铜离子胁迫对淡水石首鱼幼鱼急性毒性、抗氧化及免疫相关酶活性的影响

[目的]本研究旨在探究铜离子对淡水石首鱼幼鱼毒性效应的机制,完善铜离子对鱼的生态毒理学研究并指导淡水石首鱼的健康养殖。[方法]在(17±1)℃曝气自来水中,采用等间对数法在0.1~1.5 mg·L^(-1)Cu^(2+)范围内选取5个梯度探究Cu^(2+)浓度对淡水石首鱼幼鱼死亡率的影响;选取0.197 mg·L^(-1)Cu^(2+)进行96 h胁迫试验并取样,测定其过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GPx)、谷胱甘肽(GSH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、Na^(+)-K^(+)-ATP酶(Na^(+)-K^(+)-ATPase)、α-淀粉酶(α-AMS)、脂肪酶(LP)和胃蛋白酶(PP)活性和皮质醇(COR)、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)。[结果]Cu^(2+)胁迫淡水石首鱼幼鱼96 h死亡概率的回归方程为Y=1.4355X+0.0382,(R^(2)=0.8273),半致死浓度为0.291 mg·L^(-1),安全浓度为0.029 mg·L^(-1)。Cu^(2+)胁迫对CAT、SOD、GPx、GSH、ALT、AST、Na^(+)-K^(+)-ATPase、α-AMS、LP、PP等酶活性和COR、MDA含量及T-AOC影响显著。在受到Cu^(2+)胁迫后SOD、GPx、GSH、Na^(+)-K^(+)-ATPase、α-AMS、LP、PP活性和COR含量及T-AOC均显著上升,在4 h时达到最大,随后不同程度下降,其中T-AOC和Na^(+)-K^(+)-ATPase、α-AMS活性在96 h又恢复正常水平。CAT活性在48 h显著高于对照组,96 h又恢复正常。MDA含量及ALT和AST活性受Cu^(2+)胁迫后不断升高,MDA含量从4 h开始,ALT和AST活性从12 h开始显著高于对照组,并均在96 h达到最大值。[结论]Cu^(2+)对淡水石首鱼幼鱼的危害等级为剧毒,0.197 mg·L^(-1)Cu^(2+)胁迫对肝脏抗氧化酶、鳃Na^(+)-K^(+)-ATP酶和肠道消化酶活性均产生显著影响,对SOD、GPx、GSH、Na^(+)-K^(+)-ATPase、α-AMS、PP等酶活性和COR含量及T-AOC起到先促进后抑制作用,对CAT、ALT、AST、LP酶活性和MDA含量起到促进作用。CAT应激响应速度较其他抗氧化酶滞后,SOD是受到Cu^(2+)胁迫最敏感的抗氧化酶,可作为鱼类早期Cu^(2+)污染的首选指示指标。

基于DNA条形码技术对常见石首鱼科鱼胶的物种鉴定

目的运用DNA条形码技术对常见石首鱼科鱼胶进行物种鉴定。方法通过对26份鱼胶样品基因组DNA提取,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome c oxidase,COI)基因、测序,用生命条形码数据(barcode of life data,BOLD)物种鉴定系统,与数据库中已有鱼类序列进行比对分析,鉴定出各鱼胶的物种;根据Kimura双参数模型计算样品序列遗传距离,并将所得序列使用邻接法(neighbor-joining,NJ)和最大简约法(maximum parsimony,MP)构建系统发育树,进行聚类分析。结果26份鱼胶样品通过鉴定引物“Fish-F”“Fish-R”均可实现扩增,条带清晰,扩增和测序成功率均为100%;BOLD鉴定结果显示,26份鱼胶样品中23份能够确定物种来源(相似性达98%以上),包括石首鱼科12属15种鱼类,且多数为外来物种,另外3份鱼胶可推测其近缘物种。此外,系统发育树聚类分析结果与物种鉴定结果一致。结论目前石首鱼类鱼胶来源物种较多,且多为外来基原鱼种。DNA条形码技术与BOLD鉴定系统相结合,可对大部分鱼胶进行准确的物种鉴定。

眼斑拟石首鱼生长特性的初步研究

本文研究了眼斑拟石首鱼生长的特性以及外界因素对其生长的影响。未成熟鱼体重与体长关系为W=0.0123SL^(3.0511)(r=0.9919,3.5≤SL≤42cm),成熟鱼其关系为W=0.0042SL^(3.2422)(r=0.9098,70≤SL≤93cm);此鱼幼鱼全长与体长呈直线关系TL=1.1506SL+0.2866(r=0.9852,3.0≤SL≤7.5cm)。在适宜的温度条件下(尤其在23～28℃)鱼的生长快速,平均最大生长率达4.88g/d。在海水养殖中引起鱼死亡的临界DO值为2.0mg/dm^3左右。我国北方养殖一年鱼的体重可达500g,南方可达1000g左右。其生长率第一年大于1.16g/d,第二年大于2.14g/d,第三年大于3.97g/d,该种鱼在我国是一种有发展前途的新品种。

石首鱼或成深远海养殖潜力品种

石首鱼因脑中耳石大而得名,《淳熙三山志》卷四二记载:“石首鱼,头中有石如棋子”。石首鱼是我国重要的经济鱼类,金鱼、大黄鱼、黄唇鱼等高经济价值的鱼类均属于石首鱼科。作为广东沿海城市的重要经济鱼类,石首鱼类被视作深远海养殖的适宜品种,多地正开展石首鱼类的养殖试验,为“粤海粮仓”注入新生力量。

基于线粒体CO1基因的DNA条形码在石首鱼科(Sciaenidae)鱼类系统分类中的应用

采用CO1基因特异扩增测序及与GenBank已有序列联配分析的方法,进行了石首鱼科19属30种鱼类75个CO1基因片段的序列比较和系统进化研究,结果表明,石首鱼科鱼类该片段的平均GC含量为48.3%,其中第2密码子位点含量最高(51%-58.4%,平均56.6%),第1密码子变化范围最大(27.6%-54.1%,平均44.9%),第3密码子差别较小(41.6%-43.6%,平均42.7%)。依据Kimura-2-parameter模型,30种石首鱼科鱼类种内遗传距离平均值为0.006,种间为0.210,种间遗传距离是种内的35倍;在分子系统树上,28个种(93.3%)可形成单系,18个属(94.7%)可聚为独立的分支;与形态学分类不同的是,由黑鳃梅童鱼(Collichthys lucidus)与棘头梅童鱼(C.niveatus)的遗传距离(0.004)推断二者遗传变异尚未达到种的分化水平,灰鳍彭纳石首鱼(Pennahia anea)与白姑鱼(Argyrosomus argentatus)的形态学特征相似性和条形码序列同源性都提示二者可能为同种异名,而红牙(Otolithes ruber)印度洋和南海两个地理群体间的遗传分化已经达到种的水平。本研究证明线粒体CO1基因可作为DNA条形码对石首鱼科鱼类进行有效的物种鉴定,亦可用于探讨石首鱼科的属、种分类单元系统发育问题。

红拟石首鱼海豚链球菌分离、鉴定及致病性研究

2001年9月—12月,浙江舟山部分网箱养殖红拟石首鱼发生了陆续死鱼,发病鱼表现为眼球突出、浑浊,失去方向性,皮肤溃疡等症状。从病鱼的肾脏和肝脏中分离到菌株SO-2和SO-3,对两分离株进行了致病性试验,发现两者对红拟石首鱼、罗非鱼及小白鼠均有致病力,SO-2和SO-3对红拟石首鱼、罗非鱼及小白鼠的LD50分别为4.8×108CFU/尾和1.9×107CFU/尾2、.8×108CFU/尾和8.3×107CFU/尾及9.6×106CFU/只和4.2×106CFU/只,试验感染鱼出现眼球突出、浑浊及失去方向性等与自然发病相似症状,确定该两株菌为致病菌。两分离株为革兰氏染色阳性,呈链状球菌,β溶血,10℃生长,45℃不生长;接触酶阴性,水解七叶灵、精氨酸;VP试验、脲酶和马脲酸试验阴性,发酵葡萄糖、水杨苷、蔗糖和淀粉,不发醇阿拉伯糖、菊糖、乳糖、蜜二糖、棉子糖和山梨醇。分离株对氨卞青霉素、万古霉素和先锋Ⅴ等高度敏感,对庆大霉素、复方新诺明、林可霉素、氟哌酸等不敏感。应用16SrRNA基因进行的菌株PCR鉴定,确定该两株菌为海豚链球菌。

新发现的红拟石首鱼溃疡病病原海藻施万氏菌的分离和分子鉴定

首次从患溃疡病的养殖红拟石首鱼 (Scinenopsocellata)病灶和肠、肝、肾等处分离到多株细菌 ,发现其中两株经注射和创伤感染后 ,能引起体表溃疡 ,肠道积水等症状 ,与自然发病表现类似。经过生理生化鉴定为弧菌科 (Vibrionacea)施万氏菌属 (Shewanella) ,进一步用1 6SrDNA扩增测序鉴定该菌为海藻施万氏菌 (Shewanellaalgae) ,其主要特征为 :革兰氏阴性 ,TCBS生长 ,产硫化氢 ,嗜盐 ,不利用葡萄糖产酸或产气 ,也不发酵其他糖类产酸 ;蛋白酶 ,硝酸盐还原酶 ,氧化酶阳性 ;具有较强的溶血活性。利用作者研制出的PCR检测试剂盒 ,对海藻施万氏菌进行了快速的分子鉴定。

大黄鱼微卫星标记引物在石首鱼科几个近缘种中的通用性研究

本研究分析了8对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)微卫星标记引物在石首鱼科5个亚科8属10个种中的通用性。结果表明,大黄鱼微卫星标记引物在黄鱼亚科鱼类中有较高的通用性,其中位点PC1C4,PC4H12,PC5E11,PC8F5,PC10F10,PC10G6的引物可在小黄鱼(P.polyactis)和棘头梅童鱼(Collichthys lucidus)中获得清晰扩增条带,位点PC7H4引物也可在小黄鱼中扩增,上述可扩增位点在两个种中均得到多个等位基因,表现出较高的多态性;大黄鱼微卫星标记引物在白姑鱼亚科、叫姑鱼亚科、牙亚科及石首鱼亚科鱼类中也有较高的通用性,其中在银牙(Otolithes argenteus)中得到6个可扩增位点(PC1C4,PC4H12,PC7A2,PC7H4,PC10F10,PC10G6),在鮸状黄姑鱼(Nibea miichthioides)、丁氏(Wak tingi)和眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)中各得到5个可扩增位点,在浅色黄姑鱼(N.Chui)和尖头黄鳍牙(Chrysochir aureus)中各得到4个可扩增位点,在皮氏叫姑鱼(Johnius belengerii)中得到3个可扩增位点(PC7H4,PC10F10,PC10G6)。位点PC10F10和PC10G6引物在10个种中都可得到清晰的扩增产物,可作为10种石首鱼的通用标记。引物PC5E11和PC8F5只在黄鱼亚科中得到扩增产物,为黄鱼亚科特异性标记。

眼斑拟石首鱼暴发性传染病病原初步研究

1999年 8～ 10月广东沿海网箱养殖的眼斑拟石首鱼 (Sciaenopocellatus)流行一种暴发性传染病 ,经抗菌药或杀虫剂处理均无效。为查明病因 ,取病鱼镜检 ,未发现寄生虫 ,也分离不到细菌。电镜观察 ,可见病鱼的脾脏细胞内有截面为六边形、直径约 15 0nm的病毒颗粒 ,且脾、肝、肾都有一定程度的病变 ;用 2对日本所报道的虹彩病毒特异引物进行PCR扩增 ,在病鱼的脾脏样品中扩增出 2条大小与所报道的虹彩病毒扩增产物吻合的特征带 。

光照对眼斑拟石首鱼行为和摄食的影响

设置4种光照强度梯度和红、白、橙、绿和蓝5种光照颜色,研究了光照对眼斑拟石首鱼Sciaemops ocelletus摄食和分布行为的影响。试验结果表明,眼斑拟石首鱼对光色和光强均有反应;从光照颜色对眼斑拟石首鱼的摄食影响来看,蓝光对其摄食的影响最大,4种光照强度下的摄食率都为零,其次是绿光和橙光;从光照强度对眼斑拟石首鱼分布的影响来看,鱼对中强度的橙光和红光表现为正趋性,对其他各光强和光色均表现出负趋性。

4种常用渔药对眼斑拟石首鱼鱼种的急性毒性

本研究用敌百虫、甲醛、硫酸铜、高锰酸钾4种常用渔药对眼斑拟石首鱼鱼种进行了急性毒性实验。结果表明敌百虫的24h半致死浓度(TL_m)为1.34 mg·L^(-1),48hTL_m为0.41 mg·L^(-1),安全浓度为0.04mg·L^(-1);甲醛的24hTL_m为209.35 mg·L^(-1),48hTL_m为150.37 mg·L^(-1),安全浓度为15.04 mg·L^(-1);硫酸铜的24hTL_m为32.73,48hTL_m为16.51 mg·L^(-1),安全浓度为1.65 mg·L^(-1);高锰酸钾的24hTL_m为0.98·L^(-1)mg,48hTL_m为0.6mg·L^(-1),安全浓度为0.06mg·L^(-1)。根据实验结果,敌百虫、硫酸铜和高锰酸钾在治疗眼斑拟石首鱼鱼种疾病时应要慎用,甲醛对于眼斑拟石首鱼鱼种的疾病预防和治疗有一定的实际用途。

恩诺沙星在眼斑拟石首鱼体内的药物代谢动力学

应用反相高效液相色谱法 (RP- HPL C)研究了恩诺沙星在眼斑拟石首鱼 (Sciaenops ocellatus)体内的药物代谢动力学。实验数据经 DAS药代动力学分析软件分析后得出 :腹腔注射组血浆的药时数据符合一级吸收二室模型 ,动力学方程为 :C =4 .92 5 e- 1 .4 52 t +2 .730 e- 0 .0 75t ,其主要药代动力学参数 :AU C37.5 33mg· L- 1· h、Cmax 4 .74 7mg/ L、Tmax0 .75 0 h、t α0 .4 77h、t β9.2 92 h、Vd/ F 1 .6 76 L / kg、t Ka0 .1 70 h、Ka 4 .0 81 / h、K 6 .71 4 / h、K1 0 0 .1 91 / h、K1 2 0 .76 9/h、K2 1 0 .5 6 6 / h;灌服组血浆的药时数据符合一级吸收一室模型 ,动力学方程为 :C =6 .4 82 (e- 7.0 92 t- e- 1 0 .356 t) ,其主要药代动力学参数 :AU C1 5 .80 5 mg· L- 1 · h、Cmax2 .770 mg/ L、Tmax1 .5 0 0 h、t α4 .989h、Vd/ F2 .0 72 L/ kg、Ka7.0 92 /h、K 1 0 .35 6 / h。结果表明 ,腹腔注射给药比灌服给药吸收快 ,血药浓度达峰时间短于灌服给药 ,但血药浓度峰值明显高于灌服给药 (P<0 .0 5 ) ,血浆中恩诺沙星的回收率为 94 .5 79%。

饲料中添加龙须菜对眼斑拟石首鱼生长、脂肪酸组成、免疫及肠道的影响

为了研究添加龙须菜（Gracilaria lemaneiformis）对眼斑拟石首鱼（Sciaenops ocellatus）生长、脂肪酸组成、免疫和肠道的影响,在饲料中分别添加0（对照组）、1%、2%、3%、4%和5%的龙须菜,饲养初始体质量（9.38±0.06）g的眼斑拟石首鱼8周。结果表明,添加龙须菜对鱼体成活率、增重率（WG）和特定生长率（SGR）均不存在显著性影响（P〉0.05）,但1%~4%组的增重率均高于对照组,1%组的饲料效率和特定生长率最高;所有龙须菜添加组全鱼脂肪酸中的二十二碳六烯酸（DHA）均高于对照组,且添加量为5%时DHA显著高于对照组（P〈0.05）;肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）活性在4%组显著高于对照组（P〈0.05）;3%组肠道黏膜褶最高且组织状况最好。由此可见,饲料中添加龙须菜对眼斑拟石首鱼生长有一定的促进作用,且添加适量龙须菜可以改善眼斑拟石首鱼的肝脏和肠道健康,提高全鱼DHA含量。

淡水石首鱼幼鱼外部形态与内部解剖学特征

世界上275种石首鱼类中仅有极少数终生生活在淡水中,北美洲特有的淡水石首鱼(Aplodinotus grunniens)是其中一种,其形态学和内部解剖学特征研究对探讨石首鱼类的系统发育和进化具有重要价值。本研究较系统地对淡水石首鱼幼鱼的外部形态学可量可数性状进行测量,对内部主要器官结构及矢耳石特征进行解剖学观察。结果显示:除了吻端、颐部和峡部外,淡水石首鱼体被两种鳞片,头部两侧的鳃盖及眼睛周边覆盖小圆鳞,头后身体包括喉部均被栉鳞,且在头背交界处存在两种鳞片的过渡类型;侧线鳞从头后一直延伸至尾鳍的1/2处。腹鳍第一鳍条膜稍延长形成特有的鳍丝。黏液孔主要分布在颐部,为五孔型;具有犬牙状的颌齿和咽齿,所有齿尖均向口腔内部方向弯曲,上咽齿盘分为左右对称的2个咽齿盘,而下咽齿盘愈合为一体;消化道主要由口咽腔、较短的食道、卜形胃、具有2个弯转的肠道及肛门组成,在胃与肠交界处具有7个环状排列的指状幽门盲囊。矢耳石的形态特征与中国的黄唇鱼相似。基于外部形态学和内部解剖学特征,讨论分析了淡水石首鱼与中国石首鱼物种的亲缘关系。淡水石首鱼归属于低级底栖肉食性鱼类,这与其特定的生态习性和摄食特性等相符合。本研究旨在为中国淡水石首鱼人工驯养和紫黑翼蚌的规模化寄生繁育奠定基础,也为探讨石首鱼类在海淡水区域地理格局演化提供了基础资料。

基于RAG1基因的中国近海13种石首鱼科鱼类系统进化关系

为探讨中国近海石首鱼类的系统进化关系,通过PCR扩增和序列测定,获得了石首鱼类9属13个种类的RAG1基因序列。对序列变异进行分析,基于Kimura双参数法计算属间和种间的遗传距离,并结合GenBank中的同源序列,以攀鲈为外群构建分子系统进化树。将所得的分子数据与形态学分类进行比较,推论如下:(1)中国近海石首鱼类分为两个类群。(2)叫姑鱼亚科与石首鱼亚科以极高的置信度(90%)聚类,并处于系统进化树的基部,支持了形态学上二者是原始种类的分类观点。(3)分子系统树显示黄姑鱼属比银姑鱼属更为原始,但二者在形态分类上归为一个亚科的观点有待进一步商榷。(4)支持尖头黄鳍牙与银牙置于同一牙亚科的不同属的观点。(5)支持了形态学上黄鱼亚科分化最晚的结论。

一种危害眼斑拟石首鱼的寄生涡虫及其防治

眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)俗称美国红鱼,又称红鼓鱼,是福建水产养殖业中重要养殖鱼类之一.它们生长速度快,对饲料的适应性强,饵料转化率高,一年即可养成1kg重的成品鱼,出口韩国,价格好.较之养殖大黄鱼具有成本低,经济效益好,资金周转快,成活率高等优点.福建省罗源湾的水质适于养殖美国红鱼,因此,近年大量投苗养殖,但在养殖中出现了各种各样的病害.我们在诊治美国红鱼幼鱼(100g左右)大量死亡的病例中,发现鱼鳃上寄生了一种罕见的涡虫,它们没有钩和吸盘,寄生方式特殊,由鱼鳃分泌的大量粘液和增生的组织将其包裹.涡虫的寄生造成幼鱼鳃丝间塞满了泥土样脏物及鳃丝严重缺损,鱼因呼吸困难而死亡.

眼斑拟石首鱼的生化组成及预测模式

测定了养殖眼斑拟石首鱼肌肉及鱼体中的蛋白质、脂类、灰分和水分等生化组成。分析了肌肉蛋白质中 17种常见氨基酸的含量。建立了以鱼体体重、体长、含水量与蛋白含量、脂肪含量、灰份、比能值的回归关系的预测模型。回归结果表明 ,眼斑拟石首鱼的鱼体组分与鱼体重、含水量间呈显著线性相关 ,而与全长则呈乘幂函数 ,基本呈立方关系 ,比能值与体重无相关性 ,其相关系数蛋白质 >水份 >灰分 >脂肪 >

眼斑拟石首鱼肌肉生长抑制素基因克隆及组织表达分析

肌肉生长抑制素（MSTN）基因对肌肉生长起负调控作用,在动物育种上具有潜在的应用前景。报道了眼斑拟石首鱼（Sciaenops ocellatus）的MSTN基因的序列结构特征及其组织特异性表达。MSTN基因具有3个外显子和2个内含子,编码376个氨基酸。在内含子Ⅰ和3′-UTR区内,分别发现了（TC）4CC（TC）4CT（TC）4和（AC）7微卫星序列。推断的眼斑拟石首鱼的MSTN氨基酸序列具很强的保守性,与石鼓鱼、金鲷、条纹石鮨、白鲈、金眼石鮨之间的相似性在90%以上。在结构上,眼斑拟石首鱼的MSTN包含N端信号序列（1～22氨基酸残基）,TGF-β前肽域（41～256氨基酸残基）,RXXR蛋白水解位点（264～267位的RARR）和TGF-β区域（282～376氨基酸残基）。在检测的10种组织中,MSTN只在眼斑拟石首鱼的肌肉、脑和眼组织中表达,其中在肌肉表达最强。

眼斑拟石首鱼胚胎及仔鱼、稚鱼发育的初步观察

本文初步观察描述了眼斑拟石首鱼胚胎发育及仔鱼、稚鱼的形态特征。眼斑拟石首鱼的卵径平均为０．９５ｍｍ，大多数含１个油球，约＜１０×１０－２含２个油球，１ｃｍ３卵含量约１０００粒。受精卵在２３～２４．３℃约２６ｈ孵化出仔鱼。在２５℃条件下，前半个月仔鱼日增长约０．２ｍｍ，稚鱼期日增长约１．０ｍｍ，幼鱼期日增长约１．５ｍｍ。仔鱼鳍的发育顺序为尾鳍、臀鳍、背鳍和腹鳍，最后为胸鳍。