红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质

石蒜科植物红花石蒜(Lycoris radiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L.radiata agglutinin,LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,Sephacryl S-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0.95μg/mL和1.9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低Ⅱ型人类单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50)=5～10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性.

转石蒜凝集素基因烟草的抗蚜虫性

利用农杆菌介导法将质粒pBILRA转化烟草(NicotianatabacumL．)，该质粒含有由花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)引导的筛选基因新霉素磷酸转移酶基因(nptll)及石蒜凝集素基因(lra)。通过卡那霉素筛选获得了25株独立转基因烟草植株。Westernblot分析表明，石蒜凝集素蛋白在不同转基因植株中表达量不同。对转基因T1代植株的遗传分析表明，lra基因在大多数独立转基因植株后代中以孟德尔3：1的分离比方式遗传。抗虫试验表明，表达较高水平石蒜凝集素蛋白的转基因烟草对桃蚜种群的生长具有明显的抑制作用。首次报道了表达石蒜凝集素基因的烟草对蚜虫具有抗性。石蒜凝集素基因可用于植物抗虫基因工程研究及应用。

石蒜凝集素基因转化切花菊及抗蚜性鉴定

以切花菊‘神马’叶片为外植体,采用根癌农杆菌介导法将长筒石蒜凝集素基因LLA导入菊花。结果表明,‘神马’叶片对潮霉素（Hyg）十分敏感,叶盘再生筛选以810 mg.L-1为宜,生根筛选以18 mg.L-1为宜;羧苄青霉素抑菌浓度早期以500 mg.L-1为宜,后期以250300 mg.L-1为宜。Hyg抗性再生植株经PCR、RT-PCR检测初步证实外源基因已转入7个转化株系的植物基因组DNA中并发生转录。转基因植株幼苗人工接种蚜虫实验表明,不同转化株系的抗蚜性差异较大,蚜口密度抑制率为12.2%76.8%不等,平均蚜口密度抑制率为41.8%。

氨基酸修饰及荧光光谱分析研究黄花石蒜凝集素生物学活性与构象的关系

本文通过对黄花石蒜凝集素(Lycoris aurea Agglutinin,LAA)进行特殊氨基酸的化学修饰,显示一个LAA分子一共有8个色氨酸分子,其中有3个位于分子表面或近表面,Trp、Tyr和Ser/Thr不是LAA凝集活性所必需的氨基酸,而Asp/Glu的羧基和凝血活性密切相关,对其修饰后导致凝血活性丧失50%。通过荧光淬灭的方法对LAA分子中色氨酸所处微环境进行了研究。结果显示中性淬灭剂丙烯酰胺对LAA分子中色氨酸的淬灭作用最强可以淬灭100%的色氨酸荧光,其次是离子型淬灭剂碘化钾,能淬灭62.9%的色氨酸荧光,而氯化铯对LAA色氨酸的淬灭最弱,几乎不能淬灭LAA的荧光。

石蒜凝集素基因的克隆(英文)

用石蒜科植物凝集素基因的保守序列为引物 ,利用RACE PCR技术从石蒜幼嫩叶片中克隆出石蒜凝集素的全长cDNA .通过比较石蒜同其他石蒜科植物凝集素基因序列和推测的氨基酸序列 ,发现石蒜凝集素基因编码一具有信号肽的前体蛋白 .石蒜凝集素同其他石蒜科植物凝集素一样为具有

温度、酸碱度和变性剂对黄花石蒜凝集素活性和构象的影响

采用荧光光谱研究了不同温度、pH和变性剂对黄花石蒜凝集素(Lycoris aureaagglu-tinin,简称LAA)凝血活性和分子构象的变化关系,结果表明:LAA具有较强的温度和酸碱度的耐受性,经过3种变性剂的处理都能使LAA分子构象发生不同程度的变化并导致活性的丧失,浓度为6 mol/L的盐酸胍和脲,20 mmol/L的SDS可以使LAA完全丧失凝血活性,荧光光谱的变化表明了这种变性过程具有阶段性.

雪花莲外源凝集素基因及其应用

简明阐述了植物外源凝集素的特点和功能。对雪花莲外源凝集素 ( GNA)的体外抗虫性及