人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达

目的克隆人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区基因并在真核 细 胞中表达，为进一步研究OPG/OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT-PCR法得到人OPG/OCIF 的 编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OP G/OCIF在真核细胞中表达。结果获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCI F) 编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG/OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致 。成功构建OPG/OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳 定转染OPG/OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG/OCIF在真核细 胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区全长cD NA并证实在真核细胞中表达，为OPG/OCIF进一步的功能研究奠定了基础。

人破骨细胞生成抑制因子编码区基因的克隆及在成肌细胞中的表达

目的 :克隆人破骨细胞生成抑制因子 (OPG/OCIF)编码区基因并在真核细胞中表达。方法 :以人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA为模板 ,采用RT -PCR法得到OPG/OCIF的编码区cDNA ,构建真核表达载体 pIRES2 -OPG -EGFP ,在脂质体介导下转染小鼠成肌细胞系C2C12 ,经G418压力筛选建立稳定转染人OPG/OCIF的细胞系 ,共聚焦荧光显微镜及核酸杂交方法检测OPG/OCIF在细胞中的表达。结果 :获得的人OPG/OCIF编码区全长cDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致 ,核酸杂交证实稳定转染人OPG/OCIF编码区cDNA的小鼠成肌细胞系中有OPG/OCIFmRNA的表达。结论 :获得人破骨细胞生成抑制因子编码区全长cDNA并证实在真核细胞中稳定表达。

破骨细胞生成抑制因子在雌激素受体阳性乳腺癌中的生物学作用

目的:探讨破骨细胞生成抑制因子(osteoprotegerin,OPG)蛋白在人乳腺癌中的生物学作用。方法:利用Kaplan-Meier plotter数据库分析OPG在人乳腺癌病例中的表达对于病人预后生存的影响。MCF-7去激素培养后,加入17β-雌二醇刺激24 h后,提取总RNA,检测OPG在细胞内的表达情况。利用STRING数据库检索OPG相互作用蛋白。结果:OPG低表达明显减低雌激素受体阳性乳腺癌病人的预后生存时间,而雌激素受体阴性的乳腺癌病人的生存时间不受OPG表达的影响。在17β-雌二醇的刺激下,OPG基因表达水平明显减低。多个因子能够与OPG发生相互作用。结论:OPG可能参与雌激素受体阳性的乳腺癌的转化。

破骨细胞生成抑制因子及分化因子的研究进展

越来越多的研究资料表明破骨细胞分化因子/护骨因子配基可能是唯一能够直接诱导破骨细胞分化的细胞因子,其功能性受体RANK位于前破骨细胞及破骨细胞表面,介导了细胸分化信号的传导。破骨细胞生成抑制因子/护骨因子是破骨细胞分化因子/护骨因子配基的假活性受体,能竞争性抑制破骨细胸分化因子/护骨因子配基与RANK的结合,从而抑制破骨细胞的生成及功能。本文综述了破骨细胞生成抑制因子和分化因子的发现、结构和功能,并探讨了二者之间的相互作用机制。

骨质疏松性椎体骨折患者血清破骨细胞生成抑制因子和破骨细胞分化因子的表达及意义

目的探讨骨质疏松性椎体骨折患者血清破骨细胞生成抑制因子(osteoclast suppressor,OCIF)和破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)的表达及意义。方法选择衢州市人民医院2013年1月—2016年12月符合标准的骨质疏松性椎体骨折患者70例为骨质疏松组,非骨质疏松性椎体骨折患者70例为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(Double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定血清OCIF和ODF水平。采用双能X线骨密度仪测量腰椎正位总体L1～4骨密度及左侧股骨颈骨密度。采用SPSS20. 0统计软件对数据进行分析。结果骨质疏松组血清OCIF和ODF水平均高于对照组(均P <0. 05)。骨质疏松组腰椎正位骨密度和股骨颈骨密度均低于对照组(均P <0. 05)。骨质疏松患者血清OCIF、ODF水平与腰椎正位骨密度、股骨颈骨密度均呈负相关(均P <0. 05)。骨质疏松患者血清OCIF、ODF水平与骨折程度无显著相关性(均P> 0. 05)。结论骨质疏松性椎体骨折患者血清OCIF、ODF水平升高,血清OCIF、ODF水平与骨质疏松性椎体骨折患者的骨密度关系密切,与骨折的严重程度关系不大。

血清破骨细胞分化因子及生成抑制因子测定在前列腺癌骨转移诊断中的价值

摘要：目的探讨检测破骨细胞分化因子（osteoclastdifferentiationfactor，ODF）和破骨细胞生成抑制因子（osteo—clastogenesisinhibitoryfactor，OCIF）对前列腺癌骨转移诊断及病情评价的临床价值。方法分析2010年1月～2011年12月114例初诊为前列癌患者的资料。前列腺癌骨转移组和非骨转移组分别为61例和53例，采用ELISA法测定各组血清ODF和OCIF浓度。结果骨转移组患者血清ODF和OCIF分别为（31．35±5．34）和（42．12±9．04）ng／L，明显高于非骨转移组的（8．42±1．73）和（9．84±2．15）ng／L，差异有显著性（P〈0．01）。ODF和OCIF诊断前列腺癌骨转移ROC曲线下面积分别为0．92和o．88，具有良好的诊断价值。诊断前列腺癌骨转移的灵敏度、特异度，ODF分别为91．42％和87．35％；OCIF分别为87．51％和85．37％。ODF随骨转移部位数量增加而明显升高，OCIF随骨转移部位数量增加而明显降低。新发骨转移组和骨转移组血清ODF和OCIF浓度均显著高于非转移组，差异有显著性（P〈o．01）；新发骨转移组血清ODF和OCIF浓度与骨转移组比较，两组间无显著性差异（P〉0．05）。结论前列腺癌患者发生骨转移时，血清ODF和OCIF含量明显增高，可作为判断前列腺癌患者骨转移及监测病情的参考指标，在临床上有广泛的应用前景。

破骨细胞分化因子及生成抑制因子

破骨细胞来源于骨髓中的单核－巨噬细胞克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）［１，２］。破骨细胞的分化和／或其功能的改变所导致骨改建平衡状态的失控，是多种代谢性骨病如骨质疏松症、骨硬化症、Ｐａｇｅｔ＇ｓ骨病等形成的病理基础。目前已经证实多种钙调节激素和局部因子，...

血清破骨细胞分化因子和抑制因子检测对肺癌骨转移的诊断价值

目的探讨血清破骨细胞分化因子(ODF)和破骨细胞生成抑制因子(OCIF)水平对肺癌骨转移的诊断价值。方法入选的研究对象为经细胞学和病理学确诊为原发性肺癌的患者(186例):分为骨转移组(104例)和无骨转移组(82例);该院健康体检者(30例)作为对照组;肺部其他疾病组(66例)。采用ELISA测定各组血清ODF和OCIF浓度。结果骨转移组患者血清ODF和OCIF水平分别为(32.22±6.22)ng/L、(41.23±8.13)ng/L明显高于无骨转移组的(8.35±5.42)ng/L、(10.15±4.42)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);骨转移组ODF和OCIF检测的诊断灵敏度为90.38%和86.54%,特异度为86.59%和84.15%;不同肺癌病理类型的骨转移组患者血清ODF和OCIF水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清ODF和OCIF是诊断肺癌骨转移的重要参考指标,其水平的增高可用于诊断肺癌骨转移的发生。

白杨素抑制核因子κB受体活化因子配体诱导的小鼠破骨细胞生成

背景:白杨素存在于多种天然植物提取物的黄酮醇类化合物,具有广泛的治疗作用并且参与机体内的炎症反应,而炎症反应可增强破骨细胞生成从而导致骨侵蚀。目的:探究白杨素在炎症环境和非炎症环境下对破骨细胞分化的影响以及对骨侵蚀的保护作用。方法:选择RAW264.7细胞为种子细胞,首先,通过核因子κB受体活化因子配体(50μg/L)、巨噬细胞集落刺激因子(25μg/L)将细胞诱导分化为破骨细胞后,以0,20,40,60μg/L白杨素干预。其次,通过脂多糖模拟炎症环境,并将RAW264.7细胞在脂多糖诱导的炎症环境下诱导分化为破骨细胞,观察0,20,40,60μg/L白杨素在炎症环境下对破骨细胞分化的影响。结果与结论:(1)白杨素有效抑制破骨细胞分化,在60μg/L时抑制效果达到最大;(2)白杨素显著抑制了破骨细胞的骨吸收功能,提示白杨素对破骨细胞造成的骨侵蚀具有保护作用;(3)白杨素通过核因子κB信号通路,抑制多种破骨细胞分化关键蛋白和基因表达;(4)白杨素对炎症有明显的抑制作用,并对炎症环境导致的破骨细胞分化有强烈的抑制作用。

破骨细胞形成抑制因子研究进展

破骨细胞形成抑制因子 (OPG/OCIF)是最近发现的一种参与调节骨密度的糖蛋白 ,是一个肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的新成员 ,其氨基酸序列中具有TNF受体结构类似区 .成熟的OPG/OCIF具有 7个结构域 ,可分为三个功能区 ,即 :TNF受体结构区、致死结构区和肝素结合区 .OPG/OCIF基因定位在 8q2 3～ 2 4上 ,由5个外显子和 4个内含子组成 ,其表达受到与骨的形成和破坏有关因子的调控 :如TGF β1、 1,2 5 (OH) 2 VD3、TNF α等等 .OPG/OCIF抑制骨的破坏和吸收机制主要是抑制破骨细胞的存活 。

1,25-(OH)_2D_3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。

表皮生长因子受体对小鼠初级软骨内骨化、破骨细胞的募集及生成的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号转导在软骨内骨化中的作用。方法:以EGFR敲除鼠(EGFR-/-)、EGFR正常野生鼠(EGFR+/+)和(或)杂合子鼠(EGFR+/-)为实验动物模型,通过马森三色染色(Trichrome Masson)、原位杂交及抗九石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察各组小鼠四肢长骨软骨内骨化及破骨细胞募集情况的变化;体外分离培养破骨细胞,加入EGFR酪氨酸激酶的抑制因子AG1478,通过对破骨细胞生成实验的观察,明确EGFR信号转导在破骨细胞中的作用。结果:EGFR+/+鼠与EGFR+/-鼠有相同的表型,因此在实验中将它们皆看做EGFR+/+鼠。形态学观察EGFR-/-鼠肥大细胞区域较EGFR+/+鼠增大,其区域大小约为EGFR+/+鼠的5倍;EGFR-/-鼠破骨细胞向中心生长板的募集速度较EGFR+/+鼠亦明显延迟;在胚胎16.5 d(E16.5)dEGFR-/-和EGFR+/+鼠金属蛋白酶-9(MMP-9)分布上有一定差别,但单个破骨细胞上MMP-9的表达数量二者无明显差别;加入EGFR抑制因子AG1478的实验组与加入DMSO的对照组比较,破骨细胞的形成明显减少(P<0.01)。结论:EGFR信号转导机制可能通过调节破骨细胞的生成,影响其向中心生长板的募集,从而影响小鼠初级软骨内骨化的进展。

张力作用下牙周组织破骨细胞分化因子、破骨细胞发生抑制因子表达变化的研究

目的:运用原位杂交的方法,观察破骨细胞分化因子(ODF)、破骨细胞发生抑制因子(OCIF)在正畸大鼠牙周组织改建过程中张力侧的表达变化,探讨ODF、OCIF与正畸牙周组织改建的关系。方法:8周龄成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、牙齿移动1d组、3d组、5d组、7d组,共5组,每组6只。在大鼠上颌右侧第一磨牙与上颌切牙之间安置正畸矫治器装置,施力50g。在相应时间段处死实验动物,取材固定,进行原位杂交染色、图像分析。结果:在牙齿移动3d后,OCIF原位杂交染色在张力侧逐渐深染,OCIF mR-NA阳性细胞数量逐渐增多,OCIF阳性表达在5d时达到最高,并可见到有新骨形成;7d时OCIF阳性表达及分布情况与3d时相类似。张力侧牙周膜细胞、成骨细胞的ODF原位杂交染色阳性反应随天数的增加有逐渐增强趋势,并可观察到有ODFmRNA阳性破骨细胞出现,但表达变化并不明显。结论:ODF及OCIF参与了正畸牙周组织改建过程,OCIFmRNA在张力区随正畸牙齿移动表达升高具有时间依赖性。

人破骨细胞形成抑制因子成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达

目的 :在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因。方法 :利用 PCR从人肝细胞文库中扩增得到 OCIF成熟肽编码基因序列 ,将其与 p MD18- T连接 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体 p MD18- OCIFm,双酶切重组克隆质粒 p MD18- OCIFm得到 OCIF成熟肽基因 ,将其定向插入p MAL- c2载体中 ,转化大肠杆菌 TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。 结果 :所获得的 OCIF成熟肽基因编码序列经测序与 Gen Bank报道的完全一致。所表达的产物经 SDS- PAGE分析可见在相对分子质量 80 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Western印迹证实了表达产物的正确。表达产物在高剂量 (>12 0 ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡。 结论 :成功获得了人 OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。

人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达

目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。

破骨细胞分化因子和破骨细胞发生抑制因子的研究进展

牙周组织改建是机械力作用下正畸牙齿移动的生物学基础,主要表现为牙槽骨的有序吸收和增生;而涉及这一过程最重要的细胞是成骨细胞和破骨细胞,同时破骨细胞性骨吸收是牙齿移动的第一步。最近发现破骨细胞分化因子、破骨细胞发生抑制因子是调节骨组织代谢的核心因子,相关研究是目前骨改建机制研究的热点。本文从其结构、功能及作用机制方面加以论述。

人破骨细胞抑制因子基因的克隆和表达

目的 克隆、表达和鉴定人破骨细胞抑制因子(OPG) .方法 从培养的人胚肺成纤维细胞 (WI- 38)中提取总 RNA,经 RT- PCR获得人破骨细胞抑制因子基因 .将该基因克隆到 p GEM3zf-载体中 ,测序鉴定 .继而将 OPG基因插入 TNFHis融合表达载体中 ,4 2℃诱导表达 4～ 5 h,做 SDS-PAGE分析 .以免疫印迹法鉴定 TNFHis OPG融合蛋白的表达 .结果 DNA测序证明 ,获得了 OPG基因 ,其序列与国外文献报道不完全一致 .SDS- PAGE分析表明 ,TNFHis OPG融合蛋白获得表达 ,其 Mr为 7.1× 10 4 ku,表达量约占菌体总蛋白的 10 % .免疫印迹法鉴定显示 ,该融合蛋白可与抗 TNF-α单抗产生阳性反应 .结论 OPG基因的克隆和表达均获得了成功 .

破骨细胞分化因子和破骨细胞生长抑制因子在牙周组织细胞中的表达

目的:检测炎症前细胞因子IL-1β和骨成熟因子PGE2对人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞破骨细胞分化因子(osteoclastdifferentiation factor,ODF)和破骨细胞生长抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)表达的影响。方法:用RT-PCR和Southern-blot对该2种细胞在IL-1β或PGE2作用下细胞中ODF和OCIF mRNA的表达进行半定量。结果:上述2种细胞在IL-1β或PGE2作用下,ODF和OCIF的合成均有升高,各细胞合成ODF和OCIF的峰值随IL-1β或PGE2作用时间和浓度的不同而发生变化。结论:牙周组织中ODF和OCIF可能同时参与炎症反应,并受致炎因子IL-1β和骨代谢因子PGE2调节。

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用(英文)

背景:骨保护素(osteoprotegerin,OPG)可抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡,在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值。目的:鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性。设计:随机对照的实验研究。地点和对象:实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成,研究对象:人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存,12只6～8周龄BABL/c雄性小鼠由本校动物中心提供。干预:RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体,在脂质体介导下转染CHO细胞,经Westernblot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系。获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液,实验组:体外培养的鼠破骨细胞培养基中加入含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液。对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液。对照组2只加入完全培养基。主要观察指标:观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响。结果:转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG。小鼠骨髓细胞在1α,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液,TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5.547,P<0.01)。