降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽 (CGRP)对大鼠颅盖骨来源成骨细胞的影响 ,以进一步了解CGRP促进成骨的作用机制。方法 利用二次酶消化法培养的成骨细胞 ,加入含不同浓度CGRP的条件培养液 ,2 4小时后通过MTT比色 ,3 H TdR掺入以及细胞内碱性磷酸酶 (ALP)含量的测定来观察CGRP对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 CGRP可以明显促进成骨细胞增殖 ,而且作用呈剂量依赖性。CGRP对细胞内ALP含量无明显影响。结论 CGRP能够直接作用于成骨细胞并通过促进其增殖而有利于骨形成。

小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响

目的:构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响。方法:提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用PmeⅠ线性化后转化到含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响。结果:与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK)mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论:成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化。

降钙素基因相关肽对大鼠骨髓单核巨噬细胞破骨分化作用的实验研究

目的通过体外实验研究外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠骨髓单核巨噬细胞(BMMs)破骨分化能力的影响,为CGRP在抗骨质疏松治疗方面的应用提供理论依据。方法采用差速贴壁的方法分离出SD大鼠髓腔内单核巨噬细胞,原代培养并传代,在培养体系中添加含不同浓度CGRP(实验组:10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L;对照组:无CGRP)的破骨诱导液,对前体细胞进行破骨诱导7天后进行相关实验检测,分别采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)观察破骨细胞的生成能力;用RT-PCR方法检测破骨细胞系特征性基因(RANK、TRAP、NFATc1);Western-blot检测破骨特征性TRAP和RANK蛋白的表达;骨磨片甲苯胺蓝染色检测诱导的破骨细胞的骨吸收功能。结果 TRAP染色显示CGRP各浓度组镜下成熟破骨细胞的个数显著低于对照组,有统计学差异(P<0.05)并随CGRP浓度的增高成熟破骨细胞数减少,CGRP组间亦差异明显(P<0.05);RT-PCR检测破骨特征性RANK、TRAP、NFATc1 mRNA和Western-blot测破骨特征性TRAP、RANK蛋白的表达各CGRP组均低于对照组(P<0.05);骨磨片破骨细胞甲苯胺蓝染色后单倍视野下CGRP组破骨陷窝数量也明显少于对照组(P<0.05),且与药物组浓度与陷窝数量呈负相关性。结论 CGRP能够抑制BMMs向破骨方向的分化,为CGRP抗骨质疏松的治疗提供理论支持。

年龄相关的骨髓细胞分化对成骨和破骨影响的实验研究

目的 从骨髓细胞分化角度研究年龄相关的成骨和破骨细胞分化的机理 ,探讨老年性骨质疏松症的发生机理。方法 通过骨髓细胞培养 ,应用组织形态学、流式细胞仪分析和分子生物学技术 ,采用碱性磷酸酶 (AL P)染色和骨钙素检测等手段观察青年大鼠和老年大鼠骨髓细胞分化成成骨和破骨细胞的状况。结果 青年大鼠骨髓基质细胞 (MSCs)形成成骨细胞数比老年大鼠多 (P<0 .0 1 ) ;老年大鼠骨髓细胞形成破骨细胞数比青年大鼠多 (P<0 .0 1 )。结论 大鼠骨髓细胞分化成成骨细胞的能力与年龄呈负相关 ,分化成破骨细胞的能力与年龄呈正相关。

降钙素基因相关肽对兔成骨细胞OPG/RANKLmRNA表达的影响

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对成骨细胞核因子- κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)基因表达的影响,了解CGRP在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法:将体外培养的兔成骨细胞用不同浓度的CGRP处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)来观察成骨细胞两种目的基因(OPG, RANKL)的mRNA表达强度变化。结果:CGRP呈剂量依赖性的刺激成骨细胞OPGmRNA表达,同时亦下调RANKLmRNA表达。结论:CGRP通过调节成骨细胞OPG/RANKL的比值可间接地调节破骨细胞活性,从而影响骨代谢。

RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264．7分化成成熟破骨细胞

目的观察小鼠的单核／巨噬细胞RAW264．7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征。方法 RANKL诱导RAW264．7细胞6d后,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) 染色法观察TRAP阳性多核细胞,吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态;诱导RAW264．7细胞9d后,RT-PCR检测RAW264．7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其 RANKL诱导后变化;诱导RAW264．7细胞12d后,钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果 RAW264．7细胞TRAP染色阴性,单核或2个核,能表达破骨细胞表型和功能基因,无骨吸收功能。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞, 上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因。mRNA的表达。结论 RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱,是一种较好的破骨前体细胞模型。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成成熟破骨细胞。

多发性骨髓瘤细胞分泌外泌体对破骨细胞分化的调控及其机制

目的探究多发性骨髓瘤外泌体调控破骨细胞分化相关基因表达的功能及机制。方法为了探究多发性骨髓瘤细胞对破骨细胞分化的影响,实验分为control组(THP-1细胞)、OPM2组(THP-1+OPM2细胞)、U266组(THP-1+U266细胞)、OPM2+GW4869组(THP-1+OPM2细胞+GW4869)和U266+GW4869组(THP-1+U266细胞+GW4869)。提取OPM2和U266细胞分泌的外泌体(OPM2 exo和U266 exo),透射电镜观察外泌体结构,Western blot鉴定外泌体标志蛋白TSG101、Hsp70、CD9。为了探究外泌体对破骨细胞分化的影响,实验分为OPM2 exo组(THP-1细胞+OPM2 exo)、U266 exo组(THP-1细胞+U266 exo)和PBS组(THP-1细胞+PBS)。qRT-PCR检测所有组细胞中活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATc1)、细胞原癌基因c-Fos、组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)mRNA相对表达量,Western blot检测所有组THP-1细胞NFATc1、c-Fos、CTSK、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、动力蛋白激活蛋白4(dynactin 4,P62)蛋白表达量。结果OPM2 exo和U266 exo粒径在100 nm左右,“杯托”样结构,并且表达标志蛋白TSG101、Hsp70、CD9。相比于control组,OPM2组和U266组THP-1细胞NFATc1、c-Fos、CTSK mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.001),LC3Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),P62蛋白表达显著下调(P<0.001)。OPM2+GW4869组细胞NFATc1、c-Fos、CTSK mRNA和蛋白表达显著低于OPM2组(P<0.001),U266+GW4869组细胞NFATc1、c-Fos、CTSK mRNA和蛋白表达显著低于U266组(P<0.001)。相比于PBS组,OPM2 exo组和U266 exo组NFATc1、c-Fos、CTSK mRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.001),LC3Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),P62蛋白表达显著下调(P<0.001)。结论多发性骨髓瘤细胞外泌体可能通过促进细胞自噬诱导破骨细胞分化。

柚皮苷对破骨细胞分化和极化影响的初步探究

目的探究柚皮苷对破骨细胞分化和极化功能的影响。方法体外培养RAW264.7细胞,设置对照组(培养基不含柚皮苷)和实验组(培养基中柚皮苷剂量分别为2、20、200μg/L)连续培养7 d,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对比组间诱导分化结果,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)对比组间组织蛋白酶K(CK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、整合素β3(integrinβ3)和非受体酪氨酸激酶(c-src)mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法对比组间CK、MMP-9、integrinβ3、磷酸化产物p-src蛋白表达水平。结果与对照组相比,各实验组TRAP染色阳性细胞数显著降低(P<0.05);与对照组相比,20μg/L与200μg/L组CK、MMP-9、integrinβ3及c-src m RNA表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,20μg/L与200μg/L组CK、MMP-9、integrinβ3及p-src蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论柚皮苷对破骨细胞的分化和极化有一定的抑制作用,其作用机制可能与下调integrinβ3、c-src及p-src表达有关。

破骨细胞分化中NFATc1/miR-125a作用通路的研究

目的研究破骨细胞分化中miR-125a受转录因子NFATc1的调控模式及其作用机制,寻找骨代谢疾病新的治疗靶点。方法单核细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子-κB配体的受体激活剂(RANKL)诱导CD_(14)^+外周血单核细胞(PBMCs)向破骨细胞分化。生物信息学运算预测结合于miR-125a启动子区域的转录因子,过表达实验和抑制实验用于研究转录因子对miR-125a在破骨细胞分化中表达的影响,荧光素酶报告基因实验验证miR-125a与其靶基因之间的结合,凝胶迁移电泳实验(EMSA)和染色质免疫沉淀实验(CHIP)验证转录因子与miR-125a启动子区域的结合。结果凝胶迁移电泳和染色质免疫沉淀实验证明了NFATc1结合于miR-125a的启动子靶位点。过表达NFATc1抑制miR-125a的表达;抑制NFATc1的表达则升高miR-125a的表达。结论 miR-125a在作用于其靶基因——肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6的同时受到转录因子NFATc1的负反馈调控,发挥其在破骨细胞分化中的调控作用。表明通过调控NFATc1的表达来改变miR-125a的表达,可能成为骨代谢疾病新的治疗靶点。

miR-125a/TRAF6调控通路在破骨细胞分化中的作用研究

目的研究miR-125a在破骨细胞分化过程中的作用及其作用机制,方法单核细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子-κB配体的受体激活剂(RANKL)诱导CD_(14)^+PBMCs向破骨细胞分化。生物信息学运算预测miR-125a的靶基因以及结合于miR-125a启动子区域的转录因子。实时定量PCR法检测miR-125a以及其他相关基因的表达。过表达实验和抑制试验用于研究miR-125a在破骨细胞分化中的作用及其与靶基因之间的相互关系。荧光素酶报告基因实验验证miR-125a与其靶基因之间的结合。结果(1)miR-125a表达在CD_(14)^+PBMCs前体细胞高表达,随着诱导时间的延续逐渐下降,在诱导第5天开始明显下降并在第15天达到最低值,表明miR-125a的表达在破骨细胞分化过程中呈现明显下降趋势。(2)miR-125a参与调控RANKL和M-CSF诱导的破骨细胞分化,过表达miR-125a明显抑制了TRAP和NFATc1的mRNA表达和CD_(14)^+PBMCs向破骨细胞的分化。(3)miR-125a直接作用于靶基因肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF6),TRAF6是RANKL/RANK/NFATc1信号转导通路的转录因子,过表达miR-125a降低了TRAF6的蛋白表达水平,而TRAF6的mRNA水平无明显改变。结论 miR-125a通过作用于新的FRAF6/NFATC1/miR-125a负反馈调控环路在破骨细胞的分化中发挥了重要的调控作用,调控miR-125a的表达可能成为骨代谢疾病新的治疗靶点。

降钙素基因相关肽对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)在人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymalstem cells,HUMSCs)向成骨细胞分化过程中的作用及机制。方法体外培养HUMSCs细胞,加入0、10-9、10-8、10-7mol/L浓度的CGRP诱导其向成骨细胞分化,分别在第7、9、11、14天时采用茜素红染色检测成骨分化程度,实时定量PCR和Western blot检测ERK、RUNX2、OSTERIX的mRNA和磷酸化的ERK、RUNX2、OSTERIX的蛋白表达。结果 HUMSCs高表达CD73、CD90、CD105等间充质干细胞表面抗原,但不表达CD14、CD20、CD34、CD45等上皮和造血干细胞的表面抗原,可诱导向成骨细胞分化,随着时间延长矿化结节数量增加(P<0.05);随着CGRP浓度的升高,矿化结节减少,ERK、RUNX2、OSTERIX的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论 CGRP通过ERK信号通路抑制HUMSCs向成骨细胞的分化,并呈现出浓度和时间依赖性。

PTH对骨髓细胞骨代谢相关基因表达的影响

目的观察大鼠骨髓微环境骨代谢相关基因表达变化,拟探讨外源性甲状旁腺激素(ParathyroidhormonePTH)治疗骨质疏松的分子机制。方法给予卵巢摘除(ovariectomyOVX)诱导的骨质疏松(OsteoporosisOP)大鼠每天20μgkg重组人甲状旁腺激素[rhPTH(134)]治疗8周,采用RTPCR方法检测大鼠骨髓细胞骨代谢相关基因的表达,比较PTH用药前、后及停药后各基因表达的变化。结果显示用药后骨髓细胞中成骨活性基因ALP、BGP、Cbfα1表达均持续显著升高(P<0.05～0.001);破骨细胞调节基因MCSF与RANKL表达变化无统计学意义;OPG与TRAF6表达呈双相波动(P<0.05～0.01);RANKLOPG比值在用药1周时增加(P<0.05);IL6表达呈早期短时升高(P<0.01)。结论PTH对骨质疏松的治疗作用可能与其持续增强骨髓细胞的成骨活性基因表达,调节破骨细胞分化和功能成熟基因表达有关。

硼替佐米对多发性骨髓瘤患者破骨细胞生成的影响及机制研究

目的:观察多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者破骨细胞在体外诱导分化成熟过程中,硼替佐米(Bortezomib,Btzmb)对其分化和功能的影响,以及破骨细胞分化过程中上游关键信号分子肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)的改变。方法:患者外周血单个核细胞在经核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导后向破骨细胞分化过程中,采用不同剂量的Btzmb进行处理,观察抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistant acid phosphatase,TRAP)染色阳性的破骨细胞数量,检测培养液中的TRAP活性,并观察骨片上骨陷窝数量的变化。采用Western印迹和RT-PCR法,分析Btzmb对破骨前体细胞中TRAF6蛋白和mRNA的影响。结果:2.5和5 nmol/L Btzmb组破骨细胞数量分别为(157±21)和(98±15)个,较对照组(307±25)明显减少(P均<0.05),骨陷窝形成数量分别为对照组的(53±24)%和(29±7)%(P均<0.05),上清液中破骨细胞活性分别为对照组的(86±24)%和(60±25)%(P均<0.05)。破骨前体细胞经Btzmb处理后观察24 h,TRAF6蛋白活性逐渐降低,TRAF6 mRNA水平也有所下降。结论:Btzmb抑制MM患者破骨细胞的分化和功能,该作用可能与TRAF6有关。

PTH作用于老年大鼠骨髓细胞骨代谢相关基因表达的实验方法

目的 从骨髓微环境角度研究甲状旁腺激素 (parathyroidhormone,PTH)对老年大鼠骨形成刺激作用的分子机制。方法 8只 2 0月龄雄性大鼠随机平均分两组 ,每组 4只 ,分别给予人重组甲状旁腺激素和生理盐水 ,1次 /天 ,5次 /周 ,8周后处死 ,无菌获取股骨和腰椎骨髓细胞 ,用RT PCR法检测成骨功能相关基因核结合因子α1(Cbfα1)、碱性磷酸酶 (ALP)和骨钙素 (BGP)及破骨细胞分化成熟调节基因NF κB受体激活因子配体(RANKL)、骨保护素 (OPG)、巨噬细胞克隆刺激因子 (M CSF)、肿瘤坏死因子受体相关因子 6 (TRAF6 )和白介素 - 6 (IL 6 )mRNA表达水平。结果 PTH显著增加骨髓细胞中成骨功能相关基因Cbfα1、ALP和BGPmRNA表达 (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;调整破骨细胞分化成熟调节基因mRNA表达 :下调RANKL、M CSF和TRAF6mRNA表达 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,上调OPGmRNA表达 (P <0 .0 1)和IL 6mRNA表达 (P <0 .0 5 )。股骨与腰椎呈类似变化。结论 PTH增加老年大鼠骨量可能与其强烈刺激骨髓微环境中成骨活性基因表达 ,同时调整破骨细胞分化和功能成熟状态有关。

miR-181a调控PINK1/Parkin通路对骨质疏松大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响

目的探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病相关基因(Parkin)通路对骨质疏松(OP)大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法健康雌性SD大鼠20只,随机分为OP模型组(n=10)与对照组(n=10)。OP模型组大鼠制备OP模型,提取OP大鼠破骨细胞,设置OP组(未转染)、si-miR-181a组(转染si-miR-181a载体质粒)、si-NC组(转染si-NC阴性对照质粒)、ad-miR-181a组(转染ad-miR-181a载体质粒)与ad-NC组(转染阴性ad-NC对照质粒),对照组大鼠破骨细胞正常培养,设为正常对照组。采用RT-PCR检测miR-181a的表达,MTT法及流式细胞术检测破骨细胞的存活及凋亡情况,透射电镜观察线粒体自噬情况,免疫荧光共定位检测线粒体中Parkin的表达情况,Western blotting检测PINK1/Parkin及自噬、凋亡相关蛋白的表达情况。敲低OP大鼠破骨细胞miR-181a后下调Parkin的表达,验证Parkin对miR-181a的逆转作用。双荧光素酶报告实验验证miR-181a与Parkin的靶向调控关系。结果与正常对照组相比,OP组破骨细胞中miR-181a(1.59±0.15 vs.1.02±0.11)、Parkin^(+)TOMM2^(+)(2.02±0.20 vs.0.13±0.10)、Parkin(1.83±0.18 vs.1.13±0.10)、PINK1(1.93±0.19 vs.1.03±0.10)表达水平,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.89±0.18 vs.1.15±0.10)及细胞存活率(157.06%±12.32%vs.100.09%±0.05%)升高(P<0.05)。与OP组相比,上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(222.96%±22.15%)升高,Parkin^(+)TOMM2^(+)蛋白表达水平(1.01±0.11)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.36±0.12)及细胞凋亡率(3.28%±0.35%)降低(P<0.05);下调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(106.96%±10.15%)降低,Parkin^(+)TOMM2^(+)蛋白表达水平(2.97±0.29)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(2.47±0.24)及细胞凋亡率(19.71%±1.83%)升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,Parkin为miR-181a的靶基因。下调Parkin的表达可逆转miR-181a低表达发挥的促进线粒体自噬及抑制细胞存活的作用(P<0.05)。结论上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达可靶向下调Parkin的表达抑制线粒体自噬激活,促进破骨细胞存活。

降钙素基因相关肽抑制白细胞介素-1介导骨的吸收作用

目的 了解白细胞介素 - 1β(IL - 1β)在破骨细胞性骨吸收中的刺激作用 ,并评价降钙素基因相关肽 (CGRP)的拮抗效果 .方法 将新生大鼠破骨细胞和成骨细胞混合培养 ,接种于预置象牙片的培养板中 .2 4 h后培养液中分别加入 IL-1β和不同浓度的 CGRP.继续培养 4 8h,然后取出象牙片 ,超声处理后行甲苯胺蓝染色 ,光镜下观察骨吸收陷窝数目并计算其总面积 .结果 IL - 1β明显增加象牙片上吸收陷窝的数目 (37.2± 8.2 vs 2 2 .4± 5 .7) per slice (P <0 .0 1)和面积(μm2 ,976 1± 2 775 vs4 2 2 4± 1381,P<0 .0 1) ,而 CGRP则能够显著抑制 IL- 1β的刺激作用 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,且抑制作用呈剂量依赖性 (r1 =- 0 .5 6 ,P<0 .0 1;r2 =- 0 .4 9,P<0 .0 5 ) .结论 CGRP可直接作用于破骨细胞并抑制其活化 ,并调节成骨细胞相关因子的释放而间接影响破骨细胞功能 .

青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛

背景:研究表明,破骨细胞通过分泌netrin-1诱导软骨下骨的感觉神经异常长入,导致骨关节炎动物模型痛阈减低,由此推测抑制破骨细胞的骨吸收作用可缓解感觉神经介导的疼痛症状。目的:探讨青蒿琥酯能否通过抑制软骨下骨破骨细胞活性进而减少感觉神经支配,为研究青蒿琥酯对骨关节炎镇痛提供实验依据。方法:将C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、安慰剂组和青蒿琥酯组,每组10只;假手术组仅切开小鼠右膝关节囊不损伤其他结构,术后无其他干预;其他2组通过右膝前十字韧带横断术构建骨关节炎模型,青蒿琥酯组术后给予腹腔内注射青蒿琥酯(每日100 mg/kg),安慰剂组术后给予腹腔内注射相等体积的5%NaHCO3。术后14 d进行足印迹分析,ELISA检测各组小鼠外周血血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平,取各组小鼠膝关节标本进行番红固绿染色及组织学评分、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、netrin-1及CGRP免疫组化染色。结果与结论:①右后爪同侧接触面积百分比:假手术组和青蒿琥酯组高于安慰剂组(P<0.05);假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P>0.05);②小鼠血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平组间差异均无显著性意义(P>0.05);③基于番红固绿染色的软骨组织学评分:假手术组和青蒿琥酯组低于安慰剂组(P<0.05),假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P>0.05);④抗酒石酸酸性磷酸酶染色:假手术组、青蒿琥酯组抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞量低于安慰剂组(P<0.05),假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P>0.05);⑤与安慰剂组相比,假手术组、青蒿琥酯组软骨下骨中netrin-1及CGRP阳性感觉神经减少(P<0.05),而这2项指标在青蒿琥酯组与假手术组之间差异无显著性意义(P>0.05);⑥结果表明,青蒿琥酯通过抑制软骨下骨破骨细胞分泌netrin-1改善了感觉神经介导的疼痛,具有可缓解骨关节炎疼痛的治疗潜力。

17β-雌二醇及补骨脂素对骨髓间充质细胞向成骨细胞分化的诱导作用

目的:观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用。方法:将大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)暴露于不同浓度的17β-雌二醇、补骨脂素增殖和成骨分化培养基。通过茜素红(Alizarin Red)染色法观察细胞增殖;通过酶联免疫吸附试验法(ELISA)和实时聚合酶链反应(PCR)评估成骨标志物Ⅰ型胶原的分泌水平以及关键因子RUNX2的表达情况。结果:与对照组比较,17β-雌二醇补充剂促进BMSCs增殖。BMSCs增殖添加的17β-雌二醇的不同剂量(0、0.001、0.01、0.1 nmol/L),有效地改善了骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RUNX2的mRNA也被上调。17β-雌二醇干预后第5天,Ⅰ型胶原表达显著升高(P<0.05),在17β-雌二醇干预的第7天,RUNX2 mRNA及蛋白表达随17β-雌二醇水平的增加而升高(P<0.05)。结论:17β-雌二醇联合补骨脂素可以作为一种有效的调节剂,以提高骨髓再生中MSC的能力。