小鼠破骨细胞钠钙交换体亚型1的表达与功能

目的钠钙交换体(Sodium-Calcium Exchange,NCX)是钙离子排出细胞的重要途径。本研究探讨小鼠破骨细胞表达NCX1的不同剪切异构体及其钠钙交换功能。方法培养小鼠破骨细胞,纯化后提取总RNA样本,通过PCR克隆和DNA测序鉴定破骨细胞表达NCX1的具体剪切异构体种类。再将NCX1读码框架亚克隆至过表达质粒pIRESpuro,转染HEK293细胞后观察细胞内游离钙离子浓度的变化。结果在小鼠破骨细胞内克隆得到NCX1BD和NCX1ABD两个剪切异构体,其中NCX1ABD为新发现剪切异构体。将NCX1BD和NCX1ABD亚克隆至pIRESpuro后转染HEK293细胞,成功获得过表达细胞株。细胞加载钙离子荧光染色剂Furo-2/AM,抑制细胞膜纳钾泵并降低细胞外钠浓度后可以观察到NCX1反向模式导致的细胞内游离钙离子浓度的上升。但NCX1ABD导致的细胞内钙上升仅为NCX1BD的40%左右(t-检验,P<0.001)。结论小鼠破骨细胞表达两种NCX1剪切异构体,其中NCX1ABD为新发现剪切异构体,可能具有较弱的钠钙交换功能。