便携式近红外光谱仪快速无损鉴别霍山石斛枫斗和河南石斛枫斗

采用便携式近红外光谱仪采集231个霍山石斛枫斗和河南石斛枫斗样品的近红外光谱,采用一阶导数(1st D)、标准正态变量变换(SNV)、均值中心化(MNCN)、多元散射校正(MSC)、矢量归一化(N)等方法及其组合的9种方法预处理原始光谱,应用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)建立快速无损鉴别霍山石斛枫斗和河南石斛枫斗的数据模型,比较不同光谱预处理方法对PLS-DA建立模型的准确率影响,以预测模型的正确率、敏感性、特异性为指标,评价模型的优劣。结果表明:1st D+SNV+MNCN预处理方法的效果最好,模型的准确率最高,在潜在变量是12的情况下,校正集、交互验证集、预测集的准确率都为100%;模型的敏感性、特异性都为100%。

不同石斛枫斗中酚酸类活性成分的比较及杓唇石斛素和石斛酚含量的测定

建立了基于液相色谱-离子阱飞行时间串联质谱(LC-IT-TOF MS/MS)的酚酸类分析方法,对6种共18批次的石斛枫斗药材中的酚类化合物进行了研究,其中18种酚酸类化合物得到初步定性。在共有化合物中选择杓唇石斛素和石斛酚作为质量控制的目标化合物。在此基础上,采用响应面法(RSM)确定了提取溶剂为60%甲醇、提取时间为65min的超声提取杓唇石斛素和石斛酚的最佳条件,建立了石斛枫斗中杓唇石斛素、石斛酚的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法。定量线性优于0.999 8,检出限(LOD)分别为0.18mg/L和0.09mg/L,重复性的相对标准偏差(RSD)小于3%,加标回收率均值分别为97.1%和101.4%。这些结果表明本研究建立的方法可用于石斛枫斗药材中酚酸类化学成分研究及质量控制。

铁皮石斛枫斗加工前后差异成分比较

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)的传统功效为益胃生津、滋阴清热,在降血糖方面具有较好的作用。前期研究发现,与铁皮石斛鲜条相比,枫斗的α-葡萄糖苷酶抑制率更高,且枫斗中化学成分种类丰富。为明确铁皮石斛枫斗与鲜条的差异性成分,阐明铁皮石斛加工成枫斗的科学内涵,本研究利用超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱仪(UPLC-QTOF-MS)在正离子模式下采集二者的代谢物信息,通过主成分分析、偏最小二乘判别分析等算法挖掘差异性化合物,并利用质谱碎片、数据库比对等方式鉴定差异性成分,最后采用聚类分析方法研究差异性成分在铁皮石斛枫斗和鲜条中的含量变化规律。经过筛选和鉴定共得到16种差异性化合物,其中柚皮素、4,4′-二羟基-3,5-二甲基联苄、诺比林A、石斛酚等12种黄酮、联苄类化合物在枫斗中含量较高,而α-亚麻酸、L-苯丙氨酸、草质素等4种脂肪酸、氨基酸类化合物在鲜条中含量较高,这些差异性成分可能是潜在的铁皮石斛枫斗降血糖功能成分。本研究结果为阐明铁皮石斛枫斗降血糖物质基础提供了数据支撑,对进一步促进铁皮石斛精深加工具有重要意义。

枫斗类石斛rDNA ITS区的全序列数据库及其序列分析鉴别

目的 建立枫斗类石斛的rDNAITS区碱基全序列数据库 ,利用该数据库对枫斗类石斛待检种进行准确鉴别。方法 对枫斗类石斛的rDNAITS区进行了PCR扩增、测序 ,运用CLUSTRAL ,MEGA等软件以及枫斗类石斛rDNAITS区全序列数据库对待检种rDNAITS区进行序列分析鉴别。结果 建立了 2 1种枫斗类石斛的rDNAITS区全序列数据库 ,枫斗类石斛在该区的种间差异显著而稳定 ,转换和颠换总数为 11～ 12 2 ,变异位点数为 34 1,信息位点数为195。与外类群植物云南石仙桃间的差异较大 ,转换和颠换总数为 131～ 16 1。枫斗类石斛居群间的差异较小 ,转换和颠换总数为 0～ 6。结论 利用枫斗类石斛的全序列数据库及遗传分析软件 ,通过对待检种rDNAITS区进行序列测定 ,可以成功鉴别属于数据库中枫斗类石斛的待检种。

枫斗类石斛cpDNA psbA-trnH的序列分析与鉴别

本研究对常见枫斗类石斛cpDNA的psbA-trnH区进行了测序,利用MEGA4.0对该区序列进行了比较分析。结果显示:15种常见的枫斗类石斛的psbA-trnH序列长度为721～767bp,变异位点42个,简约信息位点11个。以Kimura-2参数计算遗传距离,常见枫斗类石斛的种间遗传距离为0.0013～0.0183,平均遗传距离为0.0148。不同石斛种间均存在序列差异,全序列中共出现6处indels,导致种间片段长度差异较大;暂未发现所检测的枫斗类石斛居群间在psbA-trnH区的序列存在差异。利用枫斗类石斛psbA-trnH序列数据库及遗传分析软件,通过对待检种的psbA-trnH序列的测定,成功鉴别了待检种。cpDNA的psbA-trnH区可作为枫斗类石斛分子鉴别的候选标记。

新型联合片段:nrDNA ITS+nad 1-intron 2在枫斗类石斛鉴定中的意义

本文从线粒体基因片段入手,利用PCR技术扩增出17种枫斗类石斛39个个体的线粒体基因co I、nad 5部分序列及nad 1-intron 2序列,nr DNA ITS及叶绿体基因序列rbc L、mat K、psb A-trn H,同时筛选出合适的基因片段来研究多片段联合在枫斗类石斛植物鉴定方面的应用。结果表明:在7个基因片段中,nr DNA ITS、nad 1-intron 2和psb A-trn H的序列变异度较高,可用于枫斗类石斛的鉴定。但是,仅利用单一序列无法对细茎石斛及霍山石斛进行鉴别。而nr DNA ITS+nad 1-intron 2新型联合片段构建的UPGMA树与其他联合片段相比,更能有效的对枫斗类石斛基原植物进行鉴别并可区分细茎石斛及霍山石斛。此外,借助nr DNA ITS+nad 1-intron 2新型联合片段构建的UPGMA树对3个待检种进行了成功鉴别,分别为霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛。本研究首次将nr DNA ITS与线粒体基因片段联合用于枫斗类石斛的鉴定,为石斛药材的鉴别提供了可靠的科学依据,同时也将对规范枫斗类石斛市场提供理论指导。