石蜡组织切片制作原理引入口腔组织病理学实验课的探讨

目的探讨石蜡组织切片制作原理引入本科口腔组织病理学实验课程的应用效果。方法2020年9—12月以自愿参加学习的郑州大学2017级口腔专业59名本科生为研究对象,实验课开课前讲授石蜡组织切片制作原理和HE染色理论知识,通过调查问卷的形式评价课程效果。结果调查问卷结果显示,57名学生(96.61%)认为该课程有助于实验课中组织切片学习且增加对实验课的兴趣。在口腔组织病理实验课中,39名学生(66.1%)观察到非学习组织结构或异常结构(情况),其中36名学生(92.31%)观察到的异常结构在课程中有讲述。结论石蜡组织切片制作原理引入本科口腔组织病理学实验课程,增强了学生对实验课的兴趣,有助于实验课中读片学习,有效提升了实验课的教学质量。

用Bouin液作固定剂制作石蜡组织切片标本的方法

在制作石蜡组织切片标本的实践中,我们选用Bouin液作为组织的固定剂。制作过程中每个环节都很重要,我们体会到要做出高质量的组织切片标本,必须严格把握好制作中的每一步骤。

制作石蜡组织切片取材注意事项浅谈

石蜡组织切片制作广泛应用于形态学实验教学用片及医院病理检查切片制作过程中，而取材是切片制作的第一关，取材的好坏直接影响到最后切片制作的效果。

肾活检石蜡组织切片的若干问题及处理

肾活检标本的石蜡切片较常规石蜡组织切片有更高的要求,是病理工作中难度较大的技术工作。一张优质的病理制片是肾脏病理诊断的基础,其关键在于石蜡组织切片的质量,这也是各医院自主开展肾穿刺活检的技术瓶颈,制约了肾病病理诊断技术的发展。作者通过多年的肾病专科病理技术工作实践和文献资料学习,将肾活检石蜡组织切片中遇到的问题和处理措施总结如下。

不同保存条件石蜡组织切片PD-L1抗原稳定性的变化分析

近年抗PD-1/PD-L1免疫治疗药物已广泛应用于多种晚期肿瘤的治疗,因此保证PD-L1免疫组化结果的准确性尤为重要。免疫组化技术是对组织或细胞中的抗原进行定性、定位或定量的方法。抗原免疫活性的高低直接影响抗原的检出率和准确率。石蜡组织切片长时间保存会导致组织抗原活性的丢失,因此长期有效保存石蜡组织切片的抗原活性是免疫组化准确检测的基础。

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

目的探讨肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色方法在Alport综合征(AS)患者诊断中的应用,从而为AS的诊断提供新的技术手段。方法将对照组及已确诊的X连锁型、常染色体隐性遗传型AS及血尿患儿各2例肾组织分别进行石蜡切片Ⅳ型胶原α3和α5链免疫组织化学染色和冰冻切片的间接免疫荧光染色,比较分析染色结果。具体方法根据PV-9000试剂盒提供的实验方法,进行染色。采用高压锅加热、胃蛋白酶消化和蛋白酶消化3种抗原修复方法分别对正常肾组织切片进行抗原修复,并比较其修复效果。免疫荧光染色采用间接免疫荧光染色法。结果肾小球基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链免疫组织化学染色在对照和血尿组为连续的线状阳性;在X连锁显性遗传型女性患儿为间断线状阳性,在男性患儿为阴性;在常染色体隐性遗传患者均为阴性,在肾小囊及部分肾小管基底膜上Ⅳ型胶原α5链为阳性。结果均与免疫荧光染色法结果一致。结论肾脏组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法可用于诊断AS,为诊断AS提供了新的手段。

家鸽器官石蜡组织切片制作与观察

家鸽是重要的经济动物和实验动物。目前关于家鸽形态结构的基础研究比较少,为了丰富家鸽的基础形态学资料,并为相关研究提供科学参考,笔者制作了家鸽石蜡连续切片,并用倒置显微镜采集图像进行观察分析。结果表明:该方法可清晰观察到家鸽气管、肺脏、胰腺和脊髓的组织结构。

FISH检测石蜡包埋组织切片的理想消化时间

目的探讨石蜡包埋组织切片进行荧光原位杂交(FISH)检测前合适的酶消化时间。方法62例乳腺癌石蜡包埋组织切片,将其中的21张石蜡包埋的组织切片进行间隔5min的梯度时间酶消化,然后光镜下及加入DAPI后荧光显微镜观察。随后对剩余的41张切片继续杂交过程,对杂交信号进行观察。结果15～20min是一个比较理想的消化时间,背景干净,杂交信号理想,能够很好地进行判读。对剩余的41张石蜡包埋切片进行15～20min的消化后均获得了满意的杂交信号。结论15～20min是石蜡包埋切片理想的消化时间。不同组织标本及实验室间略有差异。故建议不同实验室甚至不同批次的标本在进行FISH技术杂交检测之前,应首先对酶消化时间进行调整。

驴皮肤石蜡组织切片制作技术的探讨

皮肤组织与其他组织不同,具有一定的特殊性,其特点是纤维组织多、细胞组织少、组织硬韧。与石蜡相容性差,按常规技术难获满意切片。本实验以驴的皮肤组织为实验材料,探讨制作优质驴皮肤组织切片的技术,为后续实验驴真皮中胶原蛋白的定性和定位研究奠定基础。结果表明,用常规方法制作优质的驴皮肤组织切片时在10%甲醛固定液中固定7d,低熔点蜡锅浸蜡1h,高熔点蜡锅浸蜡2h,制作出的石蜡切片的效果最好。

小鼠皮肤组织石蜡切片制作经验

皮肤组织是动物体最大的器官,覆盖于身体表面,由表皮、真皮、皮下组织及附属器组成。由于皮肤的层次多,质地坚韧,各层之间的致密程度存在很大差异,使得皮肤组织切片中易出现皱褶、组织碎裂、欠完整等不良现象,因此在石蜡切片制作过程中需根据其独特的结构特点采用不同的处理方式,我们通过不断地摸索改进,整理出一套适合于小鼠皮肤组织脱水、透明、浸蜡及染色的方法,现报道如下。1材料与方法1.

肾组织石蜡切片免疫荧光检测在诊断X连锁Alport综合征中的应用

目的:建立X连锁Alport综合征(XLAS)肾组织石蜡切片型胶原A5链免疫荧光检测方法,探讨其临床应用价值。方法:将对照组及XLAS患儿各4例肾组织,分别行石蜡切片及冰冻切片型胶原A5链间接免疫荧光染色,比较分析染色结果。石蜡切片分别采用微波修复、胃蛋白酶消化及微波修复+胃蛋白酶消化三种抗原修复方法进行修复,比较三者的修复效果。结果:单独微波修复、胃蛋白酶消化均不能修复肾组织型胶原A5链,微波修复+胃蛋白酶消化法可修复A5链。组织经微波修复10min,胃蛋白酶消化10min后,肾小球基底膜型胶原A5链免疫荧光染色在对照组患儿为连续线状阳性表达,在X连锁遗传型女性患儿为间断线状阳性,男性患儿为阴性。结果均与冰冻切片免疫荧光染色结果一致。结论:经微波修复+胃蛋白酶消化双抗原修复法的石蜡切片免疫荧光检测肾组织型胶原A5链能较好地应用于XLAS诊断,可对既往临床不典型XLAS病例进行回顾性诊断,为XLAS的诊断和研究提供了一种可靠的技术手段。

石蜡组织FISH检测的关键技术点分析

石蜡组织切片的FISH技术在临床及科研工作中的应用日益广泛,但实验结果的不理想不仅给操作人员和诊断医生带来困扰,也制约着该技术的普及。基于本实验室长期实践经验,对其关键技术点,诸如切片质量、脱蜡、预处理、酶消化、加探针及变性杂交、玻片洗涤、荧光观察系统等进行分析,并针对实验中存在的常见问题提出相应的解决方法。

病理组织石蜡切片HE染色中的常见问题及解决方法

分析病理组织石蜡切片HE染色中的常见问题及解决方法,病理组织石蜡切片HE染色技术作为病理实验室基本方法之一,具有较高的使用价值,对病理石蜡切片HE染色制作过程的操作程序,可能出现的问题以及解决方法进行了归纳总结。确保组织固定完全及时、脱水彻底、透明速度、浸蜡充分、切片较薄、染色良好等,一张好的HE切片是保证病理正确诊断的关键,切片质量的好坏,可直接影响病理诊断的及时性与准确性。方法:选取我院病理科2000张病理组织切片染色及6名病理技术人员操作作为研究对象,分析病理组织切片染色中的常见问题原因,提出并实施解决该问题的方法;对比解决方法实施前与实施后的病理组织石蜡切片HE染色问题发生率、病理组织石蜡切片优良率,以及病理技术人员在切片染色过程中的操作工作质量评分。结果:解决方法实施后的病理组织石蜡切片HE染色问题发生率低于解决方法实施前,病理石蜡切片优良率高于解决方法实施前(P<0.05);解决方法实施后病理技术人员工作质量评分中的石蜡切片HE染色质量、操作规范、工作情况反馈得分高于解决方法实施前(P<0.05)。结论:病理组织石蜡切片HE染色问题会在一定程度上影响病理诊断结果的准确率,分析其常见问题并采取相应的解决方法,有助于避免问题发生,降低病理组织石蜡切片HE染色问题发生率,且能提高病理石蜡切片优良率,提升病理科病理技术人员的工作质量。

鱼类组织切片技术的改进

鱼类组织切片技术的改进各种方法制片效果图１—５常规方法用二甲苯作为透明剂和石蜡的有机溶剂的石蜡切片图为发眼的卵其大部分卵黄破碎，切片不完整。以松油醇代替二甲苯作为透明剂和石蜡有剂溶剂的石蜡切片图为同一发眼的卵其卵黄完整。切片规整。以松油醇代替二甲苯作...

一步法分离石蜡切片DNA的改进与鉴定

目的改进一种以含蛋白酶K的裂解液作用于石蜡包埋处理的细胞、分离DNA粗提液用于PCR扩增的实验方案。方法石蜡包埋组织切片经常规脱蜡处理,用蛋白酶K裂解液洗脱细胞,55℃消化3 h后离心,吸取上清液;分光光度法检测DNA酶裂解液质量和浓度;以之为模板分别扩增人线粒体基因微卫星多态D310区、ATPase6基因区和核基因HBB、BRCA1等的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测分析PCR扩增情况,并测序验证扩增产物。结果以石蜡切片的DNA裂解粗提液为模板,扩增目的 DNA片段阳性率可达100%;获得序列分析验证。结论改进的蛋白酶K裂解液一步洗脱消化法操作简单、过程快捷、费用低廉,能快速有效地分离石蜡组织切片DNA,用于后续PCR扩增检测,具有较高效率。

石蜡切片在不同保存条件下抗原稳定性分析

目的采用不同的保存条件处理石蜡组织切片,检测组织切片内抗原在不同保存条件下的稳定性,从而找到合适的石蜡组织切片保存条件。方法分别将Alk、CA125、CD10、Cox2、ER、p16、p63、Her2、Pax5、PD-L1等10个抗原阳性表达的组织蜡块连续切片后,65℃烤片2 h,作为无蜡封组;蜡封组将空白石蜡切片捞取在石蜡切片组织的表面,以达到蜡封、隔绝空气的目的。将无蜡封组和蜡封组石蜡切片在室温、2~8℃和-20℃保存,并在0 h、1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月时,使用相同批号的免疫组织化学试剂进行染色,分析不同保存条件下抗原的稳定性。另外,无蜡封组和蜡封组在37℃条件下进行2周的老化试验,以观察高温老化条件下组织切片内抗原的稳定性。结果蜡封组染色效果均差于无蜡封组。石蜡切片在保存7月时,Alk、ER、Pax5抗原项目染色明显减弱,Her2抗原阳性组织切片室温保存4月时染色已为阴性,其它抗原项目抗原虽有丢失,但免疫组织化学染色结果差异不显著。结论-20℃条件下,组织切片保存抗原稳定性最好,2~8℃条件下保存效果次之,室温保存效果最差;细胞核抗原稳定性最差;无蜡封处理的石蜡切片抗原保存效果好于蜡封处理。低温保存是储存石蜡组织切片的良好条件,但蜡封处理后的石蜡切片免疫组织化学染色弱于无蜡封组。

强蓝光照射诱发大鼠视网膜组织结构及功能变化的实验研究

目的:观察不同时长强蓝光照射后大鼠视网膜组织结构及功能的变化。方法:选取8周龄健康无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠48只,随机分为对照组(n=12)和3、6、12h实验组(n=12),对照组大鼠接受自然光照,实验组大鼠每日分别接受465±5nm、1000±100lx蓝光照射3、6、12h,连续光照8wk。采用光学相干断层扫描(OCT)、眼底荧光素血管造影(FFA)及石蜡病理组织切片苏木素-伊红(HE)染色法观察并分析不同方位及不同分层视网膜厚度、组织结构和功能变化。结果:OCT检查示,各组大鼠视盘上方、下方、鼻侧、颞侧视网膜厚度组间比较均有差异(P<0.05),且除对照组和3h实验组上方视网膜厚度无差异(P>0.05),其余各组间各方位视网膜厚度比较均有差异(P<0.05);各组大鼠平均视网膜总厚度、内界膜(ILM)-内核层(INL)厚度、外丛状层(OPL)-光感受器外节段(OS)厚度、视网膜色素上皮(RPE)层厚度比较均有差异(P<0.05),其中各组大鼠平均视网膜总厚度、OPL-OS厚度两两比较均有差异(P<0.05),对照组分别与3、12h实验组大鼠ILM-INL厚度比较均有差异(P<0.05),12h实验组分别与对照组和3、6h实验组大鼠RPE层厚度比较均有差异(P<0.05)。FFA检查示,对照组和3h实验组大鼠眼底均无明显荧光渗漏,6、12h实验组大鼠视网膜出现明显荧光渗漏和透见荧光,脉络膜背景荧光增强。HE染色结果示,实验组大鼠视网膜视细胞层细胞萎缩、凋亡,视细胞数目减少,部分细胞核淡染,随光照时间延长,RPE层出现萎缩变薄,且对照组和实验组视网膜视细胞数目具有显著差异(P<0.05)。结论:强蓝光照射可导致大鼠视网膜厚度变薄,且不同分层视网膜厚度变薄程度不同,也可导致视细胞层细胞数目减少甚至消失,RPE层局灶性萎缩,血管通透性改变,且随光照时间延长,视网膜组织结构及功能变化越明显。

自配染液进行整块组织H.E染色制片的研究

本实验利用自行配制的染液，通过具体实验进行整块组织H．E染色制片。此法制成的切片染色效果较好，色彩更加均匀。