金钗石斛生物碱对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探究金钗石斛生物碱(DNLA)对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制。方法30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组,DNLA组(DNLA,20 mg/kg),APAP模型组(APAP,300 mg/kg),APAP+DNLA低、高剂量(10、20 mg/kg)组,每组6只。灌胃给药7 d后,腹腔注射APAP溶液建立急性肝损伤模型,检测血清ALT、AST及肝组织GSH、SOD活性和MDA水平,HE染色观察肝组织病理变化,Western blot检测肝组织CYP2E1、Nrf2、GCLC、HO-1、NQO1、GPX1的蛋白表达水平;免疫荧光检测AML-12细胞中Nrf2蛋白的表达。结果与空白组比较,APAP模型组小鼠血清ALT、AST活性显著升高,肝组织MDA含量显著增加(P<0.01),SOD和GSH活性明显降低(P<0.05),CYP2E1蛋白表达增加(P<0.01),核蛋白Nrf2和GCLC、HO-1、NQO1蛋白表达明显降低(P<0.05),肝组织出现大片坏死及炎症细胞浸润。与APAP模型组比较,DNLA可显著降低小鼠血清中ALT、AST活性(P<0.01),升高肝组织SOD、GSH活性(P<0.05)、降低MDA水平(P<0.01),亦可降低CYP2E1蛋白表达(P<0.05),增加GCLC、NQO1、HO-1、GPX1及核内Nrf2的蛋白表达(P<0.01),改善肝脏组织病理损伤。结论DNLA能够改善APAP引起的小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与激活Nrf2信号通路,增强小鼠肝脏抗氧化能力有关。

基于网络药理学和分子对接技术探讨金钗石斛生物碱抗后发性白内障的作用机制

目的:探讨金钗石斛生物碱抗后发性白内障的作用机制。方法:通过查阅国内外文献,收集金钗石斛生物碱类活性成分及其结构,利用网络药理学预测金钗石斛生物碱抗后发性白内障的潜在靶点,建立金钗石斛生物碱抗后发性白内障的蛋白互作关系网络(PPI),并对潜在靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析,探索金钗石斛防治后发性白内障可能的生物进程及通路。通过分子对接验证金钗石斛生物碱与核心靶点的结合活性。结果:网络药理学分析表明,获得金钗石斛生物碱类活性成分27个,金钗石斛生物碱抗后发性白内障的核心靶点为STAT3、PIK3R1、AKT1等,GO富集分析结果表明,金钗石斛生物碱主要通过影响细胞凋亡、细胞迁移和激酶活性的双向调节等生物进程,发挥酶结合和蛋白质结合等分子结合,进而发挥抗后发性白内障的作用。金钗石斛抗后发性白内障可能与血管生成(HIF-1信号通路)、炎症反应(PI3K-Akt信号通路)等信号通路有关。分子对接结果显示金钗石斛生物碱与核心靶点均有较好的结合活性。结论:金钗石斛中石斛碱(dendrobine)、N-反式阿魏酸酰对羟基苯乙胺(N-trans-feruloyl tyramine)可能是通过STAT3、PIK3R1、AKT1等多靶点、多信号通路、多途径发挥对后发性白内障的防治作用,为后期的实验验证及金钗石斛药材的开发提供理论指导。

金钗石斛生物碱对mcf-7细胞线粒体凋亡通路研究

金钗石斛生物碱(Dendrobine)对肿瘤细胞具有抑制作用,但其对于乳腺癌细胞还未见报道。通过MTT实验,发现乳腺癌细胞的生长活力受到金钗石斛生物碱的明显抑制。对乳腺癌细胞进行Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率,进一步说明金钗石斛生物碱对乳腺癌肿瘤细胞生长的抑制作用,且具有明显的促凋亡效应。实验结果显示金钗石斛生物碱抑制了mcf-7细胞分裂过程中从G1期向S期的转换。JC-1探针荧光共聚焦显微镜观察细胞线粒体跨膜电位变化,红绿荧光比例变化由低变高。荧光免疫印迹法(Wenstern Blot)测定细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)凋亡基因蛋白表达量发现,procaspase-3和被剪切的cleaved caspase-3蛋白表达条带均清晰可见,说明通过线粒体途径激发了细胞凋亡执行基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,使得癌细胞发生凋亡。实验结果显示金钗石斛生物碱能使mcf-7细胞通过线粒体途径发生细胞凋亡,且有细胞色素C释放,并激活procaspase-3启动了细胞的死亡程序。

金钗石斛生物碱抗糖性白内障作用及蛋白质组学效应的实验研究

为观察金钗石斛生物碱抗糖性白内障作用及其相关蛋白谱。将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、样品高、低剂量组和阳性对照组,每组10只,模型组腹腔注射D-半乳糖诱导大鼠白内障模型,样品高、低剂量组和阳性对照组在注射D-半乳糖26 d后形成Ⅱ级白内障后每天分别给予0.36、0.18 g/kg金钗石斛总生物碱灌胃进行实验性治疗,阳性对照组每天以0.22 g/kg石斛夜光丸灌胃,正常对照组每天仅灌胃生理盐水;用裂隙灯观察观察晶状体浑浊度;46 d后处死动物后检测晶状体水溶性蛋白、GSH的含量及T-SOD和MDA的活性;使用双向电泳技术提取分离大鼠晶状体总蛋白及糖基化蛋白,分析比较双向电泳图谱,寻找正常组与模型组、生物碱治疗组大鼠晶状体蛋白质组学差异。结果金钗石斛生物碱高剂量组能明显减轻晶状体混浊度,显著升高晶状体水溶性蛋白、GSH含量及T-SOD活性,降低MDA的活性;2-DE获得了较好的大鼠晶状体总蛋白质及糖基化蛋白质的双向电泳图谱,并观察到模型组有大量蛋白质点表达上调或下调或新蛋白,蛋白质糖基化水平升高,给予高剂量石斛生物碱后,大部分达上调或下调蛋白质恢复到正常的水平,糖基化蛋白降低。表明金钗石斛生物碱具有较好的抗糖性白内障作用,并伴随一系列晶状体蛋白质表达水平的改变,其差异蛋白可能参与了晶状体浑浊过程。

金钗石斛生物碱对糖性白内障大鼠诱导型一氧化氮合酶基因的调控

目的探讨金钗石斛生物碱对半乳糖所致糖尿病性白内障大鼠晶状体中一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性及其基因表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、样品高、低剂量组和阳性对照组,每组10只,模型组腹腔注射D-半乳糖诱导大鼠白内障模型,样品高、低剂量组和阳性对照组在注射D-半乳糖26d后形成Ⅱ级白内障后每天分别给予0.36、0.18g/kg金钗石斛总生物碱灌胃进行实验性治疗,阳性对照组每天以0.22g/kg石斛夜光丸灌胃,正常对照组每天仅灌胃生理盐水;用裂隙灯观察观察晶状体浑浊度;46d后处死动物后取晶状体,硝酸还原法测定NO的含量、比色法检测NOS的活性,提取各组晶状体RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测iNOS基因的表达。结果金钗石斛生物碱治疗组和正常对照组、阳性对照组的NO浓度及NOS的活性均显著低于模型组,实时定量PCR表明金钗石斛生物碱可下降iNOS基因的表达。结论金钗石斛生物碱能有效抑制iNOS基因的表达,对糖尿病性白内障具有较好的治疗作用。

石斛生物碱抑制宫颈癌细胞SiHa恶性生物学行为

石斛生物碱(Dendrobium nobile Lindl.alkaloids,DNLA)可促进乳腺癌和结肠癌细胞凋亡,但其是否影响宫颈癌细胞的恶性生物学行为还未知。该文探究了DNLA对宫颈癌SiHa细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能机制。将不同剂量(15、30、60 ng/mL)DNLA作用于SiHa细胞,转染si-NC、si-KCNQ1OT1、miR-NC、miR-487a-3p mimics、pcDNA-NC或pcDNA-KCNQ1OT1至SiHa细胞,或60 ng/mL DNLA作用于转染pcDNA-NC或pcDNA-KCNQ1OT1的SiHa细胞后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中MMP2、MMP9、切割胱天蛋白酶3基因在蛋白质水平的表达量,RT-qPCR检测KCNQ1OT1和miR-487a-3p表达。双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1和miR-487a-3p调控关系。结果表明,不同剂量(15、30、60 ng/mL)DNLA可降低SiHa细胞吸光度值、迁移数、侵袭数、MMP2和MMP9基因在蛋白质水平的表达量及KCNQ1OT1表达,而提高细胞凋亡率、切割胱天蛋白酶3基因在蛋白质水平的表达及miR-487a-3p表达(P<0.05)。低表达KCNQ1OT1或高表达miR-487a-3p均可降低SiHa细胞吸光度值、迁移数、侵袭数及MMP2和MMP9基因在蛋白质水平的表达量(P<0.05),而提高细胞凋亡率和切割胱天蛋白酶3基因在蛋白质水平的表达量(P<0.05)。KCNQ1OT1靶向负调控miR-487a-3p的表达。高表达KCNQ1OT1对SiHa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响与低表达KCNQ1OT1相反,且高表达KCNQ1OT1降低了60 ng/mL DNLA对SiHa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。综上所述,DNLA可能通过调控KCNQ1OT1/miR-487a-3p轴降低宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进SiHa细胞凋亡。

金钗石斛生物碱对阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征的影响

目的研究金钗石斛生物碱对阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hyponea syndrome,OSAS)大鼠认知功能、记忆力的影响及其机制。方法从60只SPF级SD雄性大鼠中挑选50只建立OSAS模型,余下10只列入对照组。将成功建模的大鼠随机分为5组:模型组,金钗石斛生物碱高、中、低剂量组和丁苯酞组。金钗石斛生物碱高、中、低剂量组分别用0.36、0.18和0.09 g·kg^(-1)的金钗石斛生物碱灌胃,丁苯酞组用40 mg·kg^(-1)的丁苯酞灌胃,模型组和对照组均用等体积的生理盐水灌胃。每天1次,连续处理12周。通过旷场实验分析大鼠的认知能力;通过新位置识别实验研究大鼠的记忆力;通过苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察大鼠海马组织病理学变化;通过原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick and labeling,TUNEL)检测大鼠海马组织细胞的凋亡指数;通过实时荧光逆转录聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测大鼠海马组织中凋亡蛋白酶活化因子1(apoptotic protease-activating factor-1,Apaf-1)、天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,Caspase-9)、Bcl-2和Bax mRNA的相对表达量;通过蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠海马组织中Apaf-1、pro-Caspase-9、Cleaved Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果大鼠探索总里程模型组长于对照组(P<0.05),丁苯酞组和金钗石斛生物碱高、中、低剂量组均短于模型组(P<0.05);大鼠中央方格停滞时间和大鼠记忆识别指数均表现为模型组低于对照组(P<0.05),丁苯酞组和金钗石斛生物碱高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05);模型组神经细胞数量较少,排列紊乱,神经元出现明显肿胀,核仁消失并出现坏死细胞。丁苯酞组和金钗石斛生物碱高、中、低剂量组均出现好转,其中金钗石斛生物碱高剂量组与对照组较为相似;细胞凋亡指数模型组高于对照组(P<0.05),丁苯酞组和金钗石斛生物碱高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);Apaf-1、Caspase-9和Bax mRNA,Apaf-1、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白相对表达量均表现为模型组均高于对照组(P<0.05),丁苯酞组和金钗石斛生物碱高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);Bcl-2 mRNA、pro-Caspase-9和Bcl-2蛋白相对表达量模型组低于对照组(P<0.05),丁苯酞组,金钗石斛生物碱高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05)。结论金钗石斛生物碱可改善OSAS大鼠的认知能力和记忆能力,减轻大鼠海马角1(cornus ammonis 1,CA1)区组织损伤,抑制细胞凋亡,推测其机制可能与抑制Apaf-1/Caspase-9信号通路、抑制Caspase-9活化、下调Bax表达水平、上调Bcl-2表达水平有关。

石斛生物碱抗肿瘤活性的研究进展

近年来,我国对中医药重视程度逐渐提升,中医药研究引起人们广泛关注。石斛作为中医药学中的一种名贵药材,药用价值高,性味甘淡微咸,具有抗炎、养胃生津等功效。已有大量文献报道,石斛活性成分能够有效治疗肿瘤,并且其药效成分之一石斛生物碱对肿瘤细胞抑制作用效果较为显著。本文针对石斛生物碱成分抗肿瘤的作用进行分析,从石斛生物碱来源、药理活性及肿瘤细胞抑制机制展开综述,为石斛药用资源开发和利用提供参考。

金钗石斛生物碱的提取技术及临床前药理作用研究进展

金钗石斛是我国珍稀名贵中药,富含生物碱。石斛碱是金钗石斛的特征性生物碱成分,用于评价金钗石斛药材的品质。文章通过系统查阅有关书籍、期刊、数据库等资料,列举了近五年金钗石斛生物碱最新的含量测定方法和提取技术,列出了金钗石斛倍半萜生物碱的化学结构,重点阐述了金钗石斛生物碱的保护神经、肝脏、心肌,降血糖、抗白内障和抗癌的临床前药理作用及机制,简述了金钗石斛的临床应用。

金属离子对Trichoderma longibrachiatum UN32石斛碱型生物碱产量的影响

石斛碱是传统植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的特征药用活性成分,结构上属于石斛型生物碱(dendrobine-type total alkaloids,DTTAs)。石斛碱的积累受周期和环境的影响,仅从植物中获取难以满足需求。该研究的对象Trichoderma longibrachiatum UN32是实验室前期通过复合诱变获得的产DTTAs的正突变株。为提高UN32的生物碱产量,使产物表达水平趋于稳定,该研究从UN32发酵培养基中无机盐的添加量出发,利用响应面法确定金属离子的最优配比。根据Plackett-Burman法设计筛选出对响应结果影响程度最显著的3个因素分别为Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+),其最佳添加时间和添加浓度分别是Cu^(2+)0.5 mmol/L(第6天)、Fe^(2+)0.4 mmol/L(第6天)和Zn^(2+)0.7 mmol/L(第3天)。响应面统计的结果显示,当模型响应值生物碱量达最大值时,Cu^(2+)、Zn^(2+)和Fe^(2+)的浓度分别为0.54、0.69、0.39 mmol/L,此时生物碱产量达到(317.36±6.48)μg,比初始培养基提高了72.68%。综上,金属离子及其不同组合对菌株UN32生物碱的积累具有促进作用,该方法具有较好的开发价值和应用前景。

金钗石斛总生物碱对大鼠后发性白内障的影响

探讨了金钗石斛总生物碱(DNLA)对SD大鼠后发性白内障的影响。取40只健康SD大鼠随机分为空白组、模型组和3个模型组+DNLA(高/中/低)处理组。建模后连续灌胃给药30d。采用裂隙灯生物显微镜检查大鼠晶状体混浊度,HE染色观察大鼠晶状体组织病理变化,免疫荧光检测大鼠晶状体上皮细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果表明,在裂隙灯下晶状体后囊膜混浊程度为模型组>低剂量组>中剂量组>高剂量组。给药后SD大鼠眼球晶状体组织晶状体上皮增生、炎性细胞浸润和纤维组织增生等病变有明显缓减,晶状体上皮细胞中α-SMA蛋白表达量明显减弱。金钗石斛总生物碱对大鼠后发性白内障晶状体上皮细胞的异常增生及纤维化具有明显抑制效果。

金钗石斛生物碱对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠的作用

目的观察金钗石斛生物碱(ADNL)对四氯化碳(CCl4)诱导急性肝损伤小鼠的作用。方法50只C57小鼠随机分为正常对照组,正常给药(ADNL 20 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,模型组和ADNL低、高剂量(10、 20 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,每组10只,连续灌胃7 d。末次给药后2 h,除正常对照组和正常给药组外,其余各组腹腔注射0.2%CCl4玉米油溶液(10 mL·kg^(-1))建立急性肝损伤模型。采用全自动生化仪检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量, HE染色观察肝组织病理学变化, RT-PCR检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6 (IL-6) mRNA表达水平, Western blot检测TNF-α、 IL-6、 p-核转录因子(NF)-κB p65蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,正常给药组ALT、 AST及肝组织病理学无明显变化,模型组小鼠血清ALT、 AST的含量均明显升高(P <0.05),肝脏组织可见明显病理损伤, TNF-α、 IL-1β和IL-6 mRNA和IL-6、 TNF-α和p-NF-κB p65蛋白表达显著增加(P <0.05)。与模型组比较, ADNL低、高剂量组血清ALT和AST含量显著降低(P <0.05),肝组织病理损伤明显改善, TNF-α和IL-1βmRNA表达显著下调(P <0.05), TNF-α和p-NF-κB p65蛋白表达显著减少(P <0.05), ADNL高剂量组IL-6蛋白和mRNA表达也显著下调(P <0.05)。结论 ADNL对CCl4所致急性肝损伤具有显著改善作用,可能与抑制炎症反应有关。

金钗石斛总生物碱对四氧嘧啶所致糖尿病大鼠的保护作用

目的观察金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobile Lindl.alkaloids,DNLA)对四氧嘧啶所致糖尿病大鼠的影响。方法体重200-220g的雄性SD大鼠60只随机分为空白、模型、总生物碱低、中、高剂量(40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg)及二甲双胍(100mg/kg)组。预先灌胃给药1wk后腹腔注射四氧嘧啶(175mg/kg)制备高血糖大鼠模型,72h后取血测各组大鼠空腹血糖,并观察胰腺组织形态学变化。结果注射四氧嘧啶3d后,大鼠血糖较空白组明显增高(P<0.05),胰岛萎缩、数量减少,岛内细胞数减少;与模型组比较,DNLA(40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg)及二甲双胍(100mg/kg)可明显降低大鼠血糖水平(P<0.05),胰岛数量较多,体积较大,岛内细胞数较多。结论DNLA可降低四氧嘧啶所致糖尿病大鼠血糖水平,其机制与DNLA对胰岛的保护作用有关。

金钗石斛总生物碱对Aβ_(25-35)所致大鼠海马组织Aβ含量的影响

目的观察金钗石斛总生物碱(Dendrobium nobil Lindl.Alkaloids,DNLA)对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的大鼠痴呆模型海马组织Aβ含量的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、DNLA低剂量(40 mg/kg/d)及高剂量组(80 mg/kg/d)。预给药7 d后,双侧海马注射Aβ_(25-35)(1μg/μL,5μL),假手术组注射同体积生理盐水,术后继续灌胃14 d,Morris水迷宫检查大鼠空间学习成绩,Western blot法检测海马组织Aβ_(1-42)含量,β淀粉样前体蛋白(APP)和β淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1(BACE1)的蛋白表达。结果双侧海马注射Aβ_(25-35)后,模型组大鼠空间学习成绩明显比假手术组差,给予DNLA后可改善大鼠空间学习成绩;模型组大鼠海马Aβ_(1-42)、APP和BACE1蛋白量均明显高于假手术组;与模型组比较,DNLA给药可明显减少海马组织Aβ_(1-42)的含量,降低APP和BACE1蛋白在海马组织的表达(P<0.05)。结论 DNLA具有改善Aβ_(25-35)所致大鼠痴呆模型的作用,可能与减少海马组织Aβ_(1-42)产生有关。

金钗石斛总生物碱对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响

目的初探贵州省产金钗石斛总碱(DNLA)对APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆的影响。方法雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为模型对照组、模型给药组(DNLA,40 mg/kg),同月龄野生型小鼠作为空白对照组,每组10只。自7月龄始灌胃给药,连续8周。Morris水迷宫及Y迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,尼氏染色观察小鼠海马神经元形态。结果Morris水迷宫定位航行实验显示,模型组逃避潜伏期较空白对照组明显延长(P<0.05);空间探索实验显示,模型组小鼠在原平台象限停留时间及在原平台象限游泳距离的百分比较空白组明显缩短(P<0.05);模型组小鼠在Y迷宫的空间自发性探索行为正确率明显低于空白组。尼氏染色结果显示,模型组小鼠海马神经元排列疏松,神经元数量及尼氏小体减少,胞质呈淡蓝色。与模型组比较,DNLA 40 mg/kg明显缩短小鼠逃避潜伏期(P<0.05);增加小鼠在原平台象限停留时间及原平台象限游泳距离的百分率(P<0.05)、明显增加Y迷宫小鼠自发探索行为正确率(P<0.05),并改善模型小鼠海马CA1区神经元的形态和结构。结论 DNLA对APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力具有改善作用。

金钗石斛总生物碱对神经系统抗衰老作用机制的研究进展

衰老是在生命后期机体生理功能发生了不可逆退行性改变的过程。衰老的病理生理改变和老年性疾病相似,通常衰老过程中伴随着老年疾病的发生,特别是诸如老年痴呆、帕金森综合征等神经退行性疾病的发生,因此抗衰老在神经系统的研究显得尤为重要。金钗石斛总生物碱在心血管系统、神经系统方面的研究广泛,随着研究的深入,进来年金钗石斛总生物碱在延缓衰老方面的研究越来越多,备受关注。就金钗石斛总生物碱近年来在神经系统抗衰老的作用机制研究的进展情况进行综述。

铁皮石斛快繁优化及不同时期生物碱积累的研究

本研究以铁皮石斛无菌苗茎段为实验材料优化茎段培养的最适培养基,并对其愈伤组织形成后的10 d、15 d、20 d、25 d、30 d、35 d、40 d等不同时期的生物碱的含量进行测定。结果表明,以MS为基本培养基,原球茎诱导的最佳激素组合为NAA 1.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,平均诱导率为95%;原球茎增殖的最佳激素组合为6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L,原球茎分化的最佳激素组合为6-BA 5 mg/L+NAA 1 mg/L,平均分化率可达80%;生根壮苗的最佳组合为:IBA 1.5 mg/L+香蕉泥100 g/L+活性炭0.1%,其生根率为100%;愈伤组织形成后30 d左右时其总生物碱含量最高。

金钗石斛总生物碱对侧脑室注射链脲佐菌素所致痴呆大鼠脑内胰岛素信号的影响

目的:观察金钗石斛总生物碱对散发型老年痴呆动物脑内胰岛素信号的影响。方法:采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素制备大鼠散发型老年痴呆模型,空白对照组大鼠侧脑室注射溶媒。术后动物分为:模型对照组、金钗石斛总生物碱20 mg/kg、40 mg/kg组,另设空白对照组、空白+总生物碱(40 mg/kg)组。治疗组大鼠灌胃相应剂量的总生物碱,空白对照和模型对照组大鼠灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续28 d。灌胃结束前6 d采用Morris水迷宫检测大鼠行为学功能;麻醉处死大鼠并收集大脑,HE染色观察海马神经元形态及数量,Western blot法检测海马胰岛素受体(IR)、胰岛素底物-1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平及磷酸化程度。结果:水迷宫结果提示,与空白对照组大鼠相比,模型对照组大鼠逃避潜伏期明显延长;与模型对照组相比,给予金钗石斛总生物碱后大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。HE染色发现模型对照组大鼠海马CA3区神经元层次减少、排列紊乱、细胞深染,且神经元密度下降;给予金钗石斛总生物碱后部分改善了神经元的形态并提高了神经元密度(P<0.01)。模型对照大鼠海马组织IR的磷酸化水平较空白对照组大鼠明显下调,而IRS和Akt的磷酸化水平则显著下调,给予金钗石斛总生物碱40 mg/kg后显著上调了IR磷酸化、下调了IRS和Akt的磷酸化水平(P<0.01)。结论:金钗石斛总生物碱能减轻链脲佐菌素所致痴呆大鼠学习记忆功能的损害,可能与调节脑内异常的IR/IRS-1/Akt通路中关键靶点的作用有关。

金钗石斛总生物碱对犬体外循环缺血再灌注心肌脂代谢的影响

目的:探讨金钗石斛总生物碱对犬体外循环(CPB)过程中缺血再灌注心肌脂代谢的影响及其可能机制。方法:健康成年中华田园犬24只,雌雄各半,体重(11.2±1.5)kg,随机分为假手术组、模型组、溶剂对照组、治疗组(金钗石斛总生物碱,剂量为6 mg/kg)4个组(每组6只),均建立体外循环,除假手术组外其余各组均阻断主动脉60 min后再开放。各组于体外循环转流前(T1)和开放主动脉再灌注15 min(T2)、60 min(T3)、90 min(T4)4个时间点检测心肌对血浆游离脂肪酸的摄取率、心肌组织中长链脂肪酰辅酶A(LCACoA)浓度,分析心脏功能及测定心肌组织内脂肪酸转位酶(FAT/CD36)mRNA和蛋白的表达。结果:各组犬心肌对血浆游离脂肪酸的摄取率、心肌组织中LCACoA浓度及FAT/CD36 mRNA的表达在流转前差异均无统计学意义(均P>0.05),主动脉开放后(T2)以上指标模型组[分别为(35.8±4.7)%、(8.55±1.51)nmol/g、3.23±0.68]和治疗组[分别为(27.4±2.7)%、(6.10±1.38)nmol/g、2.20±0.56]均高于假手术组[分别为(19.6±3.9)%、(4.16±0.81)nmol/g、1.19±0.52](均P<0.05),在T2时间点最高,后逐渐下降;同模型组相比,以上指标治疗组的升高幅度偏低(均P<0.05)。各组心脏功能指标:左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)流转前差异均无统计学意义(均P>0.05),主动脉开放后(T2),以上心脏功能指标模型组[分别为(76.5±9.1)mmHg、(31.1±2.9)mmHg、(1.2±0.4)mmHg/ms、(-0.9±0.1)mmHg/ms]与治疗组[分别为(92.9±8.7)mmHg、(25.3±3.6)mmHg、(1.8±0.4)mmHg/ms、(-1.3±0.1)mmHg/ms]均低于假手术组[分别为(165.5±12.9)mmHg、(6.5±0.5)mmHg、(3.3±0.6)mmHg/ms、(-2.9±0.3)mmHg/ms](均P<0.05),但治疗组的心脏功能指标受损程度低于模型组(均P<0.05)。结论:金钗石斛总生物碱在犬体外循环过程中,可通过抑制FAT/CD36在心肌组织中的表达异常,降低心肌对游离脂肪酸的摄取,减少LCACoA在心肌组织内异常蓄积,达到减轻缺血再灌注后心肌损伤的作用。

金钗石斛总生物碱脂质体对胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨金钗石斛总生物碱脂质体对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其作用机制。方法分别用0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/mL金钗石斛总生物碱脂质体作用于SGC-7901细胞24、48和72 h,采用MTT检测细胞增殖情况,流式细胞计数法检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭情况,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平。结果采用不同浓度金钗石斛总生物碱脂质体作用于SGC-7901细胞后,细胞的增殖抑制率增加,差异均有统计学意义,均P<0.05。0.2、0.4和0.6 mg/mL金钗石斛总生物碱脂质体作用于SGC-7901细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(6.23±0.60)%、(15.00±2.31)%和(24.10±1.50)%,对照组为(2.87±0.55)%,差异有统计学意义,均P<0.05;细胞侵袭数分别为44±4、32±5和22±4,对照组为57±6,差异有统计学意义,均P<0.05;凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3表达水平明显升高(均P<0.05),Bcl-2表达水平明显降低,P<0.05。结论金钗石斛总生物碱脂质体能够明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、促进细胞凋亡和抑制细胞侵袭,其作用机制可能与Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路有关,金钗石斛总生物碱脂质体可能成为胃癌治疗的药物。