破骨细胞核因子κB受体活化因子配体和骨保护素在根尖周囊肿和肉芽肿中的表达及意义

目的检测破骨细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)在根尖周囊肿及根尖周肉芽肿中的表达水平,探讨RANKL和OPG在不同根尖周疾病周围骨质破坏机制中的作用。方法收集根尖周囊肿组织20例为囊肿组,根尖周肉芽肿组织20例为肉芽肿组,正常牙的牙周膜组织20例为对照组。采用免疫组织化学法检测RANKL和OPG在根尖周囊肿、根尖周肉芽肿和正常牙周膜组织中的阳性表达。结果在囊肿组、肉芽肿组、对照组中,RANKL的表达分别为75.00±7.54、68.40±6.74和29.40±2.46,OPG的表达分别为38.10±7.09、47.65±13.85和58.60±5.88,3组间的差异均有统计学意义(P<0.01)。相关性分析表明,囊肿组中RANKL与OPG呈负相关关系(r=-0.56,P=0.01),肉芽肿组和对照组中RANKL和OPG无相关关系(P>0.05)。结论 RANKL与OPG参与了根尖周病变引起的骨吸收过程。在根尖周病变中,RANKL和OPG的表达失调,RANKL增加而OPG减少,骨吸收活跃,导致溶骨性病变。根尖周囊肿的骨吸收活动较根尖周肉芽肿更活跃。

核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞前体的培养与分化

背景:以往的研究多采用长骨机械分离法获得破骨细胞,破骨细胞为终末分化细胞,无法进一步增殖和传代。因此目前常用骨髓细胞诱导培养法和RAW264.7细胞诱导培养法获得大量的破骨细胞以满足实验需要。目的:探讨细胞核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞前体细胞分化为成熟破骨细胞的最佳方法。方法:分离小鼠骨髓细胞后添加核因子κB受体活化因子配体与巨噬细胞集落刺激因子共同诱导或者取RAW264.7细胞单独加入核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞的形成;分别给予不同浓度的核因子κB受体活化因子配体,观察生成破骨细胞的数量,评价核因子κB受体活化因子配体与破骨细胞生成的量效关系;采用膜联蛋白V-FITC联合PI染色进行流式细胞术分析破骨细胞形成过程中单核巨噬细胞的凋亡情况。结果与结论:当核因子κB受体活化因子配体浓度为10μg/L时,破骨细胞形成数量最多的时间点在第六至七天;而核因子κB受体活化因子配体浓度为100μg/L时,高峰期出现在第四至五天。破骨细胞的形成数量随着核因子κB受体活化因子配体刺激浓度升高而增加,呈浓度依赖性,50μg/L的核因子κB受体活化因子配体是破骨细胞形成数量与浓度关系曲线的转折点,高于150μg/L以后破骨细胞形成数量的增幅明显放缓。核因子κB受体活化因子配体即能诱导单核巨噬细胞形成破骨细胞又可以促进其凋亡,通过破骨细胞计数比较发现在同一浓度(104/cm2)接种单核巨噬细胞后以30μg/L的核因子κB受体活化因子配体诱导后,平均每单位核因子κB受体活化因子配体所获得的破骨细胞数量最多。提示骨髓细胞或RAW264.7细胞诱导破骨细胞的培养方法皆简单可行,细胞接种的最佳浓度为104/cm2;核因子κB受体活化因子配体的适宜刺激浓度为30-50μg/L。

外源性硫化氢对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢及护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体表达的影响

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对去卵巢骨质疏松(OP)大鼠骨代谢及护骨素(OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法将50只健康SD雌性大鼠随机分为对照组、去卵巢OP模型组和外源性H2S供体硫氢化钠(NaHS)(10、50、100μmol/kg)组,每组10只。12周后检测各组大鼠的尿钙和尿脱氧吡啶啉(Dpd)及血清钙、磷、碱性磷酸酶(ALP)和雌二醇(E2)水平,采用双能X线吸收法测量大鼠右侧股骨的骨密度(BMD),采用Western blot检测股骨中OPG和RANKL的表达。结果与对照组比较,去卵巢OP模型组大鼠血清E2[(76.83±8.12)pmol/L比(11.05±1.42)pmol/L,t=5.74,P<0.05]和BMD水平[(0.25±0.03)g/cm2比(0.14±0.01)g/cm2,t=3.85,P<0.05]显著降低,尿钙[(0.85±0.08)mg/L比(1.88±0.21)mg/L,t=4.65,P<0.05]、尿Dpd[(14.67±1.28)nmol/mmol比(22.34±1.75)nmol/mmol,t=3.81,P<0.05]、血清钙[(3.29±0.27)mmol/L比(4.68±0.52)mmol/L,t=3.98,P<0.05]、血清磷[(2.49±0.35)mmol/L比(4.03±0.59)mmol/L,t=4.31,P<0.05]和ALP水平[(78.65±5.23)U/L比(167.35±1.75)U/L,t=4.47,P<0.05]均显著升高;OPG的表达显著降低[(0.68±0.09)比(0.27±0.04),t=3.82,P<0.05],而RANKL的表达显著增加[(0.18±0.02)比(0.66±0.09),t=3.91,P<0.05]。与去卵巢OP模型组比较,NaHS(50、100μmol/kg)组大鼠股骨的BMD显著增加[(0.14±0.01)g/cm2比(0.19±0.02)g/cm2和(0.23±0.03)g/cm2,F=6.42,P<0.05],尿钙[(1.88±0.21)mg/L比(1.39±0.09)mg/L和(0.97±0.09)mg/L,F=4.67,P<0.05]、尿Dpd[(22.34±1.75)nmol/mmol比(18.43±2.04)nmol/mmol和(15.75±1.14)nmol/mmol,F=3.92,P<0.05]、血清钙[(4.68±0.52)mmol/L比(3.98±0.47)mmol/L和(3.56±0.25)mmol/L,F=3.89,P<0.05]、血清磷[(4.03±0.59)mmol/L比(3.11±0.42)mmol/L和(2.68±0.26)mmol/L,F=4.23,P<0.05]和ALP水平[(167.35±1.75)U/L比(115.69±8.72)U/L和(87.61±9.56)U/L,F=4.15,P<0.05]显著降低,OPG的表达显著增加[(0.27±0.04)比(0.48±0.05)和(0.64±0.08),F=4.84,P<0.05],而RANKL的表达显著降低[(0.66±0.09)比(0.37±0.05)和(0.22±0.04),F=5.16,P<0.05]。结论外源性H2S抑制了卵巢切除所引起的OP,其作用机制可能与H2S上调骨组织中OPG的表达而降低RANKL的表达有关。

左归丸对去势骨质疏松大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体/骨保护素的影响

目的探讨左归丸对卵巢摘除大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的影响。方法 SD雌性大鼠60只,采用去卵巢法制备骨质疏松症大鼠模型,将大鼠分为假手术组,切除卵巢组,左归丸低、中、高剂量组,西药对照组(戊酸雌二醇片),每组10只。造模成功12周后给予药物干预,西药对照组给予戊酸雌二醇片0.09 mg/kg灌胃治疗,左归丸低、中、高剂量组按4.75、9.5、19 g/kg灌胃治疗,假手术组和切除卵巢组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,干预4周后股动脉采血处死大鼠。比色分析法检测血清钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus,P)含量;ELISA法检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)和RANKL含量;双能X骨密度仪分析测定大鼠股骨的骨密度(bone mineral density,BMD);AG-IX生物力学万能实验机检测最大载荷和弹性模量,比较各组间差异。结果假手术组,切除卵巢组,西药对照组,左归丸高、中、低剂量组的BMD分别为(0.145±0.004)、(0.116±0.007)、(0.146±0.006)、(0.142±0.004)、(0.134±0.002)、(0.129±0.001)g/cm2;这6组的体质量分别为(173.20±13.92)、(264.10±28.61)、(249.44±26.64)、(243.00±10.25)、(253.45±18.19)、(268.50±22.39)g;这6组的子宫指数分别为(1.62±0.34)、(0.45±0.09)、(0.89±0.22)、(1.03±0.23)、(0.91±0.13)、(0.46±0.07)mg/g;这6组Ca、P含量分别为(2.07±0.07/0.30±0.02)、(0.92±0.08/0.10±0.03)、(1.89±0.11/0.22±0.03)、(1.95±0.13/0.27±0.02)、(1.67±0.10/0.19±0.06)、(1.59±0.15/0.12±0.02)mmol/L;这6组OPG、RANKL和RANK含量分别为(755.00±58.05/5.73±0.27/10.68±0.69)、(493.67±36.77/10.24±0.33/18.62±0.74)、(653.00±56.93/7.37±0.19/12.23±0.76)、(731.00±38.49/6.77±0.65/11.52±0.39)、(704.33±62.92/7.97±0.41/14.69±0.86)、(555.00±97.09/9.31±0.75/15.04±0.52)pg/m L;这6组的最大载荷分别为(142.16±0.10)、(86.26±0.13)、(126.43±0.31)、(119.77±0.74)、(111.96±1.57)、(98.92±1.44)N;这6组弹性模量分别为(19.48±0.24)、(13.10±0.43)、(16.70±0.37)、(16.17±0.15)、(15.99±0.22)、(14.98±0.15)MPa。与假手术组比较,切除卵巢组大鼠的BMD、Ca、P、OPG、最大载荷和弹性模量水平均显著降低,而RANK和RANKL含量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与切除卵巢组相比,左归丸各剂量干预组和西药对照组大鼠BMD和弹性模量均显著升高,RANK和RANKL含量明显降低,左归丸中、高剂量组和切除卵巢+西药对照组Ca、P、OPG含量和最大载荷显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论左归丸能升高去卵巢大鼠的骨密度,提高骨强度,并改善其力学性能,其机制可能与调节RANKL/OPG水平和Ca、P代谢有关。

白杨素抑制核因子κB受体活化因子配体诱导的小鼠破骨细胞生成

背景:白杨素存在于多种天然植物提取物的黄酮醇类化合物,具有广泛的治疗作用并且参与机体内的炎症反应,而炎症反应可增强破骨细胞生成从而导致骨侵蚀。目的:探究白杨素在炎症环境和非炎症环境下对破骨细胞分化的影响以及对骨侵蚀的保护作用。方法:选择RAW264.7细胞为种子细胞,首先,通过核因子κB受体活化因子配体(50μg/L)、巨噬细胞集落刺激因子(25μg/L)将细胞诱导分化为破骨细胞后,以0,20,40,60μg/L白杨素干预。其次,通过脂多糖模拟炎症环境,并将RAW264.7细胞在脂多糖诱导的炎症环境下诱导分化为破骨细胞,观察0,20,40,60μg/L白杨素在炎症环境下对破骨细胞分化的影响。结果与结论:(1)白杨素有效抑制破骨细胞分化,在60μg/L时抑制效果达到最大;(2)白杨素显著抑制了破骨细胞的骨吸收功能,提示白杨素对破骨细胞造成的骨侵蚀具有保护作用;(3)白杨素通过核因子κB信号通路,抑制多种破骨细胞分化关键蛋白和基因表达;(4)白杨素对炎症有明显的抑制作用,并对炎症环境导致的破骨细胞分化有强烈的抑制作用。

金雀异黄素对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞骨保护素/细胞核因子κB受体活化因子/细胞核因子κB受体活化因子配体通路的影响

目的研究金雀异黄素(genistein,Gen)对人类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/细胞核因子κB受体活化因子(receptor-activator of nuclear factor kappa bata,RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor-activator of nuclear factor kappa bata ligand,RANKL)通路的影响及机制。方法培养人RA-FLS,并分为对照组(RA-FLS细胞)、TNF-α组(RA-FLS细胞+TNF-α10 ng/ml)、TNF-α+Gen组(RA-FLS细胞+TNF-α10 ng/ml+Gen 50μM)、Gen组(RA-FLS细胞+Gen 50μM)。应用免疫印迹检测Gen作用RA-FLS的RANK、RANKL、OPG、雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)表达情况,免疫荧光检测ERα细胞内分布情况。结果 Gen组、TNF-α组及TNF-α+Gen组细胞内RANK蛋白表达量较对照组无明显差异(P>0.05),但OPG及RANKL蛋白表达明显高于对照组(均P<0.05)。Gen组OPG/RANKL较对照组增高(P<0.05)。Gen组、TNF-α组及TNF-α+Gen组细胞内ERα蛋白表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光结果显示核内ERα表达量增加。结论 Gen可能通过与雌激素受体结合,转入核内发挥免疫调节作用,从而调节OPG/RANKL/RANK通路,发挥抑制骨破坏的作用。Gen可以上调人RA-FLS中OPG及RANKL,且对OPG的上调作用更强。

金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素/核因子κB受体活化因子配体分泌的影响

背景:金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的作用机制尚不清楚。目的:观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24h内的SD大鼠成骨细胞,正常血清组、去卵巢血清组、去卵巢含药血清组分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72h。采用酶联免疫吸附法检测成骨细胞骨保护素和RANKL的分泌水平。结果与结论:与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞骨保护素的表达明显降低(P<0.01),而RANKL的表达明显升高(P<0.05);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组成骨细胞骨保护素的表达明显升高(P<0.05),RANKL的表达明显降低(P<0.05)。说明金乌骨通胶囊可通过增加成骨细胞骨保护素的表达,抑制RANKL的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。

核因子KB受体活化因子配体、护骨素在不同月龄雄性大鼠股骨的表达

目的研究核因子KB受体活化因子(receptor activator of NF-KB,RANK)及核因子KB受体活化因子配体(receptoractivator of NF-KB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegrin,OPG),在不同月龄雄性大鼠股骨表达的变化,探讨αD3对老龄大鼠RANK、RANKL、OPG表达的影响。方法将6周龄、6月龄、24月龄、24月龄+αD3组Wistar大鼠分为甲、乙、丙、丁4组,每组15只。其中丁组为24月龄+αD3组,按0.05μg/kg/d-1灌胃,隔天1次,每周3次。连续10周。取左侧股骨远中干骺端1/2,采用RT-PCR测RANKL、RANK及OPG的mRNA的表达。取右侧股骨做免疫组化。结果与6周组相比,6月和24月组RANKLmRNA分别增加6.2倍和7.3倍,(P<0.05),OPGmRNA值随月龄逐步增加(P>0.05)。24月龄+αD3组较24月龄组RANK降低(P<0.05)、RANKL/OPG比值亦降低(P>0.05)。免疫组化结果显示RANKL、OPG表达于软骨和成骨细胞胞浆和胞核。24月龄+αD3干预组OPG表达较24月组增强。结论股骨RANKL/OPG值随月龄增加,有利于骨的吸收和转换;αD3有促进骨形成降低骨吸收的作用,其机制可能与降低RANK、RANKL/OPG比值有关。RANKL、OPG表达于同一类型的细胞,二者共同调节骨的代谢。

核因子κB受体活化因子配体诱导形成的成熟破骨细胞

背景:破骨细胞作为一种终末细胞,获取困难,而且没有成熟破骨细胞株等因素限制了其应用。先前国内外对破骨细胞的获取一般采用基质细胞诱导培养或共培养,或运用核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子共同作用诱导形成成熟的破骨细胞。目的:观察小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的一般生物学特征,分析其在核因子κB受体活化因子配体诱导下形成成熟破骨细胞的可行性。方法:培养RAW264.7后,用核因子κB受体活化因子配体诱导RAW264.7细胞7d后观察抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果,以抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性,细胞核≥3个为破骨细胞。以鬼笔环肽荧光染色观察纤维性肌动蛋白环,甲苯胺蓝染色观察牛骨片表面的吸收陷窝情况。结果与结论:核因子κB受体活化因子配体可诱导RAW264.7细胞形成抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的多核细胞,形成纤维性肌动蛋白环,电镜下可见骨片上圆形或椭圆形的吸收陷窝。提示RAW264.7是一种较好的破骨前体细胞模型,可用于破骨细胞分化研究。单用核因子κB受体活化因子配体诱导RAW264.7细胞分化成熟,减少了巨噬细胞集落刺激因子的应用,使培养体系更加简单,易于操作,诱导出的细胞纯度高,适合于破骨细胞的生物学和生化研究。

丹参素对牙槽骨成骨细胞细胞核因子-κB受体活化因子配体/骨保护素表达的影响研究

目的:探讨丹参素对大鼠牙槽骨成骨细胞的细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:采用体外牙槽骨成骨细胞培养,用含不同浓度(0.10、0.50、1.00、5.00 mg/L)的丹参素血清分别作用于第4代牙槽骨成骨细胞,培养1、3和5 d后,分别通过噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot法检测成骨细胞增殖率、OGP和RANKL mRNA及蛋白表达水平。结果:丹参素对牙槽骨成骨细胞增殖的影响随药物浓度和时间变化而改变,其中含5.00 mg/L丹参素的血清作用3 d后牙槽骨成骨细胞增殖率最高,OGP mRNA和蛋白表达增加( P <0.05)。结论:丹参素能通过增加OGP mRNA和蛋白表达进而促进牙槽骨成骨细胞增殖。

磁共振成像联合血清细胞核因子κB受体活化因子配体护骨素水平对类风湿关节炎诊断和治疗的有效性分析

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以周围关节骨质损害为特征的全身性自身免疫疾病,其临床特征表现为对称性累及多个周围关节疼痛、肿胀和功能低下,其主要病理特征为慢性的关节滑膜炎症浸润软骨和骨组织,导致骨关节破坏[1]。调查发现,全球RA发病率约0.5%~1.2%,我国RA发病率约0.28%,致残率高达30%~50%,是导致人类劳动能力丧失和残疾的主要疾病[2,3]。

骨保护素和核因子κB受体活化因子配基对体外培养鸭破骨细胞的影响

探讨了核因子κB受体活化因子配基(Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和不同浓度骨保护素(Os-teoprotegerin,OPG)对鸭破骨细胞(Osteoclasts,OC)生成和活化的影响。从7日龄内番鸭长骨骨髓分离破骨细胞,添加1,25-(OH)2D3进行诱导培养15 h后,更换含不同细胞因子的培养液(对照组:不加细胞因子;30μg/LsRANKL组;30μg/L sRANKL+10μg/L OPG组;10μg/L OPG组;50μg/L OPG组;100μg/L OPG组),继续培养。倒置显微镜进行OC形态学观察,比较各组培养3 d后抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性OC数量、培养7 d后扫描电镜观察象牙片吸收陷窝。结果表明:50μg/L OPG组、100μg/L OPG组OC数均极显著少于10μg/LOPG组(P<0.01);添加OPG组OC数均极显著少于30μg/L sRANKL组(P<0.01),象牙片吸收陷窝随OPG添加浓度的增加而减少,面积减小,陷窝深度变浅。RANKL能够促进OC的生成及活化,而OPG可与RANKL竞争性地结合RANK抑制OC的生成和活化,从而抑制OC的骨吸收。

咀嚼力对青龄期大鼠牙槽骨胰岛素样生长因子-1、骨保护素、核因子kB受体活化因子配体蛋白表达的影响

分析不同强度力学刺激对青龄期大鼠牙槽骨IGF-1、OPG、RANKL蛋白表达的影响,探讨力学信号在牙槽骨骨重建中的传导,揭示力学刺激对牙槽骨骨重建的调节机制。喂食不同硬度饲料,建立大鼠牙槽骨不同力学刺激动物模型。40只SD大鼠随机分为2组,一组软食喂养,一组硬食喂养。大鼠分别在喂养2月、4月时分两次处死,显微CT检测下颌骨第三磨牙区牙槽骨骨组织形态计量学指标,Western blot方法检测IGF-1、OPG、RANKL蛋白质表达。经显微CT检查发现,硬食组大鼠牙槽骨骨体积分数、骨小梁数量等均较软食组组显著增加,骨小梁分离度降低,P<0.05;大鼠牙槽骨中IGF-1和OPG蛋白表达硬食组较软食组同时上调,并且它们的表达量呈正相关;RANKL表达硬食组较软食组降低;IGF-1和RANKL表达量呈负相关;4月组结果与2月组结果相比,IGF-1、OPG和RANKL蛋白表达量均有变化,但差异不显著。结果显示较高的咀嚼力能够促进大鼠牙槽骨的生长,促进牙槽骨中IGF-1和OPG的表达,抑制RANKL的表达,表明力学刺激能够影响IGF-1和OPG/RANKL两种分子系统的表达水平,两种分子信号通路存在关联协同性。IGF-1和OPG/RANKL两种分子信号系统是调节骨重建力学信号传导通路。

护骨素和核因子KB活化因子受体配体基因多态性与类风湿关节炎的相关性研究

目的探讨护骨素（OPG）基因rs2073618、rs3102735位点和核因子KB活化因子受体配体（RANKL）基因rs2277438位点单核苷酸多态性（SNP）及其外周血水平对类风湿关节炎（RA）患者疾病活动性及骨侵蚀的影响。方法采用连接酶检测反应方法检测101例RA患者OPG基因rs2073618、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点SNP，ELISA法测定其外周血OPG和RANKL水平，采用Sharp评分评价其双手x线骨侵蚀。结果OPG基因rs2073618位点表达为纯合型RA患者（60例）比杂合型患者（40例）的关节压痛数（13±7比10±6，t=2．154，P=0．034）、关节压痛指数（19±11比13±9，t=2．318，P=0．023）、VAS评分（5．7±1．9比4．8±1．8，t=2．481，P=0．015）明显升高（P〈0．05）；RA患者OPG基因rs3102735位点SNP与其外周血OPG水平、病情活动性指标及Sharp评分无关（P〉0．05）。RANKL基因rs2277438位点表达为纯合型RA患者（62例）和杂合型（39例）间病情活动性指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）；但杂合型RA患者外周血RANKL水平较纯合型明显升高（139±152比80±38，￡=2．152，P=0．038）、双手x线Sharp评分亦明显高于纯合型（68±66比40±45，t=2．194，P=0．032）。多元线性回归分析显示，RA患者Sharp评分与病程（卢=0．725，t=9．078，P〈0．01）、外周血RANKL／OPG比值（卢=0．166，t=2．104，P=0．039）、年龄（口=一0．179，t=2．274，P=0．026）呈直线相关（R。=0．570，F=33．137，P〈0．01）。结论OPG基因rs2073618位点SNP与RA患者的病情活动性有关，纯合型患者的病情更重；RANKL基因rs2277438位点SNP与RA患者骨侵蚀相关，杂合型患者外周血RANKL水平更高，骨侵蚀更重。

骨保护素/核因子κB受体活化因子配体影响肺癌细胞下颌骨与股骨转移差异的初步研究

目的探究下颌骨和股骨中骨保护素(OPG)与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的比值是否参与调控肺癌细胞骨转移部位差异。方法采用小鼠Lewis肺癌细胞构建全身性肺癌细胞骨转移小鼠模型及股骨局部肺癌细胞骨转移模型,苏木素-伊红染色与显微CT(MicroCT)检测肿瘤细胞定植与骨组织破坏情况,组织蛋白酶K免疫组织化学染色检测骨组织中破骨细胞活化情况,转录组测序(RNA-seq)及实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨组织中OPG mRNA/RANKL mRNA比值。结果全身性肺癌细胞骨转移小鼠模型证实:相较于股骨,下颌骨不易发生肺癌细胞骨转移。分析生理情况下小鼠下颌骨与股骨的差异,发现在肺癌细胞骨转移低发的下颌骨中破骨细胞数目明显少于转移高发的股骨,且OPG mRNA/RANKL mRNA比值明显高于股骨(P<0.01)。进一步分析发生肿瘤细胞转移的骨组织中破骨细胞活化情况及OPG mRNA/RANKL mRNA比值发现,肺癌细胞骨转移引起的骨破坏主要发生在组织蛋白酶K阳性破骨细胞集中分布的区域,发生肿瘤细胞转移的骨组织中破骨细胞数目明显多于非骨转移组(P<0.01),且OPG mRNA/RANKL mRNA比值明显低于非骨转移组(P<0.000 1)。结论在小鼠肺癌细胞骨转移低发的下颌骨与高发的股骨中,破骨细胞活化情况及OPG mRNA/RANKL mRNA比值存在明显差异,提示骨组织可能通过OPG/RANKL影响破骨细胞活化进而参与调控肺癌细胞骨转移部位差异。

核转录因子-κB受体活化因子及其配体和骨保护蛋白系统在骨构建与骨改建中的作用

核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)-核转录因子-κB受体活化因子(RANK)-骨保护蛋白(OPG)系统是近年发现的调节骨吸收的关键信号通路。RANKL与RANK结合在正常骨构建与骨改建中调节破骨细胞生成、活化和存留,在多种病理状况下增加骨吸收。OPG与RANK竞争性地结合RANKL,以防止骨组织的过度吸收。笔者分别就RANKL、RANK和OPG及其在骨构建与骨改建中的作用作一综述。

核因子κB受体活化因子配体、护骨素在不同年龄男性下颌骨的表达

目的:观察核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、护骨素(OPG)在不同年龄男性下颌骨的表达。探讨RANKL、OPG与男性牙槽骨骨质疏松的关系。方法:选取湘雅医院2008年5月—2009年7月口腔门诊拔牙去骨及病房正颌外科手术男性患者46例。排除牙周病、影响骨代谢的全身系统性疾病及药物服用史,无抽烟、酗酒等不良生活习惯。分为3组,其中青少年组10～29岁,17例,中年组30～59岁,15例,老年组60～89岁,14例。采用RT-PCR方法,观察下颌骨RANKL、OPG的表达。采用SPSS16.0软件包对数据进行总体方差分析和组间比较。结果:①与青少年组相比,中年组和老年组RANKL mRNA分别升高2.1倍和5.3倍,OPG mRNA分别升高3.3倍和4.8倍,差异具有显著性(P<0.05)。RANKL和OPG值与年龄呈正相关。②中年组RANKL/OPG比值低于青少年组和老年组,差异无显著性(P>0.05)。结论:①男性下颌骨RANKL mRNA和OPG mRNA水平随年龄增长而升高,RANKL和OPG值与年龄呈正相关。②中年组颌骨改建活跃,与青少年组相比,骨形成大于骨吸收;③老年组颌骨吸收与骨形成均处于低水平,骨吸收大于骨形成。

骨保护素/核因子-κB受体活化因子/核因子κB-受体活化因子配体信号分子调控牙萌出的研究进展

牙萌出是牙胚、牙槽骨以及多种类细胞系及多条通路信号分子相互作用共同调控的、复杂有序的生理过程。牙齿萌出需要在牙胚的方形成萌出通道,穿过牙槽骨和口腔黏膜到达功能位置。这一过程主要由破骨细胞直接执行,而骨保护素/核因子-κB受体活化因子/核因子κB-受体活化因子配体信号分子(OPG/RANK/RANKL)信号分子则可通过调节破骨细胞的分化与成熟来调控牙槽骨的改建,以保证牙萌出时方牙槽骨能被正常吸收。牙萌出的具体调控机制尚不明确,该文就OPG/RANK/RANKL信号分子调控牙萌出的研究现状作一综述。

核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧牙周组织中的表达

目的:探讨正畸牙移动中,压力侧牙周组织中核因子-κB受体活化因子配体 (RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的作用。方法:建立大鼠正畸牙移动模型,对压力侧牙周组织中RANKL蛋白的表达及破骨细胞的生成进行检测。结果:TRAP( +)破骨细胞在牙移动第 3、5和 7天时数量明显增多;免疫组化检测显示牙周成骨细胞、骨衬里细胞、牙周纤维细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞,是表达RANKL的主要细胞。与对照组RANKL持续弱阳性表达比较,实验组RANKL在正畸牙移动第 3、5和 7天时出现强阳性表达,其表达变化与破骨细胞的数量变化较为一致。结论:在大鼠正畸牙移动中,RANKL可能在压力侧牙周组织破骨细胞的形成和骨改建中发挥了重要作用。

黄芪补肾活血汤对芳香化酶抑制剂诱导骨质疏松模型小鼠破骨细胞活性的影响

背景:芳香化酶抑制剂尽管显著提高了激素受体阳性乳腺癌患者的临床获益,但其相关的不良事件——骨质疏松严重影响了患者的生活质量,黄芪补肾活血汤能有效预防芳香化酶抑制剂所致骨质疏松的发生,但是其作用机制尚不清楚。目的:探究黄芪补肾活血汤对芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型小鼠破骨细胞活性的影响及机制。方法:选取60只8周龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组、阳性对照组各10只,除假手术组外,其余组小鼠均切除双侧卵巢联合皮下注射来曲唑构建绝经后芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型,黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组分别给予19.24,9.62,4.81 g/(kg·d)黄芪补肾活血汤进行灌胃(1次/d),阳性对照组给予阿仑膦酸钠5 mg/kg灌胃(1次/周)。给药3个月后,Micro-CT检测胫骨骨密度和骨微结构,对股骨进行苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色及免疫组化检测核因子κB受体活化因子配体、骨保护素蛋白表达,ELISA检测血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平。结果与结论:①与假手术组相比,模型组小鼠骨密度显著下降、骨小梁形态疏松断裂、血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平显著上升,表明芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型构建成功;②与模型组相比,黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组和阳性对照组小鼠骨密度、骨微结构显著改善,骨小梁形态增粗致密,血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平显著下降,破骨细胞数量减少,核因子κB受体活化因子配体蛋白表达下降,骨保护素蛋白表达升高。结果表明,黄芪补肾活血汤可能调控核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护素信号通路抑制破骨细胞活性,改善骨小梁形态和骨微结构,提高骨密度,进而预防芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型的发生发展。