纳米石杉碱甲脂质体的热稳定性及分配系数

采用薄膜旋蒸-超声法制备了纳米石杉碱甲脂质体(Hup-A-Lip),并对其微观形貌、包封率、相变温度、分配系数及生物利用度等进行了研究.结果表明:Hup-A-Lip呈粒径约40 nm的球形结构;包封率为(82.74±2.68)%;相变温度为67℃,在25~60℃具有较好的热力学稳定性;Hup-A-Lip中药物与脂质体膜之间的作用力以静电相互作用和氢键为主;石杉碱甲(Hup-A)经脂质体包封后,明显提高了游离药物的生物利用度.

基于网络药理学和体外实验探究石杉碱甲对急性肺损伤中肺泡上皮细胞的作用及保护机制

基于网络药理学和体外实验,探讨石杉碱甲(huperzine A,Hup A)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中肺泡上皮细胞的作用及机制。首先从公共数据库查找Hup A、ALI的相关靶点,获取二者交集即为Hup A保护ALI的潜在靶点并进行富集分析;通过构建蛋白互作网络及“成分-靶点-通路”网络进而筛选Hup A保护ALI的核心靶点并进行分子对接验证;进一步采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12)构建细胞模型加以Hup A预处理,分别检测细胞活性、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平验证Hup A的保护作用,最后蛋白免疫印迹实验验证关键靶点的蛋白水平变化。网络药理学分析结果显示Hup A共有144个潜在治疗靶点,Hup A参与调节蛋白激酶活性、氧化应激、炎症反应等生物学过程和磷脂酰肌醇-3-激酶-丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidyl-inositol 3-kinase-serine-threonine kinase,PI3K-Akt)通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路等信号通路;分子对接结果显示Hup A与Akt1、Akt2和Mapk1(又称细胞外蛋白调节激酶(extracellular regulated protein kinases,Erk))均具有较好的结合活性;细胞实验显示Hup A可以改善LPS诱导的细胞活性下降(P<0.05),降低IL-6、MDA、p-Erk1/2/Erk1/2水平(P<0.05),提高SOD与p-Akt1/Akt1水平(P<0.05)。综上,Hup A可能通过调控Akt1和Mapk1保护肺泡上皮细胞进而缓解LPS诱导的ALI。

石杉碱甲用于老年血管性痴呆对患者CDR水平及血清E2水平的影响

目的探讨石杉碱甲用于老年血管性痴呆对患者CDR水平及血清E2水平的影响。方法选取2020年12月-2022年12月我院104例的老年血管性痴呆患者,分为两组,其中对照组选择长春西汀治疗,而研究组是石杉碱甲治疗。结果研究组的治疗效果比对照组更好(P<0.05);研究组的临床血液流变学指标比对照组更优(P<0.05);研究组的血清E2水平以及P300潜伏期与波幅情况比对照组更好(P<0.05);研究组的不良反应发生率比对照组更低(P<0.05)。结论石杉碱甲治疗老年血管性痴呆可以有效改善机体的痴呆症状,恢复认知功能,调节血清E2水平,并改善机体血液流变学指标,从而有效提高日常生活能力,应该推广。

DNA-纳米金探针法检测蛇足石杉内生真菌发酵液中石杉碱甲的含量

本研究将DNA、酶和抗体修饰于纳米金颗粒表面制备纳米金探针,建立了DNA-纳米金探针检测石杉碱甲(HupA)的方法。以磁珠作为载体,将石杉碱甲完全抗原(HupA-OVA)标记在磁珠上,采用竞争免疫分析模式,发现HupA浓度在0.008~16 ng/mL范围内,抑制率(I)与HupA浓度的对数值(lg c)呈良好的线性关系,线性方程为I=0.3006 lg c+0.6142,线性相关系数为0.9952,检测限为19.41 pg/mL。应用该方法对蛇足石杉内生真菌发酵液中HupA进行了检测,加标回收率为99.33%~103.73%,相对标准偏差(RSD,n=3)为1.70%~4.67%。该方法灵敏度高、特异性强、操作简单,可用于蛇足石杉内生真菌发酵液中HupA含量的检测。

灯盏生脉胶囊联合石杉碱甲治疗血管性痴呆的临床效果

目的探讨灯盏生脉胶囊联合石杉碱甲治疗血管性痴呆(VD)的临床效果。方法以2019年1月至2022年1月河南中医药大学第五临床医学院收治的102例符合条件的VD患者,依据随机数字表法分为对照组(51例)和观察组(51例)。对照组接受常规治疗联合石杉碱甲,治疗组在此基础上联合灯盏生脉胶囊。观察两组的认知功能和日常生活能力、神经功能、血管内皮功能、氧化应激指标和不良反应。结果治疗3个月时,两组的简易智能精神状态量表(MMSE)和日常生活能力量表(ADL)评分均较治疗前升高,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平均较治疗前升高,内皮素-1(ET-1)、丙二醛(MDA)水平均较治疗前降低,且观察组指标水平变化幅度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论灯盏生脉胶囊联合石杉碱甲可能通过调节血管内皮功能、改善氧化应激等多种途径,更加有效改善VD患者认知功能,促进神经功能恢复,且安全性良好。

共生培养法促进石杉碱甲增量富集的研究

为了促进蛇足石杉中石杉碱甲增量富集,本文利用内生真菌与蛇足石杉的共生进化关系,以共培养体系(co-culture system,CCS)为基础,提出了增加石杉碱甲产率的新方法。以蛇足石杉植株存活率为指标,确定共培养体系最佳培养条件;以细胞存活率、愈伤组织诱导率和增殖率为指标,确定最佳培养基条件;以石杉碱甲和麦角甾醇为指标性成分,控制植物细胞和内生真菌比例关系,维持培养体系内植物细胞和内生真菌之间的生长平衡,获得最佳的继代时间。结果表明:CCS的最佳培养条件为光照强度100 Lux,湿度95%,MS液体培养基,蔗糖20.0 g/L,2,4-二氯苯氧基乙酸5.0 mg/L和激动素1.0 mg/L;4 d为最佳继代时间,其石杉碱甲的浓度最高,与1 d时相比增加了49.34%,并且石杉碱甲与麦角甾醇的浓度比值控制在1.5~2.2之间时,内生真菌生长对石杉碱甲的富集有良性促进作用。该研究为高效、低成本增加石杉碱甲产量提供新的探索路径,亦可以有效解决药源不足问题,具有很好的应用前景。

胆碱能抗炎通路介导石杉碱甲A对脓毒症相关性脑病的保护作用

目的观察胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲A（HupA）对脓毒症大鼠脑皮质胆碱乙酰转移酶（ChAT）及毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1（CHRMl）表达的影响，探讨胆碱能抗炎通路是否介导了HupA对脓毒症相关性脑病（SAE）的保护作用。方法8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组和HupA干预组，每组18只。采用腹腔注射脂多糖（LPS）10mg／kg（1mL）诱导大鼠脓毒症模型，对照组给予等量生理盐水。HupA干预组于术前30min腹腔注射HupA0．04mg／kg（1mL），对照组及模型组给予等量生理盐水。观察大鼠一般情况；每组分别于术后3、12、24h处死6只大鼠取大脑皮质组织，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF—α）和白细胞介素-1β（IL-1β）等炎性介质水平；采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）和神经元核抗原（NeuN）免疫双标染色实验观察神经元细胞凋亡情况；采用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT—qPCR）及免疫荧光法检测ChAT和CHRM1的mRNA表达和阳性细胞。结果模型组大鼠给药后3h即出现精神萎靡、毛发竖立及静止懒动等脓毒症症状，12h表现最为明显；并伴随大脑皮质TNF-α和IL-1β过表达，神经元凋亡细胞明显增多，ChAT和CHRM1阳性表达明显减少，ChAT和CHRMl的mRNA表达均明显降低，与对照组比较差异均有统计学意义（12h的TNF-α（ng／L）：84．97±31．84比40．31±10．37，12h的IL-1β（ng／L）：1095．98±127．09比622．62±117．25，12h的ChATmRNA（2-△△Ct）：1．34（0．67，1．86）比1．92（1．12，2．87），12h的CHRMlmRNA（2-△△Ct）：0．65±0．12比1．16±0．42，均P〈0．05]。HupA干预后可明显缓解大鼠脓毒症症状；抑制大脑皮质TNF-α和IL-1β过表达及神经元细胞凋亡，同时可明显上调ChAT和CHRMl阳性表达及mRNA表达，与模型组比较差异均有统计学意义[12h的TNF—α（ng／L）：48．38±12．62比84．97±31．84，12h的IL-1β（ng／L）：718．13±163．33比1095．98±127．09，12h的chATmRNA（2-△△Ct）：18．04（17．22，19．23）比1．34（0．67，1．86），12h的CHRMlmRNA（2-△△Ct）：1．46±0．69比0．65±0．12，均P〈0．05]；24h上述症状和数值基本恢复。结论大脑皮质胆碱能神经功能异常及炎症反应均参与了SAE的发病过程；HupA可通过恢复胆碱能神经功能及胆碱能抗炎通路对SAE起到一定的保护作用。

HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量

目的 考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲 (Hup A)和总碱含量 ;比较不同提取方法对石杉碱甲含量的影响。方法 采用 RP- HPL C法测定 Hup A的含量。结果 Hup A在根、茎、叶中的含量为茎、叶 >根 ;贵州、广东和安徽产地的 Hup A含量分别为 0 .0 18% ,0 .0 2 1% ,0 .0 2 0 % ,提取方法之间差异不显著。结论 Hup A含量在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地 Hup A含量有一定差异。

石杉碱甲胶囊和片剂治疗阿尔采末病的多中心双盲研究

目的：比较石杉碱甲胶囊和片剂治疗轻中度阿尔采末病（ＡＤ）的疗效和不良反应。方法：９２例ＡＤ病人随机分２组，胶囊组５５例（男性２７例，女性 ２８例，年龄 ６９ ａ ± ｓ７ ａ）；片剂组 ３７例（男性１７例，女性 ２０例，年龄 ７１ａ± ６ａ）。给石杉碱甲胶囊或片剂 ０． １５ ｍｇ，ｐｏ， ｂｉｄ × ８ ｗｋ。结果：胶囊组和片剂组总有效率分别为 ６９％， ５７％，２组比较差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论：石杉碱甲是一个安全、有效的治疗ＡＤ药物，肢囊剂型与片剂剂型疗效相似。

石杉碱甲鼻用原位凝胶的制备及其经鼻脑靶向性评价

目的探索利用鼻腔嗅觉区的鼻-脑通道开发经鼻脑靶向给药系统的可行性。方法用阳离子敏感性成胶辅料结冷胶，采用pH梯度沉淀法制备了石杉碱甲鼻用原位凝胶。以市售片剂和注射液为对照，用小脑延髓池插管法采集脑脊液，股动脉插管取血，测定其在大鼠脑脊液和血中药物动力学参数；用组织匀浆法，测定其在大鼠脑组织中的分布；用Morris水迷宫法、跳台法和避暗法试验其对大鼠和小鼠模型的药效。结果大鼠鼻腔给药血浆AUC0→6h为静注的0．94倍，但脑脊液AUC0→6h为静注和灌胃的1．3和2．3倍；大鼠鼻腔给药后大脑、海马、小脑、左右嗅球的AUC0→6h分别为静注的1．5，1．3，1．0，1．2和1．0倍，为灌胃的2．7，2．2，1．9，3．1和2．6倍。药效学研究表明以1／4～1／2口服剂量鼻腔给药与口服等效，与药动学结果相符。结论石杉碱甲原位凝胶鼻腔给药较静注和灌胃显著增加了药物在脑内，特别在其改善记忆障碍作用的靶部位——大脑和海马的分布，提高了药物的脑靶向性。

石杉碱甲提取工艺研究

系统研究了石杉碱甲的提取工艺.系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲.结果表明:1pH对石杉碱甲的存在形态有很大影响;2一定酸度下的液液萃取除杂效果理想;3活性炭的用量及吸附条件对除杂效果影响显著;4低温下氯仿的重结晶可得到纯度大于99%的高纯度石杉碱甲.

尼尔雌醇并石杉碱甲改善阿尔茨海默病患者认知功能的研究

目的目前主要用于治疗阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的乙酰胆碱酯酶抑制剂价格昂贵,难以普及应用,为进一步寻求费用合理、药效确切的AD的治疗药物,观察尼尔雌醇(雌激素替代疗法)并石杉碱甲治疗AD改善认知功能的有效性及安全性。方法把60例女性AD患者随机分为两组,每组30例,联合治疗组采用石杉碱甲片200μg/d分2次口服和尼尔雌醇片2mg,1次/2周,对照组服用石杉碱甲片200μg/d分2次口服,疗程均为24周;两组患者的病情治疗前、治疗后8,24周均采用简易精神状态检查(MMSE)、临床痴呆程度量表(CDR)、日常生活活动能力(ADL)评分。结果治疗8周后,治疗组与对照组的MMSE、ADL评分(分别为19.2±2.5与16.9±2.1、45.9±7.1与48.3±6.1)差异有显著性意义(t=2.140,t=2.616,P均<0.05)。治疗24周后,治疗组与对照组的MMSE、CDR、ADL评分(23.1±2.3与19.3±2.1,1.1±0.2与1.4±0.3,40.1±7.2与43.1±6.1)差异有显著意义(t=3.076、t=2.216、t=3.662,P依次<0.01、0.05、0.01)。体检及实验室检查无明显的乳腺、子宫及肝肾功能异常。结论雌激素配合石杉碱甲能有效地治疗女性轻、中度AD患者,对患者的认知功能和日常生活自理能力均有改善,耐受性好,安全性高。

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca^(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响

目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 。

HPLC法测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量

目的 测定 6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法 用 2 %酒石酸溶液提取总碱 ,HPL C法测定 ,外标法定量。结果 石杉碱甲在所测定的 5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中均有较高分布 ,分别达到 0 .0 4 81% ,0 .0 5 79% ,0 .0 70 6 % ,0 .0 345 % ,0 .196 1% ,在闽浙马尾杉中含量较少 ,仅为0 .0 0 6 1%。结论 方法简便、准确 。

石杉碱甲的合成及结构改造研究进展

石杉碱甲是一高效、高选择性乙酰胆碱酯酶抑制剂，由于其独特的药理特征和低毒性，引起了人们的广泛注意。本文系统地综述了石杉碱甲的全合成方法、结构改造工作及构效关系的研究。

从千层塔中微波协助提取石杉碱甲和石杉碱乙

首先从 8种溶剂中筛选出硫酸作为微波协助提取的浸提溶剂 ,然后用正交试验确立了千层塔生物碱的最佳提取条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标 ,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、微波处理时间等因素。结果表明 ,在室温下微波协助提取的最优条件为 :酸浓度 0 8% (v v) ,液固比例 2 5∶1 ,微波处理时间 90s。 3次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是 93 7%和 93 9% ,相对标准偏差分别为 1 79%和 1 5 6% (n =3)。与传统的回流提取工艺相比 ,过程时间从 2h缩短为 90s,回收率提高了 1 0 %以上。

野生蛇足石杉产生物碱和石杉碱甲内生真菌分离鉴定

目的从野生蛇足石杉中筛选产生物碱和石杉碱甲内生真菌。方法从野生蛇足石杉中分离获得的33株内生真菌为研究起点,采用生物碱沉淀法和酸性染料比色法筛选产生物碱菌株;构建乙酰胆碱酯酶抑制活性测定模型、通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)测定,分析是否产生石杉碱甲,并利用形态学对菌株进行初步鉴定。结果筛选出7株产生物碱菌株,并从中筛选出一株产石杉碱甲菌株V,初步鉴定为1株青霉菌属真菌。结论在分离自野生蛇足石杉叶片中内生真菌产生物碱真菌比例较高,内生真菌V能在发酵条件下产生石杉碱甲。利用生物碱沉淀法及酸性染料法共同筛选产生物碱菌株更具有高效性,利用乙酰胆碱酯酶抑制活性测定模型进行活性检测及TLC/HPLC进行结构检测筛选更具有方向性。

石杉碱甲鼻用原位凝胶喷雾剂的制备及稳定性研究

目的:开发石杉碱甲经鼻脑靶向给药系统。方法:制备了石杉碱甲溶液、环糊精包合物、微乳、嵌断共聚物纳米粒和原位凝胶5种剂型,通过考察各剂型的纤毛毒性和体外透牛嗅黏膜扩散特性,选择原位凝胶为最佳剂型。以每喷主药含量、黏度、渗透压、粒径和体外释药特性等为考察指标筛选出原位凝胶喷雾剂的优化处方,并对其进行了稳定性研究。结果:以优化处方制备的喷雾剂,加速试验和长期留样试验6个月,内容物性状、pH值、黏度、粒径、渗透压、有关物质、含量和每喷含量无明显变化。结论:石杉碱甲鼻用原位凝胶喷雾剂制备工艺简便,制剂稳定,纤毛毒性低,药物透牛嗅黏膜扩散快而完全,适宜开发为经鼻脑靶向给药系统。

4种石杉科植物中产生石杉碱甲的内生真菌的分离及初步鉴定和HPLC测定石杉碱甲的含量

目的从4种石杉科植物中得到产生石杉碱甲(Huperzine A)的内生真菌,改进筛选内生真菌的培养条件。方法消毒后的材料在培养基上培养和分离其内生真菌,HPLC检测代谢产物,显微形态鉴定菌种。结果从蛇足石杉,长柄石杉,伏贴石杉,柳杉叶马尾杉中分离得到32株内生真菌,其中从柳杉叶马尾杉分离出的2株内生真菌能够产生石杉碱甲,分别是HA15.(芽胞菌属)和HA23.(葡萄孢属)。结论首次从柳杉叶马尾杉中分离出能产生石杉碱甲的内生真菌。

石杉碱甲透皮控释制剂督脉经穴给药改善东莨菪碱小鼠记忆障碍作用及机理初探

目的 :观察石杉碱甲透皮控释贴片 (Hup ATDDS)督脉穴位给药对东莨菪碱 (Scop)致小鼠学习记忆障碍的影响 ,比较穴位给药与一般部位给药的作用差异 ,探讨督脉穴位给药机理 ,为穴位透皮控释给药新途径提供初步实验依据。方法 :采用跳台、“Y”迷宫等行为药理学实验方法 ,观察Hup ATDDS穴位给药与一般部位给药对Scop小鼠记忆障碍的改善作用 ,并以小鼠脑胆碱酯酶活性等指标初步探讨穴位给药的作用机理。结果 :跳台试验和电迷宫试验表明 ,Hup ATDDS督脉百会穴用药后 3～ 6h间有明显的改善学习记忆作用 :13.4 μg/ 0 .2 5cm2 组用药后 4h为佳 ,5～ 6h时作用减弱 ;2 6 .7μg/ 0 .2 5cm2 组自药后 3h起作用明显 ,药后 4h作用最为显著 ,维持至 6h仍有良好作用 ;Hup ATDDS 2 6 .7μg/0 .2 5cm2 经百会、哑门、大椎、至阳和命门五个穴位给药均有明显的改善学习记忆作用 ,其中以百会穴组的作用最为显著 ;Hup ATDDS经百会穴或一般部位 (选臀位 )给药均有改善学习记忆作用 ,但以百会穴给药较臀位用药作用更为显著 ,且Hup ATDDS2 6 .7μg/ 0 .2 5cm2 组对小鼠脑胆碱酯酶活性有明显抑制作用。结论 :Hup ATDDS督脉穴位给药的改善记忆作用优于一般部位给药 ;其改善学习记忆作用可能是由于抑制脑CHE活性 。