石仙桃与细叶石仙桃叶绿体基因组解析及其系统发育

石仙桃和细叶石仙桃均为珍稀濒危的附生兰,两者叶绿体基因组特征及其系统发育报道较少,本研究旨在揭示石仙桃和细叶石仙桃叶绿体基因组特征及其系统发育。2022年5月取驯化栽培的石仙桃和细叶石仙桃幼嫩叶片,基于Illumina测序平台分别获得石仙桃和细叶石仙桃叶绿体序列,用GetOrganelle组装、CPGAVAS2注释,利用生物信息学方法开展重复序列、密码子偏好性、四分体边界等叶绿体特征分析,并从NCBI上下载相关的序列开展基因组比较与系统发育分析。石仙桃叶绿体基因组大小为159122 bp(GC含量为37.41%),细叶石仙桃叶绿体基因组大小为158798 bp(GC含量为37.47%),两者均包括大单拷贝区(LSC)、小单拷贝区(SSC)和反向重复序列(IRa/IRb)。石仙桃与细叶石仙桃均注释了113个基因,其中编码蛋白质的基因79个,石仙桃中编码79个蛋白质基因使用22968个密码子,编码亮氨酸的UUA相对同义密码子使用频次(RSCU)达到1.90;细叶石仙桃中编码79个蛋白质的基因使用22923个密码子,编码亮氨酸UUA的RSCU达到1.91。石仙桃叶绿体基因组中共有44个简单序列重复(SSR)、47个散在重复、26个串联重复;细叶石仙桃有32个SSR、25个散在重复、30个串联重复。石仙桃属6个物种的四分体边界及共线性无大片段变化,但存在核苷酸多态性,trn K-UUU、trn Q-UUG、rpl16等基因可作为物种的分子标记候选基因。系统分析明确了石仙桃和细叶石仙桃等石仙桃属物种与蜂腰兰和流苏贝母亲缘关系较近,并同处于附生兰的分支中,叶绿体基因组大片段倒置等可能是兰科适应生活习性改变的原因之一。本研究明确了石仙桃和细叶石仙桃叶绿体基因组特征,探讨了其系统发育及兰科生活习性与叶绿体基因组之间的关系,为进一步分类和分子标记开发等相关研究奠定了基础。

基于茚三酮比色法测定闽产细叶石仙桃总氨基酸含量

目的:优化溶剂回流提取-茚三酮比色法测定福建省不同产地细叶石仙桃中总氨基酸含量。方法:以甘氨酸为对照品,采用茚三酮比色法测定细叶石仙桃中总氨基酸含量;考察不同影响因素对茚三酮法测定细叶石仙桃总氨基酸含量的影响,确定最佳检测条件;在单因素实验基础上,采用L9(34)正交试验考察溶剂用量、溶剂浓度、提取时间及提取次数对细叶石仙桃中总氨基酸提取工艺的影响,并以其为考察指标,优化筛选最佳提取工艺。结果:最佳检测条件为测定波长568 nm、2%茚三酮溶液用量3.0 mL、缓冲液pH值6、缓冲液用量2.0 mL、水浴加热温度80℃、水浴加热时间40 min;最佳提取条件为乙醇浓度85%,乙醇用量35.0 mL,提取时间60 min,提取2次。在所收集到的福建省4个产地的细叶石仙桃中总氨基酸含量由高到低依次为永泰县、上杭县、屏南县、永春县。结论:优选的提取工艺稳定可行,建立含量测定方法简便、准确、重复性好,为细叶石仙桃的质量评价和进一步开发利用提供依据。样品中以永泰县所产的细叶石仙桃质量最佳。

石仙桃中4种转录因子鉴定及其组织表达的研究

【目的】石仙桃Pholidota chinensis Lindl为珍稀濒危的附生兰,附生较地生而言进化出了许多特殊的形态结构和生理生化特性,而转录因子对调控植物的生长发育具有作用,旨在探讨和发掘石仙桃中调控其生长发育的转录因子。【方法】利用PacBio和Illumina测序技术获得石仙桃的全长转录组数据以及在根、根状茎、假鳞茎和叶片中的基因表达量,通过进一步生信分析,探讨石仙桃4种转录因子家族成员、理化特性及其组织表达特异性,并用氯化钠(NaCl)和茉莉酸甲酯(MeJA)诱导逆境胁迫,用RT-qPCR分析了C2H2家族和bHLH家族的表达量。【结果】石仙桃中鉴定的4种转录因子及其家族成员转录本为:C2H2家族21个、bHLH家族27个、WRKY家族30个、bZIP家族19个,这4个家族及其成员主要为亲水的不稳定性蛋白,亚细胞定位主要位于细胞核内,bHLH家族的部分成员位于细胞质、叶绿体等细胞器中,各基因家族均具有典型的保守结构域特征,在石仙桃的根、根状茎、假鳞茎和叶片呈现出明显的组织特异性。21个C2H2家族和27个bHLH家族中所有基因表达均受NaCl和MeJA影响,但家族成员受到促进或抑制表达及其表达量存在差异。【结论】鉴定了石仙桃中4个转录因子家族成员的数量,各家族成员主要是位于细胞核内的亲水不稳定性蛋白,并具有保守结构域特征和组织表达特异性。

闽南青草药石仙桃名实及药用部位调查研究

目的:对石仙桃的名实以及药用部位调查、梳理,有利于正确认识石仙桃,提高石仙桃用药的合理性和安全性。方法:通过查阅石仙桃历史文献,厘清石仙桃名实与药用部位的历史沿革,再结合实地走访与调研等方式,对石仙桃的正名与异名、药用部位等习用情况进行调查及研究。结果:石仙桃在民间多以经验性习惯用法为主。其别名众多,药用部位也与中药材标准有所差异。石橄榄是石仙桃最常见到的异名之一,与石仙桃为同一种植物,民间市场上多以石橄榄为主要流通名称,而在中药材标准上以石仙桃为正名。石仙桃用药部位可为全草或假鳞茎,但假鳞茎是其主要药效部位。结论:石仙桃药用历史悠久,药效广泛,多应用于民间验方之中,对药物名称与用药部位的系统分析与研究,可促进石仙桃临床的合理用药以及开发利用,为石仙桃的基础研究以及传承推广提供理论依据。

闽南青草药石仙桃的功效考证及应用现状

目的石仙桃是一味历史悠久、疗效广泛的闽南民间青草药,其地方习用和功效研究还呈现大量的空白,通过对闽南青草药石仙桃的功效考证,并整理、探究石仙桃的应用概况,使石仙桃能够得到正确的认识和使用,为其后续的基础研究和临床应用提供科学论证和文献参考。方法通过实地调查、查阅历代本草古籍及现代文献的方法,对石仙桃的功效、临床应用、食疗用法等进行分析与研究。结果经考证石仙桃性味甘、淡、凉,具有养阴、清肺、利湿、消瘀、止痛等功效,多用于眩晕、头痛、咳嗽、吐血等疾病。该药在临床上广泛应用,在民间常被制成食疗保健的药膳,是一味极具特色的闽南青草药。结论石仙桃的应用规律与闽南特殊的环境息息相通,独特的药用价值以及多样性的习用方法使石仙桃具有深入研究的价值,并可为闽南青草药的扩大研究及传承发展提供参考依据。

通过改良RAPD技术获得黑毛石斛、蜂腰石斛和石仙桃的3条SCAR新标记

目的寻找快速区分黑毛石斛、蜂腰石斛和石仙桃的序列特征扩增区域(sequence characterized amplified regions,SCAR)新标记。方法在改良的随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)的基础上对10个物种进行基因组DNA随机扩增、分子克隆和测序,分别设计了可鉴别3个物种的SCAR标记。结果成功筛选出3个SCAR标记,其相应的特异性标记分别为N2-12、A2-17和A6-33;其中SCAR标记N2-12在黑毛种属中扩增出约750 bp的特异性条带,SCAR标记A2-17在蜂腰石斛中扩增出约750 bp的特异性条带,SCAR标记A6-33在石仙桃种属中扩增出约600 bp的特异性条带。结论N2-12、A2-17和A6-33这3对特异性SCAR新标记能快速、准确的区分出黑毛石斛、蜂腰石斛和石仙桃这3个物种,为今后进行该中药道地药材样品的鉴定提供了实验依据。

石仙桃多糖对铜绿假单胞菌致大鼠肺部感染的作用机制研究

目的探讨石仙桃多糖(PCP)抑制铜绿假单胞菌(PA)致肺部感染模型大鼠作用并初步探讨其可能的作用机制。方法制作PA大鼠肺部感染模型,雄性SD大鼠48只,用水合氯醛腹腔注射麻醉,行气管切开术,将PA注射到气管内,将大鼠随机分为PCP高、中、低剂量组和模型组,每组12只;另用未经处理的12只大鼠作为空白对照组。PCP低、中、高剂量组大鼠每天灌胃PCP 15、20、30 mg/kg,共7 d,模型组和空白对照组大鼠每天按5 ml/kg体重灌胃生理盐水。末次用药后次日用水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,采集肺组织及肺泡灌洗液,测定肺组织湿/干比,计数各组支气管肺泡灌洗液(BALF)的白细胞总数,BALF离心取上清液检测肝素结合蛋白、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)细胞因子表达水平,用免疫印迹法(WB)检测BALF中NF-κB等蛋白磷酸化表达水平。结果与空白对照组比较,模型组肺组织湿/干比显著增加(P<0.05),肺泡灌洗液中白细胞数量明显增加(P<0.05),肝素结合蛋白、白细胞介素-6、降钙素原等表达明显上升(P<0.05),并可诱导模型组肺组织NF-κB p65和p-1κBα磷酸化(P<0.05);用PCP治疗PA致肺部感染SD大鼠模型可明显抑制NF-κB p65和p-1κBα磷酸化(P<0.05),且低、中、高剂量组作用指标呈梯度改变(P<0.05)。结论PCP对PA引起的大鼠肺部感染模型炎症反应保护作用机制可能通过下调肝素结合蛋白等细胞因子的表达和抑制NF-κB的活化及炎症因子的产生。

石仙桃黄酮-多糖抑制鲜切苹果褐变的研究

采用PEG6000/(NH_(4))_(2)SO_(4)双水相体系提取石仙桃中的黄酮和多糖,通过DPPH和ABTS自由基清除实验和对鲜切苹果褐变的抑制作用研究石仙桃黄酮和多糖的抗氧化活性。结果表明,石仙桃中黄酮和多糖的抗氧化机理不同,其中黄酮对清除自由基和抑制苹果褐变均有较好的效果,而多糖只表现出较好的抑制鲜切苹果褐变作用。当石仙桃黄酮浓度为100μg·m L^(-1)时,其对DPPH和ABTS自由基的清除率分别达到84.9%和87.0%;石仙桃黄酮和多糖及其复配液对抑制苹果多酚氧化酶活性有一定的积极作用。本研究为石仙桃的高值化利用提供了新的方法思路,并为功能性食品的开发与果蔬保鲜提供了新的理论依据。

Box-Behnken响应面优化超声法提取节茎石仙桃多糖及其抗氧化活性研究

优化超声辅助提取节茎石仙桃多糖的工艺参数并探究其抗氧化活性。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken设计试验方法,探讨料液比、浸取温度、超声时间3个因素及其交互作用对节茎石仙桃多糖提取率的影响,构建节茎石仙桃多糖提取率与提取过程中各因素的二次多元回归模型。以抗坏血酸为对照,考察节茎石仙桃多糖对·OH、O^(2-)、ABTS·+和DPPH·的清除活性。结果表明,超声辅助水提醇沉节茎石仙桃多糖的最佳工艺条件为:料液比1∶30(g/mL),浸取温度78℃(1 h),超声时间38 min(80℃),在此提取条件下节茎石仙桃多糖的提取率为11.31%,与预测值仅相差0.11%,验证了该模型的有效性。节茎石仙桃多糖对·OH、O^(2-)、ABTS·^(+)和DPPH·4种氧化因子的综合清除活性较强,平均清除率达到(56.00±0.26)%以上,且多糖浓度与清除活性呈正相关。说明该工艺对石仙桃属植物多糖纯品的制备和开发利用均具有良好的应用价值。

石仙桃中总黄酮的提取及含量测定

采用单因素试验及正交试验设计,利用乙醇溶剂浸提结合微波辅助提取法对石仙桃(Phoidotaof chinensis Lind L.)总黄酮的提取工艺进行优化,并用分光光度计比色法测定提取的总黄酮含量。结果表明,石仙桃总黄酮提取的最佳工艺条件为微波功率300 W,提取时间30 min,温度60℃,料液比(m∶V,g∶m L)1∶20,乙醇体积分数80%。按照最佳工艺条件进行提取,石仙桃总黄酮提取量达31.41 mg/g。

2种石斛属植物和小叶石仙桃多糖的组织化学定位

为对不同年龄的铁皮石斛(Dendrobium candidum)、铜皮石斛(D.moniliforme)及石斛伪品-小叶石仙桃(Pholidota chinensis)不同器官中的多糖进行组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期,根据多糖的理化性质,材料经冰冻切片,用改良的高碘酸-席夫试剂(PAS)对多糖进行组织化学定位;结果表明,多糖类物质主要存在茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中。其总多糖含量有如下顺序:二年生的铁皮石斛茎>铜皮石斛茎≈>小叶石仙桃茎,铁皮石斛根≈铜皮石斛根>小叶石仙桃根,铁皮石斛叶≈小叶石仙桃叶>铜皮石斛叶。另外,在不同的器官中,铜皮石斛的多糖含量呈现“茎≈根>叶”和小叶石仙桃的多糖含量呈现“叶>茎≈>根”的规律,而二年生的铁皮石斛则为“茎>叶>根”。这表明在种间及同种植物的不同器官、不同年龄,其多糖的含量存在差异。而3种兰科植物中,以二年生铁皮石斛茎的多糖含量最高,表明其药用价值也最高。

石仙桃多糖的提取工艺及纯化研究

采用单因素试验和L9(34)正交试验设计,研究了料液比、提取时间、提取温度对石仙桃多糖提取率的影响,筛选出了最佳提取工艺。采用盐析法除蛋白、乙醇反复沉淀的方法纯化石仙桃多糖。结果表明,影响多糖提取率的主次因素为提取时间、料液比及提取温度;石仙桃多糖最佳提取工艺条件为:提取温度80℃,浸提时间5h,料液比1:40。在此工艺条件下,石仙桃多糖的得率为2.25%。纯化后的多糖经纯度鉴定为均多糖。

细叶石仙桃的化学成分

目的:研究细叶石仙桃Pholidota cantonensis化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、Chro- matorex ODS柱色谱法分离化合物,运用波谱学和理化方法鉴定结构。结果:分离得到4个化合物:pholidonone(1),ephemeranthoquinone(2),orchinol(3),batatasinⅢ(4)。结论:4个化合物均为首次从细叶石仙桃中分离得到,化合物1为新化合物。

二种石斛属植物和小叶石仙桃生物碱的组织化学定位

目的对不同年龄的铁皮石斛、铜皮石斛及其石斛伪品———小叶石仙桃的不同器官进行生物碱组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期。方法采用冰冻切片法,根据生物碱的理化性质,用碘化铋钾染色法对3种植物的生物碱进行组织化学定位。结果生物碱主要存在于3种植物茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中;其总生物碱含量顺序为:二生年的铁皮石斛≈铜皮石斛>小叶石仙桃。此外,在3种植物不同的器官中,其总生物碱的含量都呈现“叶>茎≈根”的规律。结论在种间及同种植物的不同年龄或不同器官中,其生物碱的含量存在差异。其中,以二年生铁皮石斛和铜皮石斛茎叶的生物碱含量较高,表明其药用价值也较高。

细叶石仙桃乙酸乙酯部位化学成分研究

目的:研究细叶石仙桃乙酸乙酯部位的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI gel柱色谱及重结晶分离和纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从细叶石仙桃乙酸乙酯部位中分离纯化了10个化合物,分别鉴定为:batatasinⅢ(1)、orchinol(2)、ephmeranthoquinone(3)、densiflorol B(4)、3,5-二甲氧基-4-羟基-苯丙酮(5)、桂皮酸(6)、丁香脂素(7)、二十四亚甲基环阿尔廷醇(8)、麦角甾醇过氧化物(9)、β-谷甾醇(10)。结论:其中,化合物6、9为首次从石仙桃属植物中分离得到,化合物4、5、7为首次从该植物中分离得到。

我国石仙桃属植物的分布和开发利用

通过野外调查和广泛收集前人的研究资料,概述了14种石仙桃属植物的地理分布、研究现状、药用和观赏价值,并提出栽培和保护措施.

云南石仙桃的化学成分及其抑制NO生成的作用

目的 研究云南石仙桃全草的化学成分,并通过测定所得化合物抑制大鼠巨噬细胞中NO的生成量,以确定云南石仙桃中抑制NO生成的活性成分.方法 采用多种柱色谱法进行分离纯化,并根据理化常数和光谱分析进行结构鉴定.利用微板紫外比色法,体外测定各化合物对脂多糖（LPS）和γ-干扰素（IFN-γ）诱导的RAW 264.7大鼠巨噬细胞NO的生成量.结果 分离得到了7个化合物,分别为反式-3,3＇,5-三羟基-2＇-甲氧基二苯乙烯（trans-3,3＇,5-trihy-droxy-2＇-methoxystilbene,Ⅰ）、顺式-3,3＇-二羟基-5-甲氧基二苯乙烯（cis-3,3＇-dihydroxy-5-methoxystilbene,Ⅱ）、反式-3,3＇,5-三羟基二苯乙烯（trans-3,3＇,5-trihydroxystilbene,Ⅲ）、3,3＇-二羟基-5-甲氧基联苄（3,3＇-dihydroxy-5-methoxybibenzyl,batatasin-Ⅲ,Ⅳ）、3,4＇-二羟基-3＇,5-二甲氧基联苄（3,4＇-dih州roxy-3＇,5-dimethoxybibenzyl,gigantol,Ⅴ）、3,3＇,5-三羟基联苄（3,3＇,5-trihydroxybibenzyl,Ⅵ）、2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲（贝母兰宁,2,7-dihydroxy-4-methoxy-9,10-dihydrophenanthrene,coelonin,Ⅶ）.结论 化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ具有较强的抑制大鼠巨噬细胞NO生成的作用.化合物Ⅰ和Ⅱ为新化合物,化合物Ⅲ～Ⅶ为首次从该属植物中分离得到.

3种石斛属植物和细叶石仙桃的红外光谱分析和鉴定

利用傅里叶红外光谱仪和OMINI采样器直接迅速地测定3种石斛属常用原料药植物和常用伪品细叶石仙桃的红外光谱。结果表明,细叶石仙桃与石斛属组3种植物茎叶的红外光谱图存在较大差异,亲缘关系较远,而石斛属组内种间红外光谱图的差异较小。其中,铁皮石斛茎的特征峰为1 254、1 416、1 5453、365 cm-1等,铁皮石斛叶的特征峰为914、1 061 cm-1等。研究表明,铜皮石斛与铁皮石斛具有相似的红外光谱图,它可作为药用石斛品种代用品,而细叶石仙桃则不能作为药用石斛的代用品。

云南石仙桃中酚类成分的研究

目的 分离鉴定云南石仙桃中的酚类成分。方法 95 %乙醇提取 ,硅胶柱色谱分离 ,用UV ,IR ,MS ,1H NMR ,13 C NMR和HMBC等方法确定结构。结果 分得 4个酚类成分 ,分别为eulophiol(Ⅰ ) ,lusianthridin(Ⅱ ) ,densiflorolB(Ⅲ )和batatasin Ⅲ (Ⅳ ) ,以及 4个其他类型的化合物 3,5 二甲氧基 4 羟基苯丙酮 (3,5 dimethoxy 4 hydroxypropiophenone ,V) ;(2 4R) 6 β hydroxy 2 4 ethyl cholest 4 en 3 one(VI) ;5α ,8α epidioxy 2 4 (R) methylcholesta 6 ,2 2 dion 3β ol(Ⅶ )和胡萝卜苷 (daucosterol,Ⅷ )。 结论 以上化合物均为首次从石仙桃属植物中分离得到。

云南石仙桃中一个新的菲类化合物

目的分离鉴定云南石仙桃中的化学成分。方法用体积分数为95%乙醇提取,硅胶柱色谱分离,用IR,UV,MS,1H-NMR,13C-NMR和HMBC等方法确定结构。结果分得5个化合物,分别为n-octacostyl ferulate(Ⅰ),β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅱ),batatasin-Ⅲ(Ⅲ),石仙桃菲(pholidotol,Ⅳ)和胡萝卜苷(daucosterol,Ⅴ)。结论石仙桃菲为一新的菲类化合物,其结构确定为1,6-二羟基-2-甲氧基-8,9-二氢-三氢菲[4,5-环]呋喃(1,6-dihydroxy-2-methoxy-8,9-dihydro-3H-phenanthro-[4,5-bcd]furane)。