矮牵牛梅林愈伤组织诱导与植株再生

为建立矮牵牛梅林的高频再生体系,以叶器官为材料,研究不同生长调节剂配比、叶片不同部位和不同形态愈伤对不定芽再生的影响。结果表明:6BA和NAA及其配比极显著影响矮牵牛梅林不定芽再生率,其中NAA 0.3 mg·L^(-1)极显著促进了矮牵牛梅林不定芽的再生,6BA和NAA浓度超过1.0 mg·L^(-1)和0.5 mg·L^(-1)时,刺激玻璃化的发生。叶片不同部位极显著影响不定芽的再生,芽分化率由高到低依次是叶柄>带主叶脉>不带主叶脉,愈伤组织形态决定芽分化能力和质量,叶柄直接分化丛芽是梅林再生的优良外植体,分化率达98.3%。芽诱导最佳培养基为MS+6BA 1.0 mg·L^(-1)+NAA 0.3 mg·L^(-1),其产生不定芽无玻璃化且分化率高,为68.3%。叶片愈伤组织诱导最佳培养基为MS+6BA 1.0 mg·L^(-1)+NAA 0.3 mg·L^(-1),其不定芽分化率为68.3%且未产生玻璃化苗;最佳生根培养基为1/2 MS培养基,生根率达100.0%;继代增殖培养最佳培养基为MS+6BA 0.5 mg·L^(-1)+NAA 0.1 mg·L^(-1),丛生芽多且大小均匀。

矮牵牛‘梅林’遗传转化体系的建立

在矮牵牛‘梅林’再生体系基础上,建立根癌农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系,以获得转PSARK-IPT基因的矮牵牛植株。结果表明,转化效率最高的预培养时间为2d,农杆菌侵染浓度为OD600=0.5,侵染时间为3min;共培养时间为36h;适宜的抑菌抗生素头孢霉素浓度为500mg·L^(-1);潮霉素作为遗传转化中的筛选标记,选择2mg·L^(-1)为叶片分化筛选压,4mg·L^(-1)的Hey为最佳生根筛选压。对获得的15株潮霉素抗性植株进行PCR及RT-PCR检测,证明7株为阳性,证实目的基因已整合到这7株矮牵牛基因组中。