非高级别病变的患者有117例,占97.5%,高级别病变者仅3例,占2.5%。ΔCtJ>8.61且LBC为不明确的非鳞状上皮细胞(atypical squamous cell of undetermined significance,ASC-US)或未见上皮内病变细胞时,105例(99.1%)为宫颈非高级别病变的患者,仅1例(0.9%)检出为高级别病变;当LBC结果为高级别病变时,仅9例患者检出高级别病变,3例检出非高级别病变;而当LBC提示低级别病变、ASC-US、未见上皮内病变细胞,且ΔCtP>6.22时,有117例(97.5%)的患者检出非高级别病变。结论:在人乳头瘤病毒感染妇女中,JAM3/PAX1双基因甲基化检测可独立应用于宫颈高级别病变/非高级别病变的分层诊断,且不依赖于宫颈脱落细胞学检测结果;亦可与LBC联合使用以弥补LBC敏感度低的缺点。此外,未来将甲基化试剂盒应用于大规模宫颈癌筛查,有利于发现更多宫颈高级别病变患者,并达到早筛、早治宫颈病变/癌的目的。