从石蜡包埋的皮肤组织中提取核酸的两种脱蜡方法比较

探讨从石蜡组织中提取核酸的简便、实用方法,比较两种脱蜡方法对DNA质量的影响.取收集的20例包埋好的银屑病皮损组织,分别用二甲苯和TES溶液脱蜡、酚-氯仿提取,然后检测DNA的浓度及纯度,并用PCR扩增方法检测哪种脱蜡方法对提取DNA更有优势.结果表明,用TES溶液脱蜡提取DNA的D260/D280=1.6～1.8的比例为60%,而二甲苯脱蜡的比例为35%.从实用、快速和经济的角度综合考虑,TES溶液脱蜡、酚-氯仿提取是值得推荐的石蜡组织DNA提取方法.

改良DNA提取法对皮肤结核PCR检出率的影响

目的探索适用于石蜡包埋皮肤组织的DNA提取方法,提高结核分支杆菌PCR检出率。方法选择明确诊断的结核性肉芽肿或怀疑结核性肉芽肿的皮肤病理标本46例,分别以二甲苯脱蜡-试剂盒法和TES脱蜡-改良试剂盒法提取总DNA,荧光PCR扩增后分析结核分支杆菌的阳性检出率,并与抗酸染色的结果进行比较。结果TES脱蜡-改良试剂盒法提取的总DNA浓度显著高于二甲苯脱蜡-试剂盒法(P<0.05),并且提取的DNA质量更好。TES脱蜡-改良试剂盒法所提DNA的PCR总体阳性率显著高于二甲苯脱蜡-试剂盒法(P<0.05)。改进后的DNA提取方法荧光PCR的阳性检出率较抗酸染色高(P<0.05)。抗酸染色阳性的标本与PCR检测结果有较好的一致性(Kappa=0.804),但抗酸染色阴性的标本与PCR检测结果的一致性较差(Kappa=0.257)。结论TES脱蜡-改良试剂盒法提取石蜡包埋皮肤组织的总DNA提取率和提取质量高于二甲苯脱蜡-试剂盒法,显著提高了结核分支杆菌的PCR阳性检出率。