砷剂防治哮喘气道炎症的分子机制:砷剂对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶基因表达作用的研究

目的:研究三氧化二砷对T细胞丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(mitogen-activatedproteinkinasephosphatase,MKP-1)基因表达的影响,探讨砷剂治疗哮喘气道炎症的分子机制。方法:本研究采用定量PCR的技术研究Hut-78T细胞在不同浓度三氧化二砷(5μmol/L和1μmol/L)作用下,在不同时间段(3min,10min,20min,30min及1h),T细胞内MKP-1mRNA的表达水平。结果:Hut-78细胞在经过砷剂处理后,细胞内MKP-1mRNA水平在10min即呈现上升的趋势,5μmol/L砷剂20min组和1μmol/L砷剂20min组细胞内MKP-1mRNA水平均明显高于对照组(t=5.947,P=0.001;t=2.561,P=0.035),而在30min时,所诱导MKP-1mRNA水平均达到高峰,其后均呈下降的趋势。而在时间段20min和1h,5μmol/L砷剂组要高于1μmol/L组(t=3.056,P=0.0223;t=3.501,P=0.0128)。结论:三氧化二砷对MKP-1的基因表达具有上调作用;MKP-1为三氧化二砷作用的早期反应基因之一;砷剂对MKP-1的作用呈时间和剂量相关;小剂量的砷剂可能在哮喘的治疗和预防上具有重要的应用价值。

三氧化二砷诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人移行细胞膀胱癌细胞株T24细胞凋亡的作用。方法用MTT法、TUNEL法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导T24细胞凋亡的作用。结果As2O3可有效地抑制T24细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条带。TUNEL法呈阳性结果。透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。对照组均未见上述变化。对凋亡相关基因Bcl-2免疫组化染色发现其表达下调,同时凋亡主要效应分子Caspase 3被激活。结论As2O3可有效诱导膀胱癌细胞凋亡,通过下调Bcl-2基因表达是其作用机制之一。

三氧化二砷对鼻咽癌放疗增敏作用及其机制的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)注射液对鼻咽癌放疗增敏作用与肿瘤血管生成素表达的关系。方法:将74例鼻咽癌患者随机分为单纯放疗组(放疗组)和As2O3放射增敏组(增敏组),观察两组患者鼻咽肿瘤消退情况。每个病例在治疗前及放疗20Gy后24h各取材1次。免疫组化SP法检测血管生成素1(Ang-1)和血管生成素2(Ang-2)蛋白表达。结果:放疗40Gy时增敏组和放疗组的鼻咽肿瘤消退率分别为43.6%(17/39)和20.0%(7/35),χ2=4.684,P=0.003。增敏组Ang-1和Ang-2蛋白在放射治疗剂量20Gy时均表达下调,z分别为-2.147和-2.985,P值分别为0.032和0.003。在40Gy肿瘤消退组,Ang-2蛋白下调,z=-2.183,P=0.029。结论:As2O3注射液对鼻咽癌患者放射治疗具有增敏作用,其增敏机制可能与Ang-1和Ang-2蛋白抑制肿瘤血管形成有关。

硫化砷对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡及COX-2表达的作用

目的:体外研究中药雄黄的主要成分硫化砷(As4S4)对子宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的关系。方法:以不同浓度的As4S4(7.5～60mg/L),分12～60h5个时间点处理HeLa细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;DNA梯状电泳检测凋亡的发生;Western blot检测COX-2蛋白的表达;放射免疫法检测细胞前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)释放水平。结果:As4S4可抑制HeLa细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,P<0.01;As4S4可诱导HeLa细胞凋亡,DNA电泳呈梯状条带;As4S4可明显抑制COX-2的表达,P<0.01,并呈浓度依赖性;As4S4明显抑制HeLa细胞PGE2释放水平,其值分别为(70.56±2.03)、(48.58±2.28)、(29.25±1.57)和(18.02±1.04)μg/L,与对照组(83.15±1.01)μg/L比较差异有统计学意义,P<0.01。结论:As4S4体外对HeLa细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用,其机制可能与抑制COX-2蛋白表达有关。

三氧化二砷与化疗药物联合对急性白血病原代细胞的抑制作用研究

目的为扩展三氧化二砷（As2O3）临床适应证提供实验依据。方法应用MTT法检测As2O3及As2O3。分别与柔红霉素（DNR）、阿糖胞苷（Ara-C）、三尖杉酯碱（H）和长春新碱（VCR）联合对12例初发急性早幼粒细胞白血病（APL）、23例初发急性非早幼粒细胞白血病（ANPL）和16例难治复发ANPL病人原代细胞的抑制作用。结果（1）0．5～6．0μmol／L的As2O3对初发及难治复发ANPL细胞具有明显抑制作用，且该抑制作用在两组间差异无显著性（P〉0．05）。（2）As2O3与Ara-C、H和VCR的抑制作用无相关性，r分别为0．279、0．276和0．204（P值均〉0.05）；与DNR有相关性，r=0．432（P〈0．05）。（3）As2O3分别与DNR、Ara-C、H和VCR联用，对多数患者的抑制作用呈协同及相加作用，当As2O3分别与DNR、VCR联用时，其抑制作用明显大于单用化疗药物（P〈0.05）。结论临床可达到浓度的As2O3对ANPL原代细胞具有明显的抑制作用；As2O3与Ara-C、H及VCR无交叉耐药性，与DNR有部分交叉耐药性；As2O3与DNR、VCR等组成新的化疗方案，治疗初发及难治复发ANPL患者具有一定的实验基础。

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶抗裸鼠人结肠癌移植瘤的作用及其机制的研究

目的探讨三氧化二砷(A s2O3)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对裸鼠人结肠癌移植瘤的抗肿瘤作用、作用机制以及药物毒性。方法建立裸鼠人结肠癌模型,随机分为生理盐水组、A s2O3组、5-FU组和A s2O3联合5-FU组,腹腔分别注射生理盐水、A s2O3、5-FU和A s2O3+5-FU,观察各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对体内标本行光镜、电镜、原位末端标记(TUNEL)、免疫组化和血常规检测。结果与单药作用相比,A s2O3联合5-FU可显著抑制结肠癌移植瘤的增长,CD I值<1,并显著增强诱导瘤细胞凋亡作用、调控凋亡相关基因(B cl-2、B ax、F as和F asL)表达。联合用药并未增加裸鼠肝、肾和造血系统的毒性。结论A s2O3与5-FU联合应用对结肠癌移植瘤有协同抗肿瘤作用,其机制可能与增强诱导癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因表达有关;同时联合用药对于荷瘤裸鼠的肝、肾和造血系统无明显毒性。

Bcl-2反义核酸增强三氧化二砷诱导NCI-H69肺癌细胞凋亡

目的 :探讨Bcl 2反义核酸对三氧化二砷 (As2 O3 )诱导NCI H6 9肺癌细胞株凋亡的影响。方法 :合成Bcl 2反义核酸 (ASON) ,导入NCI H6 9肺癌细胞。Western blot法检测Bcl 2蛋白的表达 ;FTIC TUNEL流式细胞仪检测导入ASON的NCI H6 9肺癌细胞凋亡的变化 ;Western blot法检测As2 O3 作用后多聚ADP核糖聚合酶 (PARP)裂解片段。结果 :1)导入Bcl 2反义核酸后NCI H6 9肺癌细胞 (ASON -NCI H6 9)的Bcl 2基因表达受抑制 ,Bcl 2蛋白的合成减少 ;2 )随As2 O3 浓度增加 ,肺癌细胞的凋亡指数逐渐上升 ,ASON NCI H6 9细胞凋亡指数明显高于NCI H6 9细胞 ;3)As2 O3 诱导后ASON NCI H6 9肺癌细胞PARP的89KD裂解片段检测呈强阳性 ,NCI H6 9肺癌细胞则呈弱阳性。结论 :三氧化二砷可诱导肺癌细胞株NCI H6 9凋亡 ;Bcl 2反义核酸通过阻断Bcl 2基因表达 ,增强了As2 O3 诱导NCI H6

三氧化二砷联合氟尿嘧啶抗人结肠癌Lovo细胞作用及其机制的研究

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)与氟尿嘧啶(5 FU)联合应用对人结肠腺癌细胞株Lovo的影响及其作用机制。方法:经不同浓度的As2O3 和(或)5- FU处理Lovo细胞后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应;AO/EB荧光染色、DNA电泳、电镜和流式细胞术观察细胞凋亡和形态学及细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化。结果:与As2O3 或5 -FU单药作用相比,As2O3 与5- FU联合应用可显著增强人结肠癌细胞增殖抑制作用和诱导结肠癌细胞凋亡作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1 期细胞比例上升,癌细胞bcl- 2基因表达明显下降, bax和Fas基因表达显著增强。结论:As2O3与5 -FU联合应用具有显著协同抗大肠癌作用,其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关。

三氧化二砷诱导A549细胞凋亡的实验研究

【目的】研究三氧化二砷诱导A549细胞凋亡的发生机制。【方法】对三氧化二砷作用A549细胞后诱导的细胞凋亡进行光镜、电镜下的形态学观察和采用流式细胞仪定量计数凋亡细胞的比例改变，并通过WesternBlotting和RT-PCR检测凋亡相关因子Caspase3蛋白和Bcl-2133．RNA的表达，从分子水平分析探讨其机制。【结果]Caspase3蛋白和Bcl-2mRNA的表达与对照组相比较有显著差异（P〈0．05）。【结论】三氧化二砷作用于A549细胞后，使Bcl-2mRNA表达水平下调，Caspase3蛋白表达水平上调，从而诱导并调控了A549的凋亡。

三氧化二砷诱导人胆管癌细胞系QBC939凋亡的实验研究

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对体外培养的QBC939细胞的生物学效应和作用机制。方法 MTT法检测As2 O3对QBC939细胞的增殖抑制作用 ,电子显微镜观察细胞超微结构改变 ,琼脂糖凝胶电泳测定DNAladder,流式细胞术检测细胞DNA含量 ,半定量RT PCR检测p5 3/bax/bcl 2mRNA的表达水平。结果 As2 O3 对QBC939细胞的增殖抑制作用随浓度升高和作用时间的延长而明显增强 ,并以 4 μmol/LAs2 O3 作用 96h抑制率达最高 (90 2 % ) ,流式细胞术显示正常生长的QBC939细胞自发性凋亡率为 2 94 % ,各实验组均出现程度不等的亚二倍体峰 ,并以 4 μmol/LAs2 O3 作用 96h凋亡率达最高 (87 7% ) ,透射电镜显示 1μmol/LAs2 O3 作用72h出现早期凋亡特征 ,4 μmol/L作用 4 8h出现典型凋亡特征 ;DNAladder测定显示随着浓度和时间的增加 ,ladder条带越来越明显 ;半定量RT PCR显示 4 μmol/LAs2 O3 作用 2 4、4 8、72h后显示bax上调和bcl 2的下调 ,p5 3则未检测到表达。结论 在体外As2 O3 能有效地抑制QBC939细胞增殖 ,诱导其凋亡 ,其机制可能与bax上调、bcl 2下调有关。

抑制细胞外信号调节激酶对As_2O_3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶在三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径中的作用。方法:采用MTT法检测As2O3对胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用,采用瑞氏-姬姆萨染色和流式细胞仪检测As2O3诱导MGC-803凋亡以及加入选择性ERK抑制剂PD98059后细胞凋亡率的变化。结果:5μmol/L与10μmol/L的As2O3作用24h后凋亡率分别为(4.74±0.03)%和(11.93±0.06)%,而与PD98059联合作用24h后凋亡率分别增加至(11.65±0.09)%和(18.15±0.10)%,P<0.05。As2O3抑制MGC-803细胞的增殖,并诱导凋亡。结论:预先抑制ERK途径增加了As2O3诱导MGC-803细胞的凋亡效应。ERK途径可能参与了As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径。

三氧化二砷碘油乳化物对人MHCC-97裸鼠原位移植瘤模型抑瘤作用及药物释放的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)-碘油乳化物治疗裸鼠肝癌细胞株MHCC-97移植瘤模型的抑瘤作用及药代动力学情况。方法:将不同浓度的As2O3-碘油乳化物分别注入大白兔的腹腔内并检测外周血As2O3的浓度,绘制药物释放曲线,并将As2O3-碘油乳化物与人肝癌细胞株MHCC-97构建的肝脏型裸鼠肝细胞癌模型进行抑瘤作用。结果:3组大白兔腹腔内注入不同浓度梯度As2O3-碘油乳化物的实验组,与腹腔内单纯注入As2O3的对照组相比,30min～1h外周血中As2O3血药浓度偏低,P<0.05;2～3h外周血中的血药浓度差异无统计学意义;在4～8h血药浓度明显偏高,P<0.01;在3组实验组中,3种不同浓度梯度的As2O3-碘油乳化物在不同时间的血药浓度差异无统计学意义,P>0.05。采用As2O3-碘油乳化物对肝脏型裸鼠肝细胞癌模型的抑瘤作用与阴性对照组相比,差异有统计学意义,P<0.05;实验组与阳性对照组相比,平均瘤质量较阳性对照组有缩小,但无统计学意义,P>0.05。结论:As2O3-碘油乳化物在腹腔内释放缓慢,在外周血中能维持相对高浓度,并且维持时间长;As2O3-碘油乳化物对肝脏型裸鼠肝细胞癌模型的生长有抑制作用。

三氧化二砷对MRL／lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用及对TGF-β1异常表达的影响

目的研究三氧化二砷（Arsenictrioxide，ATO）对MRL／lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用及对。肾小管TGF-β1表达的影响。方法将MRL／lpr狼疮鼠45只随机平分为ATO组、CTX组和NS组，观察各组MRL／lpr狼疮小鼠治疗前后尿蛋白（半定量）的变化、肾组织病理改变、肾组织免疫球蛋白IgG、补体C3的表达及用免疫组织化学方法检测肾组织TGF—β1的表达。结果尿蛋白分析：给药后ATO组较NS组有明显减少（P〈0．01）、CTX组较NS组也有减少（P〈0．01）。免疫荧光IgG、补体c3的表达：在NS组可见IgG沿肾小球系膜区，毛细血管袢弥漫沉积（＋-3＋），而ATO组、CTX组则明显减少（--＋），经统计发现ATO组、CTX组较NS组明显减少（P〈0．05）；补体C3的表达差异无统计学意义。肾小球细胞数及肾组织活动积分在ATO组及CTX组中均较NS组明显减少（P〈0．05）。免疫组化：TGF-β1在肾小管可见明显表达，肾小球表达不明显，ATO组的阳性小管数较NS组明显减少（20．28±1．90对68．23±2．87，P〈0．01），CTX组的阳性小管数较NS组明显减少（23．26±1．71对68．23±2．87，P〈0．01）。结论三氧化二砷可以下调肾组织TGF-β1的表达改善小管病变，同时可以通过缓解肾小球、小管间质炎症及减少免疫复合物的沉积达到改善狼疮性。肾炎的进展。

三氧化二砷对乙型肝炎鸭体内NO、SOD及LPO的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对乙型肝炎鸭体内NO、SOD及LPO的影响。方法:筛选乙型肝炎麻鸭随机分为As2O3大、中、小剂量组、拉米夫定组和阴性对照组,进行相应处理,测定血清和肝脏中NO、SOD和LPO的含量。结果:As2O3可明显降低乙型肝炎鸭血清中NO和LPO的含量和肝脏中的LPO的含量,提高SOD活性。结论:As2O3可诱导抗氧化酶活力增高,保护细胞免受免疫损伤。

三氧化二砷对白血病HL-60细胞株的凋亡作用

目的：探讨三氧化二砷对HL-60的诱导凋亡作用。方法：琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoecst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化。用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：10μmol/L三氧化二砷处理HL-60细胞24~48 h可见到DNA出现梯形条带;处理24~48 h HL-60细胞核呈现细胞核浓缩和核碎裂现象。流式细胞仪测定12、24、和48 h的细胞凋亡率分别为（8.5±2.1）%、（12.8±3.4）%及（21.4±5.8）%,而培养48 h的HL-60细胞自然凋亡率仅为（1.5±0.5）%（P〈0.05）。结论：三氧化二砷可诱导HL-60细胞凋亡。